结构三酰甘油和用于制造结构三酰甘油的方法与流程

相关申请的交叉引用本申请要求于2013年10月17日提交的具有序列号61/892,017的题为“Structuredtriacylglycerolsandmethodsformakingthesame”的美国临时申请的优先权，其通过引用被整体地并入本文。背景母亲的母乳被普遍地认为是足月儿直至6个月至一年的营养的黄金标准。人乳是营养物和生物活性化合物的提供均衡营养并帮助构建免疫力的复杂混合物。虽然人的母乳是婴儿的营养的优选选择，但在母亲不能或选择不哺乳时或如果产奶量不足的某些情况下，婴儿配方奶粉(infantformulas)被采用作为人的母乳的营养备选物。脂质是人乳的重要成分，其不仅提供～50％能量而且提供必需脂肪酸(EFA)和脂溶性维生素。人的母乳的总脂质含量变化(3-5％)，并且那些脂质的98％是三酰甘油(TAG)。人乳提供EFA亚油酸(LA,18:2n-6)和α-亚麻酸(ALA,18:3n-3)以及它们的长链衍生物花生四烯酸(ARA,20:4n-6)和二十二碳六烯酸(DHA,22:6n-3)的源。在婴儿中，LA和ALA分别至ARA和DHA的转化不足够有效地满足营养要求；因此，许多常规婴儿配方奶粉补充有预先形成的ARA和DHA。虽然长链多不饱和脂肪酸(LCPUFA)占人乳脂肪中的非常小的比例(<1％，单独地)，但它们在婴儿的适当成长中起重要作用，尤其是DHA(0.32±0.22％)和ARA(0.47±0.13％)。EFA和LCPUFA的生物利用度在婴儿期对于适当的脑生长和活动、认知技能、动作技能、感觉功能和神经学是关键的。在人乳中，棕榈酸(16:0)主要地在sn-2位置处被酯化(>50％)；而植物油或牛乳脂肪在TAG分子的外部位置(例如，sn-1和sn-3位置)中包含它们的棕榈酸的大部分。这种人乳TAG的独特的脂肪酸分布大大地影响了它们的消化、吸收和代谢。在通过胰脂肪酶水解之后，棕榈酸从TAG的sn-1,3位置释放。游离棕榈酸可以形成导致膳食钙的损失、粪便的硬化以及便秘的不溶性钙皂。与婴儿配方奶粉相比，在人乳中已观察到较高的棕榈酸吸收，所述婴儿配方奶粉包括其中棕榈酸主要地在sn-1,3位置处被酯化的配方。这在足月儿和早产儿二者中都已被观察到[Carnielli,V.；等人，Am.J.Clin.Nutr.1995,61,1037-1042；Carnielli,V.；等人，J.Pediatr.Gastr.Nutr.1996,23,554-560]。然而，富含sn-2棕榈酸的婴儿配方奶粉具有较高的棕榈酸吸收并且还可以改进钙吸收[29]。概述简要地描述的，本公开内容的发明的实施方案提供结构脂质(structuredlipid)(SL)的混合物的组合物、包含SL的混合物的产品以及制造SL的混合物和包含SL的混合物的产品的方法。在实施方案中，本公开内容提供包含结构脂质(SL)的混合物的组合物，其中在该混合物中的SL的至少一部分具有在sn-2位置处的棕榈酸并且其中该混合物选自包括以下的SL混合物的组：SL1-1、SL1-2、SL2-1、SL2-2、SL132、SL142、SL151、TDA-SL、PDG-SL、SL3、SL5、SL6和SL7。本公开内容的实施方案还包括包含本公开内容的选自以下的SL的混合物的产品：SL1-1、SL1-2、SL2-1、SL2-2、SL132、SL142、SL151、TDA-SL、PDG-SL、SL3、SL5、SL6和SL7。在实施方案中，本公开内容的产品包括包含本公开内容的SL混合物的婴儿配方奶粉。本公开内容的用于制造本公开内容的SL的混合物的方法的实施方案包括提供一种或更多种基底油，其中油的至少一种是三棕榈精油；和提供一种或更多种游离脂肪酸化合物，其中游离脂肪酸化合物包括脂肪酸油、游离脂肪酸(FFA)、脂肪酸乙酯(FAEE)、或其组合。在实施方案中，脂肪酸油、FFA和/或FAEE选自：二十二碳六烯酸(DHA)油、DHA的FFA、DHA的FAEE、花生四烯酸(ARA)油、ARA的FFA、ARA的FAEE、γ-亚麻酸(GLA)油、GLA的FFA、GLA的FAEE、以及这些的组合。该方法还包括使一种或更多种基底油和一种或更多种游离脂肪酸化合物与选自以下的一种或更多种脂肪酶反应以形成SL混合物：非特异性脂肪酶、sn-1,3特异性脂肪酶、以及非特异性脂肪酶和sn-1,3脂肪酶二者的组合。本公开内容的方法还包括制造本公开内容的SL的混合物的粉末制剂的方法。在实施方案中，该方法包括提供本公开内容的SL混合物和/或由本公开内容的方法制造的SL混合物，将该SL混合物分散在碳水化合物和蛋白质混合物中以形成乳液，以及喷雾干燥该乳液以提供微封装的SL的粉末制剂。在检查以下附图和详述后，对于本领域的技术人员来说，本公开内容的其他方法、组合物、装置、特征和优点将是明显的，或将变得明显的。意图的是，所有这样另外的组合物、方法、特征和优点都被包括在此描述中，并且都在本公开内容的范围内。附图简述当结合附图考虑时，在重新检查下文描述的本公开内容的各种实施方案的详细描述后，本公开内容的另外的方面将是更容易理解的。此外，在附图中，贯穿若干视图，相同的参考数字指示相应的零件。图1图示用于合成本公开内容的SL混合物的两种反应方案。上部方案图示两阶段合成，并且下部方案图示一阶段合成。图2是图示在sn-2位置处结合的棕榈酸的量作为使用1阶段合成和2阶段合成二者的反应时间的函数的柱状图。图3A和图3B是基底和结构脂质的熔化热谱图(图3A)和结晶热谱图(图3B)。所示的温度分别是熔化完成温度和结晶开始温度。图4是图示结构脂质(1:1:0.5，TP:EVOO:AD)的mol％sn-2棕榈酸(主y-轴)和mol％总ARA+DHA(副y-轴)作为两阶段合成和一阶段合成中的Novozym435和LipozymeTLIM脂肪酶的可重用性的因素的图。图5图示在实施例2中描述的基底、结构脂质和物理掺合物的实施方案的熔化热谱图。所示的温度为熔化完成温度。图6图示来自实施例2的基底、结构脂质和物理掺合物的实施方案的结晶热谱图。所示的温度为结晶开始温度。图7A-7C是在时间保持在18h不变的情况下，基底摩尔比和温度对在sn-2处的PA(图7A)、对总PA结合(图7B)和对总DHA结合(图7C)的影响的等值线标绘图。图8是图示在来自实施例4的SL混合物、TDA-SL和PDG-SL的实施方案中的生育酚浓度(ppm)的柱状图。T，生育酚和T3，生育三烯酚。图9是图示搅拌时间对喷雾干燥的TDA-SL和PDG-SL粉末的实施方案的遮光率(obscuration)的影响的图。遮光率作为在粉末被添加至激光衍射仪的搅拌单元之后的时间的函数被测量。图10是图示所测量的平均微滴直径(μm)作为在SL粉末的实施方案被添加至激光衍射仪的搅拌单元之后的时间的函数的图。图11图示用于制备本公开内容的SL的实施方案的两种反应方案，其示出了酸解(利用FFA作为基底，顶部反应)和酯交换(利用FAEE作为基底，底部反应)。图12是图示通过在60℃下使用不同的基底摩尔比(3-9mol酰基供体:1mol三棕榈精)和不同的温育时间(12-24h)的酸解(FFA作为基底)和酯交换(FAEE作为基底)的ARA和DHA的总结合百分比(percenttotalincorporation)的图。图13图示本公开内容的SL混合物的实施方案的宽带去耦13C-NMR谱的羰基区域。注释出sn-1,3和sn-2区域异构体峰至个体脂肪酸的归属。图14图示如通过反相HPLC测定的棕榈油精、CIFL和本公开内容的SL混合物的实施方案的TAG分子物质概况(TAGmolecularspeciesprofile)。注释的TAG物质不反映立体化学构型。图15图示三棕榈精、本公开内容的SL混合物的实施方案和CIFL的结晶(放热)曲线和熔化(吸热)曲线。图16A和图16B是时间和基底摩尔比与在sn-2位置处的棕榈酸含量(图16A)以及与总DHA和GLA结合(图16B)的相互作用的等值线标绘图。图17图示如在实施例6中描述的本公开内容的SL混合物和棕榈油精的冷却和加热热谱图。图18是实施例7中描述的本公开内容的SL、PB(物理掺合物)、IFF(婴儿配方奶粉)和MF(人乳脂肪)的固体脂肪含量(％)作为温度的函数的图。图19是图示实施例7中描述的SL的实施方案、PB、IFF和MF的氧化稳定性指数(OSI)的柱状图。具有相同字母的值无显著性差异(P<0.05)。图20图示根据实施例7的SL、PB、IFF和MF的熔化热谱图。所示的温度为熔化完成温度。图21图示根据实施例7的SL、PB、IFF和MF的结晶热谱图。所示的温度为结晶开始温度。详述在本公开内容被更详细地描述之前，应理解本公开内容不限于所描述的特定实施方案，并且因此当然可以改变。还应理解，本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，而不意图是限制性的。在提供值的范围的情况下，应理解，除非上下文另外清楚地指示，否则在该范围的上限和下限之间的每一个中间值(至下限单位的十分之一)，以及在陈述的范围中的任何其它陈述的值或中间值，被涵盖在本公开内容内。这些较小范围的上限和下限可以独立地被包含在较小范围中并且也被涵盖于本公开内容内，经受陈述的范围中的任何特定排除的限制。在陈述的范围包含极限值中的一个或两者的情况下，本公开内容中还包括排除那些所包含的极限值中的任一者或两者的范围。除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管类似于或等效于本文描述的方法和材料的任何方法和材料也可以用于实践或测试本公开内容，但现在描述优选的方法和材料。除非另外说明，否则本文引用的出版物不通过引用并入，但是对于在本说明书中通过引用具体并入的任何出版物和专利，它们通过引用被并入本文以公开和描述该出版物关于其被引用的方法和/或材料。对任何出版物的引用都是针对其在申请日期之前的公开内容并且不应解释为承认本公开内容由于现有公开内容而无权先于这种出版物。此外，所提供的公布日期可能不同于可能需要独立确认的实际公布日期。在阅读本公开内容时，如对于本领域的技术人员将明显的是，本文所描述和例证的单独的实施方案中的每一个具有离散的组分和特征，这些组分和特征可以容易地与任何其它若干实施方案的特征分离或组合，而不偏离本公开内容的范围或精神。任何叙述的方法可以以所叙述的事件的顺序或以逻辑上可能的任何其它顺序进行。除非另外指示，否则本公开内容的实施方案将采用生物化学技术、分子生物学技术、化学技术以及类似技术，这些技术在本领域的技能内。文献中充分地解释了这类技术。必须注意，如本说明书和所附实施方案中所使用，除非上下文另外清楚地指示，否则单数形式“一(a)”、“一(an)”和“所述(the)”包括复数指示物。因此，例如，提及的“单元”包括多个单元。在本说明书中和在随后的实施方案中，将提及多种术语，除非明显是相反意图，否则这些术语应被定义为具有以下含义。贯穿本申请，术语“约”用于指示值包括被用于确定该值的装置或方法的误差的标准偏差。权利要求书中的术语“或”的使用被用于意指“和/或”，除非明确地指示是指仅各备选物或备选物是相互排斥的，然而本公开内容支持仅指各备选物和“和/或”的定义。如本公开内容和权利要求中所使用，词语“包含(comprising)”(以及任何形式的包含(comprising)，例如“包含(comprise)”和“包含(comprises)”)、“具有(having)”(以及任何形式的具有(having)，例如“具有(have)”和“具有(has)”)、“包括(including)”(以及任何形式的包括(including)，例如“包括(includes)”和包括“include”)或“含有(containing)”(以及任何形式的含有(containing)，例如“含有(contains)”和“含有(contain)”)具有在美国专利法中归属于它们的含义，因为它们是包括的或开放式的并且不排除另外的、未叙述的要素或方法步骤。“基本上由...组成”或“基本上包括”或类似词当被应用到本公开内容涵盖的方法和组合物时，指的是如本文所公开的组合物的组合物，但其可以包含另外的结构基团、组合物组分或方法步骤(或如上文所讨论的其类似物或衍生物)。然而，此类另外的结构基团、组合物组分或方法步骤等与本文公开的相应的组合物或方法的那些相比不实质地影响组合物或方法的基本特性和新颖特性。“基本上由...组成”或“基本上包括”或类似词当被应用到本公开内容涵盖的方法和组合物时，具有美国专利法中归属的含义并且术语是开放式的，允许存在多于所叙述的那些，只要被叙述的方法和组合物的基本特性或新颖特性不被多于所叙述的那些的存在改变，但排除任何现有技术实施方案。在描述各种实施方案之前，以下定义被提供并且应当被使用，除非另外指示。定义在描述所公开的主题时，以下的术语将根据下文陈述的定义被使用。术语“脂肪酸”(FA)是指具有长脂肪族尾部(链)的羧酸，该羧酸是饱和或不饱和的，并且该羧酸与三酰甘油(或三酰甘油的一部分)缔合。术语“游离脂肪酸”(FFA)是指具有长脂肪族尾部(链)的羧酸，该羧酸是饱和或不饱和的，并且该羧酸不与三酰甘油缔合(或不与三酰甘油的一部分缔合)。脂肪酸可以是饱和脂肪酸(SFA)、短链饱和脂肪酸(SCSFA)、中链饱和脂肪酸(MCSFA)、或不饱和脂肪酸(UFA)，其中不饱和脂肪酸包括单不饱和脂肪酸(MUFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)、短链多不饱和脂肪酸(SCPUFA)、长链多不饱和脂肪酸(LCPUFA)、以及类似物。如本公开内容中使用，术语“结构脂质”或“SL”是指在体外产生的三酰甘油(TAG)或TAG的混合物，并且其中TAG通过改变脂肪酸和/或它们在TAG中的位置从TAG的天然形式改性。在本公开内容的实施方案中，SL或SL的混合物被合成以产生具有期望的功能性质和营养性质的新颖的TAG或TAG的混合物。如贯穿本公开内容所使用，名称SL常常用于指单一的TAG以及TAG的混合物二者。术语“三酰甘油”或“TAG”(也称作甘油三酯(TG))是指由甘油和三个脂肪酸形成的脂质化合物。如本公开内容中讨论的，TAG被描述为具有3种位置，sn-1、sn-2和sn-3，如图1所图示的。取决于在每个位置处的脂肪酸的特性，不同的TAG被给予不同的缩写，包括但不限于以下：OAO、APA、OPD、ODO、LOL、LPL、MPL、POLn、SMM、OOL、POL、PLP、PPM、OOO、OPO、PPO、PPP、OOS、POS、PPS、DPD、SOO、PSO、DDD、MDD、C8PD、DDO、PDD、PAA、PAD、MPD、PPD、LPA、C10OO、C10PP、SPD、OPA、PPA、MMP、POL、PPL、POO、PSO、MPP、SPP、LLO、LaPL、LaOL、LaMAl、C8LaAl、C8LaL、DGD、GGD、DOD、GLD、OLD、SGD、PLD、LLG、OOD、POD、LOG、PLG、MOG、LaLO、OOG、LLP、POG、PLM、LaOP、MMP、MOP、SOO、SSO、LaCC、LaCla、LnDLn、LaLnLa、LaLaLa、LaMLa、OLaM、MLaM、LLL、MML、MMM、LnLnS、LnOO、LOO、POP、OSO、OSP、PSP、MSS、SOS、PSS和在下文在实施例的表中列出的其他缩写。在前述缩写中，每个字母都代表脂肪酸，如下：A是花生四烯酸(ARA)(C20:4n-6)，D是二十二碳六烯酸(DHA)(C22:6n-3)，L是亚油酸(C18:2n-6)，Ln是亚麻酸(C18:3n-3)，M是肉豆蔻酸(C14:0)，O是油酸(C18:1n-9)，P是棕榈酸(C16:0)，S是硬脂酸(C18:0)，Al是α-亚麻酸(C18:3n-3)，C8是辛酸(C8:0)，C10是癸酸(C10:0)，G是γ-亚麻酸(C18:3n-6)，并且La是月桂酸(C12:0)。如果具体指定，第一字母代表在sn-1或3处的脂肪酸，中间字母代表在sn-2处的脂肪酸，并且第三字母代表在sn-1或3处的脂肪酸，否则它们可以不按区域特异性的顺序(regiospecificorder)。术语“SL1-1”是指具有与实施例1的表1.2、表1.3和/或表1.4中的“SL1-1”名称相关的特性的结构脂质混合物。在某些实施方案中，SL1-1结构脂质混合物包含实施例1的表1.2中所示的总(mol％)脂肪酸组分，由该总(mol％)脂肪酸组分组成，或基本上由该总(mol％)脂肪酸组分组成。在其他或另外的实施方案中，SL1-1结构脂质混合物包含实施例1的表1.3中所示的三酰甘油物质，由该三酰甘油物质组成，或基本上由该三酰甘油物质组成，其中TAG以表1.3中所示的百分比+/-0.00-3.5％存在。在实施方案中，SL1-1结构脂质混合物是使用两阶段合成以基底摩尔比0.5:1:0.5(TP:EVOO:AD)合成的结构脂质混合物。术语“SL1-2”是指具有与实施例1的表1.2、表1.3和/或表1.4中的“SL1-2”名称相关的特性的结构脂质混合物。在某些实施方案中，SL1-2结构脂质混合物包含实施例1的表1.2中所示的总(mol％)脂肪酸组分，由该总(mol％)脂肪酸组分组成，或基本上由该总(mol％)脂肪酸组分组成。在其他或另外的实施方案中，SL1-2结构脂质混合物包含实施例1的表1.3中所示的三酰甘油物质，由该三酰甘油物质组成，或基本上由该三酰甘油物质组成，其中TAG以表1.3中所示的百分比+/-0.00-3.5％存在。在实施方案中，SL1-2结构脂质混合物是使用两阶段合成以基底摩尔比1:1:0.5(TP:EVOO:AD)合成的结构脂质混合物。术语“SL2-1”是指具有与实施例1的表1.2、表1.3和/或表1.4中的“SL2-1”名称相关的特性的结构脂质混合物。在某些实施方案中，SL2-1结构脂质混合物包含实施例1的表1.2中所示的总(mol％)脂肪酸组分，由该总(mol％)脂肪酸组分组成，或基本上由该总(mol％)脂肪酸组分组成。在其他或另外的实施方案中，SL2-1结构脂质混合物包含实施例1的表1.3中所示的三酰甘油物质，由该三酰甘油物质组成，或基本上由该三酰甘油物质组成，其中TAG以表1.3中所示的百分比+/-0.00-3.5％存在。在实施方案中，SL2-1结构脂质混合物是使用一阶段合成以基底摩尔比0.5:1:0.5(TP:EVOO:AD)合成的结构脂质混合物。术语“SL2-2”是指具有与实施例1的表1.2、表1.3和/或表1.4中的“SL1-1”名称相关的特性的结构脂质混合物。在某些实施方案中，SL2-2结构脂质混合物包含实施例1的表1.2中所示的总(mol％)脂肪酸组分，由该总(mol％)脂肪酸组分组成，或基本上由该总(mol％)脂肪酸组分组成。在其他或另外的实施方案中，SL2-2结构脂质混合物包含实施例1的表1.3中所示的三酰甘油物质，由该三酰甘油物质组成，或基本上由该三酰甘油物质组成，其中TAG以表1.3中所示的百分比+/-0.00-3.5％存在。在实施方案中，SL2-2结构脂质混合物是使用两阶段合成以基底摩尔比1:1:0.5(TP:EVOO:AD)合成的结构脂质混合物。术语“SL132”是指具有与实施例2的表2.2、表2.3和/或表2.4中的“SL132”名称相关的特性的结构脂质混合物。在某些实施方案中，SL132结构脂质混合物包含实施例2的表2.2中所示的总(mol％)脂肪酸组分，由该总(mol％)脂肪酸组分组成，或基本上由该总(mol％)脂肪酸组分组成。在还其他或另外的实施方案中，SL132结构脂质混合物包含实施例2的表2.3中所示的位置脂肪酸概况(positionalfattyacidprofile)，由该位置脂肪酸概况组成，或基本上由该位置脂肪酸概况组成。在还其他或另外的实施方案中，SL132结构脂质混合物包含实施例2的表2.4中所示的三酰甘油物质，由该三酰甘油物质组成，或基本上由该三酰甘油物质组成，其中TAG以表2.4中所示的百分比+/-0.00-3.0％存在。在实施方案中，SL132结构脂质混合物是以基底摩尔比1:3:2(TP:EVOOFFA:DHASCOFFA)合成的结构脂质混合物。术语“SL142”是指具有与实施例2的表2.2、表2.3和/或表2.4中的“SL142”名称相关的特性的结构脂质混合物。在某些实施方案中，SL142结构脂质混合物包含实施例2的表2.2中所示的总(mol％)脂肪酸组分，由该总(mol％)脂肪酸组分组成，或基本上由该总(mol％)脂肪酸组分组成。在还其他或另外的实施方案中，SL142结构脂质混合物包含实施例2的表2.3中所示的位置脂肪酸概况，由该位置脂肪酸概况组成，或基本上由该位置脂肪酸概况组成。在还其他或另外的实施方案中，SL142结构脂质混合物包含实施例2的表2.4中所示的三酰甘油物质，由该三酰甘油物质组成，或基本上由该三酰甘油物质组成，其中TAG以表2.4中所示的百分比+/-0.00-3.0％存在。在实施方案中，SL142结构脂质混合物是以基底摩尔比1:4:2(TP:EVOOFFA:DHASCOFFA)合成的结构脂质混合物。术语“SL151”是指具有与实施例2的表2.2、表2.3和/或表2.4中的“SL151”名称相关的特性的结构脂质混合物。在某些实施方案中，SL151结构脂质混合物包含实施例2的表2.2中所示的总(mol％)脂肪酸组分，由该总(mol％)脂肪酸组分组成，或基本上由该总(mol％)脂肪酸组分组成。在还其他或另外的实施方案中，SL151结构脂质混合物包含实施例2的表2.3中所示的位置脂肪酸概况，由该位置脂肪酸概况组成，或基本上由该位置脂肪酸概况组成。在还其他或另外的实施方案中，SL151结构脂质混合物包含实施例2的表2.4中所示的三酰甘油物质，由该三酰甘油物质组成，或基本上由该三酰甘油物质组成，其中TAG以表2.4中所示的百分比+/-0.00-3.0％存在。在实施方案中，SL151结构脂质混合物是以基底摩尔比1:5:1(TP:EVOOFFA:DHASCOFFA)合成的结构脂质混合物。术语“SL3”是指具有与实施例3的表3.6中的“SL”名称相关的特性的结构脂质混合物。在某些实施方案中，SL3结构脂质混合物包含实施例3的表3.6中所示的总(mol％)脂肪酸组分，由该总(mol％)脂肪酸组分组成，或基本上由该总(mol％)脂肪酸组分组成。在还其他或另外的实施方案中，SL3结构脂质混合物包含实施例3的表3.6中所示的位置脂肪酸概况，由该位置脂肪酸概况组成，或基本上由该位置脂肪酸概况组成。在一个实施方案中，SL3结构脂质混合物包含约43％棕榈酸。术语“SL5”和“TDA-SL”在本文中被可交换地使用并且是指具有与实施例5的表5.1和/或表5.2中的“SL”名称相关的特性的结构脂质混合物和/或具有与实施例4的表4.1中的“TDA-SL”名称相关的特性的结构脂质混合物。在某些实施方案中，SL5或TDA-SL结构脂质混合物包含实施例5的表5.1(SL)和/或实施例4的表4.1(TDA-SL)中所示的总(mol％)脂肪酸组分，由该总(mol％)脂肪酸组分组成，或基本上由该总(mol％)脂肪酸组分组成，+/-0.00-3.0％。在还其他或另外的实施方案中，SL5或TDA-SL结构脂质混合物包含实施例5的表5.2(SL)和/或实施例4的表4.1(TDA-SL)中所示的三酰甘油物质，由该三酰甘油物质组成，或基本上由该三酰甘油物质组成，其中TAG以表4中所示的百分比+/-0.00-3.0％存在。术语“SL6”和“PDG-SL”在本文中被可交换地使用并且是指具有与实施例6的表6.3和/或表6.4中的“SL”名称和/或实施例4的表4.1中的“PDG-SL”名称相关的特性的结构脂质混合物。在某些实施方案中，SL6或PDG-SL结构脂质混合物包含实施例6的表6.3(SL)和/或实施例4的表4.1(PDG-SL)中所示的总(mol％)脂肪酸组分，由该总(mol％)脂肪酸组分组成，或基本上由该总(mol％)脂肪酸组分组成，+/-0.00-3.0％。在还其他或另外的实施方案中，SL6或PDG-SL结构脂质混合物包含实施例6的表6.4(SL)和/或实施例4的表4.1(PDG-SL)中所示的三酰甘油物质，由该三酰甘油物质组成，或基本上由该三酰甘油物质组成，+/-0.00-3.0％。术语“SL7”是指具有与实施例7的表7.2和/或表7.3中的“SL”名称相关的特性的结构脂质混合物。在某些实施方案中，SL7结构脂质混合物包含实施例7的表7.2中所示的总(mol％)脂肪酸组分，由该总(mol％)脂肪酸组分组成，或基本上由该总(mol％)脂肪酸组分组成。在其他或另外的实施方案中，SL7结构脂质混合物包含实施例7的表7.3中所示的三酰甘油物质，由该三酰甘油物质组成，或基本上由该三酰甘油物质组成，其中TAG以表7.3中所示的百分比+/-0.00-3.5％存在。在实施方案中，SL7结构脂质混合物是以选自1:1-5:1-2的基底摩尔比(TP:ROO:DHASCO-EE/GLAEE)合成的结构脂质混合物。如本文中使用的，术语“基底摩尔比”是指在用于制造本公开内容的SL混合物的反应化合物中的基底油(例如，橄榄油、棕榈油精、三棕榈精)与游离脂肪酸(FFA)的比率。然而，在下文的实施例5中，基底摩尔比被颠倒，采用游离脂肪酸(FFA)或脂肪酸乙酯(FAEE)作为基底，使得基底摩尔比是FFA或FAEE(例如，DHA和/或ARA游离脂肪酸、或脂肪酸乙酯)与棕榈酸源(例如，三棕榈精)的比率。如本文中使用的，“离析的”指示从原生环境移除或分离。因此，离析的肽、酶、脂质或其他分子指示蛋白质从其自然环境分离。离析的核苷酸序列和/或蛋白质不一定被纯化。例如，离析的核苷酸或肽可以被包括在粗制细胞提取物中或它们可以经受另外的纯化和分离步骤。对于某些目的，分子或化合物呈纯化形式是有利的。关于本公开内容的化合物(例如脂肪酸、TAG等等)的术语“纯化的”代表该化合物相对于自然环境具有增大的纯度。