轨可能磨损,从而导致潜在的故障。如果可行, 这些都被设计成可以相对容易地更换。
[0239] 耗材和配件
[0240] 优选的实施方案中的舱体允许胚胎的自动化液体交换和玻璃化。胚胎的直径通常 是大约50 y m-300um,但是在此过程中,它们可能会凋萎和重新展开,因此,有时它们比这要 小很多。玻璃化过程要求胚胎在特定的温度下暴露于几种溶液以特定的持续时间,从而用 低温保护剂取代(多个)胚胎细胞中和周围的水,以消除或减少由于低温保存带来的损害, 如上述所指出的,典型地损害是由于冰晶。按照优选的实施方案,舱体设备防止胚胎随抽吸 液体抽出但是允许流体交换发生,并允许"封闭"系统中的高的传热递率。在这种情况下的 "封闭"系统指的是防止LNjP胚胎之间的直接接触的玻璃化系统。图9示出根据本发明的 优选实施方案的典型舱体。本质上,优选的实施方案的舱体包括三个组成部分,即,用于支 承的载体,盖子和通道。所述通道包括用于容纳样本胚胎的壳体,其在公开的PCT说明书第 TO 2011/146998号中有描述。优选的舱体设计具有以下特点:
[0241] ?如图18所示,凭借壳体通过清楚地识别胚胎放置区域而允许容易的装载
[0242] 鲁为了协助操作者定位胚胎,可以是光学透明的
[0243] ?可以具有湿润的表面,以允许流体在胚胎上交换
[0244] 鲁密封的,以防止1^2污染
[0245] ?允许玻璃化和升温速度高于约7000°C/min
[0246] 鲁使溶液的带出最小化(如缓冲溶液和平衡溶液之间,以及平衡溶液和玻璃化溶 液之间)
[0247] ?适用于不同类型和发育年龄以及阶段的胚胎。例如,由于开发要求必须适用于 人类胚胎但是也必须适用于小鼠胚胎,并且必须至少有潜力(有待进一步实验方案优化) 适用于其它哺乳动物和非哺乳动物物种的胚胎。它可以适用于卵母细胞直到完全孵化的囊 胚
[0248] 鲁依照当前建立的封闭的(多个)人工过程满足复苏和存活率
[0249] ?当用于人类胚胎时允许一个胚胎和多达两个卵母细胞在同一容器中玻璃化
[0250] ?允许升温和再平衡胚胎和卵母细胞
[0251] 鲁该舱体应该很容易由用户打开
[0252] 鲁该舱体应允许胚胎在升温后很容易被发现。这也决定了该舱体具有良好的光学 清晰度,并且不具有阻碍胚胎的观察的几何形状。
[0253] ?该舱体可以在大约20kGy和约35kGy之间灭菌(标称25kGy)
[0254] ?该舱体将允许对铝/聚丙烯层压材料的热封。这要求舱体上的密封面是聚丙烯 /聚乙烯
[0255] ?相比于破坏性的热封是可剥离的热封
[0256]实施上述功能,尽管胚胎是活细胞,非常小(约50-300 ym),脆弱,不容易得到,在 过程中改变形状,漂浮,并且非常敏感等增加的复杂性。
[0257] 在一个优选的实施方案中,四个舱体储存在一个料盒中,该料盒也用作放置在LN2 罐中的最终储存容器,而不降低LN2S LN 2液体或蒸汽储存罐中的当前储存容量。舱体也 适于很好地装配到横向滑架,以便有充足的热量转移从而在处理过程中保持良好的温度控 制。
[0258] 所述舱体通道优选地分开制造并且可以被组合成单一的整体部分。舱体适于很好 地装配到横向滑架,所以有充足的热量转移以在处理过程中保持良好的温度控制。通过表 面处理或其它修改方式,所述通道是可润湿的。测试了许多表面处理,包括但不限于火焰处 理,化学,电晕和等离子体处理。该舱体最好是通过等离子体处理来处理。通道的光学清晰 度与其可用性有关。所述通道适于密封至载体从而不透LN 2。可以添加到舱体中的流体的 最大体积为约55 yL。载体是舱体的一部分,其携带标签,并提供处理通道的构件。在这方 面,它为Iiyf供空间,证明标签和适当的表面。在室温至约-196°C下载体附着于料盒,并 且在相同的温度范围中可以是可移除的。
[0259] -般地,盖子将包含如以上所提及的铝/聚丙烯层压热封,并且将被密封至舱体 通道和载体。所述盖子被设计为在升温时为及时加入再平衡溶液而很容易被移除。
