一种柳蒿芽茶叶及其制备方法和应用与流程

本发明涉及保健茶饮领域。更具体地，涉及一种柳蒿芽茶叶及其制备方法和应用。

背景技术：

柳蒿为菊科多年生草本植物，其嫩茎叶可食用。主要分布在我国大兴安岭南北、呼伦贝尔草原、嫩江平原河边及江沿红柳丛中，耐寒抗热，生长在河岸湿地、沼泽、柳林灌丛下等处。研究表明，柳蒿芽含有多种生物活性成分，如胡萝卜素、烟酸、维生素C、钙、铁、锌、多种氨基酸等，其具有养肝健胃、清热解毒、消暑等功效。药理研究表明其为安全毒害食品。

目前，柳蒿芽主要作为一种食品而应用。主要具有养肝健胃、清热解毒、抗氧化、增强免疫力等作用。柳蒿芽水提物的获得主要采用水煎煮法提取或超声法提取，再经浓缩、真空干燥而获得。

肝功能损伤是危害人类健康常见的临床疾病之一。我国是肝病大国，多种急慢性肝病在我国均有较广分布。随着我国人民生活水平曰益提高，脂肪肝、酒精肝等慢性肝病发病趋势逐渐升高。调查显示，我国目前肝病患者超过2亿人，约占人口总数的10％，每年死于肝病的患者超过50万人，其中肝功能异常者所占比例最大，肝病患者是我国医疗体系中不可忽视的重要群体之一。目前，针对肝功能损伤的治疗措施主要依靠药物为主，但其均有不同程度的副反应，且用药受限，不能适应现在快节奏的生活。因此，健康的饮品对于缓解肝病的症状极为重要。

医学研究表明：柳蒿芽中蛋白质、粗纤维、碳水化合物、胡萝卜素、烟酸、维生素B、维生素C、钙、铁、锌、多种氨基酸等。且目前茶已是人民生活的必需品，现在饮用的茶叶品种繁多、花色各异。但还没有以柳蒿芽为主要原料配制的医疗保健茶。

技术实现要素：

本发明的第一个目的在于提供一种柳蒿芽茶叶的制备方法，具体的，在于提供一种具有降低转氨酶、抗氧化等护肝作用、抗衰老且无毒副作用的，服用方便，色泽纯正、茶叶柔软，且温水浸泡时可快速舒展呈自然形状，散发清香气息的，入口清淡微涩的具有提神作用的柳蒿芽茶叶的制备方法。

本发明的第二个目的在于提供采用上述制备方法制备得到的柳蒿芽茶叶。

本发明的第三个目的在于提供柳蒿芽茶叶在制备护肝保健茶中的应用。

为达到上述第一个目的，本发明采用下述技术方案：

一种柳蒿芽茶叶的制备方法，它包括如下步骤：

备料：采摘柳蒿成熟植株顶端新生嫩叶，采摘长度为3～8cm，再用流水快速冲掉嫩叶表面的异物；

凉青：将嫩叶于常温阴凉处摊放，摊放厚度为1～3cm，摊放时间为2～3天；

杀青：将凉青后的嫩叶置于80～100℃的水中，浸泡0.5～2min；

摊凉：将杀青后的嫩叶立即放于竹筛内摊凉5～15min；

揉捻：将摊凉后的嫩叶沿同一方向揉搓成球状，反复揉搓至有汁液渗出；

干燥：将揉捻成球的嫩叶在-50～-60℃温度下冷冻干燥12～24h，得柳蒿芽茶叶。

本发明中的杀青方法可有助于使得得到的柳蒿芽茶叶颜色淡绿、茶叶柔软、减少茶叶苦味。优选地，在本发明的一个具体实施例中，所述杀青的方法为：将凉青后的嫩叶置于80～90℃的水中，浸泡30～50秒。

在本发明的另一个具体实施例中，所述杀青的方法为：将凉青后的嫩叶置于80～90℃的水中，浸泡30～40秒。

优选地，本发明的制备方法中，所述摊凉的时间为5～10min。

进一步地，所述揉捻还包括：将摊凉后的嫩叶沿同一方向揉搓成球状，反复揉搓至有汁液渗出后，将球状的嫩叶均匀摊开、抖散，防止出现打结、成团现象出现，使得嫩叶的成球率达90％以上，再将其均匀铺于竹筛内，厚度为1cm；优选地，所述揉捻的时间为3～6min。