描述本公开内容的实施方案涵盖结构脂质的混合物的组合物、包含本公开内容的结构脂质的产品、包含本公开内容的结构脂质的婴儿配方奶粉、制造结构脂质的混合物的方法、以及制造包含本公开内容的结构脂质的混合物的粉末、婴儿配方奶粉和其他产品的方法。与商业婴儿配方奶粉中发现的脂质(TAG)的物理混合物相比，本文提供的结构脂质的混合物包含增大的量的在sn-2位置处的棕榈酸、以及在sn-1和sn-3位置处的其他必需脂肪酸，使得当添加至诸如婴儿配方奶粉的产品时混合物为改进的营养源。已通过改变脂肪酸和/或它们的位置从脂质的天然形式被结构改性的、或已被合成以产生具有期望的功能性质和营养性质的新颖的TAG的脂质(通常是TAG)被称作结构脂质(SL)。适合作为婴儿配方奶粉脂肪类似物的位置特异性的TAG可以使用为区域特异性和立体特异性的脂肪酶来合成。包含在sn-2位置处的棕榈酸的SL对于婴儿配方奶粉是优良的基底。(LodersCroklaan,Chanhannon,IL)是用于婴儿配方奶粉中的第一可商购的酶促合成的SL。虽然Betapol具有棕榈酸，但它没有长链多不饱和脂肪酸(LCPUFA)。具有在sn-2位置处的棕榈酸且还富含LCPUFA的SL和SL的混合物对于婴儿的最佳生长和发育是合意的。SL可以用单一脂肪酶来生产，并且对称的SL可以在顺序添加非特异性的和/或sn-1,3特异性的脂肪酶的情况下使用两步工艺来生产[115,121,87,133,104,130]。首先，在sn-2位置处的酰基部分被改性，随后是sn-1,3区域选择性酰化。关于同时使用多种脂肪酶用于SL合成已进行了很少的研究。Ibrahim等人使用双重脂肪酶系统用于棕榈硬脂(palmstearin)和椰子油的酯交换[45]。Türkan和Kalay还提及在生物柴油生产中使用双重脂肪酶反应系统代替单一酶系统[35]。然而，据相信，用于生产具有在sn-2位置处的增多的棕榈酸的SL的同时发生的双重脂肪酶系统先前未曾被描述。此外，油(例如橄榄油)、以及油(例如棕榈油精、橄榄油、三棕榈精)与游离脂肪酸(例如，DHA和/或ARA等等)的组合未被用作用于制造具有在sn-2位置处的高百分比的棕榈酸且具有DHA和ARA的高的结合的SL的混合物的基底。因此，本公开内容提供结构脂质的混合物和制造结构脂质的混合物的方法、以及包含本公开内容的SL的混合物的产品和制造包含本公开内容的SL的混合物的产品的方法。此类SL的混合物对于提供具有用于棕榈酸、钙以及其他重要的脂肪酸的较好的吸收曲线的婴儿配方奶粉是有用的。结构脂质的混合物本公开内容的实施方案提供包含结构脂质的混合物的组合物。在实施方案中，SL混合物包含TAG，该TAG与用于制造SL混合物的基底油相比和/或与在常规可商购的婴儿配方奶粉中发现的在TAG的sn-2位置处的棕榈酸的百分比相比具有在TAG的sn-2位置处的增大的百分比的棕榈酸。因此，在实施方案中，本公开内容的组合物包含SL的混合物，其中SL混合物中的SL(TAG)的至少一部分具有在sn-2位置处的棕榈酸。在实施方案中，本公开内容的组合物包含SL混合物，其中该混合物选自SL1-1、SL1-2、SL2-1、SL2-2、SL132、SL142、SL151、TDA-SL、PDG-SL、SL3、SL5、SL6、SL7，或这些的组合。本公开内容的SL混合物通过具有在三酰甘油的sn-2位置处的增大的百分比的棕榈酸而提供超越现有技术中的常规SL的优点。在实施方案中，本公开内容的SL混合物包含约30％或更多的棕榈酸的总mol％。在某些实施方案中，本公开内容的SL混合物可以包含约20％至60％的棕榈酸的总mol％(总脂肪酸的mol％)。在本公开内容的组合物的实施方案中，在sn-2位置处的棕榈酸的mol％可以描述为相对于SL混合物中的总脂肪酸的摩尔百分比(总脂肪酸的mol％)、或相对于SL混合物中的总棕榈酸的摩尔百分比(总棕榈酸的mol％)。在某些实施方案中，相对于SL混合物中的总脂肪酸的mol％，组合物可以包含具有约13％至30％的在sn-2位置处的棕榈酸的mol％(总脂肪酸的mol％)的SL混合物。在实施方案中，在sn-2位置处的棕榈酸的mol％可以为约17％至25％(总脂肪酸的mol％)。因此，在实施方案中，本公开内容的SL混合物可以包含约17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％或25％(以及中间的范围和百分比)的在sn-2位置处酯化的棕榈酸(总脂肪酸的mol％)。在某些实施方案中，相对于SL混合物中的总棕榈酸的mol％，SL混合物可以具有约30％或更多的在sn-2处的棕榈酸(总棕榈酸的mol％)。在某些实施方案中，本公开内容的SL混合物可以包含约30％至65％的在sn-2位置处酯化的棕榈酸(总棕榈酸的mol％)。因此，在实施方案中，结构脂质混合物可以具有约30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％或65％(以及中间的范围和百分比)的在sn-2位置处酯化的棕榈酸(总棕榈酸的mol％)。在实施方案中，SL混合物可以具有约50％或更多的在sn-2位置处的棕榈酸(总棕榈酸的mol％)。在某些实施方案中，本公开内容的这些SL组合物还可以包含选自二十二碳六烯酸(DHA)、花生四烯酸(ARA)、棕榈酸和γ-亚麻酸(GLA)的一种或更多种脂肪酸。在实施方案中，这些脂肪酸中的某些在三酰甘油的sn-1、sn-2、和/或sn-3位置处被结合到SL混合物的TAG中。在实施方案中，SL混合物包含在SL混合物的TAG中的一种或更多种LCPUFA。在实施方案中，LCPUFA选自二十二碳六烯酸(DHA)和γ-亚麻酸(GLA)以及花生四烯酸(ARA)。除上文提到的那些之外，可以被包含在本公开内容的组合物的SL混合物(存在于TAG的sn位置的任一个处)中的其他脂肪酸包括但不限于，亚油酸、亚麻酸、肉豆蔻酸、油酸、硬脂酸、α-亚麻酸(ALA)、辛酸、癸酸以及月桂酸。在某些实施方案中，本公开内容的SL组合物可以包含约1-15％ARA和/或约1-10％DHA、和/或约1-7％GLA。本公开内容的SL组合物包含通过使至少一种基底油与至少一种游离脂肪酸化合物和至少一种脂肪酶反应产生的SL混合物。脂肪酶可以是非特异性脂肪酶、sn-1,3特异性脂肪酶、或二者的组合。如果使用两种脂肪酶，那么反应可以按一步工艺或两步工艺进行，如在下文中在实施例1中更详细地描述。非特异性脂肪酶的实施方案是Novozym435。在实施方案中，sn-1,3特异性脂肪酶是LipozymeTLIM。在实施方案中，基底油包括选自橄榄油(特级初榨橄榄油(EVOO)或精炼橄榄油)、三棕榈精和棕榈油精油的一种或更多种基底油。在实施方案中，油未被改性，但在其他实施方案中，脂肪酸在与游离脂肪酸化合物和脂肪酶反应之前首先从油中被提取/离析，如在下文的方法和实施例中所描述。在实施方案中，游离脂肪酸化合物选自包括油、游离脂肪酸和/或DHA、ARA和/或GLA的脂肪酸乙酯的化合物。在实施方案中，仅使用一种游离脂肪酸，但在其他实施方案中，一种或更多种游离脂肪酸可以按各种比率被包含在混合物中。本公开内容还包括包含上文描述的SL混合物的产品。在实施方案中，产品包含本公开内容的呈粉末制剂的SL混合物。在实施方案中，如上文描述的本公开内容的SL混合物通过喷雾干燥工艺被制备成粉末制剂，例如在下文的实施例中所描述。在实施方案中，SL混合物被微封装于蛋白质和碳水化合物的组合中。在实施方案中，粉末化的SL混合物具有约80％或更多的微封装效率(microencapsulationefficiency)。在实施方案中，SL粉末具有约90％的微封装效率。在实施方案中，粉末化的SL混合物的水分含量为小于约4％。在实施方案中，水分含量为从约1-2％。在实施方案中，粉末化的SL混合物具有约0.10-0.25的水活度(aw)。在某些实施方案中，粉末化的SL混合物具有约0.15至0.16的水活度。在实施方案中，粉末制剂是喷雾干燥的。本公开内容的SL粉末的实施方案还具有如实施例4中讨论的其他特性，例如快速分散性和高的氧化稳定性。在实施方案中，本公开内容包括包含本公开内容的SL混合物的婴儿配方奶粉。在实施方案中，婴儿配方奶粉包含本公开内容的SL混合物的粉末制剂。制造SL混合物的方法本公开内容还提供制造本公开内容的结构脂质的混合物的方法。简述之，在实施方案中，方法包括：1)提供一种或更多种基底油，2)提供一种或更多种游离脂肪酸化合物，和3)使一种或更多种基底油和一种或更多种游离脂肪酸与一种或更多种脂肪酶反应以形成具有在sn-2位置处的至少一部分的棕榈酸的SL的混合物。在实施方案中，一种或更多种基底油可以选自三棕榈精、橄榄油(EVOO、精炼的等等)和棕榈油精油。在某些实施方案中，至少一种基底油是三棕榈精。在某些实施方案中，至少一种基底油是橄榄油。在某些实施方案中，基底油包括三棕榈精和橄榄油的组合。在实施方案中，橄榄油是精炼橄榄油(ROO)，并且在其他实施方案中，橄榄油是EVOO。在实施方案中，基底油包括三棕榈精和棕榈油精的组合。在其他实施方案中，一种或更多种基底油的另外的组合可以被使用。在某些实施方案中，脂肪酸在反应之前从油基底提取/离析。在某些实施方案中，基底油例如但不限于橄榄油和/或棕榈油精油与三棕榈酸(例如，提取自包含高的三棕榈精的油)混合以形成基底油。在实施方案中，游离脂肪酸化合物选自脂肪酸油、游离脂肪酸(FFA)以及包括二十二碳六烯酸(DHA)、花生四烯酸(ARA)、γ-亚麻酸(GLA)以及类似物的化合物的脂肪酸乙酯(FAEE，或有时是EE)、以及这些的组合。在实施方案中，游离脂肪酸化合物由包括期望的脂肪酸的油(例如，二十二碳六烯酸单细胞油(DHASCO)，例如来自藻类寇氏隐甲藻(Crypthecodiniumcohnii)；富含ARA的单细胞油(ARASCO)，例如来自真菌高山被孢霉(Mortierellaalpina))制备。在某些实施方案中，游离脂肪酸化合物包括从如下文实施例中描述的脂肪酸油提取/离析的游离脂肪酸和/或脂肪酸乙酯(例如，DHA-FFA、ALA-FFA、GLA-FFA、DHA-FAEE、ALA-FAEE和GLA-FAEE)。在其中FFA化合物包括DHA和ARA二者的某些实施方案中，ARA/DHA(在本文中也描述为n-6/n-3)的比率为约2-5。在实施方案中，脂肪酶包括一种或更多种非特异性脂肪酶和/或一种或更多种sn-1,3特异性脂肪酶。在实施方案中，方法包括至少一种非特异性脂肪酶和至少一种sn-1,3特异性脂肪酶。在某些实施方案中，一种或更多种非特异性和/或sn-1,3特异性脂肪酶可以选自Novozym435和LipozymeTLIM。Novozym435是非特异性脂肪酶且LipozymeTLIM是sn-1,3特异性脂肪酶。在某些实施方案中，Novozym435和LipozymeTLIM二者与基底油和游离脂肪酸化合物反应。在包含非特异性脂肪酶和sn-1,3特异性脂肪酶二者的实施方案中，非特异性脂肪酶和sn-1,3特异性脂肪酶二者可以同时与油和FFA反应(一阶段工艺)，或两种脂肪酶可以按两阶段工艺顺序地与油反应。在其中使用两阶段工艺的某些实施方案中，基底油首先与非特异性脂肪酶反应以产生中间SL混合物，并且然后中间SL混合物与一种或更多种游离脂肪酸化合物和sn-1,3特异性脂肪酶反应以产生最终的SL混合物。在实施方案中，本公开内容的方法产生SL混合物，该SL混合物具有关于本公开内容的SL混合物的上文描述的特性中的一种或更多种，例如总mol％棕榈酸，mol％在sn-2位置处的棕榈酸等等。这些特性中的某些可以通过改变反应物的量或比率和/或反应条件来操纵。在实施方案中，用于制造本公开内容的SL混合物的方法的反应时间为约4-36小时，在某些实施方案中，反应时间为约4-24小时，并且在某些实施方案中，反应时间为约6-36小时。在其中使用两阶段反应的实施方案中，用于第一阶段的反应时间为约6-12小时，并且用于第二阶段的反应时间为约6-12小时。在实施方案中，用于每个阶段的反应时间为约6小时。在实施方案中，反应在约50-75℃的温度下进行。在实施方案中，反应在约60℃的温度下进行。在实施方案中，基底油和FFA化合物以基底油与FFA的约1-14(mol/mol)的基底摩尔比组合。在实施方案中，基底油包括橄榄油/三棕榈精或棕榈油精/三棕榈精的组合且游离脂肪酸化合物包括DHA、ARA和/或GLA的一种或更多种FFA或FAEE，并且油:FFA/FAEE的基底摩尔比为约1至约10。在实施方案中，基底油包括橄榄油和三棕榈精且FFA化合物包括DHA-FFA和ARA-FFA的以约0.5-1:1:0.5-1的橄榄油:三棕榈精:FFA(DHA和/或ARA)的基底摩尔比的组合，例如，如实施例1中所描述。在其他实施方案中，基底油包括橄榄油和三棕榈精，并且FFA化合物包括以1:1-5:1-2的三棕榈精:橄榄油:FAEE(DHA/ARA)的基底摩尔比组合的DHA-FAEE和GLA-FAEE(也称作DHASCO-EE和GLAEE，例如在实施例7中)的组合。在某些此类实施方案中，三棕榈精:橄榄油:FAEE(DHA/GLA)的基底摩尔比选自1:1:1、1:2:1、1:3:2、1:4:2、1:5:2和1:5:1，例如，如实施例7中所描述。在还其他实施方案中，基底油是三棕榈精或油混合物，并且FFA化合物选自DHA和ARA的FFA和/或FAEE，并且酰基供体(FFA和/或FAEE)与三棕榈精/油的基底摩尔比为从约14-0.5。在某些此类实施方案中，FFA/FAEE与三棕榈精的基底摩尔比为约6-18(mol/mol)。在某些此类实施方案中，FFA/FAEE:三棕榈精的基底摩尔比为约9:1，例如，如实施例5中所描述。本公开内容的方法还包括制造本公开内容的SL混合物的粉末制剂的方法。在制造本公开内容的SL粉末制剂的实施方案中，本公开内容的SL混合物根据本文描述的方法来制造并且然后与蛋白质和碳水化合物的混合物一起微封装。在实施方案中，蛋白质和碳水化合物的混合物被制造并且然后SL油混合物通过机械混合(例如，利用均质器)被分散至蛋白质/碳水化合物混合物中以形成乳液。在实施方案中，乳液然后被喷雾干燥以形成微封装的SL的粉末。在实施方案中，蛋白质可以是，但不限于，乳清蛋白、明胶等等。在实施方案中，碳水化合物可以是，但不限于，玉米糖浆固体、环糊精、麦芽糖糊精、羧甲基纤维素(CMC)、壳聚糖、阿拉伯树胶、海藻酸钠、果胶、与碳水化合物组合的乳蛋白、美拉德反应产物(MRP，氨基酸加还原糖)等等。在某些实施方案中，蛋白质/碳水化合物混合物在添加SL混合物之前被加热并且然后被冷却。在实施方案中，蛋白质碳水化合物混合物被加热至约70-100℃(在某些实施方案中至约90℃)并且然后被冷却至约50-65℃的温度(在某些实施方案中，至约60℃)。在实施方案中，乳液通过在均质器中混合来形成。在实施方案中，SL混合物和蛋白质/碳水化合物混合物在约10-35MPa下被均质化。在某些实施方案中，乳液在喷雾干燥之前被加热至约50–65℃(在实施方案中，至约60℃)的温度。在实施方案中，乳液在比出口温度更高的进口温度下被喷雾干燥。在实施方案中，乳液具有约175-185℃的进口温度(在某些实施方案中为约180℃)和约70-85℃的出口温度(在某些实施方案中为约80℃)。在实施方案中，本公开内容的方法还包括使用本公开内容的SL混合物制造婴儿配方奶粉的方法。在实施方案中，方法包括制造SL混合物的粉末制剂并且使用这些粉末制造婴儿配方奶粉。在实施方案中，婴儿配方奶粉是粉末化的婴儿配方奶粉并且通过使本公开内容的SL粉末制剂与其他婴儿配方奶粉成分组合以形成粉末化的婴儿配方奶粉来制造。关于本公开内容的方法和组合物的另外的细节在下文的实施例中被提供。下文的具体实施例应被解释为仅是例证性的，并且无论如何不以任何方式限制本公开内容的剩余部分。在不进一步详细阐述的情况下，相信基于本文中的描述，本领域技术人员可以在其最大限度上利用本公开内容。本文中叙述的全部出版物据此通过引用以其整体并入。应强调，本公开内容的实施方案，特别是任何“优选的”实施方案，仅仅是实施方式的可能实施例，且仅仅被陈述以用于清楚理解本公开内容的原理。可以对本公开内容的上文描述的实施方案作出多种变型和修改，而不实质上偏离本公开内容的精神和原理。所有这类修改和变型都意图在本文中被包括在本公开内容的范围内，并且由以下实施方案保护。提出以下的实施例以便为本领域的普通技术人员提供对于如何进行本文所公开的方法和使用本文所公开的组合物和化合物的完全公开和描述。已经努力确保关于数(例如，量、温度等)的准确性，但一些误差和偏差应该被解释。除非另外指示，否则份是重量份，温度是以℃，且压力是在大气压下或接近大气压。标准温度和标准压力被定义为20℃和1个大气压。应注意，比率、浓度、量和其它数字数据可以在本文中以范围格式表达。应理解，为了方便和简洁起见而使用这种范围格式，并且因此应以灵活的方式被解释为不仅包括作为范围的极限值被明确叙述的数值，而且包括该范围内涵盖的所有单个数值或子范围，如同每个数值和子范围被明确地叙述。举例说明，“约0.1％至约5％”的浓度范围应被解释为不仅包括约0.1wt％至约5wt％的明确叙述的浓度，而且包括在所指示的范围内的单个浓度(例如，1％、2％、3％和4％)和子范围(例如，0.5％、1.1％、2.2％、3.3％和4.4％)。在实施方案中，术语“约”可以包括根据数值的有效数字的传统的舍入。实施例现已大体上描述了本公开内容的实施方案，以下的实施例描述本公开内容的某些另外的实施方案。虽然结合以下的实施例和对应的文字和附图来描述本公开内容的实施方案，但不意图将本公开内容的实施方案限制于该描述。相反，意图是覆盖被包括在本公开内容的实施方案的精神和范围内的所有替代方案、修改和等效物。实施例1包含ARA和DHA的基于特级初榨橄榄油的婴儿配方奶粉脂肪类似物的酶促合成：一阶段合成和两阶段合成材料和方法材料。特级初榨橄榄油(EVOO)通过AlJoufAgriculturalDevelopmentCorporation(Al-JoufSkaka,SaudiArabia)来提供，而来自藻类寇氏隐甲藻的包含DHA的单细胞油(40％DHA)和来自真菌高山被孢霉的富含ARA的单细胞油(40％ARA)通过DSMNutritionalProducts-Martek(Columbia,MD)来提供。固定化酶TLIM(疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)脂肪酶，sn-1,3特异性的，比活度250IUN/g:IUN＝酯交换单元)和435(南极假丝酵母(Candidaantarctica)脂肪酶，非特异性的，比活度10,000PLU/g:PLU＝月桂酸丙酯单元)购自NovozymesNorthAmericaInc.(Franklinton,NC)。脂质标准物Supelco37组分FAME混合物、生育酚标准物、2-油酰甘油、松脂醇、五倍子酸、阿魏酸、对香豆酸和咖啡酸购自Sigma-AldrichChemicalCo.(St.Louis,MO)。羟基酪醇购自CaymanChemicalCompany(AnnArbor,MI)。香草酸和酪醇从OakwoodProductsInc.(WestColumbia,SC)获得。木犀草素和橄榄苦苷购自IndofineChemicalCompany(Hillsborough,NJ)。三棕榈精和十五烷酸从TCIAmerica(Portland,OR)获得。TAG标准混合物(GLC-437)购自Nu-chekPrep,Inc.(Elysian,MN)。其他溶剂和化学品来自FisherScientific(Norcross,GA)和Sigma-AldrichChemicalCo.。通过皂化由ARASCO和DHASCO制备游离脂肪酸(FFA)。皂化值(SV)基于AOCS法定方法Cd3a-9420来计算。脂肪酸概况用于计算基底的分子量(MW)。ARASCO和DHASCO的MW(g/mol)分别为912.69和881.30。ARASCO和DHASCO的SV(mgKOH/g)分别为183.67和186.18。FFA根据先前描述的方法来制备[参见参考文献140，其据此关于制备FFA通过引用并入本文]。使用KOH(基于所计算的SV)、水(66mL)、95％乙醇(396mL)和丁羟甲苯(0.03g)的混合物通过将它们放置于具有在60℃下的循环水浴的1L搅拌间歇式反应器中持续1h来使一百五十克油皂化。在1h之后，将200mL蒸馏水添加至皂化的混合物并且将不可皂化物质萃取至己烷中(2x200mL)。弃去己烷层并且然后将包含可皂化物质的水层用10NHCl酸化至1-2的pH(两相的分离)。分液漏斗被用于将上部FFA层萃取至200mL己烷中。己烷层通过无水硫酸钠柱过滤以除去任何过量的水。将己烷用Büchi旋转蒸发仪(rotovapor)(Flawil,Switzerland)以40℃和50rpm速度除去，直到获得恒定重量。FFA(ARASCO-FFA和DHASCO-FFA)以2:1w/w的比率混合并且用氮气冲洗。该2:1ARASCO-FFA:DHASCO-FFA混合物被称作AD并且在-80℃下被储存于琥珀色的Nalgene瓶中直到使用。SL合成。SL在锥形瓶中在无溶剂环境下合成。使用两种类型的反应方案(图1)。两阶段合成(实例I)涉及顺序的两阶段SL合成。在第一阶段中，三棕榈精和EVOO在Novozym435的存在下反应。主要被视作非特异性脂肪酶的Novozym435在第一阶段中被使用，目的在于增加在EVOOTAG的sn-2位置处的棕榈酸。然后过滤第一阶段的产物(以除去酶)并且添加AD(ARASCO-FFA和DHASCO-FFA，2:1)。然后，酸解反应通过LipozymeTLIM(sn-1,3特异性脂肪酶)来催化，以将ARA和DHA结合至TAG结构中，同时保留在sn-2位置处的棕榈酸。在一阶段合成(实例II)中，三棕榈精、EVOO和AD在LipozymeTLIM和Novozym435脂肪酶的存在下一起反应。目的在于实现与实例I中的相似的产物并且确定是否双重酶系统具有任何协同效应。在双重生物催化剂的存在下同时进行多个反应(酯交换和酸解)可以帮助减少反应时间，消除中间纯化步骤，并且产生改进的SL合成工艺。所使用的基底摩尔比(三棕榈精:EVOO:AD)为0.5:1:0.5和1:1:0.5。反应温度被固定在60℃。对于反应时间选择，初步小规模反应以6、12、18和24h进行。在图2中示出小规模产物的sn-2棕榈酸。以下的条件针对放大试验而被选择:实例I.两阶段(顺序的)合成SL1-1–使用两阶段合成所合成的结构脂质，基底摩尔比为0.5:1(三棕榈精:EVOO)并且使用Novozym435作为生物催化剂温育24h。过滤反应产物以除去脂肪酶。在添加第二脂肪酶之前不进行进一步纯化。然后，产物在LipozymeTLIM脂肪酶的存在下与AD反应6h。最终比率为0.5:1:0.5(三棕榈精:EVOO:AD)。SL1-2–使用与SL1-1相似的两阶段合成所合成的，除了使用1:1:0.5(三棕榈精:EVOO:AD)的基底摩尔比并且第一阶段和第二阶段二者的运行时间各自都为6h之外。实例II.一阶段(一锅)合成SL2-1–一阶段合成，基底摩尔比为0.5:1:0.5(三棕榈精:EVOO:AD)。使用Novozym435和LipozymeTLIM脂肪酶作为生物催化剂的反应时间为24h。SL2-2–一阶段合成，其中使用Novozym435和LipozymeTLIM脂肪酶作为生物催化剂，所使用的基底摩尔比为1:1:0.5(三棕榈精:EVOO:AD)，持续6h。每种酶以基底的总重量的10％被添加。将锥形瓶保持在以200rpm的水浴摇动器中持续指定的时间和温度。在反应之后，多余的FFA用碱抽提法通过脱酸来除去[参考文献67，其据此关于碱抽提法通过引用被并入]并且将纯化的SL储存在-20℃下直到分析。总脂肪酸和位置脂肪酸。脂质样品遵循AOAC法定方法996.01被转化成脂肪酸甲酯[95，其据此通过引用并入本文]并且利用使用SupelcoSP-2560,100mx25mmx0.2μm柱的Hewlett-Packard6890系列II气相色谱仪(AgilentTechnologiesInc.,PaloAlto,CA)来分析。sn-2位置脂肪酸组成遵循AOCS法定方法Ch3-91来测定[参见94，其据此通过引用并入本文]。在sn-1,3位置处的脂肪酸组成可以使用以下等式来计算：sn-1,3(％)＝[3x总(％)–sn-2(％)]/2。全部实验按一式三份进行并且报道平均值。三酰甘油(TAG)分子物质。TAG组成用配备有Sedex85蒸发光散射检测器(ELSD)(RichardScientific,Novato,CA)的高效液相色谱仪(HPLC)(AgilentTechnologies1260Infinity,SantaClara,CA)来测定。BeckmanC18柱，5μm，4.6x250mm在设定在30℃的温度下使用。注入体积为20μL。以1mL/min的流速的流动相包括溶剂A(乙腈)和溶剂B(丙酮:甲基叔丁基醚(90:10，v/v))。采用梯度洗脱，以35％溶剂A开始至在42分钟时5％溶剂A，并且然后在3分钟内返回至原始组成。漂移管温度设定为50℃，压力为4.0巴并且增益为8。样品以5mg/mL的最终浓度溶解于氯仿中。TAG峰通过比较保留时间和标准物的保留时间并且还通过等效碳数(equivalentcarbonnumber)(ECN)来识别。ECN定义为CN–2n，其中CN是TAG中的碳的数目(排除甘油主链中的三个)并且n为双键的数目。进行一式三份的测定并且取平均值。生育酚。HPLC(配备有RF-10AXL荧光检测器的ShimadzuLC-6A泵，其中激发设置在290nm处并且发射设置在330nm处(ShimadzuCorp.,Columbia,MD))被用于生育酚分析。0.85％(v/v)异丙醇在己烷中的等度流动相以1.0mL/min的流速使用。