本发明涉及一种抑制黄曲霉菌的复合酸化剂，还涉及一种上述抑制黄曲霉菌的复合酸化剂的制备方法。
背景技术：
黄曲霉，半知菌类，一种常见腐生真菌。多见于发霉的粮食、粮制品及其它霉腐的有机物上。黄曲霉菌落生长较快，结构疏松，表面灰绿色，背面无色或略呈褐色。菌体有许多复杂的分枝菌丝构成。营养菌丝具有分隔；气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗，顶端产生烧瓶形或近球形顶囊，表面产生许多小梗(一般为双层)，小梗上着生成串的表面粗糙的球形分生孢子。分生孢子梗、顶囊、小梗和分生孢子合成孢子头，可用于产生淀粉酶、蛋白酶和磷酸二酯酶等，也是酿造工业中的常见菌种。
1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致肝癌甚至死亡。黄曲霉毒素中毒主要对动物肝脏的伤害，受伤害的个体因动物种类，年龄，性别和营养状态而异。研究结果表明，黄曲霉毒素可导致肝功能下降，降低牛奶产量和产蛋率，并使动物的免疫力降低，易受有害微生物的感染。此外，长期食用含低浓度黄曲霉毒素的饲料也可导致胚胎内中毒。通常年幼的动物对黄曲霉毒素更敏感。黄曲霉毒素的临床表现为消化系统功能紊乱，降低生育能力，降低饲料利用率，贫血等。黄曲霉毒素不仅能够使奶牛的产奶量下降，而且还使牛奶中含有转型的黄曲霉毒素m1和m2。据美国农业经济学家统计，由于食用黄曲霉毒素污染的饲料，每年至少要使美国畜牧业遭受10％的经济损失。在中国，黄曲霉同样给畜牧业带来严重的损失。因此，开发出一种抑制黄曲霉菌的复合酸化剂具有重要的意义。
技术实现要素：
本发明的目的之一是提供一种抑制黄曲霉菌的复合酸化剂，能有效抑制黄曲霉菌。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案，一种抑制黄曲霉菌的复合酸化剂，其制备方法如下：
(1)按照配比称取以下质量份数的各组分：青蒿10-15份、败酱草10-15份、浒苔8-10份、枇杷叶15-20份、艾叶3-5份、姜黄1-2份；
(2)将称量好的青蒿、败酱草、浒苔分别研磨粉碎，混合均匀，向混合物中加入质量为混合物总质量的1.5-2倍的0.10-0.15mol/L的柠檬酸溶液，密封，然后放振荡器中以100-150r/min的转速常温震荡10-12h；
(3)将称量好的枇杷叶刷去绒毛，用水洗净，切丝，晒干，将枇杷叶丝放入砂锅中，加入质量为枇杷叶丝质量的10倍的清水，常温浸泡4-6小时，大火烧开后文火煎煮20-25分钟，冷却至室温，再加入质量为枇杷叶丝质量的1.5-2倍的甲酸，搅匀，盖上盖，焖50-60分钟；
(4)将称量好的艾叶和姜黄混合，研成碎末，加入质量为艾叶和姜黄总质量的6倍的清水，放入水浴震荡锅内70-80℃、100-150r/min浸泡30-40分钟，冷却至50-60℃；
(5)当步骤(4)的混匀物冷却至50-60℃时，向其中加入乳酸，乳酸的添加量为乳酸与步骤(4)所得的混匀物的体积比为1:10-15，混匀，从水浴震荡锅中取出，密封，常温条件下焖12小时；
(6)将步骤(2)、步骤(3)以及步骤(5)所得的产物混合均匀，超声波震荡处理15分钟，再放振荡器中以100-150r/min的转速常温震荡12h，再将混合产物放入离心机中，以5000r/min离心分离5-10min，取所得上清液，即为目标产物。
优选地，步骤(1)中，称取的各组分的质量份数如下：青蒿15份、败酱草12份、浒苔9份、枇杷叶16份、艾叶4份、姜黄2份。
优选地，步骤(1)中，称取的各组分的质量份数如下：青蒿12份、败酱草15份、浒苔8份、枇杷叶18份、艾叶5份、姜黄1份。