[0260] 料盒是每次存放任何合适的数目,优选多达四个舱体的零件,而且图11中示出实 例。它是对当前系统中使用的"手杖(cane)"的替换,用于在LN 2或蒸汽储存罐中储存来自 同一患者的多个玻璃化设备(诸如钩、Cryotop?、吸管等)。所述料盒优选包括允许用户 把持该料盒以玻璃化在舱体中的胚胎的把手。所述料盒还配备成具有用于条形码和其他ID 的足够的面积。在一种形式中,如图12所示,所述料盒适用于一些形式的ID可被从装满料 盒的料罐的上方读取。所述料盒优选具有以下特征:
[0261] 鲁凭借舱体的载体的特征形状设计,很容易和直观地装载和卸载舱体。
[0262] 鲁很容易在LN2中迅速地浸泡和搅动料盒,而用户不会灼伤其手指。
[0263] 鲁当打算从储存器取回特定的料盒时,用户将希望能够识别该料盒而不用从料罐 或者其他储存形式移除其他料盒。
[0264] ?需要适合约28. 5mm的间距
[0265] 关于与舱体的接口,所述舱体适于在室温下容易插入料盒。当装载到仪器中,舱体 能够移动定位到滑架而不是被料盒限制。舱体在LN 2S蒸气下可移除而不容易掉出料盒。 为了实现始终可从料盒移除舱体,通过适当定位的磁体施加可重复的力,该磁体适合于对 舱体中的含铁金属施加特定大小的磁场强度。为此,磁体优选地定位在料盒内的分配位置。 所述料盒通过滑架与仪器接口并且与储存中的料罐接口。另外,所述料盒容易从料罐拆卸 而同时保持所有的胚胎在LN 2S蒸气中。舱体可设计成具有足够的浮力从而在其与LN 2罐 中的料盒分离时浮动。
[0266] 参照图13,提供可消耗托盘用于玻璃化溶液、废弃物的小瓶和移液器吸头。它平放 在工作台(bench)或热板上,并允许热传递到达舱体和溶液。它也容易被处理,并且容易且 准确地装载到加热滑架上的位置。所述舱体通过料盒以及辅助热传递到舱体内的溶液的可 消耗的托盘上的通道部件的配合而位于可消耗的托盘中。为了定位和热传递原因,小瓶紧 密地嵌入可消耗托盘内。
[0267] 所述可消耗托盘还适于允许耗材以低净空高度在各工作站下方通过以降低每个 工作站的Z-轴行进。然而,吸头优选比其它部件高得多。鉴于这一要求和平放在工作台 上的要求,将托盘设计成具有浮动的吸头固定器,从而当位于工作台或者热板上时其可以 停留在高处,并且当装载在仪器上时其可以停留在低处开口内。可以通过驱动分配轴相对 于可消耗托盘中的吸头固定器向下进入吸头而装载吸头。接载吸头的力约为垂直向下的 60-100N(6_10kg)。所述托盘适于配合约28. 5mm的间距,并适于正面接合到具有大约60mm 的总体最大高度的仪器内。
[0268] 介质料筒可具有包括以下内容的特征。它适于以可移动和无菌的方式容纳至少两 个流体小瓶。介质料筒适于配合约28. 5mm的间距。它可以最大限度地进行对介质小瓶的 热交换和适于介质小瓶的正面接合。介质小瓶可以提供为含有最低约l〇〇y L的溶液,并以 适于介质产生和保质期为准则来确定。
[0269] 吸头料筒具有以下特点。接载吸头所需的力是垂直向下地大约60-100N(6_10kg)。 吸头料筒持有至少一个用于实验方案后胚胎检查的干净废物小瓶和持有至少一个无菌移 液器吸头。它持有至少一个无菌可热密封盖子并适合约28. 5mm的间距。它最大限度地减 少用于干组分的存储容量。它也提供了吸头移除回到耗材/一次性用品中用于处理。
[0270] 提供分配吸头并且优选OEM吸头。在一个实施方案中,已经使用10yL的过滤 Axygen?TF300吸头。分配吸头的特点和设计考虑因素包括所述吸头具有细的远端,使得 它可以装配到舱体通道内,允许舱体、吸头和仪器的公差。吸头适于保持最低约10 y L并且 它应该被过滤。还优选该分配吸头适于与移液器吸头交互。