正相柱为LiChrosorbSi60柱(4mm,250mm,5μm粒度，HiberFertigsaeuleRT,Merck,Darmstadt，德国)。在HPLC级己烷中的样品浓度为20mg/mL。注入体积为20μL。生育酚通过比较它们的保留时间与可信标准物的保留时间(在包含0.01％丁羟甲苯的己烷中为1.25-20μg/mL)来识别。生育酚基于标准校正曲线来定量并且依据一式三份的测定的平均值按μg/g来报道。主要的酚类化合物。酚类使用固相萃取用甲醇、水和乙腈来萃取[26，其据此通过引用被并入本文]。主要的酚类化合物遵循Owen等人描述的方法[97，其据此通过引用被并入本文]使用具有二极管阵列检测器的Hewlett-Packard(Avondale,PA)HP1100HPLC系统来测定。柱为BeckmanC18，5μm，4.6x250mm，其中温度设定在40℃。注入体积为20μL。流动相由溶剂A(在水中的2％乙酸)和溶剂B(甲醇)组成，以1mL/min的流速。梯度洗脱如下：在2分钟时为5％溶剂B，在10分钟时为25％B，在20分钟时为40％B，在30分钟时为50％B，且在45分钟时为100％B。检测在260nm、280nm、320nm和360nm处进行。识别是基于保留时间和特征UV光谱且定量使用外标曲线来完成。全部分析按一式三份进行并且报道平均值。熔化曲线和结晶曲线。熔化曲线和结晶曲线遵循AOCS法定方法Cj1-94[94]使用差示扫描量热计DSC204F1Phoenix(NETZSCHInstrumentsNorthAmerica,Burlington,MA)来确定。将10-12mg样品称重到铝盘(aluminumpan)中并且密闭地密封。将样品以20℃/min迅速地加热至80℃，并且保持15分钟以破坏任何先前的晶体结构。然后，将样品以5℃/min冷却至-75℃(放热)，保持30分钟并且最终以5℃/min加热至80℃(吸热)。氮气用作保护气和吹扫气。全部样品按一式三份分析并且报道平均值。统计学分析。全部分析按一式三份来进行。统计学分析用SAS软件包(SASInstitute,Cary,NC)来进行。进行邓肯氏多重范围检验(Duncan'smultiple-rangetest)以确定SL之间的显著性差异(P≤0.05)。结果和讨论总脂肪酸概况和位置脂肪酸概况。表1.1示出基底的总脂肪酸和位置脂肪酸。EVOO中的主要脂肪酸是油酸(67.81mol％)和棕榈酸(16.02mol％)。三棕榈精包含98.90mol％棕榈酸。DHASCO-FFA中的主要脂肪酸是DHA(44.13mol％)、油酸(22.17mol％)和肉豆蔻酸(10.30mol％)，并且在ARASCO-FFA中，ARA(43.22mol％)和油酸(20.52mol％)是主要脂肪酸。在SL1-1中，油酸(43.22mol％)和棕榈酸(36.69mol％)是主要脂肪酸(表1.2)。人乳中的主要脂肪酸是油酸(28.30-43.83％)、棕榈酸(15.43-24.46％)和亚油酸(10.61-25.30％)。SL1-1和SL1-2分别具有3.67mol％和2.97mol％的ARA，并且分别具有1.53mol％和1.39mol％的DHA。在另一方面，SL2-1具有6.23mol％ARA和3.71mol％DHA。5.95mol％ARA和2.60mol％DHA被结合至SL2-2中。ARA和DHA是婴儿期中的重要脂肪酸，因为它们支持脑部发育并且改善视敏度。较低的n-6/n-3比率对于降低一些慢性疾病的风险是合意的。SL1-1、SL1-2、SL2-1和SL2-2的n-6/n-3比率分别为4.72、4.45、2.78和3.14。包含高的sn-2棕榈酸的TAG在人乳脂肪类似物中是优选的，因为它帮助脂肪的消化和吸收。全部SL具有>50％的在sn-2位置处的棕榈酸。sn-2棕榈酸从EVOO中的2.31mol％(表1.1)分别增加至SL1-1、SL1-2、SL2-1和SL2-2中的52.67mol％、56.25mol％、50.33mol％和55.34mol％(表1.2)。SL也富含在sn-2位置处的DHA和ARA，在该sn-2位置处，它们能够更好地被代谢。在喂有包含在sn-2位置处的DHA的油的新生大鼠的脑部中发现了比喂有包含随机分布的DHA的油的新生大鼠的脑部中更高水平的DHA。虽然LipozymeTLIM是sn-1,3特异性酶，但某些ARA和DHA在两阶段合成中还被酯化至TAG的第二位置(SL1-1和SL1-2)，在该两阶段合成中，两种酶都被单独地且顺序地添加。这可以归因于酰基转移。酰基转移是包括酰基从sn-1,3位置转移至sn-2位置的不合意的副反应，并且反之亦然，但在此实例中它是合意的，因为在sn-2位置处的脂肪酸被更好地吸收。酰基转移主要是由于作为酶促酯交换反应中的中间体的部分酰基甘油、特别是二酰基甘油的存在而发生31。酰基转移能够受到许多因素的影响。酰基转移随着反应温度、运行时间、含水量和水活度的增大而增大。酶的类型及其载体也可以对酰基转移具有影响。也已观察到，转移的趋势随着脂肪酸中的不饱和的增大而增大。在一阶段合成中(SL2-1和SL2-2)，因为同时添加两种酶，所以在sn-2位置处的ARA和DHA的存在可以归因于任一酶的作用。该目标(>50％的在sn-2位置处的棕榈酸)在一阶段合成中以比在两阶段合成中更少的运行时间被实现。这在成本方面对于企业而言是有益的。在SL1-1和SL2-1中的总反应时间分别为30h和24h。在SL1-2和SL2-2的情况下，反应运行时间分别为12h和6h。与SL1-1和SL2-1相比，当在两阶段合成(SL1-2中的44.23mol％)和一阶段合成(SL2-2中的40.07mol％)二者中都使用1:1:0.5的较高基底摩尔比时，发现了较高的总棕榈酸。在一阶段合成中，与两阶段合成相比，发现了较低的饱和脂肪和较高的ARA和DHA。基于本研究中所使用的反应参数，当同时使用两种酶时，似乎存在协同效应。类似地，先前已观察到当以相等比率一起使用LipozymeTLIM和Novozym435时对酶促酯交换的协同效应。TAG分子物质。TAG分子物质在表1.3中被示出。所分析的TAG分子物质中的脂肪酸不以区域特异性的顺序。在SL1-1、SL1-2、SL2-1和SL2-2中，EVOO中的主要TAG，三油精(OOO)，分别从47.19％降低至8.32％、6.12％、7.64％和6.83％。PPO和OPO(sn-OPO和sn-POO的组合)是在SL中占优势的TAG。SL1-1具有31.35％PPO和25.17％OPO。在SL1-2中，在PPO(33.95％)之后是OPO(28.84％)。SL2-1和SL2-2分别具有23.00％和25.96％的OPO。与OOP相比，OPO在婴儿中被更好地代谢和吸收。在人乳中发现的主要TAG分子物质是OPO(17.56-42.44％)、POL(9.24-38.15％)、OOO(1.61-11.96％)和LOO(1.64-10.18％)。全部SL具有在该范围内的OPO、OOO和LOO，但POL低于在人乳脂肪中发现的POL。TAG物质中的在sn-1、sn-2和sn-3位置处的脂肪酸的立体特异性和链长度确定在消化和吸收期间膳食脂肪的代谢转归。SL中还发现了作为起始基底之一的三棕榈精(PPP)。SL1-1、SL1-2、SL2-1和SL2-2分别具有4.50％、10.32％、4.02％和6.23％的PPP。TAG概况大大地影响了SL的物理性质。SL包含全部四种类型的TAG，即，SSS(三饱和的)、SUS(二饱和的-单不饱和的)、SUU(单饱和的-二不饱和的)和UUU(三不饱和的)。当基底摩尔比从0.5:1:0.5增大至1:1:0.5时，UUUTAG在两阶段合成中从12.85％降低至8.91％并且在一阶段合成中从14.23％降低至12.01％。SUU型TAG是存在于SL中的占优势的TAG。SL1-1、SL1-2、SL2-1和SL2-2分别具有40.83％、40.39％、45.62％和44.26％的SUUTAG。与两阶段合成相比，一阶段合成产生了较高的UUU型和SUU型的TAG和较低的SUS型和SSS型的TAG。EVOO包含63.98％UUU型的、31.81％SUU型的和4.21％SUS型的TAG。SL也具有包含ARA和DHA的新形成的TAG，例如OAO、APA、OPD和ODO。它们的相对百分比在一阶段合成的SL中比在两阶段合成的SL中更高。生育酚。常被分组为维生素E的生育酚和生育三烯酚是人类中的主要的脂溶性的、膜区域化的(membrane-localized)抗氧化剂。LC-PUFA非常易受氧化并且因此需要抗氧化剂来保护它们的功效。人乳包含0.45-0.8mg维生素E/100千卡。氧化易感性随着不饱和脂肪酸的增加而增加。SL富含LC-PUFA并且可能易于氧化。固有的抗氧化剂(Indigenousantioxidant)例如生育酚有助于针对氧化变质的保护。EVOO中的主要维生素E异构体是212.34μg/gα-生育酚、17.79μg/gγ-生育酚和16.38μg/gα-生育三烯酚(表1.4)。SL1-1、SL1-2、SL2-1和SL2-2的总维生素E含量分别为70.46μg/g、68.79μg/g、79.64μg/g和79.31μg/g，其中α-生育酚占约73％。在生育三烯酚中，在SL中仅发现了α-生育三烯酚。与EVOO相比，对于SL中的α-生育酚而言，观察到>70％的降低。类似地，β-生育酚在SL1-1中降低33.58％且在SL1-2、SL2-1和SL2-2中降低>40％。在SL1-1、SL1-2、SL2-1、SL2-2中，γ-生育酚中的％降低分别为64.25％、60.03％、54.92％和49.58％。在SL1-1、SL1-2、SL2-1和SL2-2中，δ-生育酚分别降低39.63％、64.02％、20.43％和22.87％。研究已示出，生育酚和生育三烯酚在酯交换和酸解反应期间主要作为生育酚基酯(tocopherylester)和生育三烯酚基酯(tocotrienylester)被损失[37,150]。在两阶段合成中观察到比在一阶段合成中的生育三烯酚和生育酚的较高损失(除β-生育酚之外)。酚类化合物。酚类使用固相萃取、随后的HPLC-DAD来分析。EVOO中的主要酚类是酪醇(18.38μg/g)、羟基酪醇(9.42μg/g)、松脂醇(3.52μg/g)和橄榄苦苷(1.86μg/g)。所识别的其他酚类化合物是木犀草素、香草酸、五倍子酸、阿魏酸、对香豆酸和咖啡酸。橄榄油酚类是有效的抗氧化剂，因为它们抑制脂质过氧化。这可能降低氧化应激和相关的疾病，例如癌症和心血管疾病。在SL的实例中未观察到峰，这意味着SL没有在橄榄油中发现的固有的酚类化合物。酚类化合物可以作为酯或以游离形式在酯交换反应和/或酸解反应期间被损失。熔化曲线和结晶曲线。脂肪或油的熔化性质可以受到脂肪酸链长度(链长度的增加对应于熔点的升高)、不饱和度(不饱和的增加导致熔点的降低)以及多晶型(α–最低熔点，β′–中间熔点，和β–最高熔点)的影响[125]。图3A和图3B中分别示出了基底和产物的熔化曲线和结晶曲线。熔化完成温度(Tmc)取决于存在的脂肪酸和TAG的类型。包含SSS型TAG的三棕榈精具有最高Tmc(72.2℃)。EVOO主要具有油酸和作为主要TAG的OOO，并且它在12.7℃下完全熔化。SL1-1、SL1-2、SL2-1和SL2-2的Tmc分别为37.1℃、42.0℃、35.2℃和36.1℃。人乳脂肪在正常体温(约37℃)下完全熔化。在本研究中合成的除SL1-2之外的全部SL具有它们的接近37℃的Tmc，这在婴儿配方奶粉配制中可以有助于获得适当的稠度和质地。SL1-2的相对较高的Tmc可以归因于高的饱和脂肪酸(50.60mol％)和高浓度的饱和TAG(SSS12.11％；SUS40.14％)。SL中的复杂性和宽范围的TAG导致逐渐的熔化范围而不是如在三棕榈精中那样急速的熔化，三棕榈精是简单的均质TAG。类似地，SL1-1、SL1-2、SL2-1和SL2-2的结晶开始温度(Tco)为23.7℃、27.6℃、19.8℃和22.3℃(图3B)。SL的Tco在三棕榈精(42.1℃)和EVOO(-10.2℃)的Tco之间，并且由多重峰构成，这归因于它们的脂肪酸和TAG分子物质的复杂性。酶可重用性。酶的可重用性通过在两阶段合成和一阶段合成两者中进行1:1:0.5反应十次来测试。在每次运行之后，酶用己烷洗涤4-5次并且在干燥器中干燥。它们储存在4℃下直到重新使用。总ARA和DHA以及sn-2棕榈酸(mol％)作为主要响应被确定(图4)。对于两阶段合成，sn-2棕榈酸(约57.0mol％)保持十分恒定直到第八次运行，在第八次运行之后，它降低。然而，总ARA和DHA含量(约4.4mol％)在第六次运行之后开始降低。在一阶段合成中，在第五次运行之后，在sn-2位置处的棕榈酸(约55.3mol％)和总ARA和DHA含量(约9.5mol％)二者都降低并且继续降低直到最后一次运行。在sn-2棕榈酸方面，酶在两阶段合成中表现更好。这可能是因为在两阶段合成中，两种酶，Novozym435和LipozymeTLIM，被单独地洗涤、干燥和重新使用。在另一方面，在一阶段合成中，两种酶一起被洗涤和重新使用，这可能影响它们的活性。对于两阶段合成和一阶段合成二者而言，观察到总ARA和DHA含量的降低，这可能归因于热对活性和特异性的影响。随着运行数目的增加，酶暴露于更多的热和溶剂(在清洗期间为己烷)。酶固定化载体性质还可以对酶可再用性具有影响。研究示出，LipozymeTLIM吸收较少的油并且比Novozym435更容易清洗[99,129]。酶的吸收容量的这种差异可能归因于两种酶的不同的固定化载体系统(对于LipozymeTLIM为粒状二氧化硅且对于Novozym435为大孔丙烯酸树脂)。在一阶段合成中，固定化载体性质的差异可能对它们的活性具有负面影响，这解释了在第五次运行之后降低的响应。当两种脂肪酶一起使用时，固定化作用还可能影响这两种酶的相互作用和活性。酶的活性、稳定性、效率和选择性可以通过不同的固定化方案和载体来改善。虽然酶在两阶段合成中具有较好的可再用性，但一阶段合成是较快速的反应并且产生较高的ARA和DHA。当母乳喂养可能不可行时，基于人乳组成的婴儿配方奶粉是婴儿营养的替代物。具有高的在sn-2位置处的棕榈酸且富含ARA和DHA的SL可以用于婴儿配方奶粉中以模拟人乳脂肪的物理性质、化学性质和营养性质。在本研究中产生的SL具有期望水平的在sn-2位置处的棕榈酸并且包含用于婴儿的适当生长和发育的ARA和DHA。表1.1。基底的总脂肪酸组成和位置脂肪酸组成(mol％)dnd，未检测到。e较少的是C14:1、C16:1、C17:0、C20:0、C20:1、C20:2、C22:0、C22:2、C24:0和C24:1的总和。每个值都是一式三份的平均值±标准偏差。表1.3。EVOO和结构脂质的TAG分子物质的相对百分比(％)TAGEVOOaSL1-1bSL1-2cSL2-1dSL2-2eOAOndf0.98±0.02a0.75±0.01b1.21±0.03c0.74±0.00bAPAnd2.56±0.69a1.78±0.08b6.11±1.04c5.24±0.28dOPDnd1.40±0.11a1.59±0.04b2.36±0.83c2.14±0.19cODOnd0.33±0.00a0.36±0.01a1.20±0.04b0.98±0.00cLOL6.59±1.21ndnd2.07±0.21a1.44±0.21bLPL1.97±0.671.46±0.01a1.14±0.01b0.66±0.00c0.87±0.00dMPLnd0.84±0.00a0.72±0.00b2.35±0.11c0.88±0.01aPOLnnd2.13±0.18a1.50±0.00b6.03±0.28c4.56±0.38dSMMndndnd1.44±0.01a2.59±0.19bOOL10.20±1.553.22±0.21a1.68±0.01b2.11±0.19c2.02±0.02cPOLnd6.28±1.01a4.68±0.33b6.08±2.03a4.34±0.27bPLP0.74±0.012.53±0.46a3.42±0.19b2.32±0.79a2.37±0.68aPPMnd1.12±0.06a1.11±0.07a0.88±0.04ab0.67±0.00bOOO47.19±3.088.32±0.78a6.12±1.06b7.64±1.44c6.83±1.79bOPO25.37±2.1825.17±2.51a28.84±2.11b23.00±2.18c25.96±2.79aPPO2.81±0.2231.35±2.49a33.95±2.98b24.82±1.59c28.64±2.91dPPPnd4.50±1.62a10.32±1.70b4.02±0.58a6.23±1.04cOOS4.47±0.671.83±0.29a0.86±0.28b1.38±0.00ac1.15±0.00cPOS0.66±0.014.31±0.01a2.05±0.29b3.80±0.02c3.65±0.00cPPSnd0.82±0.00a0.68±0.00b0.78±0.00a0.82±0.00a脂肪酸不呈区域特异性的顺序，并且缩写词在上文的描述中被陈述。每个值都是一式三份的平均值±标准偏差。在每行中的具有不同字母的值为P≤0.05的显著性差异。表1.4。特级初榨橄榄油和结构脂质的生育酚含量(μg/g)α-生育酚α-生育三烯酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚EVOOa212.34±4.7816.38±2.114.02±1.0217.79±1.683.28±1.02SL1-1b51.83±2.99a7.62±1.09a2.67±0.68a6.36±1.03a1.98±0.79aSL1-2c50.90±2.16a7.23±1.21b2.37±0.79a7.11±1.01b1.18±0.49bSL2-1d58.84±1.97b8.10±1.77c2.03±0.88b8.02±0.93c2.61±0.68cSL2-2e56.96±2.41c8.74±1.69c2.11±0.82b8.97±1.11d2.53±0.39c每个值都是一式三份的平均值±标准偏差。在每列中的具有不同字母的值为P≤0.05的显著性差异。实施例2由特级初榨橄榄油和三棕榈精合成富含DHA的婴儿配方奶粉的脂肪类似物材料和方法材料。材料为如实施例1中所描述。通过皂化由EVOO和DHASCO制备游离脂肪酸(FFA)。皂化值(SV)基于AOCS法定方法Cd3a-94来计算[10]。脂肪酸概况用于计算基底的分子量(MW)。EVOO和DHASCO的MW(g/mol)分别为872.49和881.30。EVOO和DHASCO的SV(mgKOH/g)分别为192.58和186.18。FFA如实施例1中所描述的来制备。FFA(EVOOFFA和DHASCOFFA)用氮气冲洗并在-80℃下储存在琥珀色的Nalgene瓶中直到使用。通过酸解的SL合成。SL在锥形瓶中在无溶剂环境下合成。所使用的基底摩尔比(三棕榈精:EVOOFFA:DHASCOFFA)为1:1:1、1:2:1、1:3:2、1:4:2和1:5:1。得到的SL分别命名为SL111、SL121、SL132、SL142和SL151。EVOOFFA、DHASCOFFA和三棕榈精的MW(g/mol)分别为277.59、282.49和806.89。反应温度和时间被固定为65℃和24h。总基底重量为8.47g并且添加按重量计10％的LipozymeTLIM脂肪酶。在不使用酶作为对照的情况下，也产生了物理掺合物(PB)(1:3:2基底摩尔比)。使PB经受与SL的合成和净化过程相同的合成和净化过程。将烧瓶保持在以200rpm的水浴摇动器中持续上文指定的时间和温度。在反应之后，产物在真空下通过撒有无水硫酸钠的Whatman1号滤纸过滤。除去FFA。多余的FFA用碱抽提法通过脱酸来除去[12]。简言之，将8gSL/PB与250mL己烷、在95％乙醇中的1％酚酞以及125mL在20％乙醇中的0.5NKOH在分液漏斗中混合。弃去水层，同时将50mL在20％乙醇中的0.5NKOH和100mL的饱和NaCl溶液添加至己烷层。己烷层被收集并且在真空下通过无水硫酸钠。溶剂通过在40℃下且以50rpm速度的旋转蒸发仪来除去。产物用氮气冲洗并且储存在-20℃下直到分析。脂肪酸概况的测定。基底(即EVOO、DHASCO、三棕榈精、EVOOFFA和DHASCOFFA)和产物(SL和PB)遵循AOAC法定方法996.01[95]在较少修改的情况下转化成FA甲酯(FAME)。将0.1g样品称重到特氟隆加衬的试管中，并且添加0.25mL内标(C15:0，在己烷中的20mg/mL)并且在氮气下干燥。添加2mL的在甲醇中的0.5NNaOH并且在100℃下加热10分钟(除在FFA样品中之外)。使样品在冰浴中冷却并且添加2mL的在甲醇中的BF3并且再次在100℃下加热10分钟。冷却样品并且最终添加2mL己烷和2mL饱和NaCl溶液并涡旋2分钟。上部FAME层在使样品于室温下以1000rpm离心5分钟之后被收集并且通过无水硫酸钠柱至GC小瓶中。Supelco37组分FAME混合物用作外标。样品利用使用SupelcoSP-2560、100mx25mmx0.2μm柱的Hewlett-Packard6890系列II气相色谱仪(AgilentTechnologiesInc.,PaloAlto,CA)来分析。氦气是以1.1mL/min的恒定流速的载气。注入体积为1μL并且使用20:1的分流比。检测为在300℃下利用火焰离子化检测器。柱最初保持在140℃持续5分钟并且然后以4℃/min升高至240℃并保持在240℃持续25min。全部样品按一式三份分析并且报道平均值。位置分析。sn-2位置脂肪酸组成如上文实施例1中所描述的来测定。全部样品按一式三份分析并且报道平均值。三酰甘油(TAG)分子物质。TAG组成如实施例1中的来测定，具有在此描述的较小修改。反相HPLC(AgilentTechnologies1100Infinity,SantaClaraCA)配备有Sedex55ELSD(Richardscientific,Novato,CA)。以1mL/min的流速的流动相包括溶剂A(乙腈)和溶剂B(丙酮)。采用梯度洗脱，以35％溶剂A开始至在45分钟时5％溶剂A，并且然后在5分钟内返回至原始组成。漂移管温度设定为70℃，压力为3.0巴并且增益为8。熔化曲线和结晶曲线。熔化曲线和结晶曲线如实施例1中所描述的来测定，除以下的修改之外。8-12mg样品被称重并被密封，以20℃/min迅速地加热至80℃，并且保持10分钟以破坏任何先前的晶体结构。然后，将样品以10℃/min冷却至-80℃(用于结晶曲线)，并且保持30分钟并最终以10℃/min加热至80℃(用于熔化曲线)。氮气用作保护气和吹扫气。全部样品按一式三份分析并且报道平均值。统计学分析。全部分析如实施例1中所描述的按一式三份来进行。结果和讨论总脂肪酸概况和位置脂肪酸概况。表2.1示出人乳脂肪和某些商业婴儿配方奶粉的常见脂肪酸组成。人乳中的主要脂肪酸是油酸(28.30-43.83％)、棕榈酸(15.43-24.46％)和亚油酸(10.61-25.30％)。婴儿配方奶粉的总脂肪酸组成几乎相似于人乳，而它们的在sn-2位置处的棕榈酸含量大大低于人乳脂肪。表2.2中示出了三棕榈精、EVOOFFA、DHASCOFFA、SL和PB的脂肪酸概况。三棕榈精包含97.90mol％棕榈酸。在EVOOFFA中占优势的脂肪酸是油酸(68.32mol％)和棕榈酸(16.13mol％)。DHASCOFFA中的主要脂肪酸是DHA(44.13mol％)、油酸(22.17mol％)和肉豆蔻酸(10.30mol％)。表2.2中未示出SL111和SL121的脂肪酸概况。SL111和SL121二者都具有>60mol％的在sn-2位置处的棕榈酸，但它们分别具有68.32mol％和60.97mol％的总棕榈酸，这与人乳脂肪相比是非常高的。因此，它们被拒绝用于进一步分析。SL132具有42.23mol％的总棕榈酸和67.34mol％的在sn-2位置处的棕榈酸(表2.3)。具有高的sn-2棕榈酸的TAG在人乳脂肪类似物中是优选的，因为它帮助总体消化性和脂肪吸收。另外，如果棕榈酸主要地存在于sn-1,3位置处，那么它将由于胰脂肪酶作用而作为FFA被释放。非酯化的棕榈酸的熔点为约63℃并且其大大高于体温。在肠的pH下，棕榈酸与Ca和其他二价阳离子容易形成不溶性皂并且作为硬的粪便被排泄。这导致棕榈酸和矿物二者对婴儿的不可用性。SL142和SL151二者分别具有63.27mol％和58.78mol％的在sn-2位置处的棕榈酸(表2.3)。在SL的sn-2位置处发现了比在sn-1,3位置处更高的棕榈酸，这可以有助于更好的消化和吸收。与商业婴儿配方奶粉的位置分布相比(表2.1)，在本研究中合成的SL具有与人乳脂肪相似的sn-2棕榈酸。这些SL中的总棕榈酸的高含量可以归因于未反应的三棕榈精基底，其随后产生了在SL的TAG中的较高水平的棕榈酸。随着EVOOFFA含量增加，mol％油酸在SL中也增加。SL132具有33.55mol％油酸，油酸在SL142中增加至34.81mol％并且在SL151中增加至40.50mol％。SL还富含DHA。SL132具有7.54mol％总DHA，其中10.34mol％存在于sn-1,3位置处。SL142和SL151具有6.72mol％和5.89mol％的DHA。PB具有非常高的(>95mol％)总棕榈酸。因为三棕榈精为起始的TAG，在无脂肪酶的情况下，FFA不被酯化至甘油主链。PB中不存在DHA。本实施例中的全部SL都具有范围从短链脂肪酸(C6:0)至长链多不饱和脂肪酸(DHA)的不同的脂肪酸。短链脂肪酸和中链脂肪酸可以用于新生儿的快速能量和快速吸收，而DHA用于基本的结构和功能的发育。