本发明涉及一种虾青素阿胶糕及其制备方法。
背景技术:
随着生活节奏的不断加快,人们常常会面临长期超负荷工作、思想压力过大、饮食不规律、缺少运动等问题,这会导致人们长期处于亚健康状态,以致内分泌失调、睡眠质量降低、免疫力下降等状况。目前,越来越多的人受到失眠及免疫力低下的困扰,严重影响了日常工作和生活。失眠、睡眠不稳以及免疫力低下已成为我国主要的公共卫生问题之一。
目前,针对失眠以及免疫力低下的问题,通常是采用药物治疗,虽即时效果不错,但存在不同程度的副作用,且容易使患者对药物产生依赖性。
技术实现要素:
本发明为了弥补现有技术的不足,提供了一种改善睡眠、增强人体免疫力的虾青素阿胶糕及其制备方法。
本发明是通过如下技术方案实现的:
一种虾青素阿胶糕,其活性成分由以下重量份数的原料制成:虾青素粉8~12份、阿胶5~8份、黑芝麻3~6份、核桃仁5~9份、冰糖3~5份、黄酒13~16份、红枣4~6份、桂圆5~7份、枸杞4~7份、葡萄干4~6份、玫瑰粉3~5份、薄荷4~7份、莲子心1.5~2.2份、当归4~7份、白芍5~7份、葛根5~8份、芡实4~6份、桂花3~5份、独一味3~4份、白前4~6份、薏苡仁3~5份、水飞蓟3~6份、香附3~5份、车前草4~7份、余甘子2~3份、威灵仙3~7份。
优选的,各活性成分的重量份数为:虾青素粉10份、阿胶7份、黑芝麻5份、核桃仁7份、冰糖4份、黄酒15份、红枣5份、桂圆6份、枸杞6份、葡萄干5份、玫瑰粉4份、薄荷6份、莲子心1.9份、当归6份、白芍6份、葛根7份、芡实5份、桂花4份、独一味3.5份、白前5份、薏苡仁4份、水飞蓟5份、香附4份、车前草6份、余甘子2.5份、威灵仙5份。
所述的虾青素粉为雨生红球藻虾青素粉。
一种虾青素阿胶糕的制备方法,采用如下步骤:
(1)将当归、白芍、葛根、香附和威灵仙切片,置于砂锅内,加入5~7倍当归、白芍、葛根、香附和威灵仙质量和的纯净水,浸泡4~6小时后,加入莲子心和芡实,加水煎煮两次,每次煎煮40~60分钟后过滤,合并两次滤液;
(2)将薄荷、桂花、独一味和车前草制成粗粉,水提两次,水提时每次煮沸1小时后过滤,合并两次滤液,向合并滤液中加入玫瑰粉后混合均匀,静置3~4小时后加入质量浓度为70%~75%的酒精,充分搅拌,过滤,去除沉淀,在35℃~40℃下将去除沉淀后的溶液浓缩至相对密度为1.2~1.4的稠膏,然后将稠膏在60℃以下干燥,粉碎成细粉,过60~80目筛,得粉末;
(3)将白前、薏苡仁、水飞蓟和余甘子粉碎,过40~60目筛,混匀,将混匀后的混合物料置于中药提取罐中,向中药提取罐中加入8~10倍混合物料质量的水,提取两次,每次提取60~80分钟后过滤,合并两次滤液,将合并后的滤液静置过夜,过滤,加入步骤(1)所得滤液,混合均匀,在38℃~41℃下浓缩至相对密度为1.25~1.35的稠膏,向所得稠膏中添加质量浓度为55%~60%的乙醇溶液,至乙醇的质量浓度为29%~36%时停止添加,搅拌,将加乙醇溶液后的稠膏再次静置过夜后,减压回收乙醇,加入步骤(2)所得粉末,混合均匀,将混匀后得到的无醇浓缩膏置于真空干燥箱中,在55℃~65℃的温度下干燥成干浸膏,备用;
(4)在不锈钢托盘的表面平整地铺一层保鲜膜,在保鲜膜表面刷一层香油,备用;
(5)将黑芝麻淘洗两次,晾干,将晾干后的黑芝麻置于炒锅内,文火缓慢加热并不断搅拌,炒至黑芝麻略带香气且用拇指和食指挤压极易破碎时出锅,降温至室温,得炒制黑芝麻,备用;
(6)将核桃仁置于另一炒锅内,文火缓慢加热至核桃仁的温度为38℃~42℃时,文火转中火继续炒至用手轻捻核桃仁时内衣极易脱落,停火,出锅,降至室温,得炒制核桃仁,备用;
(7)将红枣和桂圆去核,置于烤箱中,在160℃~180℃下烤5~10分钟,取出,放凉后置于中药粉碎机中,加入步骤(6)所得炒制核桃仁,粉碎,过80~120目筛,得粉末;