进一步地，本发明的护肝柳蒿芽茶叶的制备方法中，首次创造性的采用低温冷冻干燥的方法对柳蒿芽嫩叶进行冷冻干燥，促进保证得到柳蒿芽茶叶色泽纯正、在温水浸泡时球状的柳蒿芽茶叶可快速舒展呈自然形状，散发清香气息、入口清淡微涩。在本发明的一个具体实施方式中，所述干燥的方法为：在-55～-60℃温度下冷冻干燥12～20h。

在本发明的又一个具体实施方式中，所述干燥的方法为：在-55～-58℃温度下冷冻干燥12～16h。

本发明还保护采用上述制备方法制备得到的柳蒿芽茶叶。

包含如上述柳蒿芽茶叶的柳蒿芽水溶液也在本发明的保护范围内。该柳蒿芽水溶液可由如下方法制备得到：

将柳蒿芽茶叶与纯净水按1000g：10～12L的比例混合，浸泡2～3h；

将混合物于提取罐内，在80～100℃温度下煮35～40min后，再于30～50℃温度下煮30～50min，分别收集滤渣S1和滤液A1；

将滤渣S1与纯净水按400g：3～4L的比例混合，在80～100℃温度下煮20min，再于30～50℃温度下煮15～30min，收集滤渣S2和滤液A2；

将滤渣S2与纯净水按350g：2.5～3L的比例混合，在80～100℃温度下煮20min，再于30～50℃温度下煮15～30min，收集滤渣S3和滤液A3；

将滤液A1、A2和A3合并浓缩，得干浸膏；

将干浸膏与纯净水按需求配制得到不同浓度的柳蒿芽水溶液。

如，可根据需求，配制得到浓度为600mg/L、300mg/L、150mg/L等具有浓度梯度的柳蒿芽水溶液；优选地，配制浓度为150mg/L～600mg/L的柳蒿芽水溶液；更优选地，配制浓度为300mg/L～600mg/L的柳蒿芽水溶液。

本发明还保护上述柳蒿芽茶叶在制备护肝保健茶中的应用。

进一步地，本发明中制备得到的柳蒿芽茶叶可作为护肝保健茶的原料而应用在护肝保健茶的制备中。

本发明的有益效果如下：

本发明制备得到的柳蒿芽茶叶是市场上首次出现的柳蒿芽茶叶产品，且其可以四季食用，使用方便且便于携带，突破了柳蒿芽为季节性使用的瓶颈。

本发明的柳蒿芽茶叶的制备过程中发现，杀青采用在80～100℃的水中浸泡0.5～2min的方法，相比较传统的杀青方法，通过限定在水中浸泡的温度及将时间控制在0.5～2min，可使得得到的柳蒿芽茶叶颜色淡绿、茶叶柔软、减少茶叶苦味。

本发明柳蒿芽茶叶的制备方法中选用的干燥方法为在-50～-60℃温度下干燥，促进保证得到柳蒿芽茶叶色泽纯正、在温水浸泡时球状的柳蒿芽茶叶可快速舒展呈自然形状，散发清香气息、入口清淡微涩。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。

图1示出本发明柳蒿芽茶叶的制备工艺流程。

图2示出本发明实施例8中实验大鼠血清ALT、AST和LDH的活性值。

图3示出本发明实施例8中实验大鼠肝组织中MDA含量和SOD活性值。

图4示出本发明实施例8中正常组(a)、模型组(b)、实验组1(c)、实验组2(d)、实验组3(e)实验大鼠肝组织经HE染色的形态图。

图5示出本发明实施例8中正常组(a)、模型组(b)、实验组1(c)、实验组2(d)、实验组3(e)实验大鼠肝组织经Masson染色的形态图。

图6示出本发明实施例8中正常组(a)、模型组(b)、实验组1(c)、实验组2(d)、实验组3(e)实验大鼠肝组织透射电镜图。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例和附图对本发明做进一步的说明。附图中相似的部件以相同的附图标记进行表示。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。