虽然SL与人乳脂肪相比包含较高的总棕榈酸，但它们还具有合意的sn-2棕榈酸含量并且富含DHA。它们可以被用作与其他植物油的掺合物以降低总棕榈酸含量，同时仍保持期望的sn-2棕榈酸并在最终产物中包含DHA。虽然LipozymeTLIM是sn-1,3特异性酶，但油酸和DHA还被酯化至TAG的第二位置，这可以归因于酰基转移。在本研究中，还发现基底摩尔比影响酰基转移。全部反应在相同的酶和相同的酶负载量的存在下在相同的温度下进行持续相同的时间。观察到，随着基底的FFA含量增加，至sn-2位置的油酸转移也增加，而sn-2棕榈酸含量减少。因此，在用于酯化至SL的甘油主链上的游离OH基团的FFA之间似乎存在竞争。TAG分子物质。TAG分子物质在表2.4中被示出。全部SL和PB的占优势的TAG为PPP，因为三棕榈精是酸解反应的起始TAG。PB具有与三棕榈精的PPP相似的～97％PPP，意味着在TAG分子物质中没有变化。在SL132中，在PPP(42.46％)之后是PPO(28.56％)和OPO(23.67％)。OPO的相对百分比在SL142中增加至30.61％并且在SL151中增加至31.46％。与OOP相比，OPO在婴儿中被更好地代谢和吸收[22]。在人乳中发现的主要TAG分子物质是OPO(17.56-42.44％)、POL(9.24-38.15％)、OOO(1.61-11.96％)和LOO(1.64-10.18％)[23]。SL的OPO含量在母乳中发现的OPO含量的范围内。SL包含全部四种类型的TAG，即，SSS(三饱和的)、SUS(二饱和的-单不饱和的)、SUU(单饱和的-二不饱和的)和UUU(三不饱和的)。SL132具有42.61％SSS型TAG，该SSS型TAG在SL142中减小至41.84％并且在SL151中减小至39.19％。SUS型TAG还从SL132中的29.22％减小至SL151中的20.47％。在另一方面，观察到SUU型TAG的较大增加。SL132、SL142和SL151分别包含27.10％、33.98％和40.22％的SUUTAG。所形成的新的TAG还包含主要作为OPD的DHA。物理掺合物具有比SL更高比例的SSS型TAG并且不具有SUU型的和UUU型的TAG。物理掺合物的TAG分子物质类似于三棕榈精的那些，而SL由更多不同的且新形成的TAG组成。熔化曲线和结晶曲线。图5和图6中分别示出了基底和产物的熔化曲线和结晶曲线。熔化完成温度(Tmc)取决于存在的脂肪酸和TAG的类型。随着UUU型TAG增加且SSS型TAG减少，Tmc也降低。包含SSS型TAG的三棕榈精具有最高的Tmc(72.3℃)，随后是EVOOFFA(33.2℃)和DHASCOFFA(29.3℃)(图5)。类似地，基底的结晶开始温度(Tco)从三棕榈精中的42.9℃降低至EVOOFFA中的16.8℃和DHASCOFFA中的12.1℃(图6)。SL132、SL142和SL151的Tmc分别为37.1℃、35.2℃和32.9℃。正常体温为约36-37℃。这可以有助于婴儿配方奶粉配制和代谢，因为SL在体温下将完全熔化。人乳脂肪在接近体温时熔化。PB的Tmc(66.9℃)远高于SL。SL132、SL142和SL151的Tco分别为19.8℃、20.6℃和18.2℃(图2)。在SL之间未发现Tco的显著性差异(P>0.05)，而在Tmc中发现了显著性差异(P<0.05)。在SL和PB的Tmc和Tco中也发现了显著性差异(P<0.05)。本实施例证实包含主要(例如，约60％)在sn-2位置处的棕榈酸且还富含DHA的SL可以用于婴儿配方奶粉中以模拟人乳脂肪的物理性质、化学性质和营养性质。因此，全部三种SL，即SLl32、SL142和SL151，可以适合于在婴儿配方奶粉中用作人乳脂肪类似物。它们具有期望水平的在sn-2位置处的棕榈酸并且还包含用于婴儿的适当生长和发育的DHA。表2.1。人乳和商业婴儿配方奶粉的脂肪酸组成(％)[73]。表2.2。基底、结构脂质和物理掺合物的总脂肪酸(mol％)组成较少的：较少的脂肪酸包括C14:1、C20:2、C22:0、C20:3n3、C24:0和C24:1。每个值都是一式三份的平均值±标准偏差。在每行中的具有不同字母的值为P≤0.05的显著性差异。表2.3。结构脂质和物理掺合物的位置脂肪酸(mol％)概况每个值都是一式三份的平均值±标准偏差。在sn-2和sn-1,3列内的每行中的具有不同字母的值分别为P≤0.05的显著性差异。表2.4。结构脂质和物理掺合物的三酰甘油(TAG)分子物质的相对百分比(％)TAG物质SL1321SL1422SL1513PB4DPD0.08±0.00a0.05±0.00a1.16±0.02bnd5OPD2.60±0.01a2.10±0.04b3.05±0.09cndODO0.10±0.00a0.11±0.00a0.09±0.00andLOL0.05±0.00a0.05±0.00a0.13±0.00bndLPL0.19±0.00a0.19±0.00a0.18±0.00andOOL0.04±0.00a0.05±0.00a0.04±0.00andPOL0.48±0.00a0.85±0.02b4.21±0.98cndOOO1.37±0.00a1.67±0.01b1.13±0.39cndPLP0.51±0.00a0.44±0.00a0.17±0.00b1.36±0.01cPPM0.15±0.00a0.47±0.03b0.72±0.02cndOPO23.67±2.56a30.61±2.10b31.46±2.29bndPPO28.56±2.19a20.93±2.08b20.18±1.93b1.02±0.00cPPP42.46±3.12a41.37±3.00a38.47±2.68b97.01±2.31cSOO0.09±0.00a0.18±0.00b0.23±0.01cndPSO0.15±0.00a0.12±0.00a0.13±0.00and脂肪酸不呈区域特异性的顺序，并且如说明书中所描述地缩写。每个值都是一式三份的平均值±标准偏差。在每行中的具有不同字母的值为P≤0.05的显著性差异。实施例3使精炼橄榄油富含棕榈酸和二十二碳六烯酸以产生人乳脂肪类似物材料和方法材料。材料如实施例1中所描述的来获得，加上以下的内容。精炼橄榄油(ROO)购自ColumbusVegetableOils(DesPlaines,IL)。DHASCO购自DSMNutritionalProducts(Columbia,MD)。棕榈酸购自AlfaAesar(WardHill,MA)。脂质标准物C15:0十五烷酸(>98％纯度)和三油精购自Sigma-AldrichChemicalCo.(St.Louis,MO)。对于RSM研究的实验设计。为了研究实验条件对总棕榈酸、DHA和在sn-2位置处的棕榈酸的结合的影响，使用由Modde5.0软件(Umetrics,Umea,Sweden)提供的实验设计来应用响应面法(responsesurfacemethodology)(RSM)。数学模型通过软件来产生以预测三种反应响应。在设计实验时考虑了三种因素：反应时间(12-24h)、反应温度(55-65℃)和精炼橄榄油与DHAFFA与棕榈酸(1:1:6、1:1:9和1:1:12mol/mol)的基底摩尔比。得到的设计包括十五种不同的反应条件的组合。实验按一式三份进行，得到了四十五种总反应。由DHASCO制备DHA游离脂肪酸。DHA单细胞油(DHASCO)遵循上文描述的方法在进行较少修改的情况下被转化成DHAFFA。二十五克的DHA用5mg丁羟甲苯处理并且然后如实施例1中被皂化。将50mL蒸馏水添加至皂化的混合物并且未皂化的物质用己烷萃取两次(100mL)并且弃去。然后，使用10mol/LHCL来酸化水层至约1.0的pH。50ml己烷用于萃取所释放的游离脂肪酸。然后，包含游离脂肪酸的己烷用无水硫酸钠干燥并且溶剂在60℃下在旋转蒸发仪中被除去。得到的游离脂肪酸用氮气冲洗并且储存在-80℃的制冷器中。酸解反应。带螺帽的试管中的0.1g的精炼橄榄油根据相应的基底摩尔比与一定量的DHAFFA和棕榈酸混合。3mL己烷和以总基底质量的10％(w/w)的Novozym435脂肪酶还被添加至反应混合物。然后，混合物在其对应的反应温度(55℃、60℃或65℃)下在以200rpm恒定搅动下在水浴中温育12h、18h或24h。反应通过过滤出脂肪酶而停止并且将产物在-80℃下储存用于将来分析。全部反应按一式三份进行并且报道平均值和标准偏差。胰脂肪酶催化的sn-2位置分析。sn-2位置脂肪酸组成遵循上文描述的方法和/或通过参考文献103(通过引用并入本文)来测定。全部样品按一式三份分析并且报道平均值。脂肪酸概况的测定。精炼橄榄油、DHASCO和产物(SL)遵循上文实施例2中描述的程序被转化为FA甲酯(FAME)，除了加热步骤为5分钟，注入体积为1μL，分流比为5:1，并且检测利用火焰离子化检测器在250℃下进行。全部样品按一式三份分析并且报道平均值。模型验证。模型的验证通过从等值线标绘图随机选择五个区域并且使用对应于这些区域的条件进行酸解反应来进行。所获得的响应值与来自模型的预测值相比较。进行卡方检验以比较观测值和预测值。统计学分析。全部反应按一式三份进行并且报道平均值。响应面、回归分析和后向消元使用Modde5.0软件(Umetrics,Umea,Sweden)来进行。结果和讨论模型拟合。表3.1示出了使用通过RSM产生的条件产生的SL的总脂肪酸组成和sn-2概况。精炼橄榄油通过酸解反应而富含DHA和棕榈酸。SL中的总DHA结合的范围为从零至3.5mol％，而总棕榈酸结合的范围为从26.8mol％至54.6mol％。此外，在sn-2位置处的棕榈酸的范围为从18.0mol％至33.6mol％。使结果经受多元线性回归和后向消元分析以拟合成多项式模型。回归系数(β)和显著性(P)值基于表3.1中的数来计算。用于三种响应的相应的ANOVA表可以在表3.2、表3.3和表3.4中发现。对于三种响应的每一种，还列出了R2值(通过模型解释的响应的变化的部分)和Q2(可以通过模型预测的响应的变化的部分)。用于在sn-2位置处的棕榈酸含量的模型方程为：在sn-2处的PA＝27.09–2.10*SR–1.90*时间+1.98*SR*温度，其中SR代表基底摩尔比。可见，基底摩尔比和时间二者都具有负面影响，而基底摩尔比和温度之间的相互作用具有正面影响。对于总棕榈酸和DHA结合而言，模型为：总PA＝46.18–1.63*SR+3.29*温度+9.08*时间–8.64*温度*温度+4.21*时间*时间且总DHA结合＝0.97–0.79*SR+0.44*温度+0.65*时间+0.93*SR*SR–0.85*温度*温度+0.66*时间*时间+0.40*SR*温度–0.52*SR*时间。两种模型都包括比用于在sn-2位置处的棕榈酸的有效项更多的有效项。一般地，基底摩尔比一贯地对两种响应具有负面影响，而温度和时间示出了一贯的正面影响。温度和时间的二阶项的影响在两种模型中也是一贯的，其中前者为负面的，而后者为正面的。另外，用于总DHA结合的模型包含在基底摩尔比与温度和时间之间的两个相互作用项，其中它们的影响分别为正面的和负面的。反应的优化。等值线标绘图通过Modde5.0软件产生以显示反应条件和每种响应之间的关系。如图7A-7C中所示，时间被保持在18h不变，而基底摩尔比和温度分别被置于y轴和x轴上。一般而言，对于总DHA结合(图7C)和在sn-2位置处的PA(图7A)而言，它们的含量随着基底摩尔比的增加而增加。对于总PA结合(图7B)而言，基底摩尔比的影响更复杂，如上文描述的二阶模型所表明。尽管如此，在全部三种实例中，温度的影响显示相似的模式，其中响应水平随着温度变得更高而升高，并且然后在某一点处，随着温度继续升高，响应水平开始降低。对于该现象的原因可能是因为，当温度开始升高时，基底分子在混合物中更具活性并且因此记录了较高的响应；然而，随着温度继续升高，酶蛋白变性变成问题并且某些Novozym435可能被灭活并且因此产生了如在等值线标绘图中看到的响应水平的降低。另外，可见，为了实现某一水平的响应，可以采用反应条件的不同组合。线性变量和二次变量的复杂关系表明，当优化反应模型时，应当考虑用于产生期望的响应值的反应的成本效益。模型的验证。模型的验证通过进行卡方检验来进行，并且在观测值和预期值之间不存在显著性差异，因为对于总DHA(3.085)、总PA(6.997)和在sn-2处的PA(3.644)的卡方值全部小于α＝0.05且DF＝4处的截点(9.488)(表3.5)。有趣地，虽然在sn-2位置处的棕榈酸含量的R2值和Q2值显著地低于其他两种响应的R2值和Q2值，似乎暗示了模型的预测能力是低的。然而，验证结果示出，模型在其可预测性方面仍是相对准确的。这可能是因为，反应条件的某些二阶项在多元回归和后向消元期间被消去，但实际上对响应仍具有某些影响，只是该影响不是统计学上显著的。模型的有效性通过以1:1:6(精炼橄榄油:DHAFFA:PA)的基底摩尔比在60℃下在无溶剂的情况下进行放大反应(8g的总基底)持续12小时来进一步检验。所示的结果(表3.6)再次证明，对于所测定的三种响应，模型具有高的预测准确度。此外，值得注意，在sn-2位置处，与毫克规模生产的脂肪酸的种类相比检测到更多的脂肪酸的种类，值得注意的是亚油酸(C18:2n6)和DHA(C22:6n3)。这暗示了在毫克规模生产中可能存在这些脂肪酸，但它们的信号太弱以致不能被GC检测到。精炼橄榄油和SL的脂肪酸和sn-2位置组成。表3.6中示出了精炼橄榄油和DHA-FFA的总脂肪酸组成和sn-2位置脂肪酸组成。可见，精炼橄榄油中的主要脂肪酸是油酸(73.95mol％)、棕榈酸(9.97mol％)、亚油酸(7.26mol％)和硬脂酸(6.90mol％)。油酸的优势度在sn-2位置上是甚至更突出的，其中油酸为86.35mol％，而棕榈酸为仅1.49mol％。如上文所讨论，在HMF中，接近60％的棕榈酸位于sn-2位置处，其中不饱和脂肪酸例如油酸位于sn-1,3位置处。进行酸解反应，目的在于增加在sn-2位置处的棕榈酸含量并且得到的SL包含与精炼橄榄油中的1.5mol％相比的多达33.6mol％的在sn-2处的棕榈酸。此外，当棕榈酸在sn-2位置处为33.6mol％时，DHA结合是3mol％，这进一步增大了SL的营养价值，因为DHA通常在人乳中以0.15％至0.92％存在[73]。虽然在sn-2位置处的棕榈酸结合仍低于HMF中发现的水平，但它是从精炼橄榄油中的水平的显著升高。此外，油酸组成在与HMF中相同的范围内，并且DHA组成被显著改善。这些发现表明所产生的SL可以在油掺合物中使用以生产具有较高的DHA含量的附加价值的、包含与HMF相似的脂肪酸概况的婴儿配方奶粉。结论。在以小规模生产的实施例中产生的SL包含期望量的DHA和在sn-2位置处的PA。在sn-2位置处的PA含量与精炼橄榄油的在sn-2位置处的PA含量相比被增大，并且SL具有婴儿配方奶粉应用中的巨大潜力。此外，可以将包含大量的在sn-2位置处的PA的基底例如三棕榈精添加至反应混合物(例如实施例1和实施例2中所描述的)，以改进其在最终SL中的组成。表3.2。在sn-2位置处的PA的ANOVA表N＝45，DF＝35，Q2＝0.098，R2＝0.433，R2adj＝0.287；DF：自由度；SS：平方和；MS：均方；SD：标准偏差表3.3。用于PA的结合的ANOVA表N＝45，DF＝35，Q2＝0.869，R2＝0.918，R2adj＝0.897表3.4。用于DHA的结合的ANOVA表N＝45，DF＝35，Q2＝0.808，R2＝0.877，R2adj＝0.846表3.6。来自放大试验的SL的总脂肪酸组成和sn-2脂肪酸组成(mol％)a平均值±SD，n＝3；ND：未检测到表3.7。精炼橄榄油和DHA-FFA的总脂肪酸和sn-2概况(mol％)a其他包括：C8:0、C10:0、C14:1实施例4用于婴儿配方奶粉中的包含长链多不饱和脂肪酸的喷雾干燥的结构脂质材料和方法材料。和如上文实施例1中所描述。以游离脂肪酸形式的GLA(70％GLA)购自SanmarkCorp.(Greensboro,NC)。三棕榈精购自TokyoChemicalIndustryAmerica(Montgomeryville,PA)。棕榈油精(SanTrans25)由IOI-LodersCroklaan(Channahon,IL)慷慨捐献。SL混合物的合成：两种结构脂质(SL)通过如在上文实施例中大体上描述的脂肪酶催化的酸解反应来制备。表4.1示出了这些SL的脂肪酸组成。简言之，TDA-SL由三棕榈精以及DHASCO和ARASCO的游离脂肪酸混合物制备。无溶剂酸解反应在基底摩尔比为9(FFA的混合物与三棕榈精)、10％(w/w)的LipozymeTLIM和以200rpm的恒定搅拌的情况下在1L搅拌的间歇反应器中在60℃下进行持续24小时。反应器包裹有箔材以减少对光的暴露。在反应结束时，得到的SL通过包含硫酸钠的Whatman1号并且然后通过0.45μm膜滤器真空过滤以干燥SL并且分离SL与酶。SL在4℃下在氮气下储存在气密的琥珀色容器中。SL产物的纯化使用短路径蒸馏以及随后的碱脱酸来进行。蒸馏在以下的条件下进行：60℃保持温度；约100mL/h进料速率；170℃加热油温度；20℃冷却剂温度；和真空<13.33Pa。通过碱抽提的脱酸根据上文实施例中所描述的方法在较少修改的情况下进行。从短路径蒸馏纯化的SL(10g)与己烷(150mL)、酚酞溶液和80mL的20％乙醇中的0.5NKOH混合。分离在分液漏斗中获得，并且收集上部相。上部相用另外的30mL的20％乙醇中的0.5NKOH和60mL的饱和NaCl溶液萃取。包含SL的己烷相通过硫酸钠柱。己烷被蒸发以获得脱酸的SL。完成脱酸步骤以获得用于进一步研究的足够的纯化的SL(FFA<0.1％)。PDG-SL按具有修改的相似的方式由棕榈油精以及DHASCO和GLA的游离脂肪酸混合物制备。基底摩尔比为2(棕榈油精:FFA混合物)且Novozym435(10％重量的总反应物)作为生物催化剂。反应在以200rpm的恒定搅拌下温育22.7小时。短路径蒸馏(KDL-4unit,UICInc.)用于在以下的条件下从SL除去FFA：保持温度：60℃；进料速率：～100mL/h；加热油温度：185℃；冷却剂温度：15-20℃；和真空：<100毫托。所获得的SL在-80℃在氮气下储存直到进一步使用。SL粉末的制备。TDA-SL和PDG-SL遵循Augustin的方法[11，其据此关于微封装工艺通过引用并入本文]在进行较少修改的情况下被微封装。乳清分离蛋白(wheyproteinisolate)(21g)在60℃下在350mL水中重构，然后添加玉米糖浆固体(42g)。将NaOH溶液(1M)添加至混合物以使pH调节至7.5。将混合物在90℃在水浴中加热30分钟并且冷却至60℃，之后添加TDA-SL或PDG-SL(21g)。油使用台式均质器(BrinkmannKinematicaPolytron,Luzern,Switzerland)被分散至混合物中。预乳液在两个步骤中在35MPa下并且随后在10MPa下通过高压均质器(AvestinEmulsiflex-C5,Ontario,Canada)。均质化的乳液被保持在60℃，以5mL/min的进料速率在180℃的进口温度和80℃的出口温度下喷雾干燥。微封装效率。总油的萃取根据Klinkesorn的方法[61，其据此关于萃取工艺通过引用并入本文]在进行某些修改的情况下进行。将二毫升的蒸馏水添加至0.5g粉末。混合物被涡旋1分钟，之后添加25mL己烷/异丙醇(3:1，v/v)。然后使管涡旋三次，每次持续5分钟，并且以3,000g离心30分钟。收集有机相。水相用相同的溶剂混合物重新萃取两次。在通过硫酸钠柱过滤之后，使用旋转蒸发仪(BüchiRotavapor,Flawil,Switzerland)在60℃下蒸发溶剂。总油的量通过重量分析确定。游离油或己烷可萃取的油在用15mL己烷萃取2.5g粉末之后通过重量分析被确定。混合物被涡旋3分钟并且以3,000g离心30分钟。过滤上清液，并且将滤纸用己烷洗涤两次。收集滤液，并且在60℃下蒸发己烷。微封装效率(ME)如下来计算：ME＝[(总油–游离油)/总油]x100总油和游离油的单位是样品的g/g。水活度(aw)和水分含量。SL粉末的水活度在25℃下用AquaLab水活度仪(CX-2,DecagonDevices,Inc.,Pullman,WA)来测量。将二克样品称重到铝盘中并且在真空烘箱(FisherScientific,Fairlawn,NJ)中在70℃和29英寸汞柱下干燥24h。水分含量由重量差来计算。脂质氧化测量。脂质氢过氧化物和硫代巴比妥酸-反应物质(TBARS)使用Klinkesorn的改良方法来测量[62，其据此通过引用被并入]。SL粉末(0.1g)在0.3mL蒸馏水中被重构。将重构的样品添加至1.5mL的异辛烷-2-丙醛(3:1,v/v)，随后涡旋3次，每次10秒，并且以3,000g离心2分钟。有机相(0.2mL)被收集并且添加至2.8mL甲醇-丁醇(2:1,v/v)，随后添加15μL硫氰酸盐溶液(3.94M)和15μL亚铁溶液。溶液被涡旋并且在20分钟后测量在510nm处的吸收度。亚铁溶液通过使0.132MBaCl2和0.144MFeSO4在酸性溶液中混合来制备。脂质氢过氧化物浓度使用氢过氧化枯烯标准曲线来确定。硫代巴比妥酸(TBA)溶液通过使15g三氯乙酸、0.375gTBA、1.76mL12NHCl和82.9mL蒸馏水混合来制备。将三毫升的乙醇中2％丁羟甲苯(BHT)添加至100mL的TBA溶液，并且使2mL的该溶液与1mL的重构的样品(在1mL蒸馏水中的5mg的乳液粉末)混合。混合物被涡旋、在沸水浴中被加热15分钟，并且以3,000g被离心25分钟。测量在532nm处的上清液的吸收度。TBARS浓度使用用1,1,3,3-四乙氧基丙烷制作的标准曲线来测定。加速氧化测试。SL粉末的氧化稳定性还通过使用差示扫描量热法(DSC)的加速氧化测试来评估。量热测量利用NetzschDSC204F1Phoenix(Burlington,MA)来进行。氧气以20mL/min的速率用作吹扫气。仪器使用标准DSC程序用铟校准。将样品(4-5mg)放置于卷曲的铝样品盘(crimpedaluminumsamplepan)中。为了促进样品与氧气的接触，每个盘的盖子钻有四个针孔。开始氧化温度(OOT)的测定以10℃/min的加热速率在50-300℃的温度区间中进行。氧化诱导时间(OIT)在200℃下等温地测定。全部测量按一式三份进行并且报道平均值。生育酚分析：生育酚分析如上文实施例1中描述的来进行，除以下之外：用于可信标准物的保留时间为包含0.01％BHT的己烷中的0.03μg/mL至1.25μg/mL，并且依据一式三份测定的平均值将定量作为百万分率(ppm)报道。SL粉末的分散性。分散性通过将少量粉末(～0.1g)添加至激光衍射仪(MalvernLaserParticleSizeAnalyzer,MastersizerS,MalvernInstruments,Southborough,MA)的搅拌室(2,000rpm)来测定。测量用蒸馏水作为分散剂来进行。分散性通过测量平均粒径(d4,3)和遮光率(当引入样品时，从主激光束损失的光的分数)作为时间的函数的变化(Klinkesorn以及其他人，2005)来评估。统计学分析。报道了至少一式三份测定的平均值和标准偏差。独立的样品t检验(α＝0.05)使用IBMSPSSStatistics21来进行以确定TDA-SL粉末和PDG-SL粉末之间的显著性差异。结果和讨论TDA-SL和PDG-SL的脂肪酸组成和位置分布。三棕榈精和棕榈油精通过分别与DHASCO和ARASCO的游离脂肪酸混合物(生成TDA-SL)以及DHASCO和GLA的游离脂肪酸混合物(生成PDG-SL)的脂肪酶催化的酸解反应来改性。表4.1中示出了这些SL以及它们的基底的脂肪酸概况。在TDA和PDG-SL中的TAG的sn-2位置处的棕榈酸的水平分别为48.53％和35.11％。这些水平低于HMF中的sn-2棕榈酸的含量，该含量大于50％(Straarup以及其他人，2006)。然而，这些水平高于植物油中的水平(5-20％sn-2棕榈酸)(Mattson和Lutton1958)，这些植物油常常作为婴儿配方奶粉混合物中的脂肪成分被添加。HMF中的LCPUFA的水平变化并且取决于母亲的饮食。所报道的人乳中的ARA、DHA和GLA的值分别为0.24-1.00％、0.06-1.40％和0.07-0.12％(Brenna以及其他人，2007；Jensen1999)。TDA-SL包含17.69％ARA和10.75％DHA。PDA-SL包含5.03％GLA和3.75％DHA。这些SL可以被部分地添加在用于婴儿配方奶粉中的植物油掺合物中，以提供在sn-2位置处的棕榈酸和有益的LCPUFA。水分含量和水活度(aw)。水分含量和aw影响食物产品的货架期并且影响脂质氧化的速率。由食品工业规定的干燥粉末的最大水分含量在3-4％之间(Master1991)。在本研究中生产的SL粉末具有1.78-1.96％的水分含量和0.15-0.16的水活度(表4.2)。一般而言，低水分含量(1-3％)和低aw(0.10-0.25)通过在165-195℃之间的温度下进行的喷雾干燥来实现(Hogan以及其他人，2001；Klinkesorn以及其他人，2006)。水在脂质氧化中的作用取决于食物的结构和组成。例如，在11％、33％和52％的平衡相对湿度(RH)下进行的对涂覆有卵磷脂-壳聚糖壁的喷雾干燥的金枪鱼油的储存研究，示出在较低的相对湿度(11％和33％RH)下的快速氧化(Klinkesorn以及其他人，2005)。