(8)将阿胶置于打粉机中粉碎,过100~140目筛,过筛后的阿胶粉置于非铁制容器中,加入经过粉碎后的冰糖,放置2~3天,加入黄酒,放入锅中隔水蒸,大火煮至开锅后转文火慢蒸,熬至挂旗时加入枸杞和葡萄干,搅拌均匀,继续文火慢蒸25~35分钟后,加入步骤(3)所得干浸膏和步骤(7)所得粉末,搅拌均匀,继续文火慢蒸15~20分钟后,加入虾青素粉和步骤(5)所得的炒制黑芝麻,顺时针搅拌8~10分钟,关火,出锅,将出锅后的产物倒在步骤(4)准备好的不锈钢托盘上,压平,放凉至室温,在-4℃~-8℃的温度下冷冻15~25小时,以每块质量28g~30g进行切块,包装,即得该虾青素阿胶糕。
步骤(8)中所述挂旗是指用木铲盛一些提起时,阿胶成片状挂在铲上,呈一面旗子状慢慢往下掉,挂旗时膏状物的浓度为1.46g/cm3~1.49g/cm3。
步骤(8)中的虾青素粉为雨生红球藻虾青素粉。
用法用量:每天食用两次,每次食用一块,分别于早饭前和晚饭后1小时食用,服用时多喝温水。
本发明所采用的各活性成分的药用性能如下所示:
虾青素粉:虾青素属于一种脂溶性及水溶性的色素。本发明中使用的是雨生红球藻虾青素,提取自雨生红球藻,雨生红球藻中虾青素含量为1.5%-3.0%,虾青素具有强大的抗氧化性。其常见的保健功效:保护眼和中枢神经系统;防紫外线辐射;预防心血管疾病;增强免疫力;缓解运动疲劳,增强机体能量代谢;抗炎抗感染特性;抑制肿瘤;抑制糖尿病肾病。
阿胶:味甘,性平。归肺、肝、肾经。阿胶为马科动物驴的皮,经煎煮、浓缩制成的固体胶,是传统的滋补上品、补血圣药。具有补血止血、滋阴润燥等功效,药食两用,可补血养血、美白养颜、抗衰老、抗疲劳、提高免疫力。
黑芝麻:味甘,性平。黑芝麻为胡麻科芝麻的黑色种子,含有大量的脂肪和蛋白质,还含有糖类、维生素A、维生素E、卵磷脂、钙、铁、铬等营养成分。具有滋补肝肾、益血润肠、通便、通乳的功能。
核桃仁:核桃中的磷脂,对脑神经有良好保健作用。核桃油含有不饱和脂肪酸,有防治动脉硬化的功效。核桃仁中含有锌、锰、铬等人体不可缺少的微量元素。核桃仁的镇咳平喘作用也十分明显,而且核桃中所含的精氨酸、油酸、抗氧化物质等对保护心血管,预防冠心病、中风、老年痴呆等是颇有裨益的。
冰糖:味甘、性平。归肺、脾经。冰糖是砂糖的结晶再制品,可作药用,也可作糖果食用。冰糖可以增加甜度,中和多余的酸度,并且有去火的功效。具有补中益气、和胃润肺、养阴生津、润肺止咳的功效。用于肺燥、肺虚、风寒劳累所致的咳喘、小儿疟疾、噤口痢、口疮、风火牙痛。
黄酒:黄酒是一类以稻米、黍米、玉米、小米、小麦等为主要原料,采用蒸煮、加酒曲、糖化、发酵、压榨、过滤、煎酒、贮存、勾兑而成的酿造酒。含有多酚、类黑精、谷胱甘肽等生理活性成分,具有清除自由基,预防心血管病、抗癌、抗衰老等生理功能。黄酒含有丰富的营养,包括数种人体自身不能合成必须依靠食物摄取的氨基酸。
红枣:味甘、微甜,性微温。红枣为鼠李科植物枣的果实,含有蛋白质、脂肪、醣类、有机酸、维生素A、维生素C、微量钙多种氨基酸等丰富的营养成份。具有补脾益气、滋阴补阳、养血安神的功效。红枣能提高人体免疫力,并可抑制癌细胞。药理研究发现,红枣能促进白细胞的生成,降低血清胆固醇,提高血清白蛋白,保护肝脏,红枣中还含有抑制癌细胞,甚至可使癌细胞向正常细胞转化的物质。
桂圆:味甘,性温。归心、脾经。桂圆为无患子科植物龙眼的假种皮,含有多种营养物质,具有补血安神、健脑益智、补养心脾的功效。用于虚劳羸弱,失眠症,健忘,惊悸,怔忡。研究发现,桂圆对子宫癌细胞的抑制率超过90%。
枸杞:味甘、性平。归肝、肾、肺经。枸杞为茄科植物宁夏枸杞的干燥成熟果实。含枸杞多糖、甜菜碱、阿托品、天仙子胺、玉蜀黍黄素、酸浆红素、隐黄质、东莨菪素、胡萝卜素、核黄素、烟酸、维生素等。具有养肝、滋肾、润肺的功效。用于肝肾亏虚,头晕目眩,目视不清,腰膝酸软,阳痿遗精,虚劳咳嗽,消渴引饮。
