一种球孢白僵菌种衣剂及其制备方法

一种球孢白僵菌种衣剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及球孢白僵菌种衣剂及其制备方法。一种微生物农药的新剂型。
【背景技术】
[0002] 玉米是我国第二大粮食作物，年产3000亿斤以上，可用来食用，也可以作为饲料 和工业原料生产工业酒精和烧酒等。而玉米螟（Ostrinia nubilalis)是玉米生产中的主 要害虫，不仅取食玉米叶片、蛀入玉米主茎或果穗内，降低光合作用，影响养分运输，还产生 各种次级病害，致使玉米减产降质，常年造成玉米的产量损失在7%-15%，严重年份减产50% 以上，甚至绝产，给我国粮食生产造成巨大的经济损失。
[0003] 化学农药在玉米螟的防治中一直起着主要的作用，保证了粮食增产和安全问题， 但是随着大量、连续的化学农药使用，农药残留对食用安全和环境经安全的危害越来越严 重，环境兼容性好的高效农药已成为农药发展的方向。球孢白僵菌（Beauveria bassiana) 是一种微生物农药，是目前国内应用最广泛的昆虫病原真菌，可侵染鳞翅目螟蛾科、金花虫 科、金龟子科、蚜虫科800余种害虫具有致病性强，杀虫范围广，环境友好等优点，尤其是在 玉米螟和松毛虫的防治中更是取得了辉煌的成就，已经在各个地区被广泛应用。
[0004] 目前，在白僵菌防治害虫中应用的剂型主要有粉剂、可湿性粉剂、颗粒剂、油剂、悬 浮剂以及油悬浮剂等几大类，防治手段包括喷粉、撒颗粒剂、喷雾防治及无纺布挂条等，但 这些农药剂型和防治手段均采用球孢白僵菌与害虫直接接触的触杀方式，唯一目标是杀虫 效率。近年来，随着昆虫内生真菌与植物互作关系研宄的深入，学者们发现球孢白僵菌可以 在玉米、高粱、小麦、西红柿、香蕉、罂粟等植物体内共生，提高植物的抗病虫能力，增强植物 对营养的吸收、对生物量的累积、对逆境环境的适应，是植物的生态益生菌。