这与一种普遍观点矛盾，该普遍观点是，当aw在0.2和0.4之间(单层水)时，食物中的脂质氧化处在其最低水平，但当aw降低或升高时，食物中的脂质氧化迅速升高(Karel以及其他人，1967)。另外的证据示出，干燥的全脂乳粉(dried-wholemilkpowder)的初始粉末品质在0.11和0.23之间的aw下被最好地保留(Stepelfeldt以及其他人，1997)。微封装的效率。微封装效率反映了颗粒表面上的游离油的存在以及壁可以防止内部油的提取的程度(Hogan以及其他人，2001)。之前报道的使用MRP作为密封剂的微封装效率在80-98％之间，这取决于蛋白质的类型、油与蛋白质的比率以及粉末中的油负载量(Rusli以及其他人，2006)。SL粉末的微封装效率为90％，并且在所报道的值的中间范围内。这些较低值可以是所使用的不同提取条件的结果。氧化稳定性。在脂质氧化期间，氢过氧化物主要氧化产物连续地形成，并且分解成多种非挥发性和挥发性次级产物(Shahidi和Zhong2005)。干燥的SL粉末的氧化稳定性基于用于脂质氢过氧化物(PV)和TBARS形成二者的总脂质来测定(表4.2)。这些SL粉末的氢过氧化物和TBARs的水平与在先前研究中生产的鱼油粉末是相当的(Klinkesorn以及其他人，2005)。TDA-SL和PDG-SL两种粉末具有低的TBARS和PV值，表明它们对氧化应激的稳定性。MRP具备抗氧化性质(Wijewickreme以及其他人，1999)并且可以为不饱和油类提供保护。在喷雾干燥的TDA-SL粉末中的氢过氧化物浓度明显高于PDG-SL(p<0.05)。与PDG-SL粉末相比，TDA-SL粉末具有稍微较高的TBARS浓度；然而，差异不是显著的(p>0.05)。使用氧化稳定性仪器在110℃下测定的氧化稳定性指数(OSI)还指示用于PDG-SL粉末的较高氧化稳定性(数据未示出)。两种SL粉末都使用相同的微封装方案来制备。用于TDA-SL的较低的氧化程度指示，PDG-SL对于在微封装过程期间的氧化条件是相对更稳定的。多不饱和脂肪酸的量在TDA-SL中大于30％，但在PDG-SL中低于20％(表4.1)。油中的较高浓度的不饱和脂肪酸可以促进脂质氧化的速率的增加。脂肪酸中的不饱和度越大，它对于脂质氧化就越易受攻击。DHA(6个双键)、ARA(4个双键)和GLA(3个双键)是SL中的具有高不饱和度的LCPUFA。与PDG-SL相比，TDA-SL中的较低氧化稳定性可能可归因于具有较高不饱和度的较高量的DHA和ARA。油基底的生育酚分析。脂肪和油的氧化稳定性取决于脂肪酸组成并且取决于存在的抗氧化剂的量。油中的生育酚的抗氧化效应可以帮助改进在微封装工艺期间的产物的氧化稳定性。生育酚分析揭示出TDA-SL包含与PDG-SL(147.84ppm)相比较低量的总生育酚(48.19ppm)。图8中示出了TDA-SL和PDG-SL中的生育酚和生育三烯酚各自的量。生育三烯酚以较高浓度存在于PDG-SL中。PDG-SL的基底油是棕榈油精，维生素E的天然来源。PDG-SL微封装的产物的较高的氧化稳定性可能是由于与TDA-SL相比在PDG-SL中的LCPUFA的较低的量和较低的不饱和度以及总生育酚的较高含量。加速稳定性测试。氧化反应是放热过程，其可以通过DSC以等温模式或非等温模式测量。氧化开始温度(OOT)是在给定加热速率和氧化环境下评估的材料的氧化稳定性程度的相对量度。OOT值越高，材料越稳定(ASTM标准E2009-2008)。类似地，氧化诱导时间(OIT)是在测试(ASTM标准E1858-2008)的等温温度下评估的材料的氧化稳定性程度的相对量度。OOT和OIT值关于SL粉末来确定以获得相对氧化稳定性的信息。DSC测量关于OOT以10℃/min的加热速率进行，并且关于OIT在200℃下等温地进行。PDG-SL粉末与TDA-SL粉末相比具有较高的OOT和较长的OIT(表4.2)。再次地，这可能是由于两种SL粉末之间的抗氧化剂和不饱和脂肪酸的水平的差异，因为它们使用相同的微封装方法和喷雾干燥方法来生产。产品分散性。将SL粉末的少量样品(～0.1g)添加至填充有蒸馏水的连续搅拌的测量室。体积加权平均直径(volume-weighedaveragediameter)d4,3(在每个大小等级中液滴的体积比的总和乘以该大小等级的中点直径)对乳液中的大颗粒的存在是敏感的，并且因此对诸如絮凝的现象敏感(Walstra2003)。遮光率对在流体中分散的材料的总量是敏感的。遮光率作为时间的函数的变化和平均粒度d4,3被测量以评估SL粉末的分散性(Walstra2003)。图9示出两种SL粉末的液滴遮光率在搅动时间的第一分钟内急剧地增加，此后它达到了相当恒定的值(对于TDA-SL粉末为约24％且对于PDG-SL粉末为27％)。另外，d4,3在搅拌时间的1分钟之后减小，如图10中所示。遮光率和d4,3二者在2-3分钟之后很快达到了相对恒定的值(对于TDA-SL粉末为约1.7μm且对于PDG-SL粉末为2μm)。粒度的迅速减小和液滴遮光率的增加指示这些产物快速地分散至均匀的悬浮液中(Raphael和Rohani1996)。结论用于婴儿配方奶粉用途的两种酶促合成的SL被封装并且喷雾干燥成粉末形式。这些SL被封装在加热的乳清分离蛋白和玉米糖浆固体的MRP中。封装的SL粉末产生了90％封装率(encapsulationefficiency)、低的过氧化物值和低的TBARs值。这些粉末迅速地分散在水中以给出均匀的悬浮液。包含具有较高的不饱和度和较低的生育酚浓度的SL的粉末产生了较高的过氧化物值和TBARs值。结果表明存在于起始的油中的抗氧化剂的不饱和度和浓度影响封装的产物的氧化稳定性。表4.1酶促产生的TDA-SL和PDG-SL的脂肪酸组成和位置分布(％)表4.2微封装的TDA-SL和PDG-SL粉末a的产品特性a使用粉末中的油与蛋白质的1:1比率和25％油负载量来制备微封装。报道了至少一式三份测量的平均值。星号指示在两种SL微胶囊之间具有显著性差异(p<0.05)的值。b以10℃/min的加热速率通过DSC测定的OOT。c通过DSC在220℃下等温地测定的OIT。实施例5通过酶促酯化合成富含ω脂肪酸和sn-2棕榈酸的结构脂质、以及其在粉末化的婴儿配方奶粉中的结合材料和方法材料。材料如实施例1或实施例4中所提供并描述的，除如下的之外。三棕榈精和内标C15:0十五烷酸(>98％纯度)购自TokyoChemicalIndustryAmerica(Montgomeryville,PA)。三油精和油酸乙酯购自Sigma-AldrichChemicalCo.(St.Louis,MO)。TAG标准混合物(GLC参考标准)购自Nu-checkPrep,Inc.(Elysian,MN)。包括脱脂奶粉、乳糖以及婴儿配方奶粉维生素和矿物预混合物的其他成分分别由O-AT-KAMilkProductsCooperative,Inc.(Batavia,NY)、HilmarIngredients(Hilmar,CA)和Fortitech,Inc.(Schenectady,NY)慷慨捐赠。FFA和FAEE的制备。DHASCO和ARASCO在制备FFA和FAEE之前以1:1的摩尔比混合。混合物包含26.01±0.35％DHA、22.56±0.56％ARA、18.65±0.32％油酸、8.90±0.02％棕榈酸、5.62±0.02％肉豆蔻酸、4.47±0.03％硬脂酸和2.56±0.19％月桂酸。油混合物的水解和乙醇分解根据上文实施例中所描述的方法在此处描述的某些修改的情况下进行。对于水解，150g的油使用KOH(34.5g)、蒸馏水(66mL)、96％乙醇(396mL)和丁羟甲苯(0.03g)来皂化。添加120mL的蒸馏水以停止反应并且酸化至pH2以释放FFA。FFA被洗涤、通过硫酸钠柱过滤，并且在-20℃下在氮气下储存在琥珀色的Nalgene瓶中直到使用。对于乙醇分解，反应通过混合油与乙醇钠(2.625％,v/v)在绝对乙醇中以4:2(v/v)的比率(2.25倍摩尔过量的乙醇)进行。混合物在氮气气氛下在机械摇动下于60℃加热40分钟。产物首先用100mL的饱和NaCl溶液洗涤，并且然后用100mL的蒸馏水洗涤。在分离之后，FAEE用硫酸钠干燥，真空过滤，并且与FFA类似地储存。FFA和FAEE通过分别使用油酸和油酸乙酯作为标准物的薄层色谱法(TLC)分析来确认。SL产品的小规模合成和分析。SL使用如图11中所图示的两种类型的反应，酸解(用FFA作为基底)和酯交换(用FAEE作为基底)，来生产。反应混合物包含己烷(3mL)，并且将以不同的基底摩尔比(以3mol/mol、6mol/mol和9mol/mol的FFA或FAEE与三棕榈精)的FFA或FAEE和三棕榈精的混合物放置于带螺帽的试管中。添加LipozymeTLIM(基底的总重量的10％)。试管在回转式摇动水浴(orbitalshakingwaterbath)中以200rpm在60℃下温育12h、18h和24h。产物被收集并且通过硫酸钠柱以除去水分和酶。全部反应按一式三份来进行。报道了平均值和标准偏差。产物的TLC分析根据Lumor和Akohwas描述的方法[76，其据此通过引用并入本文]在修改的情况下进行。五十微升的反应产物在硅胶GTLC板上点板。使用石油醚/乙醚/乙酸(80:20:0.5，v/v/v)使板展开(对于用FFA制成的SL)，使用90:10:0.5(v/v/v)组合(对于用FAEE制成的SL)。带用在甲醇中的0.2％的2,7-二氯荧光黄喷雾并且在UV光下可视化。TAG带被刮到带螺帽的试管中，用于脂肪酸组成分析。TAG样品遵循如上文所描述的AOAC法定方法996.01被转化成脂肪酸甲酯(FAME)。SL的大规模合成和纯化。给出ARA和DHA的最高结合的条件被选择用于SL的1L规模的生产。无溶剂酸解反应在基底摩尔比为9(FFA的混合物与三棕榈精)、10％(w/w)的LipozymeTLIM和以200rpm的恒定搅拌的情况下在1L搅拌的间歇反应器中在60℃下进行持续24h。反应器包裹有箔材以减少对光的暴露。在反应结束时，得到的SL通过包含硫酸钠的Whatman1号并且然后通过0.45μm膜滤器真空过滤以干燥SL并且分离SL与酶。SL在4℃在氮气下储存在气密的琥珀色容器中。SL产品的纯化使用短路径蒸馏以及随后的碱脱酸来进行。蒸馏在以下的条件下进行：60℃保持温度；约100mL/h进料速率；170℃加热油温度；20℃冷却剂温度；和真空<13.33Pa。碱抽提的脱酸根据上文所描述的方法在进行较少修改的情况下进行。从短路径蒸馏纯化的SL(10g)与己烷(150mL)、酚酞溶液和80mL的20％乙醇中的0.5NKOH混合。分离在分液漏斗中获得，并且收集上部相。上部相用另外的30mL的20％乙醇中的0.5NKOH和60mL的饱和NaCl溶液萃取。包含SL的己烷相通过硫酸钠柱。己烷被蒸发以获得脱酸的SL。完成脱酸步骤以获得用于进一步研究的足够的纯化的SL(FFA<0.1％)。FFA含量根据AOCS法定方法Ac5-41来测定[7]。位置分析。所遵循的胰脂肪酶水解程序为如上所述。水解产物用2mL二乙醚萃取并且在氮气下浓缩。浓缩的萃取物在硅胶GTLC板上点板并且用己烷:二乙醚:甲酸(60:40:1.6，v/v/v)的混合物展开。2-油酰甘油作为2-MAG的识别标准物被平行点板。对应于2-MAG的带被收集并且转化成FAME，用于如上所述的脂肪酸组成分析。13CNMR分析除胰脂肪酶分析之外，ARA和DHA的区域异构体分布通过质子-去耦的13C核磁共振(NMR)分析来测定。对于溶解于0.8ml99.8％CDCl3中的200mg样品，光谱在25℃下利用配备有3mm三共振低温探针的VarianDD600MHz光谱仪使用连续的1H去耦来收集。数据使用以下的采集参数以150.82MHz的13C频率来采集：56,818复数数据点，37,879Hz(251ppm)的谱宽、脉冲宽度30°、采集时间1.5s，弛豫延迟(relaxationdelay)1s和20,000次扫描的收集。指数谱线增宽(1Hz)在傅立叶转换数据之前被应用。13C化学位移相对于在77.16ppm处的CDCl3以百万分率(ppm)表示。熔化曲线和结晶曲线。熔化曲线和结晶曲线关于如上所述的三棕榈精、SL和从商业婴儿配方奶粉提取的脂肪(CIFL)使用利用Haake浸没式冷却器(HaakeEK90/MT,ThermoScientific)冷却的差示扫描量热计(DSC1STAReSystem,Mettler-Toledo)来测定。从婴儿配方奶粉的脂质提取根据Teichart和Akoh6来进行。分析根据AOCS法定方法Cj1-94在进行较少修改的情况下使用铟作为标准物来进行。将样品以50℃/min从25℃加热至80℃，保持10分钟，以10℃/min从80℃冷却至-55℃(用于结晶曲线)，保持30分钟，并且然后以5℃/min从-55℃加热至80℃(用于熔化曲线)。熔化曲线和结晶曲线按一式二份进行。TAG分子物质。SL和CIFL的TAG分子物质在进行以下的修改的情况下如上所述地分析。ELSD条件是70℃，3.0巴，和7的增益。样品浓度为在氯仿中的5mg/mL。洗脱剂梯度为以1mL/min的溶剂流速和10分钟的后运行(postrun)，其中梯度为0分钟，65％B；55分钟，95％B和65分钟，65％B。包含三亚麻精(ECN＝36)、三亚油精(42)、三油精(48)、三棕榈精(48)、三硬脂精(54)和三花生精(triarachidin)(60)以及棕榈油精的标准物TAG混合物进行色谱分析以帮助确定TAG物质。婴儿配方奶粉制备。包含SL的婴儿配方奶粉使用两种一般制造方法来制备：1)湿混合/喷雾干燥工艺和2)干掺混工艺[147，其据此关于婴儿配方奶粉制备通过引用并入本文]。对于湿混合/喷雾干燥工艺，脱脂奶粉(20g)、乳清分离蛋白(10g)、乳糖(31g)、麦芽糖糊精(30g)和水(800mL)在50℃-60℃下混合。向混合物添加SL(30g)和维生素/矿物预混合物(3.9g)，并且使用高速台式均质器(BrinkmannKinematicapolytron,Switzerland)均质化。样品在两个步骤中以35MPa和随后以10MPa通过高压均质器(AvestinEmulsiflex-C5,Canada)，在65℃下巴氏杀菌持续30分钟，然后使用小型喷雾干燥器Buchi-290(瑞士)喷雾干燥。使用喷雾干燥进口-出口温度的两种不同组合(120℃-70℃相对于180℃-80℃)。将这些干燥温度对产品质量的影响进行比较。对于干掺混工艺，在掺混步骤之前，SL遵循上文的实施例4中所描述的方法被封装。然后使微封装的SL(120g)与上文列出的除水之外的成分干掺混。婴儿配方奶粉的脂质氧化和颜色测量。脂质氢过氧化物和硫代巴比妥酸-反应物质(TBARS)根据上文实施例4中所描述的方法来测量，除了对于TBARS，样品混合物在冷却之后以3400g离心25分钟之外。对于颜色测量，L*,a*,b*值使用Minolta颜色分析器来测量。色度C*和色调相角h*由a*和b*值来计算。数学的C*和h*定义为C*＝[a*2+b*2]1/2且h*＝反正切[b*/a*]22。全部数据代表两种不同试验的6次测量的平均值，并且结果报道为这些测量的平均值和标准偏差。统计学分析。样品之间的差异的统计学显著性使用IBMSPSSStatistics19在p<0.05的显著性水平下使用方差分析(ANOVA)和事后的图基检验(Tukey'stest)来计算。结果和讨论酰基供体(FFA或FAEE混合物)的基底摩尔比、三棕榈精、反应时间和酰基供体的类型对ARA和DHA的结合的影响被确定。在图12中，可见，当反应时间和基底摩尔比增加时，ARA和DHA的总结合也增加。增加的反应时间导致增加的LCPUFA的结合，因为较长的停留时间允许酶和基质之间的延长接触。至三棕榈精中的ω-3PUFA(DHA和EPA)结合的增加已经随着增加的反应时间和基底摩尔比被观察到[113，85]。当基底摩尔比对于酯交换反应和酸解反应二者为9时，ARA和DHA的总结合显著较高(p<0.05)。当反应以9的基底摩尔比在60℃下持续24h时，获得了对于酯交换(26.38±0.97％)和对于酸解(29.27±0.74％)的最高总结合。在这些条件下，当FFA(酸解)用作基底时，ARA和DHA的结合与FAEE(酯交换)相比显著较高(p<0.05)。当FFA用作酰基供体时，与在45℃、55℃和65℃下通过sn-1,3特异性酶LipozymeRMIM(供体有机物：米黑根毛霉菌(Rhizomucormiehei))催化的反应[76]中的FAEE相比，观察到LCPUFA(GLA，ω-6LCPUFA)的较高结合。在分子水平下，酯交换过程包括酯分子的水解、随后的酯化反应。脂肪酸乙酯的水解在反应中产生乙醇，这导致酶活性的损失。这可能使过程变复杂，并且导致与酸解批次相比，在酯交换批次中ARA和DHA的较低的结合。给出最高的ARA和DHA结合的条件用于在1L搅拌的间歇反应器中放大酸解反应。纯化的SL产品通过短路径蒸馏、随后的碱脱酸来获得。纯化的SL的FFA含量为0.01±0.02％。表5.1中示出了SL和CIFL的脂肪酸组成和位置分布。在SL中发现的主要脂肪酸为棕榈酸(36.77±0.11％)、ARA(17.69±0.09％)、油酸(15.28±0.03％)、DHA(10.75±0.15％)和肉豆蔻酸(5.09±0.02％)。位置分析示出SL的sn-2位置包含48.53±1.40％棕榈酸、9.82±0.12％油酸、9.73±0.13％ARA和4.80±0.03％DHA。在sn-2位置处的ARA和DHA的存在可能是由于在反应期间从sn1,3位置至sn-2位置的酰基转移。与包含主要被酯化至sn-1,3位置的棕榈酸的婴儿配方奶粉相比，采用富含在sn-2位置处酯化的棕榈酸的配方奶粉示出棕榈酸的更好的吸收[16]。SL似乎提供与人乳脂肪的sn-2棕榈酸(51.17-52.23％)相似水平的sn-2棕榈酸(48.53％)。如标签上列出的用于商业婴儿配方奶粉中的植物油掺合物包含棕榈油精、大豆油、椰子油和高油酸的红花油或高油酸的葵花油。位置分析揭示出来自CIFL的sn-2棕榈酸的含量(6.02％)远低于SL。植物油中的棕榈酸主要位于sn-1,3位置处，这导致用基于植物油的配方奶粉喂养的婴儿中的较低的脂肪和钙的吸收。CIFL中的ARA的水平为0.08±0.00％且DHA为0.39±0.01％。CIFL必须包含作为物理掺合物的ARA和DHA。当前实施例中产生的SL可以用于油掺合物中以增大sn-2棕榈酸、ARA和DHA含量。SL中的脂肪酸的位置分布也通过13C-NMR光谱学来测定。TAG中的脂肪酸的羰基碳的化学位移取决于区域特异性的位置(sn-1,3或sn-2)，并且对于不饱和脂肪酸的羰基碳，化学位移还取决于链中的双键的位置和数目。不同的碳原子在13C-NMR光谱的不同区域中给出信号。图13中示出了SL的光谱。羰基碳(C1原子)给出信号的区域在172-174ppm之间。共振的归属根据先前关于鱼脂质的研究[112,126]和sn-1,3和sn-2链之间的距离为约0.4ppm的事实来作出。光谱示出饱和脂肪酸、单不饱和n-9脂肪酸、DHA和ARA在sn-2位置处酯化。TAG分子物质使用反相HPLC来测定。峰识别根据涉及棕榈油和棕榈油精的公布的文献[66,90]、TAG标准物的洗脱时间和TAG物质按等效碳数(ECN)＝TC-2xDB的顺序被洗脱的事实来作出。TC是酰基的总碳数且DB是TAG中的双键的总数。图14示出棕榈油精、CIFL和SL的RP-HPLC色谱图。表5.2示出了在三种脂质样品中的TAG物质及其相对百分比之间的比较。PPO(61.01,26.09％)和POO(34.23,23.70％)分别构成了棕榈油精和CIFL二者中的大多数TAG。这些TAG也在SL中被发现；然而，它们的丰度低得多(PPO＝9.97％,POO＝1.80％)。最近，初乳脂肪、过渡乳脂肪和成熟乳脂肪的TAG物质组成通过RP-HPLC来测定[151]。二十二种不同的TAG物质在这些乳样品中被发现并且大多数包括POO(21.51±5.39％)、POL(16.93±3.27％)和POLa(10.39±3.02％)。在该研究中制成的SL包含各种各样的26种不同的TAG物质。SL中的主要TAG物质包括PDD(15.36％)、PPA或LPL(12.33％)、PPO(9.97％)、PPP(7.66％)、C8PD(7.40％)、PPD或LPA(7.38％)和OPA(7.35％)。SL中识别的九种TAG物质(包括POO、OOO、POL、PPL、PPP、PPO、PSO、MPP和SPP)被报道为HMFTAG[151]；然而，量是相当不同的。大部分SLTAG在它们的结构中包含多于3个DB，四种不包含DB(PPP＝7.66％、C10PP＝5.39％、SPP＝1.02％和MPP＝3.82％)。TAG物质的种类、脂肪酸链长度和饱和度被示出为影响脂肪和油的熔化曲线和结晶曲线[77,128]。SL的熔化行为和结晶行为与它的基底，从CIFL提取的三棕榈精和脂肪进行比较(图15)。SL具有较低的熔点和约37℃至-25℃的较宽的熔化范围。SL和CIFL二者的热谱图展现出指示TAG分布的复杂性的多重峰。这还被示出为来自TAG分子物质的分析的色谱图中的多重峰。SL的TAG中的棕榈酸和高度饱和的TAG物质(PPP、C10PP、SPP和MPP)的存在有助于在36.36℃处的较高的温度熔化峰。包括SPP、MPP、PPP、SMM的高度饱和的TAG也在人乳脂肪样品(初乳脂肪、过渡乳脂肪和成熟乳脂肪)中被发现。然而，这些TAG的量相当低(其中含量<1％或在1-5％的范围内)。这表明了该SL作为在婴儿配方奶粉中与包含不饱和油的掺合物互补的脂肪的用途而不是植物油掺合物的替代物。对于SL，结晶热谱图示出在-6℃结晶开始，在26℃结束。CIFL具有-30℃至-3℃的较低熔化范围。粉末化的婴儿配方奶粉使用两种一般类型的工艺来制造：干掺混工艺和湿混合/喷雾干燥工艺。某些制造商也使用这些工艺的组合以喷雾干燥基础粉末(蛋白质组分和脂肪组分)，然后与碳水化合物、维生素和矿物成分干掺混。为了确定哪个工艺适合于粉末化的婴儿配方奶粉中的SL应用，婴儿配方奶粉使用这两种一般工艺、采用作为脂肪源的SL来制备，并且评价产品的氧化稳定性和目测评分(L*、a*、b*、C*和h*)。PV衡量脂质氢过氧化物(主要的氧化产物)将亚铁离子氧化成铁离子的能力，铁离子与硫氰酸根形成了红紫色络合物。TBARs测试测量次级氧化产物，该次级氧化产物当与硫代巴比妥酸试剂反应时形成粉红色。表5.3中示出了婴儿配方奶粉的这些分析的结果。与湿混合/喷雾干燥工艺相比，干掺混工艺产生了具有显著较低的PV值和TBARs值的产品。干掺混的婴儿配方奶粉和商业婴儿配方奶粉的PV值和TBARs值不具有显著性差异。与120℃的较低温度相比，在湿混合/喷雾干燥中使用的较高温度(180℃)产生显著较高的PV值和TBARs值。目测评分，对于亮度的L*和对于色度或饱和度的C*，示出了与PV值和TBARs值的负相关(表5.3)。具有较高的PV值和TBARs值的产品的颜色(湿混合/喷雾干燥产品)较不饱和(较低的C*)，意味着颜色看起来是无光泽的且浅灰色的。这些产品也是较暗的，具有较低的L*值。全部婴儿配方奶粉的色调颜色值都落入黄色和绿色之间。根据欧洲儿科肠胃病、肝病和营养学会(EuropeanSocietyforPediatricGastroenterology,HepatologyandNutrition)(ESPGHAN)，婴儿配方奶粉应当提供60-70千卡/100mL[63]。在本实施例中的婴儿配方奶粉的制备的目的在于贡献从3.3-6.0％脂肪、1.2-3.0％蛋白质和5.4-8.1％碳水化合物产生的60-70千卡/100mL的制剂。微封装SL包含约25％脂肪(SL)、25％蛋白质(WPI)和50％碳水化合物(CSS)。SL的微封装增大了最终产品的稳定性；然而，由用作密封剂的碳水化合物和蛋白质贡献的能量使产物能量贡献增加35千卡/100mL(表5.4)。在使用LipozymeTLIM作为生物催化剂的酸解反应中，SL由三棕榈精和衍生自DHASCO和ARASCO的FFA制备。该SL可以提供具有生理学上重要的脂肪酸的脂肪源并且充当sn-2棕榈酸的良好的源，这可以改进脂肪和钙的吸收。包含SL的粉末化的婴儿配方奶粉通过湿混合/喷雾干燥工艺和干掺混工艺来制备。通过干掺混工艺制备的具有微封装的SL的婴儿配方奶粉具有较好的氧化稳定性和视觉质量。表5.1。与从商业婴儿配方奶粉提取的脂肪(CIFL)相比，通过使来自富含DHA和ARA的单细胞油的FFA的混合物和三棕榈精酸解产生的结构脂质(SL)的脂肪酸组成(％)。a以痕量存在的脂肪酸为：C8:0、C10:0、C17:0、C20:0、C20:1n-9、C22:0、C20:3n-6、C22:5n-3和C24:0。cCIFL＝通过物理掺混从可商购的富含ARA和DHA的婴儿配方奶粉提取的脂肪。表5.2。根据它们的ECNa通过RP-HPLC确定的SL、CIFL和棕榈油精的TAG分子物质a等效碳数(ECN)＝TC-2xDB；TC是酰基的总碳数且DB是TAG中的双键的总数。TAG物质不反映立体化学构型。表5.3。粉末化的婴儿配方奶粉的表征平均值±SD，在相同的行和类别中具有相同字母的n＝6平均值不具有显著性差异(p>0.05)表5.4。能量贡献(在100mL的重悬浮的配方中)实施例6来自用于婴儿配方奶粉用途的棕榈油精的富含DHA和GLA的结构脂质的生产及表征材料和方法材料为如在上文的实施例中描述并获得，除以游离脂肪酸形式(70％GLA)的琉璃苣油GLA购自Sanmark(Greensboro,NC)之外。棕榈酸(95％纯的)购自AlraAesar(Heysham,Lancashire,UK)。由DHASCO制备FFA。DHASCO被转化成FFA，如上所述。