葡萄干:葡萄干是在日光下晒干或阴干的葡萄的果实。葡萄干中的铁和钙含量十分丰富,可补血气、暖肾,帮助改善贫血,血小板减少。葡萄干含大量葡萄糖,对心肌有营养作用,有助于冠心病患者的康复。葡萄干还含有多种矿物质和维生素、氨基酸,常食对神经衰弱和过度疲劳者有较好的补益作用。
玫瑰粉:玫瑰粉是玫瑰花经膜技术净化、浓缩后,真空冷冻干燥制得,完好地保持了玫瑰的营养成分、颜色效果等。富含人体所需氨基酸、蛋白质、有机酸维生素C、大量天然色素及多种矿物质、水槿酸;并含三大丰富的稀有元素:天然花青素、天然类黄酮素、天然总多酚。
薄荷:味辛,性凉。归肺、肝经。薄荷为唇形科薄荷属植物薄荷的干燥地上部分。含挥发油0.8~1%,挥发油中主要成分为薄荷醇,其次为薄荷酮,还含乙酸薄荷酯、莰烯、柠檬烯、异薄荷酮、蒎烯、薄荷烯酮、树脂及少量鞣质、迷迭香酸等。具有宣散风热、清头目、透疹的功效。用于风热感冒,风温初起,头痛,目赤,喉痹,口疮,风疹,麻疹,胸胁胀闷。
莲子心:味苦,性寒。归心、肾经。莲子心为睡莲科植物莲的成熟种子中间的绿色胚根(莲心)。具有清心安神、交通心肾、涩精止血的功效。用于热入心包,神昏谵语,心肾不交,失眠遗精,血热吐血。
当归:味甘、辛、微苦,性温。归肝、心、脾经。当归为伞形科植物当归的干燥根。具有补血活血,调经止痛,润肠通便的功效。用于血虚萎黄,眩晕心悸,月经不调,经闭痛经,虚寒腹痛,肠燥便秘,风湿痹痛,跌扑损伤,痈疽疮疡。
白芍:味苦、酸,性寒。归肝、脾经。白芍为毛茛科植物芍药的干燥根。具有平肝止痛,养血调经,敛阴止汗的功效。用于头痛眩晕,胁痛,腹痛,四肢挛痛,血虚萎黄,月经不调,自汗,盗汗。
葛根:味甘、辛,性凉。归脾、胃经。葛根为豆科植物野葛的干燥根。具有解肌退热,生津,透疹,升阳止泻的功效。用于外感发热头痛、项背强痛,口渴,消渴,麻疹不透,热痢,泄泻;高血压颈项强痛。
芡实:味甘、涩,性平。归脾、肾经。芡实为睡莲科植物芡的干燥成熟种仁。具有益肾固精,补脾止泻,祛湿止带的功效。用于梦遗滑精,遗尿尿频,脾虚久泻,白浊,带下。
桂花:味辛,性温。桂花为木犀科植物木犀的花。花含芳香物质,如γ-癸酸内酯、α-紫罗兰酮、β-紫罗兰酮、反-芳樟醇氧化物、顺-芳樟醇氧化物、芳樟醇、壬醛以及β-水芹烯、橙花醇、牻牛儿醇、二氢-β-紫罗兰酮。具有化痰、散瘀的功效。用于痰饮嘲咳,肠风血痢,疝瘕,牙痛,口臭。
独一味:味甘、苦,性平。为唇形科植物独一味的干燥全草。具有活血止血,祛风止痛,干黄水的功效。用于跌打损伤,外伤出血,风湿痹痛,黄水病。
白前:味辛、苦,性微温。归肺经。为萝藦科植物柳叶白前或芫花叶白前的干燥根茎及根。具有降气,消痰,止咳的功效。用于肺气壅实,咳嗽痰多,胸满喘急。
薏苡仁:味甘、淡,性凉。归脾、胃、肺经。为禾本科植物薏苡的干燥成熟种仁。具有健脾渗湿,除痹止泻,清热排脓的功效。用于水肿,脚气,小便不利,湿痹拘挛,脾虚泄泻,肺痛,肠痈,扁平疣,健脾渗湿,除痹止泻。
水飞蓟:味苦,性凉。归肝、胆经。为菊科植物水飞蓟的干燥成熟果实。具有清热解毒,舒肝利胆的功效。用于肝胆湿热,胁痛,黄疸。
香附:味辛、微苦、微甘,性平。归肝、脾经。为莎草科植物莎草的干燥根茎。具有行气解郁,调经止痛的功效。用于肝郁气滞,胸、胁、脘腹胀痛,消化不良,胸脘痞闷,寒疝腹痛,乳房胀痛,月经不调,经闭痛经。
车前草:味甘,性寒。归肝、肾、肺、小肠经。为车前科植物车前或平车前的干燥全草。具有清热利尿、祛痰、凉血、解毒的功效。用于水肿尿少,热淋涩痛,暑湿泻痢,痰热咳嗽,吐血衄血,痈肿疮毒。
余甘子:味甘、酸、涩,性凉。归肺、胃经。为大戟科植物余甘子的干燥成熟果实。具有清热凉血,消食健胃,生津止咳的功效。用于血热血瘀,消化不良,腹胀,咳嗽,喉痛,口干。
威灵仙:味辛、咸,性温。归膀胱经。为毛茛科植物威灵仙、棉团铁线莲或东北铁线莲的干燥根及根茎。具有祛风除湿,通络止痛的功效。用于风湿痹痛,肢体麻木,筋脉拘挛,屈伸不利,骨硬咽喉。