优选地，乳酸与步骤(4)所得的混匀物的体积比为1:10-12。
本发明还公开了一种上述制备方法所制得的复合酸化剂。
本发明所制得的复合酸化剂健康安全，对动物和人无毒副作用，有利于人体和动物体吸收，可有效抑制黄曲霉菌，减少了抗生素的使用，应用于畜禽养殖时可有利于食品安全。按照本发明的配方比例和制备方法所制得的复合酸化剂可使本发明的各原料组分之间充分的结合和反应，所制得的复合酸化剂能很好的发挥各组分的协同作用，对黄曲霉菌具有显著的抑制效果，添加到食物或饲料中可以减少黄曲霉菌的危害，有利于人体或养殖动物的健康。在养殖动物的饲料中添加本发明的复合酸化剂，可降低黄曲霉菌的影响，有利于养殖动物的健康生长，提高养殖收益。
本发明还公开了一种上述复合酸化剂作为养殖动物的饲料添加剂在抑制黄曲霉菌时的应用，其用法用量为：每1kg饲料中加入5-20ml本发明所制得的抑制黄曲霉菌的复合酸化剂。
具体来说本发明与现有技术相比可产生如下积极效果：本发明所制得的复合酸化剂健康安全，对动物和人无毒副作用，有利于人体和动物体吸收，可有效抑制黄曲霉菌，减少了抗生素的使用，应用于畜禽养殖时可有利于食品安全。按照本发明的配方比例和制备方法所制得的复合酸化剂可使本发明的各原料组分之间充分的结合和反应，所制得的复合酸化剂能很好的发挥各组分的协同作用，对黄曲霉菌具有显著的抑制效果，添加到食物或饲料中可以减少黄曲霉菌的危害，有利于人体或养殖动物的健康。在养殖动物的饲料中添加本发明的复合酸化剂，可降低黄曲霉菌的影响，有利于养殖动物的健康生长，提高养殖收益。
具体实施方式
以下的实施例是为了便于更好地理解本发明，但并不用于限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
本发明所用的甲酸(分析纯)购自天津市凯信化学工业有限公司，乳酸(分析纯)购自莱阳市康德化工有限公司；柠檬酸(分析纯)购自上海埃比化学试剂有限公司，将购买的柠檬酸配制为所需浓度的柠檬酸溶液。
实施例1
一种抑制黄曲霉菌的复合酸化剂，其制备方法如下：
(1)按照配比称取以下质量份数的各组分：青蒿15份、败酱草12份、浒苔9份、枇杷叶16份、艾叶4份、姜黄2份；
(2)将称量好的青蒿、败酱草、浒苔分别研磨粉碎，混合均匀，向混合物中加入质量为混合物总质量的1.8倍的0.12mol/L的柠檬酸溶液，密封，然后放振荡器中以120r/min的转速常温震荡10h；
(3)将称量好的枇杷叶刷去绒毛，用水洗净，切丝，晒干，将枇杷叶丝放入砂锅中，加入质量为枇杷叶丝质量的10倍的清水，常温浸泡4小时，大火烧开后文火煎煮25分钟，冷却至室温，再加入质量为枇杷叶丝质量的2倍的甲酸，搅匀，盖上盖，焖60分钟；
(4)将称量好的艾叶和姜黄混合，研成碎末，加入质量为艾叶和姜黄总质量的6倍的清水，放入水浴震荡锅内70-80℃、110r/min浸泡40分钟，冷却至50-60℃；
(5)当步骤(4)的混匀物冷却至50-60℃时，向其中加入乳酸，乳酸的添加量为乳酸与步骤(4)所得的混匀物的体积比为1:10，混匀，从水浴震荡锅中取出，密封，常温条件下焖12小时；
(6)将步骤(2)、步骤(3)以及步骤(5)所得的产物混合均匀，超声波震荡处理15分钟，再放振荡器中以100r/min的转速常温震荡12h，再将混合产物放入离心机中，以5000r/min离心分离5-10min，取所得上清液，即为目标产物。
一种上述制备方法所制得的复合酸化剂。
实施例2
一种抑制黄曲霉菌的复合酸化剂，其制备方法如下：
(1)按照配比称取以下质量份数的各组分：青蒿12份、败酱草15份、浒苔8份、枇杷叶18份、艾叶5份、姜黄1份；