一百五十克的油使用KOH(34.5g)、蒸馏水(66mL)、96％乙醇(396mL)和丁羟甲苯(0.03g)的混合物来皂化，该水醇混合物通过添加6MHCl来酸化并且调节至pH2以释放FFA。FFA在-20℃下在氮气下储存在琥珀色Nalgene瓶中直到使用。酸解反应。酸解反应混合物包含棕榈油精、以如之前通过RSM测定的不同基底摩尔比的棕榈酸:GLA:DHA(1:4:4)的FFA混合物、以及3mL正己烷。将混合物放置于带螺帽的试管中，并且添加固定化脂肪酶，Novozym435(10％重量的总反应物)。脂肪酶的量基于上文的实施例来选择。Novozym435的比活度为10,000PLU/g(PLU是月桂酸丙酯单元)。试管在回转式摇动水浴中在60℃下且以200rpm温育。全部反应按一式三份进行并且报道平均结果和标准偏差。用于RSM研究的实验设计。RSM被应用以研究“基底摩尔比，Sr”和“反应时间，T”对所产生的SL的在sn-2位置处的棕榈酸的量的影响。RSM也用于研究将DHA和GLA结合至SL中，并且用于预测反应条件的模型。中心复合面设计(centralcompositefacedesign)包括具有三个中心点的11个实验运行，并且这些运行通过使用Modde5.0(Umetrics,Sweden)软件来产生。用于两个变量的水平为：Sr(棕榈油精/FFA混合物0.5-2mol/mol)和T(12-24h)。表6.1中示出了自变量和实验设计。酸解产物的分析。在酶促反应之后，得到的产物在氮气下被浓缩至其体积的一半并且被点板到硅胶GTLC板上。石油醚:二乙醚:乙酸(70:30:0.5，v/v/v)的混合物用于使TAG与其他反应产物分离。TAG带使用作为标准物的三油精来识别并且在用0.2％的在甲醇中的2,7-二氯荧光黄喷射板之后在UV光下目测。将TAG带回收至试管，用于转化成脂肪酸甲酯(FAME)和位置分析。TAG样品遵循AOAC法定方法996.01、采用如上文的实施例2和其他实施例中描述的修改被转化成FAME，但在100℃下温育5分钟。将上部有机层回收在GC小瓶中用于分析。FAME外标，Supelco37组分FAME混合物与用于FA识别的样品平行地运行。胰脂肪酶催化的sn-2位置分析。TAG的胰脂肪酶水解为如由Pina-Rodriguez和Akoh描述的[104]和如在上文实施例中描述的。简言之，样品使用1.5ml的二乙醚从回收的TLC上的TAG带萃取两次。样品在氮气下被完全干燥。将四十毫克的纯化的胰脂肪酶(猪的胰脂肪酶，粗制型II)、1ml的三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)、0.20ml的0.05％胆酸钠和0.1ml的2.2％氯化钙添加至样品。将混合物在40℃在水浴中温育3分钟。在结束后，添加1ml的6MHCl和4ml的二乙醚并且以1000rpm(约100xg)离心。包含脂质组分的上层在氮气下浓缩。浓缩的萃取物在硅胶GTLC板上点板并且用己烷:二乙醚:甲酸(60:40:1.6，v/v/v)的混合物展开。2-油酰甘油作为2-单酰甘油(2-MAG)的识别标准物被平行点板。对应于2-MAG的带被收集并且转化成FAME，用于FA组成分析。脂肪酸组成分析。单细胞油、棕榈油精和酸解产物中的脂肪酸组成在具有火焰离子化检测器(FID)的6890N气相色谱仪(AgilentTechnologies,SantaClara,CA)上分析。SupelcoSP-2560柱(100mx250μm,0.20μm膜)用于FA分离。1μL的样品的注入以20:1的分流比进行。氦气为以1.1mL/min的流速且在恒定压力下(45.0mL/min)的载气。注射器温度和FID设定点为300℃。烘箱被保持在140℃持续5分钟，然后以4℃/min增加至240℃，并且保持在240℃持续15min。相对FAME含量使用在线计算机来计算。报道了一式三份分析的平均值和标准偏差。模型验证。为了验证模型，在随机条件下以及在RSM建议的最佳条件下，在试管中进行五个酸解反应。然后使实验值与通过模型预测的值相比较，如6.2所示。SL的放大生产。无溶剂酸解反应使用2的基底摩尔比(棕榈油精:FFA混合物)和作为生物催化剂的Novozym435(10％重量的总反应物)在60℃于1L搅拌的间歇反应器中进行。反应在以200rpm的恒定搅拌下温育22.7h。在反应结束时，得到的SL和基底的混合物通过包含硫酸钠的Whatman1号并且然后通过0.45μm膜滤器真空过滤以干燥SL并且分离SL与酶。短路径蒸馏(KDL-4unit,UICInc.)用于在以下的条件下从SL除去FFA：保持温度：60℃；进料速率：～100mL/h；加热油温度：185℃；冷却剂温度：15-20℃；和真空：<100毫托。在短路径蒸馏之后，FFA含量根据AOCS法定方法Ac5-41[7，其通过引用并入本文]来测定。所获得的SL在-80℃在氮气下储存直到进一步使用。TAG分子物质分析。TAG分析如上文的实施例1、2以及其他实施例中所描述的来进行。洗脱剂为以1mL/min的溶剂流速的乙腈(A)和丙酮(B)的梯度，其中梯度为0分钟，65％B；55分钟，95％B以及65分钟，65％B，后运行10分钟。等效碳数(ECN)法用于预测TAG物质的洗脱顺序。标准物：包含三亚麻精(ECN＝36)、三亚油精(42)、三油精(48)、三棕榈精(48)、三硬脂精(54)和三花生精(60)以及棕榈油精的TAG混合物还进行色谱分析以帮助识别TAG分子物质。熔化曲线和结晶曲线。熔化曲线和结晶曲线如上文实施例中所描述的且根据AOCS法定方法Cj1-94在进行较少修改的情况下使用铟作为校准标准物来确定。样品以50℃/min从25℃加热至80℃，保持10分钟，以10℃/min从80℃冷却至-55℃(用于结晶曲线)，保持30分钟，并且然后以5℃/min从-55℃加热至80℃(用于熔化曲线)。统计学分析。除熔化曲线和结晶曲线之外，全部分析都按一式三份进行。熔化曲线和结晶曲线按一式二份进行。测定平均值和标准偏差。方差分析(ANOVA)和用于优化的数学模型使用(Modde5.0,Umetrics,Sweden)进行。结果和讨论模型拟合。RSM实验设计被应用于本实施例中以获得用于SL中的在sn-2位置处的棕榈酸含量和总DHA和GLA结合的预测模型。两个自变量是时间和基底摩尔比，并且响应是1)在sn-2位置处的棕榈酸含量和2)总DHA和GLA结合(表6.1)。多元线性回归和后向选择法用于将结果拟合至二阶多项式模型。对于在sn-2位置处的棕榈酸含量，p-值<0.01的一阶参数是时间且这具有正面影响。显著的二阶参数(significantsecond-orderparameter)是时间的二阶项(t2)，其具有负面影响。用于在sn-2位置处的棕榈酸含量的模型方程为如下：在sn-2处的棕榈酸＝31.61+3.85t-2.57t2；其中t＝时间。对于总DHA和GLA结合，时间和基底摩尔比为p-值<0.01的显著的一阶参数。时间对总DHA和GLA结合具有正面影响，而基底摩尔比具有负面影响。显著的二阶参数为基底摩尔比的二阶项(Sr2)以及时间和基底摩尔比的相互作用项(t*Sr)。总DHA和GLA结合与这些二阶项的两种都是负相关。用于总DHA和GLA结合的模型方程可以如下书写：总DHA和GLA结合＝11.33+0.96t-5.90Sr+2.49Sr2-0.90t*Sr其中t＝时间且Sr＝基底摩尔比。R2，用于通过模型解释的响应的变化的部分，对于在sn-2位置处的棕榈酸含量和总DHA和GLA结合分别为0.90和0.99。拟合值的不足(p>0.05)指示两种模型对于预测都是合适的。反应的优化。图16A和16B中分别示出了描述时间和基底摩尔比与1)在sn-2位置处的棕榈酸含量和2)总DHA和GLA结合的相互作用的等值线标绘图。在sn-2位置处的棕榈酸含量随着时间和基底摩尔比(棕榈油精:FFA混合物)增加而增加(图16A)。较高的基底摩尔比指示,，来自棕榈油精的更多棕榈酸存在于反应中，这导致在SL中较高的棕榈酸含量。已示出，反应中的高浓度的基底导致靶向脂肪酸结合的增加。Teichert和Akoh[131]报道了较高的sn-2棕榈酸含量在反应中具有高含量的棕榈酸的情况下实现。然而，某些作者报道了脂肪酶的基底抑制和至SL中的较低的靶向脂肪酸结合[50,118]。在本研究中使用的基底摩尔比不导致脂肪酶的基底抑制或在SL的sn-2位置处的棕榈酸的减少的结合。总DHA和GLA结合随着时间的增加而略微增加(图16B)。较长的保留时间允许酶和基底之间的延长的接触。图16B示出了当在反应中使用较低的基底摩尔比时总DHA和GLA结合随着时间流逝的增加。随着更多的DHA和GLA在反应混合物中可用，这些FA的结合增加。本实施例的主要目的是使用非特异性脂肪酶增加在棕榈油精甘油主链的sn-2位置处的棕榈酸含量。RSM预测在22.7h的温育时间和2的基底摩尔比下在sn-2位置处的最高棕榈酸为34.86％。在这些条件下，所预测的总DHA和GLA结合为7.77％。这些参数用于模型确认和SL的大规模生产。模型的确认。酸解反应在包括用RSM获得的最佳条件的各种条件下在试管中进行以便验证模型。此外，最佳条件用于SL的大规模生产。表6.2中给出了在小规模生产和大规模生产中的模型验证的结果。验证落入总DHA和GLA结合以及在sn-2处的棕榈酸含量的预测值的上限和下限内，指示RSM预测对估计响应的值的有用性。基底和SL的脂肪酸和sn-2位置脂肪酸组成。表6.3中示出了棕榈油精和SL的脂肪酸组成和分布。棕榈油精中的主要脂肪酸是棕榈酸(43.60％)、油酸(40.91％)和LA(9.92％)。虽然作为最丰富的脂肪酸，棕榈酸在棕榈油精甘油主链的sn-2位置处发现为仅13.79％。在sn-2位置处的主要脂肪酸为不饱和的油酸(66.38％)和亚油酸(18.96％)。HMF具有其在sn-2处的棕榈酸的大部分(大于60％)，而不饱和脂肪酸位于外部位置处。配方奶粉喂养的婴儿中的脂肪的较低吸收归因于植物油和HMF的TAG的立体特异性结构的差异。进行使用棕榈油精以及DHA(23.23％)、GLA(31.42％)和棕榈酸(15.12％)的FFA混合物的酸解实验以增加棕榈油精中的sn-2棕榈酸含量。与在原始棕榈油精中的13.79％相比，在通过RSM选择的最佳条件下产生的得到的SL包含35.11％的在sn-2位置处的棕榈酸。在棕榈油精的sn-2位置处的油酸从66.38％减少至33.99％。棕榈油精的营养价值通过添加包含3.75％DHA、5.03％GLA和10.09％LA的PUFA来改进。在人乳中发现的DHA和GLA水平分别为0.15-0.92％和0.06-0.13％。虽然大于60％的sn-2棕榈酸未实现，但根据模型预测，35.11％是可接受的(表6.1和6.2)。该SL也可以在用于婴儿配方奶粉的油掺合物中使用以提供较高的sn-2棕榈酸TAG和有益的PUFA。HPLCTAG分子物质识别。棕榈油精的TAG分子物质及其SL产物使用反相HPLC来测定。峰识别如上所述的、TAG标准物的洗脱时间和以下事实来进行：TAG物质按等效碳数(ECN)＝TC-2xDB的顺序洗脱；TC是酰基的总碳数且DB是TAG中的双键的总数)。表6.4示出了在棕榈油精和SL中的TAG分子物质及其相对百分比之间的比较。棕榈油精的主要TAG分子物质为PPO、POO、PPL和POL。这些TAG在SL产物中也是占优势的，然而它们的丰度显著变化。PPO和POO的量对于PPO从61.01％减少至28.99％且对于POO从34.24％减少至24.96％。PPL从1.76％增加至3.97％。类似地，POL从1.50％增加至9.58％。SL包含多达29种不同的TAG分子物质。这些TAG中的大部分在它们的结构中包含多于3个DB，仅两种不包含DB(MMP＝1.69％且PPP＝5.23％)。TAG物质的种类、脂肪酸链长度和饱和度被示出为影响脂肪和油的熔化曲线和结晶曲线。SL的熔化曲线和结晶曲线。与棕榈油精的那些相比，SL的冷却热谱图和加热热谱图是较宽的并且包含较多的峰。在热谱图中观察到的多重峰可以归因于植物油中的TAG分布的复杂性。棕榈油精呈现出在结晶曲线中的一个主要放热峰(具有肩峰)，而在SL中，观察到两个主要峰(图17)。在3.52℃的棕榈油精主要放热峰及其在-4.52℃的肩峰接近SL的第一主要放热峰(2.85℃)及其肩峰(-5.19℃)，指示出它们二者都具有相同类型的多晶型形式。在CheMan等人的研究[18]中的RBD棕榈油精的冷却热谱图指示，这些低温峰代表多晶型物β2’和α。SL结晶曲线中的第二主要峰与棕榈油精相比是新的并且在较高温度(20.29℃)，这指示作为TAG物质的酶促改性的结果的多晶型概况的变化。通过HPLC的TAG物质分析揭示出显著量的三饱和物(trisaturate)(PPP，5.23％和MMP，1.69％)。这些高度饱和的TAG代表在20.29℃的该第二峰。对于熔化曲线，与棕榈油精的开始熔化温度(4.19℃)相比，SL在较低温度(2.18℃)开始熔化。这种熔化行为是由于在SL中存在高度不饱和的(DGD,GGD)TAG。SL和棕榈油精二者都具有在4℃至12℃之间的相似熔化峰。然而，SL具有反映高度饱和的TAG的存在的两个肩峰(22.97℃和39.93℃)。在本实施例中由棕榈油精产生的SL具有比原始棕榈油精更高的含量的sn-2棕榈酸，并且当用于婴儿配方奶粉产品中时将增强脂肪酸和钙的吸收。DHA和GLA被结合至该SL的TAG中以改善油的营养价值。该SL具有与HMF相似的脂肪酸概况。因此，它可以在用于婴儿配方奶粉的脂肪掺合物中使用以提供具有与HMF相似的结构的脂肪以及有益的PUFA。表6.1。通过使用RSM条件a的酸解的DHA和GLA的总结合以及在SL的sn-2位置处的棕榈酸(PA)a温育温度为60℃。b棕榈油精与PA:DHA:GLA(1:4:4)的FFA混合物的基底摩尔比表6.2。来自RSM模型验证的预测值和观察值(％)a棕榈油精与FFA混合物的基底摩尔比。b在sn-2位置处的棕榈酸(％)。c下限(％)d上限(％)。e在SL中的总DHA和GLA含量(％)。f通过RSM预测的最佳条件和在试管中进行的反应表6.4。根据它们的ECNa通过RP-HPLC确定的棕榈油精和SL的TAG分子物质实施例7用于婴儿配方奶粉中的潜在应用的包含ω-3脂肪酸和ω-6脂肪酸的基于精炼橄榄油的结构脂质的酶促合成材料和方法材料。材料如上文的实施例1以及其他实施例中所陈述的来提供和描述，加上以下的以游离脂肪酸(FFA)形式(70％GLA)的γ-亚麻酸(GLA)购自SanmarkCorp.(Greensboro,NC)。包含DHA和ARA的商业婴儿配方奶粉NestleGoodStartGentle(NestleUSA,Inc.,Glendale,CA)在Athens,GA的当地杂货店购买。乳脂肪(MF)购自DairyFarmersofAmerica(Winthrop,MN)。其他溶剂和化学品购自FisherScientific(Norcross,GA)和Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。脂肪酸乙酯的制备。DHASCO和GLA-FFA的脂肪酸乙酯(FAEE)根据上述方法在进行较少修改的情况下来制备。100mL的DHASCO或GLA-FFA与在绝对乙醇中的乙醇钠(2.625％,v/v)以4:2(v/v)的比率混合。将混合物在氮气气氛下于60℃在以200rpm的恒定搅拌下加热40分钟。产物随后用100mL饱和NaCl溶液洗涤，然后是用100mL蒸馏水的洗涤步骤。在分离之后，包含FAEE的上层被收集并且在真空下通过硫酸钠柱。然后，FAEE通过使用油酸乙酯作为标准物的薄层色谱法(TLC)来证实。DHASCO-EE和GLAEE最终分别以1:2(被称作DG12)和2:3(被称作DG23)的摩尔比混合，并且在-20℃在氮气下储存在琥珀色瓶中直到使用。SL产物的小规模合成和分析。三棕榈精与ROO、DG12或DG23以不同的基底摩尔比(以1:1:1、1:2:1、1:3:2、1:4:2、1:5:2和1:5:1的三棕榈精与ROO与DG12或DG23)混合。3mL己烷和以总基底质量的10％(w/w)的LipozymeTLIM还被添加至反应混合物。将混合物放置于带螺帽的试管中并且在以200rpm的恒定搅动下于65℃温育24h。然后，产物被收集并且通过硫酸钠柱以除去水分和酶。全部反应按一式三份进行并且报道平均值和标准偏差。物理掺合物(PB)也用1:1:1的三棕榈精与ROO与DG23的摩尔比来制备，而不添加LipozymeTLIM。PB经受与SL的合成和净化过程相同的合成和净化过程。分离SL与FAEE通过使用在上文实施例中讨论的TLC溶剂系统通过TLC分离SL与FAEE。石油醚/二乙醚/乙酸(97.5/52.5/3,v/v/v)首先用于分离SL和FAEE与单酰甘油(MAG)、二酰甘油(DAG)和FFA。在随后的TLC中，石油醚/二乙醚/乙酸(75/5/1，v/v/v)被用于分离SL与FAEE。从商业婴儿配方奶粉的脂肪提取从商业婴儿配方奶粉的脂肪提取遵循先前由Bligh和Dyer描述的方法[13，其据此通过引用并入本文]在进行较少修改的情况下进行。将100克的婴儿配方奶粉与100mL的氯仿混合并且均质化30s。然后将200mL的甲醇添加至混合物并且再次均质化30s。添加另外的100mL氯仿并且使混合物掺混1-2分钟。最后，添加100mL的0.88％氯化钠溶液，并且使混合物再次掺混1分钟。Whatman1号滤纸用于通过布氏漏斗真空过滤混合物。将滤纸上的残余物转移至烧杯中并且与100mL的氯仿混合。得到的混合物如上所述的再次真空过滤并且收集第一滤液。然后将全部滤液转移至1L分液漏斗并且允许分离。在观察到清楚的分离之后，底部氯仿层被收集并且通过无水硫酸钠柱以除去任何过量的水。然后使用旋转蒸发仪在40℃下除去氯仿。将提取的婴儿配方奶粉脂肪(IFF)在-20℃在氮气下储存在琥珀色瓶中直到使用。脂肪酸概况的测定基底，即ROO、DHASCO-EE、GLAEE和产物(SL、PB、IFF和乳脂肪(MF))，如上文例如实施例4所述的被转化成FA甲酯(遵循AOAC法定方法996.01，进行较少修改)。全部样品按一式三份分析并且报道平均值。位置分析。sn-2位置脂肪酸组成遵循上述方法来测定。全部样品(SL、PB、IFF和MF)按一式三份分析并且报道了平均值和标准偏差。SL的放大生产。无溶剂酯交换反应使用1:1:1(三棕榈精:ROO:DG23)的基底摩尔比和作为生物催化剂的LipozymeTLIM(10％重量的总基底)在65℃于1L搅拌的间歇反应器中进行。将反应器密封并且用铝箔覆盖以最小化光和氧的影响。反应在以200rpm的恒定搅拌下进行24h。在反应结束时，产物通过Whatman1号滤纸真空过滤以分离SL与酶。进行使用Whatman1号滤纸和硫酸钠的第二过滤以除去任何过量的水。将SL保持在用氮气冲洗的琥珀色容器中并且储存在4℃直到使用。短路径蒸馏。进行短路径蒸馏以在以下的条件下使用KDL-4(UICInc.,Joliet,IL,USA)系统从SL除去过量的FFA：65℃的保持温度、约100mL/h的进料速率、175℃的加热油温度、20-25℃的冷却剂温度和<100毫托的真空。SL被经过三次并且表示为油酸百分比的FFA含量遵循AOCS法定方法5a-40[91，通过引用并入本文]来测定。三酰甘油分子物质。TAG组成用配备有Sedex85ELSD(Richardscientific,Novato,CA)的反相HPLC(AgilentTechnologies1260Infinity,SantaClaraCA)确定。柱为BeckmanC18,5μm,4.6x250mm，温度设定在30℃。注入体积为20μL。以1mL/min的流速的流动相由溶剂A(乙腈)和溶剂B(丙酮)组成。采用梯度洗脱，以35％溶剂A开始至在45分钟时5％溶剂A，并且然后在5分钟内返回至原始组成。漂移管温度设定为70℃，压力为3.0巴并且增益为8。将样品(SL、PB、IFF和MF)以5mg/mL的浓度溶解于氯仿中。TAG峰通过比较保留时间和标准物的保留时间并且还通过等效碳数(ECN)来识别。ECN定义为CN–2n，其中CN是TAG中的碳的数目(排除甘油主链中的三个)并且n为双键的数目。进行一式三份的测定并且报道平均数据。固体脂肪含量。固体脂肪含量(SFC)遵循AOCS法定方法Cd16b-93(8)在台式NMR分析仪–MQC(OxfordInstruments,Abingdon,England)上测定。样品在100℃回火15分钟并且然后保持在60℃持续10分钟，然后在0℃持续60分钟并且最后在每个选择的测量温度下持续30分钟。从25℃至55℃以5℃的间隔测量SFC。氧化稳定性指数(OSI)。样品的OSI根据AOCS法定方法Cd12b-92[92，通过引用并入本文]在110℃用油稳定性仪器(OilStabilityInstrument)(Omnion,Rockland,Mass.,U.S.A.)来测定。熔化曲线和结晶曲线。熔化曲线和结晶曲线遵循AOCS法定方法Cj1-94[94，通过引用并入本文]使用差示扫描量热计DSC204F1Phoenix(NETZSCHInstrumentsNorthAmerica,Burlington,MA)来测定。首先，将8-12mg样品称重到铝盘中并且密封。将样品以20℃/min迅速地加热至80℃，并且保持10分钟以破坏任何先前的晶体结构。然后，将样品以10℃/min冷却至-80℃(用于结晶曲线)，并且保持30分钟并最终以10℃/min加热至80℃(用于熔化曲线)。氮气用作保护气和吹扫气。全部样品按一式三份分析并且报道平均值。统计学分析。统计学分析用SAS软件包(SASInstitute,Cary,NC)来进行。进行邓肯氏多重范围检验以测定样品之间的显著性差异。结果和讨论总脂肪酸概况和位置脂肪酸概况。放大的SL产物的表征在短路径蒸馏之后进行。需要三次通过(pass)以将SL的FFA值降低至0.08％。产物中的大量的FFA可能是由于DHASCO-EE和GLAEE的存在，这可能在它们的相应乙酯的水解期间产生DHASCO-FFA和GLA-FFA。表7.1示出DHASCO-EE和GLAEE的脂肪酸组成，以及ROO的总脂肪酸组成和位置脂肪酸组成。可见，DHASCO-EE包含45.98mol％DHA，而GLAEE包含71.79mol％GLA。油酸是以73.95mol％在ROO中发现的主要的脂肪酸，而棕榈酸含量为仅9.97mol％。在ROOTAG的sn-2位置，油酸含量为86.35mol％，而棕榈酸含量为仅1.49mol％，这大大地低于包含50–60mol％的在sn-2位置处的棕榈酸的人乳脂肪。表7.2中示出了SL、PB、IFF和MF的总脂肪酸组成和位置脂肪酸组成。可见，在sn-2位置处，仅6.12mol％的棕榈酸在IFFTAG中被发现，而49.28mol％在SLTAG中被发现。PB包含与SL相似的总棕榈酸含量(46.60mol％)，然而，在sn-2位置处，它的32.67mol％显著低于(P≤0.5)SL的棕榈酸含量。如先前讨论的，具有在sn-2位置处的高棕榈酸的TAG是优选的，因为它帮助增加棕榈酸和钙的吸收。与商业婴儿配方奶粉中的脂肪酸的位置分布相比，SL示出了与人乳脂肪中的位置分布较接近的类似处。还值得注意的是，尽管商业婴儿配方奶粉宣称包含ARA和DHA，但发现它们分别包含0.59mol％和0.26mol％。相比之下，SL包含0.73mol％DHA，并且虽然在SL中未发现ARA，但5.00mol％的GLA被结合，GLA可以在人类中被转化成ARA。SL包含在其TAG的sn-2位置处的合意的棕榈酸含量并且富含DHA和GLA。虽然它们与人乳脂肪相比具有较高的总棕榈酸，但它们可以与其他植物油一起作为掺合物使用以产生理想的总棕榈酸含量，而在最终产品中仍保持sn-2棕榈酸和总DHA水平。TAG分子物质。表7.3中示出了SL、PB、IFF和MF的TAG分子物质。IFF和MF具有比SL和PB更多样的TAG物质。在PB中占优势的TAG为PPP，该PPP是期望的，因为三棕榈精是酯交换反应中的起始TAG之一。相比之下，在SL中占优势的TAG为POP(31.91％)和OPO(22.78％)，随后是LnDLn(10.91％)、PPP(10.18％)、LPL(10.09％)、LOO(9.83％)和OOO(4.29％)。除PPP之外，包含棕榈酸的TAG从在PB中的32.75％增大至64.78％，表明在sn-2位置处的棕榈酸含量的可能增大，这与在SL中的脂肪酸的位置分布中观察到的一致。相比之下，在人乳脂肪中发现的主要TAG分子物质是OPO(1.56-42.44％)、POL(9.24-38.15％)、OOO(1.61-11.96％)和LOO(1.64-10.18％)。SL的OPO、OOO和LOO含量全部都在人乳中被发现的范围内，并且IFF的OPO(3.37％)和LOO(ND)含量不在。固体脂肪含量。固体脂肪含量(SFC)是在各种温度下脂肪的固体/液体的比率的量度。它可以对包含TAG的产品的物理性质和感觉性质例如质地和口感具有影响。在本研究中选择的温度为25℃、35℃、45℃和55℃，我们相信该温度在婴儿配方奶粉将被消耗的或在消耗之前将被加热的温度的范围内。图18中示出了SL、PB、IFF和MF的SFC。SL在所测试的每个温度下呈现出与IFF相当的SFC曲线，表明在婴儿配方奶粉生产中应用SL的有前景的可行性。氧化稳定性指数(OSI)。评价SL、PB、IFF和MF的OSI并且在图19中示出结果。商业婴儿配方奶粉(17.08h)和乳脂肪(17.50h)示出比SL(2.98h)和PB(3.82)显著更高的OSI。与PB相比在SL中观察到的较低OSI可能是由于在酯交换过程和短路径蒸馏期间的天然抗氧化剂例如生育酚的损失。可以推荐将另外的抗氧化剂添加至SL以增大氧化稳定性并且延长包含SL的产品的货架期。熔化曲线和结晶曲线。图20和图21中分别示出了SL、PB、IFF和MF的熔化曲线和结晶曲线。