一种人工培育的冬虫夏草及其培育方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药领域，尤其涉及冬虫夏草的培育，特别地关系到一种人工培育的冬虫夏草及其培育方法。
【背景技术】
[0002]冬虫夏草又称虫草、冬虫草等，是麦角菌科虫草属真菌(虫草菌)Cordyc印ssinensis (Berk) Sacc.与鳞翅目蝙蝠蛾科蝙蝠蛾幼虫在特殊条件下形成的菌虫结合体，是传统的名贵药材，主要产于在我国的四川、青海、西藏、云南和甘肃等地。冬虫夏草的营养成分高于人参，可入药，也可食用，是上乘的佳肴，具有很高的营养价值。冬虫夏草可以增强机体的免疫力，滋补肺肾，对肺癌、肝癌等有明显的抑制作用。在临床上对肺虚久咳，气喘，肺结核咯血，盗汗，肾虚腰膝酸痛，阳瘘遗精，神经衰弱及化疗、放疗后的红细胞下降都有疗效。
[0003]经过严格检测和动物试验、临床实验，冬虫夏草具有下列药理或保健功能:
[0004]一是具有明显的安神镇静作用。注射虫草抽提液后的动物，活动很快减少，能延长戊巴比妥睡眠时间，增加阀下量巴比妥入睡率。表明服用虫草能提高人的安睡效率，延长睡眠时间，适合失眠多梦者长期服用。
[0005]二是抗炎作用。对小鼠耳片、对大鼠足跖致炎研宄表明，虫草在治疗肾炎、前列腺炎等方面具有独特的功效。而且，一些传统医学文献中有记载，虫草对于抑制肝脏纤维化进程有“全能”效果。
[0006]三是耐缺氧作用。研宄表明，腹腔注射2.5g/kg以上的冬虫夏草的抽提物可明显降低小鼠心肌耗氧量，对异丙肾上腺素引起的心肌耗氧量的增加及耐缺氧能力下降有突出的改善效果。
[0007]上述三种保健功能，不仅是现代科学实验的结论，也是人们使用后感觉得到的反应。因此消费者都公认虫草具有护心养脑、强肾固本、改善血液循环、抗疲提神、改善亚健康状况等作用。
[0008]抗肿瘤作用是冬虫夏草新发现的功能。体外实验研宄表明，不加虫草的肿瘤细胞培养至第六天，B16细胞、K526细胞、HL260细胞分别增长75、68、58倍，而虫草组在不影响造血细胞生长的情况下，培养第六天，肿瘤细胞保持在原来接种时的水平，增殖完全停止。可见，虫草确实具有阻抗肿瘤、抑制病毒作用，对晚期肝癌患者的肿瘤细胞复制、扩散犹有较好的延缓影响。与其他滋补品的“热补路线”不同，虫草具有“温补”的特性，适合于任何年龄、体质层次的人，尚未发现任何副作用。
[0009]但是，随着冬虫夏草的药用价值不断地被人们所发现，虫草资源的产业化应用量和优质虫草的市场需求量急剧膨胀，滥采滥挖，使得野生虫草资源日益匮乏。
[0010]因此，很多人在努力以人工方式培养冬虫夏草，以期能产业化。但是，野生冬虫夏草来自青藏高原，垂直分布于3000?5100m高海拔地区的高山草甸和灌木丛中，生态环境比较复杂，其分布主要受海拔高度、植被、土壤结构、坡向、小气候、温度、光照、湿度及其它自然和人为因素的影响，生长条件苛刻。
[0011]对于人工培育来说，养虫、培菌和育草是人工培养冬虫夏草的必要条件。如在其他地区人工培养，除了这三者外，还必须模拟适宜三者生长发育的环境条件。这在理论上是可行的，但实践中操作难度非常大。目前，仅在实验室中可以模拟高原特有的生态环境，但成本非常高，没有产业化价值。同时，大规模饲养蝙蝠蛾幼虫和培养虫草属菌的技术仍未解决。
[0012]野生冬虫夏草中真菌要寄生于蝙蝠蛾幼虫，蝙蝠蛾的一个生活周期在自然状况下需4年以上，而各虫态的变化，龄期的长短，因受虫种、温度、海拔、饲料等因素的决定，所以在时间上存在一定的差异。人工培育蝙蝠蛾幼虫的生产周期长，经试验，感染成活率非常低，无法进行产业应用。因此人们尝试采用其他宿主代替蝙蝠蛾幼虫作为虫草菌的宿主。
[0013]此外，由于冬虫夏草人工培育困难，野生资源有限，因此《中国药典》将冬虫夏草同属真菌蛹虫草Cordyceps militaris (L.) Link作为冬虫夏草的替代品。蛹虫草的真菌已经可以实现人工培育，获得子实体。即使是这样，对于蛹虫草的培育也很难获得真正“有虫有草”的产品，市面上出售的所谓蛹虫草产品多为蛹虫草的子座，属于“有草无虫”产品，而非“有虫有草”的真正虫草，并且其有效成分的含量远远低于真正的冬虫夏草。