本发明的有益效果:该虾青素阿胶糕,以雨生红球藻虾青素粉、阿胶、黑芝麻、核桃仁、冰糖和黄酒为基础原料,外加红枣、桂圆、枸杞、葡萄干、玫瑰粉、薄荷等辅料以及多种中草药精制而成。制备时根据诸原料的性质采用不同的处理方式,而且对于使用的中草药,根据诸中草药的药理采用不同的处理,比如将当归、白芍、葛根、香附和威灵仙浸泡后加莲子心和芡实共同煎煮,将薄荷、桂花、独一味和车前草水提后加入玫瑰粉并浓缩,将白前、薏苡仁、水飞蓟和余甘子提取有效成分后与其他有效成分混合等。该虾青素阿胶糕,是在现代营养学的基础上,与中国传统的中医学有机结合,充分利用了天然食物所含的营养成分以及中草药的有效成分,除了含有阿胶等常见的有益成分外,还含有多种中草药有效成分,诸原料作用协同,具有调节生物节律、抗氧化抗衰老、增强人体免疫功能等功效外,还能有效调节睡眠,实现了用保健食品来代替传统药物。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明,但本发明并不局限于此,实施例中的制备方法均为常规制备方法,不再详述。
实施例1:该虾青素阿胶糕,取下述重量份数的原料制备而成(每份取30g):虾青素粉8份、阿胶5份、黑芝麻3份、核桃仁5份、冰糖3份、黄酒13份、红枣4份、桂圆5份、枸杞4份、葡萄干4份、玫瑰粉3份、薄荷4份、莲子心1.5份、当归4份、白芍5份、葛根5份、芡实4份、桂花3份、独一味3份、白前4份、薏苡仁3份、水飞蓟3份、香附3份、车前草4份、余甘子2份、威灵仙3份。
上述虾青素阿胶糕的制备方法,采用如下步骤:
(1)将当归、白芍、葛根、香附和威灵仙切片,置于砂锅内,加入6倍当归、白芍、葛根、香附和威灵仙质量和的纯净水,浸泡5小时后,加入莲子心和芡实,加水煎煮两次,每次煎煮50分钟后过滤,合并两次滤液;
(2)将薄荷、桂花、独一味和车前草制成粗粉,水提两次,水提时每次煮沸1小时后过滤,合并两次滤液,向合并滤液中加入玫瑰粉后混合均匀,静置4小时后加入质量浓度为73%的酒精,充分搅拌,过滤,去除沉淀,在38℃下将去除沉淀后的溶液浓缩至相对密度为1.3的稠膏,然后将稠膏在60℃以下干燥,粉碎成细粉,过70目筛,得粉末;
(3)将白前、薏苡仁、水飞蓟和余甘子粉碎,过50目筛,混匀,将混匀后的混合物料置于中药提取罐中,向中药提取罐中加入9倍混合物料质量的水,提取两次,每次提取70分钟后过滤,合并两次滤液,将合并后的滤液静置过夜,过滤,加入步骤(1)所得滤液,混合均匀,在40℃下浓缩至相对密度为1.3的稠膏,向所得稠膏中添加质量浓度为58%的乙醇溶液,至乙醇的质量浓度为33%时停止添加,搅拌,将加乙醇溶液后的稠膏再次静置过夜后,减压回收乙醇,加入步骤(2)所得粉末,混合均匀,将混匀后得到的无醇浓缩膏置于真空干燥箱中,在60℃的温度下干燥成干浸膏,备用;
(4)在不锈钢托盘的表面平整地铺一层保鲜膜,在保鲜膜表面刷一层香油,备用;
(5)将黑芝麻淘洗两次,晾干,将晾干后的黑芝麻置于炒锅内,文火缓慢加热并不断搅拌,炒至黑芝麻略带香气且用拇指和食指挤压极易破碎时出锅,降温至室温,得炒制黑芝麻,备用;
(6)将核桃仁置于另一炒锅内,文火缓慢加热至核桃仁的温度为40℃时,文火转中火继续炒至用手轻捻核桃仁时内衣极易脱落,停火,出锅,降至室温,得炒制核桃仁,备用;
(7)将红枣和桂圆去核,置于烤箱中,在170℃下烤8分钟,取出,放凉后置于中药粉碎机中,加入步骤(6)所得炒制核桃仁,粉碎,过100目筛,得粉末;