实施例1

一种柳蒿芽茶叶的制备方法，步骤如下：

1)备料：采摘柳蒿成熟植株顶端嫩叶2kg，采集长度为3～8cm，并经流水快速冲掉其表面的异物；

2)凉青：将嫩叶摊放于常温阴凉处，摊放厚度为1～3cm，摊放2天；

3)杀青：将凉青后的嫩叶置于95℃的水中，浸泡1min；

4)摊凉：将杀青后的嫩叶趁热摊放于竹筛中自然冷却10min；

5)揉捻：将摊凉后的嫩叶在竹筛内沿同一方向揉搓成球状，反复揉搓至有汁液渗出后，将其均匀摊开、抖散，防止出现打结、成团现象出现，使得嫩叶的成球率达90％以上，揉捻的时间为4min；

6)干燥：将揉捻后的嫩叶放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥，温度为-55℃，干燥时间为20h，得柳蒿芽茶叶。

该柳蒿芽茶叶可作为护肝保健茶的原料。

实施例2

一种柳蒿芽茶叶的制备方法，步骤如下：

1)备料：采摘柳蒿成熟植株顶端嫩叶2kg，采集长度为3～8cm，并经流水快速冲掉其表面的异物；

2)凉青：将嫩叶摊放于常温阴凉处，摊放厚度为1～3cm，摊放2天；

3)杀青：将凉青后的嫩叶置于85℃的水中，浸泡45秒；

4)摊凉：将杀青后的嫩叶趁热摊放与竹筛中自然冷却10min；

5)揉捻：将摊凉后的嫩叶在竹筛内沿同一方向揉搓成球状，反复揉搓至有汁液渗出后，将其均匀摊开、抖散，防止出现打结、成团现象出现，使得嫩叶的成球率达90％以上，揉捻的时间为5min；

6)干燥：将揉捻后的嫩芽放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥，温度为-60℃，干燥时间为16h，得柳蒿芽茶叶。

该柳蒿芽茶叶可作为护肝保健茶的原料。

实施例3

一种柳蒿芽茶叶的制备方法，步骤如下：

1)备料：采摘柳蒿成熟植株顶端嫩叶2kg，采集长度为3～8cm，并经流水快速冲掉其表面的异物；

2)凉青：将嫩叶摊放于常温阴凉处，摊放厚度为1～3cm，摊放2天；

3)杀青：将凉青后的嫩叶置于90℃的水中，浸泡40秒；

4)摊凉：将杀青后的嫩叶趁热摊放与竹筛中自然冷却6min；

5)揉捻：将摊凉后的嫩叶在竹筛内沿同一方向揉搓成球状，反复揉搓至有汁液渗出后，将其均匀摊开、抖散，防止出现打结、成团现象出现，使得嫩叶的成球率达90％以上，揉捻的时间为5min；

6)干燥：将揉捻后的嫩芽放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥，温度为-58℃，干燥时间为16h，得柳蒿芽茶叶。

该柳蒿芽茶叶可作为护肝保健茶的原料。

对比例1

重复实施例1，区别在于，将步骤3)中的杀青方法改为：将凉青后的嫩叶放置于微波炉中，放置厚度为2～4cm，并在其表面铺一层纱布，进行微波加热，微波功率为800W，火力100％，杀青3min。其余条件不变，制备得到柳蒿芽茶叶。

对比例2

重复实施例1，区别在于，将步骤6)中干燥的方法改为：将揉捻后的嫩叶置于电锅灶中进行炒制，锅温为90℃，翻炒25min，然后出锅。其余条件不变，制备得到柳蒿芽茶叶。

对比例3

重复实施例1，区别在于，将步骤3)中的杀青方法改为：将凉青后的嫩叶放置于微波炉中，放置厚度为2～4cm，并在其表面铺一层纱布，进行微波加热，微波功率为900W，火力100％，杀青2min。

