一种白刺组培快繁技术的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种白刺组培快繁技术。
【背景技术】
[0002]白刺属(AYiraria L.)是蔡藜科的I个古老小属，属地中海线-中亚荒漠植物区的灌木层中的建群种或优势种之一，具有极强的耐旱性、耐盐碱性和耐寒性，它可以防风固沙、改善土壤，是盐碱地生态植被恢复的优良树种。白刺分布广泛、抗逆性强，是优良固沙保土树种，因其果实营养成分高而有“第三代果树”之称。通过对白刺优良品种进行无性繁殖进而得到大量苗木，从而满足盐碱地区对耐盐碱植物的需求。
[0003]在自然状态下，白刺的果实性状分化变异严重，即使相邻植株，果实的大小、形状、颜色、味道等性状的变异也极大。在白刺繁殖方面，多采用种子育苗造林，但种子引进成本高，数量少，并且种子繁殖生产周期长，得到的苗木易产生变异。而扦插繁殖方式则存在生根困难的问题，繁殖系数较低，繁殖上的困难限制了该产业的发展。本发明以白刺半木质化的侧芽为外植体，通过外植体消毒、不定芽诱导、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了白刺离体再植株，建立了有效的白刺组培快繁殖技术体系，短时期内即可生产大量种苗，提高繁殖效率，降低生产成本，有利加快其繁育及推广。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供出一种白刺组培快繁技术，本发明以白刺半木质化的侧芽为外植体，通过外植体消毒、不定芽诱导、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了白刺离体再植株，建立了有效的白刺组培快繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。
[0005]本发明的一种白刺组培快繁技术，包括以下的步骤:
(I)外植体采集及消毒:选择连续3天以上的晴天，并在中午太阳暴晒后进行外植体采集。采取半木质化的侧芽作为外植体保湿并带回实验室。用自来水冲洗10?20min，在加有1%洗洁精的洗涤液中浸泡5?1min,用毛笔刷轻刷枝条，再用自来水冲洗30?50min，移至超净工作台。在超净工作台中，用70%?80%的酒精浸泡20?30s后，用0.1% HgCl溶液消毒15?30min,并用无菌水冲洗4?6次后备用。
[0006](2)诱导培养:将步骤(I)处理好的白刺茎段切成1.5?2.0cm左右的带节茎段并接种于诱导培养基中进行不定芽诱导。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为1000?20001X，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计诱导率。
[0007](3)增殖培养:以步骤(2)诱导得到不定芽作为材料，将老化的和生长不良的不定芽去掉，并将生长状态良好的不定芽切成单芽并转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计增殖情况。
[0008](4)生根培养:将经步骤(3)后得到的生长较一致且健壮的未生根的无菌苗单株切下转入生根培养基诱导。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计生根情况。
[0009](5)炼苗移栽:当组培苗具备发达健壮的根后，即可移栽。移栽在遮阴棚中进行。将生长健壮的试管苗在自然条件下炼苗5?7天，再开盖炼苗3?5天.在试管苗移栽前，基质先用0.5%的KMnSO4溶液消毒，后装入营养袋。用小勺轻轻取出带根小苗(带少许培养基)移到营养小钵中。移栽完用自动喷水装置将移栽苗浇透。以后每2h喷一次，每次喷 50s。
[0010]上述步骤(2)所述的诱导培养基为:Ν6+1.0?5.0mg/L 6-BA+0.1?1.0mg/L6-BA+0.5 ?lmg/L AC+25 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0011]上述步骤(3)所述的增殖培养基为:Ν6+1.0?2.0mg/L 6 — ΒΑ+0.1?0.5mg/LIBA+25 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0012]上述步骤(4)所述的生根培养基为:l/2MS+0.1?0.5mg/LNAA+20?30g/L蔗糖+3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0013]本发明的优点是:通过外植体消毒、不定芽诱导、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了白刺离体再植株，建立了有效的白刺组培快繁殖技术体系，短时期内即可生产大量种苗，提高繁殖效率，降低生产成本，有利加快其繁育及推广。
【具体实施方式】
[0014]以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
[0015]实施例1
(I)外植体采集及消毒:选择连续3天以上的晴天，并在中午太阳暴晒后进行外植体采集。采取半木质化的侧芽作为外植体保湿并带回实验室。用自来水冲洗lOmin，在加有1%洗洁精的洗涤液中浸泡5min，用毛笔刷轻刷枝条，再用自来水冲洗30min，移至超净工作台。在超净工作台中，用70%的酒精浸泡20s后，用0.1% HgCl溶液消毒15min，并用无菌水冲洗4次后备用。
[0016](2)诱导培养:将步骤(I)处理好的白刺茎段切成1.5?2.0cm左右的带节茎段并接种于诱导培养基中进行不定芽诱导。接种后置于每天光照12小时，光照强度为ΙΟΟΟΙχ，置于培养温度为25°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后诱导率达到79.3%。所述的诱导培养基为:N6+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L AC+25g/L 蔗糖 +3.5g/L 琼脂，pH 为 5.4。
[0017](3)增殖培养:以步骤(2)诱导得到不定芽作为材料，将老化的和生长不良的不定芽去掉，并将生长状态良好的不定芽切成单芽并转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照12小时，光照强度为20001x，置于培养温度为25 V，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后增殖系数为2.78。所述的增殖培养基为！Ne+!.0mg/L 6 - BA+0.lmg/LIBA+25g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.4。
[0018](4)生根培养:将经步骤(3)后得到的生长较一致且健壮的未生根的无菌苗单株切下转入生根培养基诱导。接种后置于每天光照12小时，光照强度为20001χ，置于培养温度为25°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后生根率达到91.5%。所述的生根培养基为:1/2MS+(X 2mg/LNAA+2