一种抗草胺膦棉花的快速鉴定方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及农业技术领域，具体地说，设及一种抗草胺麟棉花的快速鉴定方法。
【背景技术】
[0002] 棉花是我国重要的经济作物，常年种植面积500万hm2,占经济作物总面积的 26%，是国民经济的重要支柱产业。然而，我国棉田杂草危害较重，常年造成损失在14%~ 16%，严重制约了棉花的优质、高效生产。草锭麟（glu化sinate-ammonium)由赫斯特公司 (现归属于拜耳公司）开发生产，化学名称为4-[径基（甲基）麟酷基]-〇心高丙氨酸，属 于麟酸类除草剂，是谷氨酷胺合成抑制剂，非选择性（灭生性）触杀型除草剂。草锭麟开发 于二十世纪80年代，是世界上第二大转基因作物耐受除草剂。草锭麟对耐受草甘麟的部分 恶性杂草去除效果非常好，施药后短时间内，植物体内锭代谢陷于素乱，细胞毒剂锭离子在 植物体内累积，与此同时，光合作用被严重抑制，达到除草目的。草锭麟毒性低，较为安全， 在±壤中易于降解，对作物安全，不易飘移，除草谱广，活性高，用量少，环境压力小，杀草迅 速，能快速杀死100种W上的禾本科和阔叶杂草，可用水做基剂，使用安全方便，在棉田杂 草的防除中发挥着重要作用。但是，由于草胺麟不具有在杂草和棉花之间的选择性，在使用 草胺麟时，往往容易对常规棉花品种造成药害，甚至死亡。
[0003] 转基因技术发展的速度惊人，转基因作物对农业的巨大贡献已经得到广泛的认 可，其种植近年来也呈愈演愈烈之势。转基因抗草胺麟棉花的应用不仅可W避免药害的产 生，还可W扩大草胺麟的使用范围和灵活性。草锭麟作为一种优良的灭生性除草剂，非常适 合作为抗性基因，赫斯特公司积极发展转基因作物，W草锭麟为目标，进行抗性基因转移、 选育抗性作物品种，目前，赫斯特公司已经成功将草锭麟的抗性基因应用于棉花等20多种 作物中，运些转基因作物不仅在W美国为主的广大北美地区普遍种植，近年来开始在亚洲、 澳洲、欧洲部分国家及地区推广种植。高剂量使用草锭麟对转基因作物具有一定的伤害，但 药害轻，对产量影响不大。抗草锭麟作物安全剂量可高达2. 0kg/hm2W上，而0. 5~1. 0kg/ hm2的草锭麟即可防除大部分杂草。
[0004] 目前，我国正在实施转基因抗草胺麟棉花新品种培育计划，已获得一批稳定表达 的转基因棉花新材料。随着农业现代化水平的提高，农村劳动力大量城市化转移，棉花生产 者对抗除草剂品种的需求越来越强烈。转基因抗草胺麟棉花势必将成为我国继抗草甘麟棉 花之后有望推广的另一类转基因抗除草剂棉花产业化品种。在抗草胺麟棉花品种选育过程 中，对棉花材料进行草胺麟抗性评价不仅是棉花育种和产业化推广的基础，也是进行转基 因棉花环境安全性评价的内容之一，因此，开发一种抗草胺麟棉花的检测和鉴定方法就显 得尤为重要。 阳〇化]目前，抗草胺麟棉花的鉴定方法主要为田间或溫室植株抗性鉴定法，即在田间或 溫室种植待测棉花，当棉花长到一定叶龄后喷施一定浓度的草胺麟，根据施药后棉花植株 的死亡程度对其是否为抗草甘麟棉花做出判断。此方法直观准确，但是耗时长、占用空间 大、季节性强。因此，建立一种快速、简便、低成本且准确有效的抗草胺麟棉花鉴定方法对于 我国抗草胺麟棉花的推广和检测具有重要意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种抗草胺麟棉花的快速鉴定方法。
[0007] 为了实现本发明目的，本发明的一种抗草胺麟棉花的快速鉴定方法，所述方法包 括：将已露白的待测棉花种子用草胺麟溶液浸泡；清水冲洗后，将所浸泡过的种子置于光 照培养箱中进行砂培；分别统计出苗数及培根长，计算出苗率和胚根生长抑制率；根据出 苗率和胚根生长抑制率判断待测棉花是否为抗草胺麟棉花，其中出苗率>80%或胚根生长 抑制率《40%的为抗草甘麟棉花，而出苗率《40%或胚根生长抑制率> 80%的为非抗草 胺麟棉花。