(8)将阿胶置于打粉机中粉碎,过120目筛,过筛后的阿胶粉置于非铁制容器中,加入经过粉碎后的冰糖,放置3天,加入黄酒,放入锅中隔水蒸,大火煮至开锅后转文火慢蒸,熬至挂旗(用木铲盛一些提起时,阿胶成片状挂在铲上,呈一面旗子状慢慢往下掉,挂旗时膏状物的浓度为1.47g/cm3)时加入枸杞和葡萄干,搅拌均匀,继续文火慢蒸30分钟后,加入步骤(3)所得干浸膏和步骤(7)所得粉末,搅拌均匀,继续文火慢蒸18分钟后,加入虾青素粉(为雨生红球藻虾青素粉,购自西安皓源生物技术有限公司)和步骤(5)所得的炒制黑芝麻,顺时针搅拌9分钟,关火,出锅,将出锅后的产物倒在步骤(4)准备好的不锈钢托盘上,压平,放凉至室温,在-6℃的温度下冷冻20小时,以每块质量30g进行切块,包装,即得该虾青素阿胶糕。
用法用量:每天食用两次,每次食用一块,分别于早饭前和晚饭后1小时食用,服用时多喝温水。
实施例2:该虾青素阿胶糕,其活性成分由以下重量的原料制成(每份取15g):虾青素粉12份、阿胶8份、黑芝麻6份、核桃仁9份、冰糖5份、黄酒16份、红枣6份、桂圆7份、枸杞7份、葡萄干6份、玫瑰粉5份、薄荷7份、莲子心2.2份、当归7份、白芍7份、葛根8份、芡实6份、桂花5份、独一味4份、白前6份、薏苡仁5份、水飞蓟6份、香附5份、车前草7份、余甘子3份、威灵仙7份。
制备方法与用法用量同实施例1。
实施例3:该虾青素阿胶糕,其活性成分由以下重量的原料制成(每份取25g):虾青素粉9份、阿胶6份、黑芝麻4份、核桃仁6份、冰糖3.5份、黄酒14份、红枣4.5份、桂圆5.5份、枸杞5份、葡萄干4.5份、玫瑰粉3.5份、薄荷5份、莲子心1.8份、当归5份、白芍5.5份、葛根6份、芡实4.5份、桂花3.5份、独一味3.3份、白前4.5份、薏苡仁3.5份、水飞蓟4份、香附3.5份、车前草5份、余甘子2.3份、威灵仙4份。
制备方法与用法用量同实施例1。
实施例4:该虾青素阿胶糕,其活性成分由以下重量的原料制成(每份取20g):虾青素粉11份、阿胶7份、黑芝麻5份、核桃仁8份、冰糖4.5份、黄酒15份、红枣5.5份、桂圆6.5份、枸杞6份、葡萄干5.5份、玫瑰粉4.5份、薄荷6份、莲子心1.9份、当归6份、白芍6.5份、葛根7份、芡实5.5份、桂花4.5份、独一味3.7份、白前5.5份、薏苡仁4.5份、水飞蓟5份、香附4.5份、车前草6份、余甘子2.7份、威灵仙6份。
制备方法与用法用量同实施例1。
实施例5:该虾青素阿胶糕,其活性成分由以下重量的原料制成(每份取35g):虾青素粉10份、阿胶7份、黑芝麻5份、核桃仁7份、冰糖4份、黄酒15份、红枣5份、桂圆6份、枸杞6份、葡萄干5份、玫瑰粉4份、薄荷6份、莲子心1.9份、当归6份、白芍6份、葛根7份、芡实5份、桂花4份、独一味3.5份、白前5份、薏苡仁4份、水飞蓟5份、香附4份、车前草6份、余甘子2.5份、威灵仙5份。
制备方法与用法用量同实施例1。
试验例:针对本发明所得虾青素阿胶糕,我们分别做了改善睡眠质量的效果实验和增强免疫力的效果实验。
实验1:改善睡眠质量的效果实验
为了验证本发明所得虾青素阿胶糕的改善睡眠的疗效,发明人于2011年5月-2011年11月以小白鼠为实验对象做了改善睡眠的疗效试验。
(一)实验材料
随机取本发明所得虾青素阿胶糕(实施例1-5),戊巴比妥钠、巴比妥钠均由中国医药(集团)上海化学试剂公司提供。
筛选健康的昆明小白鼠210只,体重18~22g,由济南中药研究所提供。在恒温、安静、清洁环境下,分笼饲养。随机分为实验组和对照组(对照组为条件对照组和空白对照组),其中,实验组150只,对照组60只(条件对照组和空白对照组分别为30只),两组在体重、健康状况等方面均无显著性差异(P>0.05),具有可比性。
(二)具体实验方法
实验组:随机取本发明所得虾青素阿胶糕(实施例1-5),切碎,加蒸馏水熬成液态状,每天喂服两次,分别于早饭前和晚饭后1小时,连续喂服30天。对照组:条件对照组,每天喂服等量的其他改善睡眠的保健品(购自山东圣海保健品有限公司),同样分别于早饭前和晚饭后1小时喂服两次,连续喂服30天;空白对照组,每天喂服等量的蒸馏水,同样分别于早饭前和晚饭后1小时喂服两次,连续喂服30天。
