一种提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物种苗组培繁育技术领域，具体涉及一种提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法。
【背景技术】
[0002]蓝莓素有“抗氧化之王，美瞳之果”的美誉，对快节奏生活的现代都市人来说越来越具有保健价值。我国蓝莓产业经过近15年来的快速发展已经初具规模，但面积和产量还远远不能满足国内市场的需求。目前，国内蓝莓种苗生产主要依靠组培技术，其技术难点集中于瓶内壮苗、瓶外生根、炼苗移栽等环节。普遍存在繁殖系数偏低、生根率偏低、移苗操作效率偏低等“三低”问题(以下简称“三低”问题)，大大提高了蓝莓组培育苗成本和苗木价格，从而制约了蓝莓产业的发展。
【发明内容】
[0003]本发明旨在集成创新一种提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法的方法，系统解决现有技术存在的“三低”问题。
[0004]本发明所采用的技术方案是，一种提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法的方法，在无菌条件下进行初代培养和继代增殖培养，在培养得到无菌继代苗的基础上再进行以下操作:
[0005]步骤1、对继代苗采用添加西红柿的WPM培养基进行壮苗培养，得到健壮瓶苗；
[0006]步骤2、对健壮瓶苗进行室内瓶外微型茎段高密度生根培养，制备得到微型生根苗；
[0007]步骤3、对微型生根苗进行室外炼苗和移栽管理，培育出标准组培容器苗。
[0008]本发明的特点还在于，
[0009]步骤I中对继代苗采用添加西红柿的WPM培养基进行壮苗培养具体按照以下步骤实施:
[0010]步骤1.1、将继代苗接种到蓝莓继代培养基上，蓝莓继代培养基配方为WPM+ZTRlmg/L+西红柿5g/L，无需调节pH值，转接I次，其中，蓝莓继代培养基即为添加西红柿的WPM培养基；
[0011]步骤1.2、将蓝莓继代培养基配方调整为WPM+ZTR 0.5mg/L+西红柿10g/L，无需调节PH值，经多次转接后得到足够数量的健壮瓶苗，其中，蓝莓继代培养基即为添加西红柿的WPM培养基。
[0012]对继代苗采用添加西红柿的WPM培养基进行壮苗培养操作时切取带I?2个单芽的茎段接种培养基中，培养容器采用250ml罐头瓶或马铃薯瓶，每瓶接种数量10?15棵。
[0013]步骤2中对健壮瓶苗进行室内瓶外微型茎段高密度生根培养具体按照以下步骤实施:
[0014]步骤2.1、蓝莓壮苗茎段的剪取及处理:在空气中打开瓶盖，用镊子夹出试管苗，剪去基部带有培养基的部分，再剪成带2个芽的茎段，用洁净容器收集，立刻在激素溶液内浸泡3s捞出；
[0015]步骤2.2、茎段的扦插:生根基质置入塑料餐盒中，将步骤2.1制得的蓝莓微型生根茎段置于盛装了生根基质的塑料餐盒内，每盒100株左右，改直接扦插为打孔扦插；
[0016]步骤2.3、密封生根:立即用保鲜膜密封，置于温度为21°C?28°C，光照条件为2000?30001ux光照环境条件下培养21天。
[0017]步骤2中生根营养液的配制和灭菌方法是:配制IL的WPM培养基加水稀释至5L，稀释后的溶液调节PH值到4.5，灭菌(改高压灭菌为煮沸灭菌，下同)。灭菌后冷却即得到生根营养液，备用；所述激素溶液的配制方法是:称取IBA或NAA lg，用少量IN的NaOH溶液溶解，定容至1L，将稀释后的溶液调节pH值至5.0，灭菌后冷却备用；所述生根基质的配制方法是:按照珍珠岩与生根营养液重量比例1:5，将两者混合即制得生根基质。
[0018]步骤3蓝莓组培微型生根苗的炼苗和移栽具体按照以下步骤实施:
