一种黑尾近红鲌精子保存方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及精子保存技术领域，具体是一种黑尾近红舶精子保存方法。
【背景技术】
[0002]黑尾近红舶是我国长江上游特有经济鱼类，因过度捕捞、水利工程修建等，自然资源严重衰退;开展人工繁养，是资源保护和充分利用的重要举措。在人工繁殖过程中，黑尾近红舶鳞片易脱落受伤，不易操作，亲本成活率低;黑尾近红舶精子排出体外后保存时间较短，如4°C条件下，3h内可保持80%成活率，7h内成活率仅为50%;黑尾近红舶远缘杂交育种过程中，因不同种类繁殖时间存在差异，有效育种时间短或杂交成活率低。利用精子保存液保存黑尾近红舶精子，一是减少亲本损耗和用量;二是准确掌握精子活力，提高受精率和孵化率;三是延长精子保存时间和远缘杂交育种时间，提高远缘杂交育种成活率，大规模培育新品种或新品系。而现有的精子保存液对精子保存效果存在保存时间短以及成本高等问题。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种黑尾近红舶精子保存方法，以解决上述【背景技术】中提出的问题。
[0004]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案:
一种黑尾近红舶精子保存方法，具体步骤如下:
(I)精子保存液的制备:按配比称取各原料成分，用蒸馏水分别进行溶解，混合均匀，加蒸馏水定容至100 mL；
精子保存液采用如下配方中的一种进行配制:
Ai保存液配方:NaCl 0.80g，KCl 0.04g,CaCl2 0.01g,MgS04.7H20 0.02g,NaHCO30.04g,Na2HPO4.H2O 0.02g,KH2PO4 O-OlgjC6Hi2O6.H2O 0.10g，蒸馏水定容至10mL;
A2保存液配方:NaCl 0.80g，KCl 0.04g,CaCl2 0.0lg,MgSO4.7H20 0.02g,NaHCO30.04g,Na2HPO4.H2O 0.02g,KH2PO4 O-OlgjC6Hi2O6.H2O 0.10g，青霉素200X 14 IU、蒸馏水定容至100 mL；
Bi保存液配方:NaCl 0.7800g、KCl 0.0200gXaCl2 0.0210g、NaHC03 0.0021g、蒸馏水定容至10mL;
B2保存液配方:NaCl 0.7800g，KCl 0.0200g,CaCl2 0.021g,NaHCO3 0.0021g，青霉素200 X 14 IU，蒸馏水定容至10mL;
C1保存液配方:葡萄糖2.90g，KCl 0.05g,CaCl2 0.02g,NaHCO3 0.21g，蒸馏水定容至10mL；
C2保存液配方:葡萄糖2.90g，KCl 0.05g,CaCl2 0.02g,NaHCO3 0.21g，青霉素200 X 14IU，蒸馈水定容至10mL;
Di保存液配方:NaCl 0.743g，KCl 0.278g,CaCl2 0.029g,MgCl2.6H20 0.030g,NaHCO30.042g，蒸馈水定容至10mL;D2保存液配方:NaCl 0.743g，KCl 0.278g,CaCl2 0.029g,MgCl2.6H2O 0.030g,NaHCO30.042g，青霉素200 X 14 IU，蒸馏水定容至10mL ；
Ei保存液配方:NaCl 0.6903g，KCl 0.0946g，CaCl2 0.0300g,MgCl2.6H2O 0.0142g，Na2HPO4 0.0540g,NaHCO3 0.3999g，络氨酸 0.0996g，甘氨酸 0.0412 g，牛血清白蛋白0.41 1g，蒸馈水定容至10mL;
E2保存液配方:NaCl 0.6903g，KCl 0.0946g，CaCl2 0.0300g,MgCl2.6H2O 0.0142g，Na2HPO4 0.0540g,NaHCO3 0.3999g，络氨酸 0.0996g，甘氨酸 0.0412g，牛血清白蛋白0.41 1g，青霉素200 X 14 IU，蒸馏水定容至10mL ；
(2)精液采集:用毛巾擦干成熟黑尾近红舶雄鱼并排除尿液和粪便，避免精液污染;轻压腹部，用吸管收集挤出的精液，采集过程避免阳光或紫外线照射；
(3)精液存放:将采集的黑尾近红舶精液置于经灭菌消毒的干燥、洁净且密封的容器中，精液与精子保存液的体积比为I: 5?10，采集结束后将盛有精液和保存液的容器置3?5°〇低温避光保存。
[0005]作为本发明进一步的方案:黑尾近红舶精子保存液的优选方案为保存液配方C2:葡萄糖2.90g，KCl 0.05g，CaCl2 0.02g,NaHCO3 0.21g，青霉素200 X 14 IU，蒸馏水定容至100mL，在4°C条件下，保存液配方C2使黑尾近红舶精子活力达80%的保存时间为156 h。
[0006]与现有技术相比，本发明的有益效果是:本发明通过以上技术方案，能有效延长黑尾近红舶精子体外存活时间，保持其受精活力，实现黑尾近红舶的保护性开发和远缘杂交育种。该方法成本低廉、简短易操作，有效保存时间长，具有重要的应用价值。
【具体实施方式】
[0007]下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0008]为提高黑尾近红舶精子体外保存活力，实现保护性开发，其精子保存液各成分用蒸馏水配制而成。
[0009](I)精子保存液的制备:按配比称取各原料成分，用蒸馏水分别进行溶解，混合均匀，加蒸馏水定容至100 mL；
精子保存液采用如下配方中的一种进行配制:
Ai 保存液配方:NaCl 0.80g，KCl 0.04g，CaCl2 0.0lg，MgS(k.7H20 0.02g, NaHCO30.04g,Na2HPO4.H2O 0.02g,KH2PO4 0.0lg，C6Hi2O6.H2O 0.10g，蒸馏水定容至10mL;
A2保存液配方:NaCl 0.80g，KCl 0.04g,CaCl2 0.0lg,MgSO4.7H20 0.02g,NaHCO30.04g,Na2HPO4.H2O 0.02g,KH2PO4 0.0lg，C6Hi2O6.H2O 0.10g，青霉素200X 14 IU、蒸馏水定容至100 mL；
Bi保存液配方:NaCl 0.7800g、KCl 0.0200g、CaCl2 0.0210g、NaHC03 0.0021g、蒸馏水定容至10mL;
B2保存液配方:NaCl 0.7800g，KCl 0.0200g,CaCl2 0.021g,NaHCO3 0.0021g，青霉素200 X 14 IU，蒸馏水定容至10mL; Ci保存液配方:葡萄糖2.90g，KCl 0.05g，CaCl2 0.02g，NaH⑶3 0.21g，蒸馈水定容至10mL；
C2保存液配方:葡萄糖2.90g，KCl 0.05g，CaCl2 0.02g,NaHCO3 0.21g，青霉素200 X 14IU，蒸馈水定容至10mL;
Di保存液配方:NaCl 0.743g，KCl 0.278g，CaCl2 0.029g，MgCl2.6H2O 0.030g,NaHCO30.042g，蒸馈水定容至10mL;
D2保存液配方:NaCl 0.743