[0271] 参照图14,料罐被用作在储罐或杜瓦瓶中保持数个料盒的容器。目前的系统使用 料罐保持手杖,然后其持有数个吸管,或者其他玻璃化设备。在该实施方案中,示例性料罐 设计用于以下系统:1^ 2储存罐;LN 2气相储罐,干托运器和杜瓦瓶存储系统。
[0272] 对于杜瓦瓶存储,有16个小手杖@每个3-6个胚胎,或者4个大手杖@每个7个 胚胎的容量。料罐容量相当于大约20个患者,即,76个胚胎,其相当于总容量。对于储罐, 有16小手杖@每个3个胚胎,或者10个大手杖@每个7个胚胎的容量。料罐容量相当于 大约26个患者,即118个胚胎。如果2个料罐堆叠,则有相当于大约52个患者,即236个 胚胎的容量。
[0273] 对舱体移除工具已经确定的一个潜在的需求是帮助从料盒移除舱体而同时在LN2 或蒸气中。只有当舱体和料盒设计很难移除舱体的情况下才这样要求。然而,相比之下,优 选使用如上所述的磁体定位系统。
[0274] 作为参考,已经观察到,由于在低温下塑料的硬度增加,通常设计成挠曲以便接合 和释放的部件在用户友好的力下不再能够挠曲。
[0275] 虽然已经结合本发明的具体实施方案描述了本发明,应当理解的是,能够进一步 (多处)修改本发明。本申请意在覆盖大体上遵循本发明的原理的并且包括落入本发明所 属的领域内的已知和惯常实践内的并且可以适用于上文所阐述的基本特征的对本公开的 这种偏离的本发明的任何变型用途或修改。
[0276] 由于本发明可以若干形式实施而不脱离本发明的本质特征的精神,应该理解的 是,上述实施方案并不限制本发明,除非另有说明,而是应该在所附权利要求所限定的本发 明的精神和范围内宽泛地解释。所描述的实施方案在所有方面都只是说明性的而不是限制 性地加以考虑。
[0277] 各种修改和等同布置旨在被包括在本发明和所附权利要求的精神和范围内。因 此,具体实施方案应被理解为是其中本发明的原理可以被实施的许多方面的说明。在以下 权利要求中,手段加功能条款旨在覆盖执行所限定的功能的结构,不只是结构等同物,也是 等效的结构。例如,尽管钉子和螺钉可能不是结构等同物,因为钉子使用圆柱表面来将木制 零件固定在一起,而螺钉采用一螺旋表面来将木制零件固定一起,然而在紧固木质零件的 环境中,钉子和螺钉是等同结构。
[0278] 应当注意的是,在本文使用术语"服务器","安全服务器"或类似的术语的情况下, 描述了可在通信系统中使用的通信设备,除非上下文另有要求,并且不应该解释为限制本 发明到任何特定的通信设备类型。因此,通信设备可以包括,但不限于,桥接器,路由器,桥 接路由器(路由器),交换机,节点或其他通信设备,其可以是或可以不是安全的。
[0279] 还应当指出的是,在本文使用流程图说明本发明的各个方面的情况下,不应被解 释为将本发明限制于任何特定的逻辑流程或逻辑实现。所描述的逻辑可以划分成不同的逻 辑块(例如,程序,模块,功能或子程序)而不改变整体结果或以其他方式偏离本发明的真 实范围。通常,逻辑元件可被添加,修改,省略,以不同的顺序执行,或者使用不同的逻辑结 构(例如,逻辑门,循环原语,条件逻辑和其他逻辑结构)实施而不改变整体结果或者以其 他方式偏离本发明的真正范围。
[0280] 本发明的各种实施方案可体现为许多不同的形式,包括用于处理器(例如,微处 理器,微控制器,数字信号处理器,或通用计算机,并且就此而言,任何商业处理器可以被用 于实现本发明的实施方案,作为系统中的单一处理器,串行或并行的处理器组,因此,商用 处理器的例子包括,但不限于:Merced?,奔腾?,奔腾II?,至强?,赛扬?,Pentium Pro?, Efficeon?,速龙?,AMD?等)的计算机程序逻辑,用于可编程逻辑设备(例如,现场可编 程门阵列(FPGA)或其它PLD)的可编程逻辑,分立元件,集成电路(例如,专用集成电路 (ASIC)),或任何其他方式,包括它们的任何组合。在本发明的示例性实施方案中,主导的是 用户和服务器之间的所有通信作为转化成计算机可执行形式的一组计算机程序指