[0008] 前述的方法，待测棉花种子预先进行硫酸脱绒处理，然后将种子于清水中浸泡24 小时，获得已露白的种子。
[0009] 前述的方法，将已露白的待测棉花种子用有效成分浓度0. 5~2. Og/L的草胺麟溶 液浸泡0. 5~2小时，随后用水冲洗，即草胺麟处理组；同时，设清水对照处理组，即用清水 浸泡待测样本。
[0010] 前述的方法，砂培的具体操作为：将细砂过筛后置于干燥箱中，180°C干热灭菌4 小时，惊凉后将细砂和水按照25:4的重量比混匀，装入规格为13cmX19cmX12cm的发芽盒 中，至约2/3高度；将浸泡过的棉花种子均匀摆放于发芽盒中，约50粒种子/盒，重复4次； 然后在种子上覆盖约1. 5cm厚的松散砂，盖上盖子后置于光照培养箱中培养。
[0011] 其中，光照培养箱的溫度设定为30°C，湿度60%~80%，光照8小时/黑暗16小 时，光照强度为60001X。
[0012] 砂培7天后，分别统计清水对照处理组和草胺麟处理组的棉花种子的出苗数，计 算出苗率，统计胚根长，并计算胚根生长抑制率；其中种子出苗的判断标准为子叶破上。胚 根生长抑制率的计算公式为：
[0013] 胚根生长抑制率％=(清水对照处理组的胚根长-草甘麟处理组的胚根 长）X 100/清水对照处理组的胚根长
[0014] 在上述抗草胺麟棉花的快速鉴定方法中，在所述统计和计算步骤中，还可观察胚 根生长情况；在所述判断步骤中，还可根据胚根生长情况判断待测棉花是否为抗草胺麟棉 花，其中胚根生长正常的为抗草胺麟棉花，而胚根生长受抑制、无侧根的为非抗草胺麟棉 花。
[0015] 本发明具有W下优点：
[0016](一）周期短。一般8天左右即可获得鉴定结果。与田间或溫室抗性鉴定方法相 比，鉴定周期缩短了 10天左右。
[0017](二）用药量少。用少量药剂浸泡种子就可W鉴定，与田间或溫室抗性鉴定方法相 比，省去大量喷洒的用药量，本发明的鉴定方法可W重复进行，结果一致性较好。
[0018] (Ξ)工作量小。本发明的鉴定方法在室内完成，无需进行整地、播种、施药等操 作，一人便可完成整个鉴定过程。并且占用空间小，可W同时对多个材料进行鉴定。
[0019](四）不受季节限制。本发明的鉴定方法在室内操作，种子在光照培养箱中培养。 与田间或溫室抗性鉴定方法相比，本发明的鉴定方法避免了不良气候的影响。
【具体实施方式】
[0020] W下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例 中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
[002UW下实施例中使用的试验材料：抗草胺麟棉花材料共6种，分别为ZYA1、ZYA2、 ZYA3、ZYA4、ZYA5、ZYA6 ;非抗草胺麟棉花材料共3种，分别为中棉所52、中棉所65、中棉所 83。上述材料均由中国农业科学院棉花研究所育种室提供。所用草胺麟为紫电青霜，其为 浓度200g/L的草胺麟水剂，由河北石家庄市龙汇精细化工有限责任公司生产。实施例中的 定量试验，均设置4次重复实验，结果取平均值。
[0022] 实施例1抗草胺麟棉花的快速鉴定方法 阳〇2引试验方法：
[0024] 1、催芽
[00巧]将所有棉花种子进行硫酸脱绒，光子处理备用。然后取每种待测材料的种子于清 水中浸泡24小时，取已露白的种子备用。
[0026] 2、浸泡
[0027] 每个待测样本挑选已催芽露白的、饱满的棉花种子，用草胺麟溶液浸泡，随后用水 冲洗。同时，设清水对照处理组：用清水浸泡待测样本。
[0028] 3、砂培
[0029] 将细砂过筛后置于干燥箱中，180°C干热灭菌4小时，惊凉后将细砂和水按照25:4 的重量比混匀，装入规格为13cm