熔化完成温度(Tmc)通常取决于存在的脂肪酸和TAG物质的类型。UUU型的TAG表明TAG由三种不饱和脂肪酸组成，而SSS型的TAG由三种饱和脂肪酸组成。因为不饱和脂肪酸通常呈现出比它们的具有相同烃链长度的饱和对应物更低的熔点，UUU型的TAG将被期望具有比其SSS对应物更低的熔点。在本实施例中，SL包含4.29％的OOO，而OOO在PB中不存在。另外，SL包含比PB(64.23％)显著更低的(P<0.5)PPP(10.18％)。这可以解释在SL(45.8℃)下观察到比PB(63.1℃)更低的熔化完成温度。类似地，IFF和MF二者都包含比SL更高的OOO(分别为8.96％和5.24％)和更低的PPP(ND和8.78％)，这可能导致在IFF(31.0℃)和MF(34.6℃)中观察到比SL显著更低的(P<0.5)熔化完成温度。由于酯交换，SL与非酯化的PB、MF和IFF相比具有较宽的熔化曲线。另外，SL呈现出比IFF(16.3℃)和MF(17.5℃)显著更高的结晶开始温度(Tco)(26.2℃)。与SL、IFF和MF相比，PB具有最高的Tco(54.9℃)(P<0.5)。如所讨论的，当母乳喂养不可用或被限制时，具有类似人乳脂肪的脂肪部分的婴儿配方奶粉将是用于人乳的理想的营养替代物。在本实施例中，商业婴儿配方奶粉被发现包含低至6.12mol％的在其TAG的sn-2位置处的棕榈酸。在本研究中产生的SL包含49.28mol％的在sn-2位置处的棕榈酸，而DHA含量也显著高于在商业婴儿配方奶粉中发现的DHA含量。SL包含增加的量的OPO物质，OPO物质对于棕榈酸和钙的更好吸收为合意的。另外，SL呈现出与IFF相似的SFC。因此，本文中所产生的SL具有将用于婴儿配方奶粉应用中的潜力。表7.1。基底DHASCO-EE、GLAEE和精炼橄榄油的总脂肪酸组成和位置脂肪酸组成(mol％)*平均值±SD；ND：未检测到。表7.3。结构脂质、物理掺合物、婴儿配方奶粉脂肪、和乳脂肪的三酰甘油(TAG)分子物质的相对(％)脂肪酸不按区域特异性的顺序；在每行中具有不同字母的值是以P≤0.5的显著性差异的。参考文献：1.AgostoniC(2008)RoleofLong-chainPolyunsaturatedFattyAcidsintheFirstYearofLife.JPediatrGastroenterolNutr47:S41-S442.AugustoPED,SoaresBMC,ChiuMC,GoncalvesLAG(2012)Modellingtheeffectoftemperatureonthelipidsolidfatcontent(SFC),FoodRes.Int.45:132-1353.AkohC,XuX(2002)Enzymaticproductionofbetapolandotherspecialtyfats.inKuoTM,GardnerHW(编辑)LipidBiotechnology.CRC出版社,NewYork,第461-478页.4.AkohCC,MinDB(2008)Foodlipids:chemistry,nutrition,andbiotechnology，第三版。CRC出版社/Taylor&FrancisGroup,BocaRaton5.Akoh,C.C.；Kim,B.H.Structuredlipids.InFoodlipids:chemistry,nutrition,andbiotechnology,第三版；Akoh,C.C.,Min,D.B.,编辑；CRC出版社:BocaRaton,FL,2008,第841-865页.6.AOACInternational(1998)OfficialMethodsofAnalysisofAOACInternational，第17版。Gaithersburg,MD,Method996.017.AOCSOfficialMethodsAc5-41andCj1-94(2009)OfficialmethodsandrecommendedpracticesoftheAmericanOilChemists'Society.In:FirestoneD(编辑)第六版，AmericanOilChemist'sSociety,Champaign.8.ASTMAmericanSocietyforTestingandMaterialsStandardE1858-2008\Standardtestmethodfordeterminingoxidationinductiontimeofhydrocarbonsbydifferentialscanningcalorimetry.WestConshohocken,PA:ASTMInternational.9.ASTMAmericanSocietyforTestingandMaterialsStandardE2009-2008\Standardtestmethodforoxidationonsettemperatureofhydrocarbonsbydifferentialscanningcalorimetry.\WestConshohocken,PA:ASTMInternational.10.AugustinMA等人2011.Effectsofmicroencapsulationonthegastrointestinaltransitandtissuedistributionofabioactivemixtureoffishoil,tributyrinandresveratrol.JFunctFoods3:25-37.11.AugustinMA等人2006.Maillardreactionproductsasencapsulantsforfishoilpowders.JFoodSci71:E25-E32.12.Barbas,C.；Herrera,E.LipidcompositionandvitaminEcontentinhumancolostrumandmaturemilk.J.Physiol.Biochem.1998,54,167-173.13.BlighEG,DyerWJ(1959)Arapidmethodoftotallipidextractionandpurification,Can.J.Biochem.Phys.37:911-91714.BrennaJT等人2007.Docosahexaenoicandarachidonicacidconcentrationsinhumanbreastmilkworldwide.AmJClinNutr85:1457-1464.15.Burdge,G.C.；Calder,P.C.Conversionofalpha-linolenicacidtolonger-chainpolyunsaturatedfattyacidsinhumanadults.Reprod.Nutr.Dev.2005,45,581-597.16.CarnielliVP等人(1996)Structuralpositionandamountofpalmiticacidininfantformulas:effectsonfat,fattyacid,andmineralbalance,JPediatrGastroenterolNutr23:553-56017.Carnielli,V.等人Feedingprematurenewborninfantspalmiticacidinamountsandstereoisomericpositionsimilartothatofhumanmilk:Effectsonfatandmineralbalance.Am.J.Clin.Nutr.1995,61,1037-1042.18.CheManY等人(1999)Compositionandthermalprofileofcrudepalmoilanditsproducts,JAmOilChemSoc76:237-24219.ChnadhapuramM,SunkireddyYR(2012)Preparationofpalmoleinenrichedwithmediumchainfattyacidsbylipaseacidolysis,FoodChem132:216-22120.ChoiK等人2010.Spray-driedconjugatedlinoleicacidencapsulatedwithMaillardreactionproductsofwheyproteinsandmaltodextrin.FoodSciBiotechnol19:957-965.21.ChopraR,RastogiN,SambaiahK(2011)Enrichmentofricebranoilwithα-linolenicacidbyenzymaticacidolysis:optimizationofparametersbyresponsesurfacemethodology,FoodBioprocessTech4:1153-116322.Christensen,M.M.；C.E.Earlydietaryinterventionwithstructuredtriacylglycerolscontainingdocosahexaenoicacid.Effectonbrain,liver,andadiposetissuelipids.Lipids1997,32,185-191.23.ChristieW等人(1991)Stereospecificanalysisoftriacyl-sn-glycerolsviaresolutionofdiastereomericdiacylglycerolderivativesbyhigh-performanceliquidchromatographyonsilica,JAmOilChemSoc68:695-70124.CoulsonS,VitettaL(2009)Nutrientsandthebrain,JournalofComplementaryMedicine8:24-2925.Crawley,H.；Westland,S.InfantmilksintheUK:Greenwichbreastfeedingstrategy.URL(http://www.greenwichbreastfeeding.com/downloads/Infant％20milks％20in％20the％20UK.pdf)(2013年3月访问).26.delaTorre-Carbot,K.,等人Characterizationandquantificationofphenoliccompoundsinoliveoilsbysolid-phaseextraction,HPLC-DAD,andHPLC-MS/MS.J.Agric.FoodChem.2005,53,4331-4340.27.DelCoco等人Comparisonamongdifferentgiltheadseabream(Sparusaurata)farmingsystems:activityofintestinalandhepaticenzymesand13CNMRanalysisoflipids.Nutrients2009,1,291-301.28.DoyleKM,BirdDA,AlsalihiS,HallaqY,CluettebrownJE,GossKA,LaposataM(1994)Fattyacidethylestersarepresentinhumanserumafterethanolingestion,J.LipidRes.35:428-437.29.EFSAPanelonDieteticProducts,NutritionandAllergies.Scientificopiniononthesubstantiationofahealthclaimrelatedtobeta-palmitateandincreasedcalciumabsorptionpursuanttoArticle14ofRegulation(EC)No1924/2006.Eur.FoodSafetyAuthorityJ.2011,9,2289-2305.30.EstebanL等人(2011)Productionofstructuredtriacylglycerolsrichinpalmiticacidatsn-2positionandoleicacidatsn-1,3positionsashumanmilkfatsubstitutesbyenzymaticacidolysis,BiochemicalEngineeringJournal54:62-6931.Fernandez-Lafuente,R.LipasefromThermomyceslanuginosus:usesandprospectsasanindustrialbiocatalyst.J.Mol.Catal.B:Enzym.,2010,62,197-212.32.FilerLJ,Jr.等人(1969)Triglycerideconfigurationandfatabsorptionbythehumaninfant,JNutr99:293-29833.FleithM,ClandininMT(2005)DietaryPUFAforpretermandterminfants:reviewofclinicalstudies,CritRevFoodSciNutr45:205-22934.Gibson,R.A.；Makrides,M.Theroleoflongchainpolyunsaturatedfattyacids(LCPUFA)inneonatalnutrition.ActaPaediatr.1998,87,1017-1022.35.GroenendaalW,vandenBurgC.,inventors2002.Lateadditionofpufaininfantformulapreparationprocess.美国专利第6428832号.36.Gunstone,F.D.；Seth,S.Astudyofthedistributionofeicosapentaenoicacidanddocosahexaenoicacidbetweentheαandβglycerolchainsinfishoilsby13CNMRspectroscopy.Chem.Phys.Lipids1994,72,119-126.37.Hamam,F.；Shahidi,F.Acidolysisreactionsleadtoesterificationofendogenoustocopherolsandcompromisedoxidativestabilityofmodifiedoils.J.Agric.FoodChem.2006,54,7319-7323.38.HamoshM(1990)LingualandGastricLipases.Nutr6:421-42839.HamoshM(2008)Fattyacidsandgrowthanddevelopment.inChowCK(编辑)Fattyacidsinfoodsandtheirhealthimplications.BocaRaton:CRC出版社,第899-935页40.HeirdWC(2006)Theroleofessentialfattyacidsindevelopment.剑桥大学出版社,Cambs,England41.Hernández-Martín,E.；Otero,C.Differentenzymerequirementsforthesynthesisofbiodiesel:435andTLIM.BioresourceTechnol.2008,9,277-286.42.HoganSA等人2001.Emulsificationandmicroencapsulationpropertiesofsodiumcaseinate/carbohydrateblends.IntDairyJ11:137-144.43.HorbyJorgensenM等人(1998)Effectofformulasupplementedwithdocosahexaenoicacidandgamma-linolenicacidonfattyacidstatusandvisualacuityinterminfants,JPediatrGastroenterolNutr26:412-42144.HorrobinDF.1992.Nutritionalandmedicalimportanceofgamma-linolenicacid.ProgLipidRes31:163-194.45.Ibrahim,NA.；等人Enzymaticinteresterificationofpalmstearinandcoconutoilbyaduallipasesystem.J.Am.OilChem.Soc.2008,85,37-45.46.InnisSM.2007.Fattyacidsandearlyhumandevelopment.EarlyHum.Dev83:761-766.47.InnisSM等人(1994)Evidencethatpalmiticacidisabsorbedassn-2monoacylglycerolfromhumanmilkbybreast-fedinfants,Lipids29:541-54548.Innis,S.M.S.；等人Palmiticacidisabsorbedassn-2monopalmitinfrommilkandformulawithrearrangedtriacylglycerolsandresultsinincreasedplasmatriglyceridesn-2andcholesterylesterpalmitateinpiglets.J.Nutr.1995,125,73-81.49.JeffreyBG等人(2001)Theroleofdocosahexaenoicacidinretinalfunction,Lipids36:859-87150.JenningsB,AkohC(1999)Enzymaticmodificationoftriacylglycerolsofhigheicosapentaenoicanddocosahexaenoicacidscontenttoproducestructuredlipids,JAmOilChemSoc76:1133-113751.JensenRG.1999.Lipidsinhumanmilk.Lipids34:1243-1271.52.KagamiY等人2003.Oxidativestability,structure,andphysicalcharacteristicsofmicrocapsulesformedbysprayfryingoffishoilwithproteinanddextrinwallmaterials.JFoodSci68:2248-2255.53.KarelM,LabuzaTP,MaloneyJF.1967.Chemicalchangesinfreeze-driedfoodsandmodelsystem.Cryobiol3:288-296.54.Karupaiah,T.；Sundram,K.Effectsofstereospecificpositioningoffattyacidsintriacylglycerolstructuresinnativeandrandomizedfats:areviewoftheirnutritionalimplications.Nutr.Metabol.2007,4,1-17.55.Kato,A.IndustrialapplicationsofMaillard-typeprotein-polysaccharideconjugates.FoodSci.Technol.Res.2002,8,193-199.56.Kennedy,K等人(1999)Double-blind,RandomizedTrialofaSyntheticTriacylglycerolinFormula-fedTermInfants:EffectsonStoolBiochemistry,StoolCharacteristics,andBoneMineralization.AmJClinNutr70:920-92757.KimBH,AkohCC(2005)ModelingofLipase-CatalyzedAcidolysisofSesameOilandCaprylicAcidbyResponseSurfaceMethodology:OptimizationofReactionConditionsbyConsideringBothAcylIncorporationandMigration.JAgricFoodChem53:8033-803758.Kim,J.；Friel,J.Lipidsandhumanmilk.LipidTechnol.2012,24,103-105.59.KinnunenPM,LangeLG(1984)Identificationandquantitationoffattyacidethylestersinbiologicalspecimens,Anal.Biochem.140:567-57660.KleinerL等人(2012)Increasingstearidonicacid(SDA)inmodifiedsoybeanoilbylipase-mediatedacidolysis,JAmOilChemSoc89:1267-127561.KlinkesornU等人2006.Characterizationofspray-driedtunaoilemulsifiedintwo-layeredinterfacialmembranespreparedusingelectrostaticlayer-by-layerdeposition.FoodResInt39:449-457.62.KlinkesornU等人2005.Stabilityofspray-driedtunaoilemulsionsencapsulatedwithtwo-layeredinterfacialmembranes.JAgricFoodChem53:8365-8371.63.Koletzko,B.；等人Globalstandardforthecompositionofinfantformula:recommendationsofanESPGHANcoordinatedinternationalexpertgroup.J.Pediatr.Gastr.Nutr.2005,41,584-599.64.KooWK等人(2003)Reducedbonemineralizationininfantsfedpalmolein-containingformula:Arandomized,double-blinded,prospectivetrial,Pediatr111:1017-102365.KosarajuSL等人2009.In-vitroevaluationofhydrocolloid–basedencapsulatedfishoil.FoodHydrocolloid23:1413-1419.66.LaiOM等人(2005)Lipase-catalyzedacidolysisofpalmoleinandcaprylicacidinacontinuousbench-scalepackedbedbioreactor,FoodChem92:527-53367.LeeKT,AkohCC(1998)CharacterizationofEnzymaticallySynthesizedStructuredLipidsContainingEicosapentaenoic,Docosahexaenoic,andCaprylicAcids.JAmOilChemSoc75:495-49968.LeeKT,FogliaTA(2000)Synthesis,purification,andcharacterizationofstructuredlipidsproducedfromchickenfat,JAmOilChemSoc77:1027-103469.LegakoJ,DunfordNT.2010.Effectofspraynozzledesignonfishoil–wheyproteinmicrocapsuleproperties.JFoodSci75:E394-E400.70.LienEL(1994)Theroleoffattyacidcompositionandpositionaldistributioninfatabsorptionininfants,JPediatr125:S62-6871.LienEL等人(1997)Theeffectoftriglyceridepositionaldistributiononfattyacidabsorptioninrats,JPediatrGastroenterolNutr25:167-17472.Lopez-LopezA等人(2001)Theinfluenceofdietarypalmiticacidtriacylglyceridepositiononthefattyacid,calciumandmagnesiumcontentsofattermnewbornfaeces,EarlyHumDev65:S83-S9473.Lopez-LopezA等人(2002)Fattyacidandsn-2fattyacidcompositioninhumanmilkfromGranada(Spain)andininfantformulas,EuropeanJournalofClinicalNutrition56:1242-125474.LuddyFE,MagidmanP,HerbSF,RiemenschneiderRW,BarfordRA(1964)Pancreaticlipasehydrolysisoftriglyceridesbysemi-microtechnique,J.Am.OilChem.Soc.41:639-69675.LumorSE等人(2007)Synthesisandcharacterizationofcanolaoil-stearicacid-basedtrans-freestructuredlipidsforpossiblemargarineapplication,JournalofAgriculturalandFoodChemistry55:10692-1070276.Lumor,S.E.