将步骤6)中干燥的方法改为：将揉捻后的嫩叶置于电锅灶中进行炒制，锅温为95℃，翻炒20min，然后出锅。其余条件不变，制备得到柳蒿芽茶叶。

对比例4

重复实施例1，区别在于，将步骤4)的摊凉改为：将杀青后的嫩叶立即浸入常温清水中冷却10min。其余条件不变，制备得到柳蒿芽茶叶。

对比例5

重复实施例1，区别在于，将步骤3)杀青中的浸泡时间改为5min。其余条件不变，制备得到柳蒿芽茶叶。

对比例6

重复实施例1，区别在于，将步骤6)中的冷冻干燥温度改为-30℃，其余条件不变，制备得到柳蒿芽茶叶。

实施例4

柳蒿芽水溶液的制备，步骤如下：

(1)将实施例1制备得到的柳蒿芽茶叶与纯净水按1000g：12L的比例混合，在容器中浸泡3h；

(2)将得到的混合物于提取罐内，在85℃温度下煮40min，再于35℃温度下煮50min，分别收集滤渣S1和滤液A1；

(3)将滤渣S1与纯净水按400g：3L的比例混合，在90℃温度下煮20min，再于40℃温度下煮30min，分别收集滤渣S2和滤液A2；

(4)将滤渣S2与纯净水按350g：3L的比例混合，在90℃温度下煮20min，再于40℃温度下煮30min，分别收集滤渣S3和滤液A3；

(5)将滤液A1、A2和A3合并浓缩，得干浸膏；

(6)将干浸膏与纯净水按需求配制得到所需浓度的柳蒿芽水溶液。

实施例5

柳蒿芽水溶液的制备，步骤如下：

(1)将实施例2制备得到的柳蒿芽茶叶与纯净水按1000g：12L的比例混合，在容器中浸泡2.5h；

(2)将得到的混合物于提取罐内，在90℃温度下煮38min，再于40℃温度下煮35min，分别收集滤渣S1和滤液A1；

(3)将滤渣S1与纯净水按400g：4L的比例混合，在95℃温度下煮20min，再于45℃温度下煮20min，分别收集滤渣S2和滤液A2；

(4)将滤渣S2与纯净水按350g：3L的比例混合，在90℃温度下煮20min，再于42℃温度下煮15min，分别收集滤渣S3和滤液A3；

(5)将滤液A1、A2和A3合并浓缩，得干浸膏；

(6)将干浸膏与纯净水按需求配制得到所需浓度的柳蒿芽水溶液。

实施例6

重复实施例4，区别在于，将步骤(1)中的柳蒿芽茶叶换成实施例3制备得到的柳蒿芽茶叶。其余条件不变，制备得到柳蒿芽水溶液。

对比例7

重复实施例4，区别在于，将步骤(1)中的柳蒿芽茶叶分别换成对比例1～6的柳蒿芽茶叶，其余条件不变，制备得到柳蒿芽水溶液。

实施例7

考察本发明制备得到的柳蒿芽茶叶的色泽、口感、形态等整体感官特性：

考察本发明实施例1～3以及对比例1～6所得柳蒿芽茶叶的整体感官特性；采用不记名打分的方法进行60人评分测试，评价指标如下表1所示，各指标满分3分，分数越高，相应的指标性能越高。评价打分结果如下表2所示。

表1感官特性评价指标

表2感官特性评价结果

实施例8

柳蒿芽茶叶对四氯化碳致大鼠肝损伤的保护作用的实验：

实验试剂：

四氯化碳(CCl₄，天津市凯通化学试剂有限公司)，天冬氨酸转氨酶(AST)试剂盒、丙氨酸转氨酶(ALT)试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒、Masson染色试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒及考马斯亮蓝蛋白试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

实验方法：

购入SPF级雄性SD大鼠(200±20)g，50只，10周(购自哈尔滨医科大学实验动物中心)，标准化房笼喂养，自由进食饮水每天光照12h。适应性喂养一周后，按体重随机分成5组，每组10只。其中：

1个正常对照组(正常组)：按大鼠体重算，每次按1mL/kg(下同)的计量腹腔注射生理盐水，每周2次，共8周；于第9周给予0.2mL生理盐水灌胃，每日一次，连续给药8周；

1个模型对照组(模型组)：按1mL/kg计量腹腔注射20％四氯化碳橄榄油溶液，每周2次，共8周；于第9周给予0.2mL生理盐水灌胃，每日一次，连续给药8周；

1个实施例4配制的浓度为150mg/L的柳蒿芽水溶液实验组(实验组1)：按1mL/kg计量腹腔注射20％四氯化碳橄榄油溶液，每周2次，共8周；于第9周给予0.2mL 150mg/L的柳蒿芽水溶液灌胃，每日一次，连续给药8周；