1、直接睡眠试验:在末次给药后观察小鼠是否出现睡眠现象,睡眠以翻正反射消失为指标(翻正反射即当小鼠置于背卧位时,能立即翻正身位)。如超过60s不能翻正者,即认为翻正反射消失,进入睡眠。翻正反射恢复即为动物觉醒,翻正反射消失至翻正反射恢复的这段时间为睡眠时间,比较对照组与实验组入睡动物数和睡眠时间。
结果,食用本发明所得虾青素阿胶糕的实验组与食用其他改善睡眠质量的保健品的条件对照组以及空白对照组均没有动物出现翻正反射消失,即全部动物均没有进入睡眠状态,可看出该虾青素阿胶糕和其他改善睡眠质量的保健品都没有直接改善小鼠睡眠的作用,即无明显直接催眠作用。
2、间接睡眠试验
判定标准:根据《保健食品检验与评价技术规范》中的改善睡眠功能检验方法判定标准,若延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验3项实验中2项阳性,且无明显直接催眠作用,可判定该受试样品具有改善睡眠功能的作用。
2.1延长戊巴比妥钠睡眠时间试验:在末次给药20~25分钟后,均对实验组和对照组的动物进行腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg。以翻正反射消失为入睡标志,观察本发明所得虾青素阿胶糕与其他改善睡眠质量的保健品能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。比较实验组与对照组的睡眠时间。
2.2戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验:在末次给药20~25分钟后,均对实验组和对照组的动物进行腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg。观察并记录30分钟内各组入睡动物数(翻正反射消失达到1分钟以上者)。
2.3巴比妥钠睡眠潜伏期试验:在末次给药20~25分钟后,均对实验组和对照组的动物进行腹腔注射巴比妥钠300mg/kg。以翻正反射消失为入睡标志,观察本发明所得虾青素阿胶糕与其他改善睡眠质量的保健品能否缩短巴比妥钠睡眠潜伏期。
采用SPSS 13.0统计软件,睡眠时间的不同组间比较采用方差分析,以多组间方差分析及组间LSD-t检验作统计学处理,睡眠发生率比较采用χ2检验。延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验的具体情况分别见表1、表2、表3所示:
表1延长戊巴比妥钠睡眠时间实验结果(x±s)
从表1可见,食用本发明所得虾青素阿胶糕的实验组显著地延长小鼠戊巴比妥钠的睡眠时间,与同期的食用其他改善睡眠的保健品的条件对照组以及空白对照组相比,均具有显著性差异(P<0.01),表明本发明所得虾青素阿胶糕延长戊巴比妥钠睡眠时间的实验结果为阳性,且比现有的改善睡眠的保健品的疗效更加显著。
表2对戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响
从表2可见,食用本发明所得虾青素阿胶糕与食用其他改善睡眠的保健品的条件对照组以及空白对照组相比,动物的入睡率显著增加(P<0.01)。表明本发明所得虾青素阿胶糕的戊巴比妥钠阈下催眠实验结果为阳性,即说明该虾青素阿胶糕与阈下剂量的戊巴比妥钠有协同催眠作用;而且比现有的其他具有改善睡眠的保健品的效果更加显著。
表3对巴比妥钠睡眠潜伏期的实验结果(x±s)
从表3可见,食用本发明所得虾青素阿胶糕的实验组显著地缩短了小鼠巴比妥钠的睡眠潜伏期,与同期的食用其他改善睡眠的保健品的条件对照组以及空白对照组相比,均具有显著性差异(P<0.01),表明本发明所得虾青素阿胶糕缩短巴比妥钠睡眠潜伏期的实验结果为阳性,且比现有的改善睡眠的保健品的疗效更加显著。