【发明内容】

[0005] 本发明的目的在于提供一种球孢白僵菌种衣剂及其制备方法，利用球孢白僵菌与 植物共生互惠的关系，其筛选到包衣种子孢子含量高、孢子萌发率高、可高效机械化播种的 种衣剂，该种衣剂能明显促进玉米生长和提高玉米的抗虫性；对玉米具有促生和抗虫作用， 可机械化播种。
[0006] 本发明的技术方案是这样实现的：一种球孢白僵菌种衣剂悬乳剂，包含如下组分： 1. Og悬乳剂、50-100g玉米种子，搅拌均勾，瞭干待播种。
[0007] 所述的悬乳剂包含如下组分：水55-75ml、聚乙烯醇3. Og,种衣成膜剂853 2. 〇g，麦芽糖2. 0g、蛋白胨3. 0g、黄原胶I. 0g、农乳600# 2. 0g、农乳603# 2. 0g、乳化剂 AllO 2. Og、乳化剂M0A23 2. 0g、大红水性色素 I. 0g、乳酸链球菌素0. 5g、球孢白僵菌高 孢粉 10. 0-30. 0g。
[0008] 所述玉米种子选自市售玉米种子：肯粘1号，平均百粒重为23g，发芽率多90%。
[0009] 所述球孢白僵菌高孢粉为含水量为5-10%的球孢白僵菌高孢粉，细度为400目，孢 子萌发率多95%。
[0010] 所述的聚乙烯醇为成膜剂，购自国药集团化学试剂有限公司。
[0011] 所述的种衣成膜剂853为成膜剂，购自广州凡采精细化工有限公司。
[0012] 所述的麦芽糖为高温保护剂和营养剂，购自工生物工程(上海）有限公司。
[0013] 所述的蛋白胨为增稠剂和营养剂，购自北京澳博星生物技术有限公司。
[0014] 所述的黄原胶为增稠剂，购自淄博中轩生化有限公司。
[0015] 所述的农乳600#和农乳603#为乳化剂，购自山东天道生物工程有限公司。
[0016] 所述的乳化剂AllO和乳化剂M023为乳化剂，购自江苏省海安石油化工厂。
[0017] 所述的大红水性色素为警戒色，购自广州凡采精细化工有限公司。
[0018] 所述的乳酸链球菌素为生物保护剂，购自天津艾玛斯特生物科技有限公司。
[0019] 所述的水为纯净水，购自公主岭市叮咚饮品有限公司。
[0020] 本发明积极效果是通过对球孢白僵菌种衣剂的制备，实现了球孢白僵菌与种子同 时播种，提高了球孢白僵菌施用的劳动效率；同时，本研宄获得的球孢白僵菌包衣种子可短 时间保存，不影响种子和孢子活力，这对地下害虫防治、促进玉米生长、提高玉米抗虫性具 有重要意义，打破了球孢白僵菌仅仅作为杀虫剂施用的现状，对推进生物农药球孢白僵菌 的商业化和产业化发展具有重要意义。
[0021] 为了更好地验证本发明的效果，通过以下实验例来进行说明： 一、试验方法 1. 制备悬乳剂方法： 根据悬乳剂1-5的配方，向砂磨机料桶中依次加入纯净水、聚乙烯醇、成膜剂835、黄 原胶、蛋白胨、麦芽糖、农乳600#、农乳601#、乳化剂A110、乳化剂M023,2500rpm/min，砂磨 15-20min ;待将这些化合物搅拌均勾后加入大红水性色素和乳酸链球菌素，2000rpm/min， 砂磨5min ;最后加入球孢白僵菌高孢粉，根据加入量的不同在2500rpm/min砂磨10-25min， 待悬乳剂成流动性不同的均匀膏状体即可，球孢白僵菌高孢粉含量分别为l〇g、15g、20g、 25g、30g，具体见下表：
2. 悬乳剂品质检测方法 2. 1.悬乳剂悬浮率检测方法：参照GB/T14825-93执行，称取适量试样(悬浮液浓度为 最高喷洒浓度)，精确至0. 〇〇〇lg，置于盛有50mL标准硬水（30± I°C )的200mL烧杯中，用手 摇荡作圆周运动，约每分钟120次，进行2min，将悬乳液在同一温度的水浴锅中放置13min， 然后用30 ± I °C的标准硬水将其全部洗入250mL量筒中，并稀释至刻度盖上盖子。以量筒底 部为轴心，将量筒在Imin内上下颠倒30次(将量筒倒置并恢复至原位为1次，约2s)。打 开塞子，在垂直放入无振荡的恒温水浴锅中30min。用吸管在10~15s内将内容物的9/10 即（225mL)悬浮液移出。不要摇动或搅起量筒内的沉降物，确保吸管的顶端总是在液面下 几毫米处，之后烘干称取重量，并计算悬浮率，每组实验重复三次。
[0022] 悬浮率=(试样质量-25ml悬乳液中有效成分质量）/试样质量X 10/9X 100%。
[0023] 2. 2悬乳剂粘度检测方法：高孢粉悬浮液稀释2倍后，采用粘度计直接读数，单位 为mPa · s，读数3次。
[0024] 2. 3悬乳剂孢子萌发率测定方法：高孢粉悬乳液稀释100倍后，取Iml稀释液加入 到9ml灭菌的含有抗生素的SDY液体培养液中，26°C、lSOrpnij·旦温振荡培养16h后显微镜镜 检萌发孢子，并统计孢子萌发率。每个样品重复三次，取平均值。
[0025] 孢子萌发率=萌发包子/(萌发孢子+未萌发孢子）*100% 3. 悬乳剂种子包衣方法： 悬乳剂3号和玉米种子按照下表比例加入到500ml三角瓶中充分搅拌，待玉米包衣均 匀后取出晾干，待用。每种包衣处理重复3次。
[0026] 4.种衣剂品质检测方法 4. 1种衣剂球孢白僵菌孢子包衣率检测方法： 取25粒包衣种子，放入无菌100mL三角瓶中，加入无菌的含0. 05%的吐温-80无菌水 25ml，无菌玻璃珠25g，摇床200rpm/min震荡洗涤包衣的球孢白僵菌孢子2小时，显微镜下 血球计数板计数孢子数目，计算每粒种子孢子包衣浓度。
[0027] 洗脱液孢子浓度(个孢子/ml菌悬液）=每个方格内孢子总数*稀释倍数*4*106 种子包衣浓度(个孢子/粒种子）=洗脱液孢子浓度 4. 2种衣剂包衣孢子萌发率检测方法： 取包衣种子孢子洗脱液Iml，加入到9ml灭菌的含有抗生素的SDY液体培养液中，26 °C、 ISOrpm恒温振荡培养20h后显微镜镜检萌发孢子，并统计孢子萌发率。每个样品重复三次， 取平均值。
[0028] 孢子萌发率=萌发孢子/(已萌发孢子+未萌发孢子）*100% 4. 3种衣剂包衣种子发芽率检测方法： 取包衣种子50粒，用种子发芽机25°C避光发芽，每12小时换一遍水，48小时候统计种 子萌发情况。种子萌发以胚芽吸胀穿透种皮为标志，记为萌发，以未包衣种子为对照处理。
[0029] 种子萌发率=萌发种子/(萌发种子+未萌发种子）*100% 4. 4包衣种子储存时间检测 包衣种子室温干燥储存，在1、5、10和15天时分别检测包衣孢子和种子的萌发率，筛选 包衣种子的室温储存时间。
[0030] 5.种衣剂田间应用 5. 1包衣种子田间种植和管理方法 包衣种子采用播种机两粒播种，垅距0. 75米，株距0. 25米，播种前用除草剂封闭除草 一次，播种时一次性施用长效缓释复合肥，出苗10天后进行除草和间苗，约30天时进行二 次除草和趟地。未包衣种子为对照处理，3个重复。
[0031] 5. 2促生检测方法 在种子出苗后，第30、45、55天用5米卷尺测量20株玉米苗的株高，计算玉米每天的生 长速率。重复3次。
[0032] 玉米生长速率（cm/天）=(后一次株高-前一次株高）/两次测量的间隔时间 5. 3抗虫检测方法 7月5日早晨8:00前，调查玉米螟对玉米叶片的危害程度，危害标准和抗性程度参见 NY/T 1248. 5-2006 (见下表)。调查20株玉米，重复3次。
[0033] 5. 4增产检测方法 在9月中旬，收获玉米，检测玉米百穗重、千粒干重，计算增产率。重复3次。
[0034] 增产率=(包衣千粒干重-非包衣千粒干重）/非包衣千粒干重*100% 所述的述砂磨机采用"众时(上海）机械有限公司"生产的ZMD-550实验室分散砂 磨机。
[0035] 所述的粘度计为上海天平仪器厂生产的NDJ-I型号粘度计。
[0036] 所述的显微镜采用重庆光电仪器有限公司生产的XSZ-HY2型生物显微镜。
[0037] 所述摇床为上海智诚分析仪器制造有限公司生产的ZWY-2102C型号摇床。
[0038] 所述电子称为上海光正医疗仪器有限公司生产的YPB2003型号电子