[0014]目前在人工培育冬虫夏草和蛹虫草的子座过程中，由于其“长草”的温度为25-300C，湿度为70-90%，其高湿度易生虫害，而为了防虫，需要喷洒农药，以致农药残留超标。人若经常服用，又对其身体又产生了新的危害。由于对虫草有需求的人群多为免疫力低下的人群，因此农药残留超标对其身体危害更大。
【发明内容】
[0015]为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种人工培育冬虫夏草的方法，该方法省去发草步骤，使得冬虫夏草有效成分保留在虫体体内，而不造成药效流失，并且获得的冬虫夏草的全程均保持无菌环境，无需喷洒农药，无农药残留。
[0016]本发明的另一目的是提供一种采用上述方法获得的冬虫夏草，所获得的冬虫夏草经检测有效成分高于野生冬虫夏草。
[0017]为了实现上述目的，本发明提供一种人工培育冬虫夏草的方法，包括以下步骤:
[0018]I)液体培养基配置
[0019]液体培养基按重量计包括:葡萄糖:磷酸二氢钾:硫酸镁:维生素B1:黄豆粉:酵母粉:水=40:1:0.5:0.5:20:20:1000,自然 pH 值；
[0020]按比例称取葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1、黄豆粉、酵母粉和水，混匀，倒入量杯量取体积，然后倒入锅中煮沸5-10分钟，煮沸后沉淀20分钟，把上清液倒入量杯中，加水补足蒸发量，冷却至室温；
[0021]2)液体培养基灭菌
[0022]将液体培养基倒入三角瓶内，填装量为三角瓶容积的60-70%，装瓶后用棉花或橡胶塞或无菌透气封口膜将瓶口封好进行灭菌，灭菌后静置冷却至室温；
[0023]3)接种
[0024]在无菌条件下将冬虫夏草菌种接种至灭菌后的液体培养基中，接种量为液体培养基填装量的2-6% ；
[0025]4)液体菌种培养
[0026]将接种后的三角瓶置于摇床，在18_25°C环境下，摇床转速为140转/分，培养6-10天，得到液体菌种；
[0027]5)固体培养基选择
[0028]选取健康的活体宿主虫体作为固体培养基材料，清水冲洗掉虫体上的灰尘和杂质；
[0029]6)固体培养基制备
[0030]将宿主虫体放入提前清洗晾干的洁净广口玻璃瓶，装虫量为玻璃瓶容积的50-70 %，装瓶后用无菌透气封口膜或专用瓶盖封口，灭菌；
[0031]7)接菌
[0032]在无菌条件下将步骤4)培养获得的液体菌种装入预先经过灭菌的喷雾器或注射器中，用喷雾器或注射器将液体菌种均匀地喷洒在虫体上，搅拌均匀，封好瓶盖，隔绝空气;
[0033]8)黑暗发菌
[0034]将接完菌种的玻璃瓶放在无光黑暗培育发菌室培养架上，控制温度为18_20°C，湿度为50-60%，培育发菌30天；
[0035]9)光照发菌
[0036]用日光灯管或节能灯管给予冷光，光照度为300-400LX，光照时间30天，控制温度为25-30°C，湿度为80-85%，当虫体培养基菌丝由白色变为暗黄色时，培育发菌完毕；
[0037]10)烘干
[0038]将培育好的虫体从玻璃瓶内倒出，放在烘干箱内烘干，获得人工培育的冬虫夏草成品；
[0039]11)封装保存
[0040]使用真空封装机进行封装，封装后放到通风干燥处保存。
[0041]更进一步地，所述灭菌采用高压蒸汽灭菌或常压蒸汽灭菌。
[0042]更进一步地，所述高压蒸汽灭菌方法为:使用高压灭菌锅，当压力达到49千帕时，打开高压锅放气阀排出冷气，冷气放尽后，关闭放气阀重新升温，待压力达到117千帕时再保持I小时。
[0043]更进一步地，所述常压蒸汽灭菌方法为:使用灭菌锅，常压条件下当温度达到100°C时，灭菌保持8小时。
[0044]更进一步地，所述宿主虫体为大麦虫、黄粉虫、幼蚕，优选为大麦虫。
[0045]更进一步地，所述步骤7)中接菌量为虫体重量的3-10%
[0046]更进一步地，所述步骤10)中烘干的温度为50_60°C。
[0047]本发明还提供一种人工培育的冬虫夏草，所述冬虫夏草采用上述方法培育而成。
[0048]培养中所用三角瓶可根据生产量选择不同容量大小，广口玻璃瓶以便于操作为首要保证，可以为一般广口瓶或虫草/植物专用组培瓶，一般广口瓶可使用无菌透气封口膜封口，组培瓶可使用其配套专用瓶盖(耐高温高压，适当透气)封口。
[0049]发菌室培养架层间高度可根据广口玻璃瓶的高度调整，以保证广口玻璃瓶能均匀接受光照为前提。
[0050]当