综上可以看出,本发明所得虾青素阿胶糕虽然无明显直接催眠作用,但延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验均为阳性,所以根据《保健食品检验与评价技术规范》中的改善睡眠功能检验方法判定标准,可以得到本发明虾青素阿胶糕具有改善睡眠功能的作用。同时,通过与其他具有改善睡眠功效的保健品的对照,可以看出,本发明虾青素阿胶糕的改善睡眠的效果更加显著,值得广泛推广。
实验2增强免疫力的效果实验
为了验证本发明所得虾青素阿胶糕的增强免疫力的功效,发明人于2011年4月-2012年10月做了对比试验,分别通过测定巨噬细胞的吞噬功能(巨噬细胞是一种位于组织内的白血球,为吞噬细胞,在脊椎动物体内参与非特异性防卫和特异性防卫。主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用,并激活淋巴球或其他免疫细胞,令其对病原体作出反应。巨噬细胞是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象)和外周血淋巴细胞ANAE阳性率来进行免疫力评价。
2.1试验材料
筛选健康的实验兔210只,兔的体格大小、年龄及饲养管理均相近或相同,经方差分析差异不显著(p>0.05)。
2.2试验方法
将筛选的210只健康的实验兔随机分成实验组和对照组两组,其中实验组有150只,随机分成5个小组,每个小组有30只,对照组有60只,随机分成条件对照组和空白对照组,每个小组有30只。实验组的实验兔食用本发明所得虾青素阿胶糕,条件对照组食用等量的其他具有提高免疫力的保健品(如蛋白粉,购自山东圣海保健品有限公司),空白对照组食用等量的纯净水。各组按规定的免疫程序进行免疫,实验组和对照组均自由采食,饲养管理条件相同。各组实验兔喂养观察5个月时试验结束。
2.21腹腔巨噬细胞吞噬功能测定
两组分别于1个月、2个月、3个月、4个月、5个月时对实验兔进行腹腔注射5%蛋白胨,24h后以稀释的灭活卡介苗1mL/只腹腔注射,0.5h后抽取腹腔液,迅速涂在干净灭菌的玻片上,于湿盒内孵育1.0h后,用生理盐水轻轻冲洗,除去未贴壁的细胞,晾干,甲醇固定,抗酸染色后油镜下计数300个巨噬细胞,用以下两个指标来表示吞噬活性:吞噬百分率:(吞噬结核杆菌的腹腔巨噬细胞数/被基数的腹腔巨噬细胞数)×100%。吞噬指数:即每个巨噬细胞吞噬的结核杆菌的平均数(被吞噬结核杆菌数/被记数腹腔巨噬细胞数)。
使用Excel 2003和SPASS 13.0软件包,以单变量方差分析和卡方检验进行统计,数据以平均数和标准差(X±SD)表示,P<0.05为差异显著,P<0.01为差异极显著,具体情况见表4
表4对实验兔腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
经统计学处理实验组和对照组的疗效有显效性差异(p<0.001),说明实验组的疗效效果优于对照组。而且由表4可以看出,食用本发明所得虾青素阿胶糕的实验组对实验兔腹腔巨噬细胞吞噬功能有显著的提高作用,而食用其他提高免疫力的保健品的对照组对实验兔腹腔巨噬细胞吞噬功能远不及实验组。其中,食用实施例5所得虾青素阿胶糕的第5个月时,实验组的吞噬百分率和吞噬指数分别为25.83±2.12和0.91±0.05,而条件对照组的吞噬百分率和吞噬指数分别为18.31±2.04和0.69±0.05,空白对照组的吞噬百分率和吞噬指数分别为15.78±1.88和0.49±0.04。
从整个试验过程来看,食用本发明所得虾青素阿胶糕对实验兔腹腔巨噬细胞吞噬功能远远比空白对照组以及食用其他提高免疫力的保健品的条件对照组的高。这表明,本发明所得虾青素阿胶糕能更好地增强机体的非特异性免疫机能,从而进一步显著提高机体的抵抗力。