[0019]步骤3.1、炼苗:在温度20?25°C，光照20001ux，相对湿度70?90%环境条件下，步骤2.3生根苗餐盒保鲜膜划开一道口子，炼苗I?2天，之后完全揭去保鲜膜，浇水继续炼苗I?2天；
[0020]步骤3.2、移栽:完成炼苗后收集蓝莓微型生根苗于塑料盒容器中，移栽时用镊子夹取生根的蓝莓微型生根苗直接放入盛装移栽基质的穴盘中，置于带有喷灌系统的苗床内，不定期喷水保湿；
[0021]步骤3.3、上盆:待穴盘苗新梢长出4-5张叶片时，带基质移栽上盆，其中，塑料盆口径8-lOcm，即移入苗圃进行正常管理。
[0022]移栽基质的具体制备方法如下:按照质量百分比称取泥炭70份，珍珠岩10份，黄心土 10份，稻壳8份，控释肥2份混拌均匀，浸泡消毒，移栽前浇透水备用。
[0023]本发明的有益效果是:本技术方案采用的瓶内壮苗、室内瓶外高密度集中生根、室外炼苗移栽等方法，提高了成苗率和工作效率，系统解决蓝莓工厂化组培育苗的“三低”问题。与现有同类技术相比，优点在于:①步骤I继代苗培养基添加西红柿有机物进行壮苗培养，提高了试管苗的健壮程度，更有利于生根和增强其对不良环境的抵抗能力；蓝莓自然生长时属于喜强酸性土壤条件的植物，由于西红柿富含有机酸，添加西红柿的培养基维持低PH值的缓冲能力大大增强，降低了未添加的培养基后期pH上升的不利影响，还可省去每次培养基配制时调节酸碱度的麻烦。②步骤2采用的室内瓶外高密度生根技术，方法上改变灭菌方式，实行室内操作，简易方便；环境控制上室内可控性强，管理方便集约化，从而保证了其生根的稳定性；③步骤3微型生根苗的室外炼苗移栽，较之同类技术的无根苗驯化时既要适应环境又要生根，其对环境变化的适应性大大增强，生根率达到95%，比国内平均水平高出10个百分点以上；④步骤3生根茎段仅带2个芽，仅此阶段就比现有技术(5?6个芽)的苗木繁殖系数提高2倍以上。⑤生根采用珍珠岩作为支持物，材料易取得重量轻，移栽时操作方便，每人每天可移栽0.8?I万株，移栽效率是国内现有技术的2倍，显著降低了人工成本。
【附图说明】
[0024]图1是微型苗生根显微镜照片，其中，a为一种是微型苗生根显微镜照片；b为另一种是微型苗生根显微镜照片，C是生根后成活情况图片，d是室内大规模生根图片。
【具体实施方式】
[0025]下面结合附图和【具体实施方式】对本发明进行详细说明。
[0026]本发明提供一种提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法，具体按照以下步骤实施:取蓝莓半木质化或未木质化嫩梢进行无菌接种，经初代培养和继代增殖培养，在得到继代苗的基础上再进行以下操作:
[0027]步骤1、继代苗的壮苗培养；将进入快速增殖阶段的蓝莓无菌苗，进行壮苗培养。壮苗培养共分二个阶段进行:第一阶段的培养基组成为:基本培养基、激素及有机添加物。基本培养基采用WPM培养基，添加激素为反式玉米素核苷(ZTR)，浓度为lmg/L，有机添加物为西红柿，浓度为5g/L，无需调节pH值。第二阶段将培养基激素配方调整为ZTR 0.5mg/L、有机添加物西红柿浓度调整为10g/L，无需调节pH值。第一阶段转接I次，第二阶段转接多次，每次转接间隔时间I个月，直至培养获得足够数量的健壮瓶苗。每次转接操作时，要求切取带2个单芽的茎段，培养容器采用250ml罐头瓶或马铃薯瓶，每瓶接种数量10-15棵。
[0028]步骤2、健壮瓶苗室内瓶外高密度生根培养，配制2种生根溶液:生根营养液(1/5WPM营养溶液)和激素溶液(lmg/mL的IBA溶液)。1/5WPM营养液配制方法是:配制IL的WPM培养基加水稀释至5L，稀释后的溶液调节pH值到4.5，煮沸灭菌后冷却即可，备用。激素溶液的配制方法是:称取IBA lg，用少量IN的NaOH溶液溶解，定容至1L，将稀释后的溶液调节PH值至5.0，煮沸灭菌后冷却备用。
[0029]将干净的珍珠岩与生根营养