；Akoh,C.C.Incorporationofγ-linolenicandlinoleicacidsintoapalmkerneloil/palmoleinblend.Eur.J.LipidSci.Technol.2005,107,447-454.77.MarikkarJMN等人(2003)Differentialscanningcalorimetricanalysisfordeterminationofsomeanimalfatsasadulterantsinpalmolein,JFoodLipids10:63-7978.MasterK.1991.Spraydryinghandbook.NewYork:JohnWiley&Sons,Inc.79.Mateo,C.；等人Improvemnetofenzymeactivity,stabilityandselectivityviaimmobilizationtechniques.EnzymeMicrob.Tech.2007,40,1451-1463.80.MattsonFH,LuttonES.1958.Thespecificdistributionoffattyacidsintheglyceridesofanimalandvegetablefats.JBiolChem233:868-871.81.MattsonFH,VolpenheinRA(1962)Rearrangementofglyceridefattyacidsduringdigestionandabsorption,JBiolChem237:53-5582.MoreraS等人(2003)TriacylglycerolMarkersofMatureHumanMilk.EurJClinNutr57:1621-162683.MuH,CE(2004)TheDigestionofDietaryTriacyglycerols:Review.ProgLipidRes43:105–13384.MuH等人(2001)QuantitationofAcylMigrationDuringLipase-CatalyzedAcidolysisandoftheRegioisomersofStructuredTriacylglycerolsFormed.JAmOilChemSoc78:959-96485.NagachintaS,AkohCC(2012)EnrichmentofPalmOleinwithLongChainPolyunsaturatedFattyAcidsbyEnzymaticAcidolysis.LWT-FoodSciTechnol46:29-3586.NagachintaS,AkohCC(2013)ProductionandcharacterizationofDHAandGLA-enrichedstructuredlipidfrompalmoleinforinfantformulause,JournaloftheAmericanOilChemistsSociety90:1141-114987.Negishi,S.；等人Synthesisof1,3-dicapryloyl-2-docosahexaenoylglycerolbyacombinationofnonselectiveandsn-1,3-selectivelipasereactions.J.Am.OilChem.Soc.2003,80,971-974.88.NelsonSE等人(1998)Absorptionoffatandcalciumbyinfantsfedamilk-basedformulacontainingpalmolein,JAmCollNutr17:327-33289.NelsonSE等人(1996)Palmoleinininfantformula:absorptionoffatandmineralsbynormalinfants,AmJClinNutr64:291-29690.NoorLidaH等人(2002)TAGcompositionandsolidfatcontentofpalmoil,sunfloweroil,andpalmkerneloleinbelendsbeforeandafterchemicalinteresterification,JAmOilChemSoc79:1137-114491.OfficialMethodsandRecommendedPracticeoftheAOCS,第6版；Firestone,D.,编辑；AmericanOilChemists’Society:Champaign,IL,2009；OfficialMethodsAc5-41andCj1-94；Ca5a-40andCe8-89.92.OfficialMethodsandReommendedPracticesoftheAOCS.(1997)AmericanOilChemists'Society,Champaign,IL；OfficialMethodCd12b-92.93.OfficialMethodsofAnalysisofAOACInternational,第17版；AOACInternational:Gaithersburg,MD,1998；OfficialMethod996.01.94.OfficialMethodsandRecommendedPracticesoftheAmericanOilChemists’Society,第6版；AOCS:Champaign,IL,2011；OfficialMethodCd3a-94；Ch3-91；Cd3a-94；Ch3-91；Cj1-94；Cj1-94.95.OfficialMethodsofAnalysisofAOACInternational(2012)第19版.AOACIntl,Gaitherburg,MD；Method996.01.96.Owen,R.W.；等人Olive-oilconsumptionandhealth:thepossibleroleofantioxidants.LancetOncol.2000,1,107-112.97.Owen,R.W.；等人Phenoliccompoundsandsqualeneinoliveoils:theconcentrationandantioxidantpotentialoftotalphenols,simplephenols,secoiridoids,lignansandsqualene.FoodChem.Toxicol.2000,38,647-659.98.PandeG等人(2013)SynthesisofinfantformulafatanalogsenrichedwithDHAfromextravirginoliveoilandtripalmitin,JournaloftheAmericanOilChemistsSociety90:1311-131899.Pande,G.,等人Productionoftrans‐freemargarinewithstearidonicacidsoybeanandhigh‐stearatesoybeanoils‐basedstructuredlipid.J.FoodSci.2012,77,C1203-C1210.100.Pande,G.；Akoh,C.C.Enzymaticsynthesisoftrans-freestructuredmargarinefatanaloguesusingstearidonicacidsoybeanandhighstearatesoybeanoils.J.Am.OilChem.Soc.2012,89,1473–1484.101.PattenGS等人2009.Sitespecificdeliveryofmicroencapsulatedfishoiltothegastrointestinaltractoftherat.DigDisSci54:511-521.102.PiccianoMF(1998)HumanMilk:NutritionalAspectsofaDynamicFood.BiolNeonates74:84-93103.Pina-RodriguezAM,AkohCC(2009)Enrichmentofamaranthoilwithethylpalmitateatthesn-2positionbychemicalandenzymaticsynthesis,JournalofAgriculturalandFoodChemistry57:4657-4662104.Pina-RodriguezAM,AkohCC(2009)Synthesisandcharacterizationofastructuredlipidfromamaranthoilasapartialfatsubstituteinmilk-basedinfantformula,JournalofAgriculturalandFoodChemistry57:6748-6756105.QuinlanPT等人(1995)Therelationshipbetweenstoolhardnessandstoolcompositioninbreast-fedandformula-fedinfants,JPediatrGastrNutr20:81-90106.RaphaelM,RohaniS.1996.On-lineestimationofsolidsconcentrationsandmeanparticlesizeusingaturbidimetrymethod.PowderTechnol89:157-163.107.RoblesA等人(2011)Enzymaticproductionofhumanmilkfatsubstitutescontainingpalmiticanddocosahexaenoicacidsatsn-2positionandoleicacidatsn-1,3positions,LWT-FoodScienceandTechnology44:1986-1992108.Rodrigues,R.C.,等人Modifyingenzymeactivityandselectivitybyimmobilization.Chem.Soc.Rev.2013,42,6290-6307.109.Ruiz-GutierrezV,BarronLJ(1995)Methodsfortheanalysisoftriacylglycerols,JChromatogrB671:133-168110.RusliJ等人2006.Stabilizationofoilsbymicroencapsulationwithheatedprotein-glucosesyrupmixtures.JAmOilChemSoc83:965-972.111.Ryan,A.S等人Effectsoflong-chainpolyunsaturatedfattyacidsupplementationonneurodevelopmentinchildhood:areviewofhumanstudies.Prostaglandins,LeukotrienesEssent.FattyAcids2010,82,305-314.112.Sacchi,R.等人Quantitativehigh-resolution13CNMRanalysisoflipidsextractedfromthewhitemuscleofAtlantictuna(Thunnusalalunga).J.Agric.FoodChem.1993,41,1247-1253.113.Sahin,N.等人Humanmilkfatsubstitutescontainingomega-3fattyacids.J.Agric.FoodChem.2006,54,3717-3722.114.Sahin,S.,Sumnu,S.G.ElectromagneticProperties.InPhysicalPropertiesofFoods,Sahin,S.；Sumnu,S.G.,编辑；Springer:NewYork,NY,2006；第157-192页.115.Schmid,U.等人Highlyselectivesynthesisof1,3‐oleoyl‐2‐palmitoylglycerolbylipasecatalysis.Biotechnol.Bioeng.1999,64,678-684.116.ScottDT等人(1998)Formulasupplementationwithlong-chainpolyunsaturatedfattyacids:aretheredevelopmentalbenefits？,Pediatr102:E59117.SenanayakeS,ShahidiF(1999)Enzymaticincorporationofdocosahexaenoicacidintoborageoil,JAmOilChemSoc76:1009-1015118.SenanayakeS,ShahidiF(2004)Incorporationofdocosahexaenoicacid(DHA)intoeveningprimrose(OenotherabiennisL.)oilvialipase-catalyzedtransesterification,FoodChem85:489-496119.ShahidiF,ZhongY.2005.Lipidoxidation:Measurementmethods.InShahidiF,编辑.Bailey'sIndustrialOilandFatProducts.JohnWiley&Sons,Inc.第357-385页.120.AM等人(2010)HumanMilkFatSubstitutefromButterfat:ProductionbyEnzymaticInteresterificationandEvaluationofOxidativeStability.JAmOilChemSoc87:185-194121.Soumanou,MM等人Two-stepenzymaticreactionforthesynthesisofpurestructuredtriacylglycerides.J.Am.OilChem.Soc.1998,75,703-710.122.SpurgeonMJ等人(2003)Aninvestigationofthegeneral,reproductiveandpostnataldevelopmentaltoxicityofBetapol,ahumanmilkfatequivalent,FoodChemToxicol41:1355-1366123.StepelfeldtH等人1997.Effectofheattreatment,wateractivity,andstoragetemperatureontheoxidativestabilityofwholemilkpowder.IntDairyJ7:331-339.124.StraarupEM等人2006.Thestereospecifictriacylglycerolstructuresandfattyacidprofilesofhumanmilkandinfantformulas.JPediatrGastroenterolNutr42:293-299.125.Strayer,D等人Foodfatsandoils.第九版；InstituteofShorteningandEdibleOils,Washington,DC,2006..iseo.org/httpdocs/Publications/FoodFatsOils2006.pdf(访问:2013年8月5日)126.Suárez,E等人13CNMRregioisomericanalysisofEPAandDHAinfishoilderivedtriacylglycerolconcentrates.J.Am.OilChem.Soc.2010,87,1425-1433.127.TakeuchiH(2010)Applicationofbiotechnologyinthedevelopmentofahealthyoilcapableofsuppressingfataccumulationinthebody.inBagchiD,LauFC,GhoshDK(编辑)BiotechnologyinFunctionalFoodsandNutraceuticals.CRC出版社,BocaRaton,第103-112页128.TanCP,CheManYB(2002)Differentialscanningcalorimetricanalysisofpalmoil,palmoilbasedproductsandcoconutoil:effectsofscanningratevariation,FoodChem76:89-102129.TeichertSA,AkohCC(2011)Characterizationofstearidonicacidsoybeanoilenrichedwithpalmiticacidproducedbysolvent-freeenzymaticinteresterification,JAgricFoodChem59:9588-9595130.TeichertSA,AkohCC(2011)ModificationsofStearidonicAcidSoybeanOilbyEnzymaticAcidolysisfortheProductionofHumanMilkFatAnalogues.JAgricFoodChem59:13300-13310131.TeichertSA,AkohCC(2011)Stearidonicacidsoybeanoilenrichedwithpalmiticacidatthesn-2positionbyenzymaticinteresterificationforuseashumanmilkfatanalogues,JournalofAgriculturalandFoodChemistry59:5692-5701132.Tomarelli,RM等人Effectofpositionaldistributionontheabsorptionofthefattyacidsofhumanmilkandinfantformulas.J.Nutr.1968,95,583-590.133.TuranD等人(2012)Productionofhumanmilkfatanaloguecontainingdocosahexaenoicandarachidonicacids,JAgricFoodChem60:4402-4407134.TuranD等人(2013)Enrichmentofsn-2positionofhazelnutoilwithpalmiticacid:Optimizationbyresponsesurfacemethodology,LWT-FoodScienceandTechnology50:766-772135.Türkan,A.；Kalay,Monitoringlipase-catalyzedmethanolysisofsunfloweroilbyreversed-phasehigh-performanceliquidchromatography:elucidationofthemechanismsoflipases.J.Chromatogr.A2006,1127,34-44.136.UauyR等人(2003)TerminfantstudiesofDHAandARAsupplementationonneurodevelopment:resultsofrandomizedcontrolledtrials,JPediatr143:S17-25137.VázquezL,AkohC(2011)Concentrationofstearidonicacidinfreefattyacidandfattyacidethylesterformsfrommodifiedsoybeanoilbywinterization,JAmOilChemSoc88:1775-1785138.WalczewskaA等人(2011)Theroleofdocosahexaenoicacidinneuronalfunction,PostepyHigienyIMedycynyDoswiadczalnej65:314-327139.WalstraP.2003.Physicalchemistryoffoods.NewYork:MarcelDekker.140.WanasundaraUN,ShahidiF(1999)ConcentrationofOmega3-PolyunsaturatedFattyAcidsofSealBlubberOilbyUreaComplexation:OptimizationofReactionConditions.FoodChem65:41-49141.WijewickremeAN等人1999.Hydroxylscavengingactivityofglucose,fructose,andribose-lysinemodelMaillardproducts.JFoodSci64:457-461.142.XuX(2000)Productionofspecific-structuredtriacylglycerolsbylipase-catalyzedreactions:areview,EuropeanJournalofLipidScienceandTechnology102:287-303143.XuX等人(1998)ProductionofSpecific-structuredLipidsbyEnzymaticInteresterification:ElucidationofAcylMigrationbyResponseSurfaceDesign.JAmOilChemSoc75:1179-1186144.YangT等人(2005)SupressionofAcylMigrationinEnzymaticProductionofStructuredLipidsthroughTemperatureProgramming.FoodChem92:101-107145.Yehuda,S等人Essentialfattyacidsandthebrain:frominfancytoaging.Neurobiol.Aging2005,26,98-102.146.YoungSL等人1993.Microencapsulatingpropertiesofwheyproteins.2.Combinationofwheyproteinswithcarbohydrates.JDairySci76:2878-2885.147.Zink,D.Powderedinfantformula:anoverviewofmanufacturingprocesses.URL(http://www.fda.gov/ohrms/dockets/ac/03/briefing/3939b1_tab4b.pdf)(2013年1月访问).148.ZockPL等人(1996)PartialConservationofthesn-2PositionofDietaryTriglyceridesinFastingPlasmaLipidsinHumans.EurJClinInvest26:141-150149.ZouX等人2012.Preparationofhumanmilkfatsubstitutesfrompalmstearinwitharachidonicanddocosahexaenoicacid:Combinationofenzymaticandphysicalmethods.JAgricFoodChem60:9415-9423.150.Zou,L.；Akoh,C.C.Identificationoftocopherols,tocotrienols,andtheirfattyacidestersinresiduesanddistillatesofstructuredlipidspurifiedbyshort-pathdistillation.J.Agric.FoodChem.2012,61,238-246.151.Zou,XQ等人Modelforhumanmilkfatsubstituteevaluationbasedontriacylglycerolcompositionprofile.J.Agric.FoodChem.2013,61,167-175.当前第1页1 2 3