2.22外周血液酸性ɑ-醋酸萘酯酶(ANAE)阳性率
(1)原理:正常发育成熟的淋巴细胞胞浆内含有一定含量的酸性ɑ-醋酸萘酯酶,其含量的多少可反映淋巴细胞的功能。
(2)试剂的配制:
2.5%戊二醛固定液:在9m1 0.1mol/L pH值7.4的磷酸缓冲液中加入2.5%戊二醛溶液1ml,混合置4℃冰箱保存备用。
孔雀绿染色液:取孔雀绿1g,加入预温至37℃的蒸馏水100ml,溶解后置冰箱保存备用。
反应液:甲液:KH2P04 9.12g,加蒸馏水至1000ml;乙液:NaHP04 9.49g,加蒸馏水至1000ml)在13ml甲液中加入乙液87ml即得0.065mol/L、pH7.5磷酸缓冲液。将副品红4g加入100m1 2mol/L盐酸中,置37℃水浴中使其溶解,用滤纸过滤后,得副品红溶液;取亚硝酸钠0.2g,溶于5ml蒸馏水中,得亚硝酸钠溶液;取新配置的亚硝酸钠溶液3ml,慢慢加入副品红溶液3ml,边滴边摇,此时有刺激性气体产生,充分混合,得六偶氮副品红液。将ɑ-醋酸萘酯酶2g溶于100ml乙二醇单甲醚中,得ɑ-醋酸萘酯酶溶液。最后,取0.065mol/L、pH7.5磷酸缓冲液89ml,倾入染色缸中,慢慢加入六偶氮副品红液6ml,充分混合后,再慢慢滴入ɑ-醋酸萘酯酶溶液2.5ml,充分混匀,溶液呈均匀混浊,调pH至5.8~6.4,此反应液应在临用前配置。
(3)试验测定操作:
抗凝血离心处理:往离心管中加入淋巴细胞分层液1.5~2ml,用吸管吸取抗凝血约1ml,沿管壁徐徐重叠于分层液上,2000~3000转/分离心20min。管底为粒细胞及红细胞,上层血浆另取小离心管加入3~5ml Hank's液(是一种平衡盐溶液),用胶头滴管吸取离心后的淋巴细胞层(离心后在血浆与分层液间形成乳白色细胞层),混合,1000~1500r/min离心10min,弃上清,轻振,使细胞重悬,再加Hank’s液离心洗涤,共三次,弃上清。
制片:用玻璃棒蘸取少量上述离心后所得的淋巴细胞,涂抹于载玻片上。涂片干燥后加1滴2.5%戊二醛,4℃下固定10min,流水充分冲洗,将玻片置于37℃的反应液中,37℃孵育l~1.5h,取出后以流水冲洗,吹干。将上述玻片吹干,滴加1%孔雀绿复染30s,流水冲洗、吹干。
再10×40倍显微镜下观察,计数。每份标本至少计数200个淋巴细胞,分别记下T、B淋巴细胞数,计算ANAE淋巴细胞阳性百分率(%)。
使用Excel2003和SPASS 13.0软件包,以单变量方差分析和卡方检验进行统计,数据以平均数和标准差(X±SD)表示,P<0.05为差异显著,P<0.01为差异极显著,具体情况见表5
表5对实验兔外周血淋巴细胞ANAE阳性率(%)的影响(X±SD)
经统计学处理实验组和对照组的疗效有显效性差异(p<0.001),说明实验组的疗效效果优于对照组。而且由表5可以看出,食用本发明所得虾青素阿胶糕的实验组对实验兔的外周血淋巴细胞ANAE阳性率有显著的提高作用,而空白对照组和食用其他具有免疫力的保健品的条件对照组对实验兔的外周血淋巴细胞ANAE阳性率远不及实验组。其中,食用实施例5所得虾青素阿胶糕第5个月时,实验组对实验兔的外周血淋巴细胞ANAE阳性率为37.08±1.76,而空白对照组和食用其他具有免疫力的保健品的条件对照组仅为31.73±1.96和33.56±2.11。
从整个试验过程来看,食用本发明所得虾青素阿胶糕对实验兔的外周血淋巴细胞ANAE阳性率的提升作用远远比空白对照组和食用其他具有提高免疫力的保健品的高。这表明,本发明虾青素阿胶糕能更好地增强机体的细胞免疫机能,从而进一步显著提高机体的抵抗力。
最后应说明的是,实施例只是本发明最优的具体实施方式而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。