一种姜黄组织培养快速繁殖方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种姜黄组织培养快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]药材姜黄又名宝鼎香、黄姜，为姜科植物，姜黄(Curcumalonga L.)的干燥根莖，具有破血、行气、通经、止痛的功效，用于治疗风湿、肩臂酸痛、胸胁疼痛、痛经以及损伤瘀痛等。
[0003]现代研究表明，姜黄根茎以姜黄素类为主，含有倍半萜类化合物、酸性多糖、挥发油类、菜油甾醇厚等多种复杂成分，具有保护免疫系统(抗炎、创伤愈合等)、消化系统(抗溃疡、解痉)、心血管系统(降压、降血脂、抗血凝)和保肝利胆作用，以及兴奋子宫、抗生育、抗氧化、抗突变、抗肿瘤、抗艾滋病、抗老年痴呆、抗病原微生物及原虫等广泛药理活性，且无毒副作用。
[0004]我国己经开发出多种以姜黄为主要原料的中成药，如:马应龙麝香痔疮膏、舒肝片、珊瑚癣净等。美国国立肿瘤研究所将姜黄素列为第三代癌化学预防药。除了用于临床中药配方、作为多种传统中成药和抗菌消炎、抗肿瘤类新药开发的重要原料外，姜黄色素还被广泛用作食品添加剂、饮料原料、染料添加剂，以及香水等日化用品，出口东南亚和欧美等国家，表现广阔的开发潜力和市场前景。因此，随着规模开发利用的需求，姜黄的种植面积不断扩大。
[0005]植物姜黄主要分布于四川、福建、江西、在广西、湖北、陕西、台湾、云南等地也有栽培。但是，姜黄开花很少，大多数种子不充实，栽培上主要利用根茎繁殖，称为“种姜”，即“老母姜”，但不能使用老母姜作种，要待子姜繁殖出的长成后的母姜，即“二母姜”才行，因此，姜黄和繁殖速度慢、效率低下。迄今尚无姜黄组织培养研究的报道。
【发明内容】
[0006]本发明通过以下技术方案达到上述目的，一种姜黄组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤:
[0007](I)外植体的选择与消毒:取姜黄地下块茎作外为植体，先用2v/v%的洗洁精水溶液浸泡20min，线状自来水冲洗15-20min，再用添加了2-3滴吐温-20的0.lm/v%的升汞消毒10-15min，无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去除外植体表面水份，其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
[0008](2)块茎发芽培养和获得无菌试管苗:将步骤(I)中获得的外植体接种到MS发芽培养基中培养得到无菌试管苗，其中MS发芽培养基中添加IAA 0.1-0.5mg/L、6-BA 0.5-
2.0mg/L、鹿糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8 ；
[0009](3)试管苗快速繁殖和获得丛生芽:将步骤(2)中得到的试管苗接种至MS丛芽培养基中培养25-30d，获得丛生芽，其中，MS丛芽培养基中添加ZT 0.1-1.0mg/L、IBA 0.1-
1.0mg/L、鹿糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8 ；
[0010](4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的丛生芽转接至MS壮苗培养基中培养25-35d，得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加6-BA 0.5-1.5mg/L、NAA 0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8 ；
[0011](5)生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株转接至I/2MS生根培养基中培养25-35d，得到带根完整植株，其中1/2MS培养基中添加NAA 0.1-1.0mg/L ,I BA 0.1-0.5mg/L、蔗糖 15mg/L、琼脂 5mg/L，pH值5.8 ；
[0012](6)炼苗与移栽:室温下打开组培瓶盖，加入少量自来水，炼苗7天;待培养基表面形成角质后，取出幼苗，洗净根部培养基，移栽到沙床中；在沙床中生长27-33d，移栽到大田。
[0013]本发明突出的优点在于:
[0014](I)通过姜黄组织培养，在短时间内培育出大量适合移栽的姜黄种苗，显著提高姜黄种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足市场需求。
[0015]在MS发芽诱导培养基中添加6-BA 0.5_2.0mg/L，可显著促使芽萌动，添加IAA0.1_0.5mg/L，可促使芽伸展，从而产生大量丛生芽;在MS壮苗培养基添加NAA0.1-0.5mg/L可促进丛生芽长高和展叶。
[0016](2)采用本发明培养所得到的组培苗增殖系数达到10-15倍，获得组培苗生根率在98 %以上，移栽苗床成活率在95 %以上，有效解决了姜黄工厂化育苗的问题。
【具体实施方式】
[0017]下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明，
[0018]实施例1
[0019]本发明所述的姜黄组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括如下步骤:
[0020](I)外植体的选择与消毒:取姜黄地下块茎作外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡20分钟，用毛刷仔细刷掉块茎上的泥土，用解剖刀切取带芽的块茎，用线状自来水冲洗
15-20分钟，添加了 2-3滴吐温-20的0.lm/v %升汞消毒10_15分钟，无菌水冲洗3_5次，在超净工作台上用无菌解剖刀切取芽点，剥去芽点外层，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体。其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
[0021](2)芽点萌发，获得无菌试管苗:将步骤(I)中获得的外植体接种到MS培养基中，在温度为22-26°C，光照强度15001uX，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，获得无菌试管苗。其中，MS培养基中添加NAA 0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH值5.8。
[0022](3)试管苗丛生芽快速地繁殖培养:将步骤(2)中得到的试管苗置于MS繁殖培养基中，在温度为22-26°(:，光照强度150011?，光照时间8-1011/(1的条件下培养30(1，获得无菌试管苗丛生芽。其中，MS繁殖培养基中添加ZT0.5-2.0mg/L IBA 0.2-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂511^/1，培养基?!1为5.8。
[0023](4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在温度为22-26°C，光照强度15001ux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，得到健壮植株。其中，MS壮苗培养基中添加6-BA 0.5-1.5mg/L、NAA 0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8。
[0024](5)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中，在温度为22-26°C，光照强度15001ux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，得到带根完整植株。其中，1/2MS生根培养基中添加NAA0.1-1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼月旨511^/1，培养基?!1为5.8。
[0025](6)炼苗与移栽:在室温下打开瓶盖，瓶中加入少量自来水，炼苗7天，待表面角质形成后，取出幼苗，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。
[0026]实施例2
[0027]本发明所述的姜黄组织培养快速繁殖方法的另一个实例，包括如下步骤:
[0028](I)外植体的选择与消毒:取姜黄地下块茎作外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡20min，用毛刷仔细刷掉块茎上的泥土，线状自来水冲洗15-20min，用添