1个实施例4配制的浓度为300mg/L的柳蒿芽水溶液实验组(实验组2)：按1mL/kg计量腹腔注射20％四氯化碳橄榄油溶液，每周2次，共8周；于第9周给予0.2mL 300mg/L的柳蒿芽水溶液灌胃，每日一次，连续给药8周；

1个实施例4配制的浓度为600mg/L的柳蒿芽水溶液实验组(实验组3)：按1mL/kg计量腹腔注射20％四氯化碳橄榄油溶液，每周2次，共8周，于第9周给予0.2mL 600mg/L的柳蒿芽水溶液灌胃，每日一次，连续给药8周。

生化指标检测：

给药干预8周后，大鼠经ip 10％水合氯醛，麻醉后腹主动脉取血，分取血清，按试剂盒要求测定谷氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性。取血后及时分离肝脏，生理盐水冲洗瘀血，滤纸吸干水分后称重，取肝脏左叶制备组织匀浆，根据各自试剂盒分别测定超氧化物歧化酶(SOD)SOD的活性和丙二醛(MDA)的含量。测定结果见表3和表4及图2和图3。

表3实验大鼠血清ALT、AST和LDH的活性值(n＝10，x±s)

注：与模型组比较：^◎P＜0.05，^*P＜0.01

从表3中可看出，与正常组相比较，模型组大鼠血清ALT、AST和LDH的活性显著提高(P<0.01)，说明SD大鼠肝损伤模型复制成功；与模型对照组比较，柳蒿芽水溶液中柳蒿芽中(实验组2)、高剂量(实验组3)组血清中的ALT和AST和LDH活性明显降低(P<0.05)，而中剂量组更为显著(P<0.01)。

表4实验大鼠肝组织中MDA含量和SOD活性值(n＝10，x±s)

注：与模型对照组比较：^◎P＜0.05，^*P＜0.01

从表4中可看出，与正常组相比较，模型组大鼠肝组织中SOD活性显著降低(P<0.01)及MDA含量明显升高(P<0.01)；与模型组相比较，柳蒿芽水溶液中柳蒿芽中(实验组2)、高剂量(实验组3)组大鼠肝脏系数可明显降低(P<0.05)，同时可显著增加肝组织中SOD活性(P<0.05)及明显降低MDA含量(P<0.05)，而中剂量组更为显著(P<0.01)。

HE和Masson染色观察大鼠肝组织形态变化，结果分别见图4和图5。从图4 HE染色可知，正常组(a)大鼠肝小叶结构完整，肝窦清晰、较宽，肝上皮细胞排列整齐，呈多边型，细胞质均匀红染，细胞核清晰，未见明显肿胀变性，枯否氏细胞分布均匀，未见局部大量聚集；模型组(b)大鼠肝小叶结构异常紊乱，有明显形成假小叶趋势，肝上皮细胞呈广泛性空泡样变，出现明显的结节性增生和大量坏死点，大量上皮细胞核浓缩、溶解、坏死，血窦在肿胀的上皮细胞相互挤压下变细或消失。与模型组比较，柳蒿芽水溶液低(实验组1(c))、中(实验组2(d))、高剂量(实验组3(e))组大鼠肝小叶结构较完整，肝上皮细胞排列比较整齐，细胞质均匀红染，细胞核较清晰，细胞肿胀变性有所好转，高剂量组作用更为明显。

图6示出了实验大鼠肝组织透射电镜图。从图中可知，正常组(a)正常干细胞呈多面体、细胞核为圆形或椭圆形，核膜清晰，组织结构条例有序，有规律的内质网。模型组(b)大鼠肝组织明显发生纤维化，细胞肿胀变性明显，核膜模糊不清，结构模糊，内质网溶解。与模型组比较柳蒿芽水溶液低(实验组1(c))、中(实验组2(d))、高剂量(实验组3(e))组大鼠肝组织纤维化明显减轻，结构较清晰，核膜界限较清楚，内质网溶解有所好转，但是细胞肿胀变性改善不是很明显，高剂量组作用更为明显。

将实施例5和实施例6制备得到的柳蒿芽水溶液按实施例8的方法用于对四氯化碳至大鼠肝损伤的保护作用的实验，效果与实施例8中相近。

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。