(2)将称量好的青蒿、败酱草、浒苔分别研磨粉碎，混合均匀，向混合物中加入质量为混合物总质量的2倍的0.10mol/L的柠檬酸溶液，密封，然后放振荡器中以100r/min的转速常温震荡12h；
(3)将称量好的枇杷叶刷去绒毛，用水洗净，切丝，晒干，将枇杷叶丝放入砂锅中，加入质量为枇杷叶丝质量的10倍的清水，常温浸泡5小时，大火烧开后文火煎煮25分钟，冷却至室温，再加入质量为枇杷叶丝质量的1.6倍的甲酸，搅匀，盖上盖，焖60分钟；
(4)将称量好的艾叶和姜黄混合，研成碎末，加入质量为艾叶和姜黄总质量的6倍的清水，放入水浴震荡锅内70-80℃、120r/min浸泡35分钟，冷却至50-60℃；
(5)当步骤(4)的混匀物冷却至50-60℃时，向其中加入乳酸，乳酸的添加量为乳酸与步骤(4)所得的混匀物的体积比为1:12，混匀，从水浴震荡锅中取出，密封，常温条件下焖12小时；
(6)将步骤(2)、步骤(3)以及步骤(5)所得的产物混合均匀，超声波震荡处理15分钟，再放振荡器中以150r/min的转速常温震荡12h，再将混合产物放入离心机中，以5000r/min离心分离5-10min，取所得上清液，即为目标产物。
一种上述制备方法所制得的复合酸化剂。
实施例3
一种抑制黄曲霉菌的复合酸化剂，其制备方法如下：
(1)按照配比称取以下质量份数的各组分：青蒿14份、败酱草10份、浒苔9份、枇杷叶20份、艾叶3份、姜黄2份；
(2)将称量好的青蒿、败酱草、浒苔分别研磨粉碎，混合均匀，向混合物中加入质量为混合物总质量的1.6倍的0.15mol/L的柠檬酸溶液，密封，然后放振荡器中以150r/min的转速常温震荡10h；
(3)将称量好的枇杷叶刷去绒毛，用水洗净，切丝，晒干，将枇杷叶丝放入砂锅中，加入质量为枇杷叶丝质量的10倍的清水，常温浸泡6小时，大火烧开后文火煎煮20分钟，冷却至室温，再加入质量为枇杷叶丝质量的1.5倍的甲酸，搅匀，盖上盖，焖60分钟；
(4)将称量好的艾叶和姜黄混合，研成碎末，加入质量为艾叶和姜黄总质量的6倍的清水，放入水浴震荡锅内70-80℃、100r/min浸泡40分钟，冷却至50-60℃；
(5)当步骤(4)的混匀物冷却至50-60℃时，向其中加入乳酸，乳酸的添加量为乳酸与步骤(4)所得的混匀物的体积比为1:11，混匀，从水浴震荡锅中取出，密封，常温条件下焖12小时；
(6)将步骤(2)、步骤(3)以及步骤(5)所得的产物混合均匀，超声波震荡处理15分钟，再放振荡器中以130r/min的转速常温震荡12h，再将混合产物放入离心机中，以5000r/min离心分离5-10min，取所得上清液，即为目标产物。
一种上述制备方法所制得的复合酸化剂。
实施例4
一种抑制黄曲霉菌的复合酸化剂，其制备方法如下：
(1)按照配比称取以下质量份数的各组分：青蒿11份、败酱草11份、浒苔8份、枇杷叶19份、艾叶4份、姜黄1份；
(2)将称量好的青蒿、败酱草、浒苔分别研磨粉碎，混合均匀，向混合物中加入质量为混合物总质量的1.5倍的0.14mol/L的柠檬酸溶液，密封，然后放振荡器中以110r/min的转速常温震荡12h；
(3)将称量好的枇杷叶刷去绒毛，用水洗净，切丝，晒干，将枇杷叶丝放入砂锅中，加入质量为枇杷叶丝质量的10倍的清水，常温浸泡5小时，大火烧开后文火煎煮25分钟，冷却至室温，再加入质量为枇杷叶丝质量的1.8倍的甲酸，搅匀，盖上盖，焖50分钟；
(4)将称量好的艾叶和姜黄混合，研成碎末，加入质量为艾叶和姜黄总质量的6倍的清水，放入水浴震荡锅内70-80℃、150r/min浸泡30分钟，冷却至50-60℃；
(5)当步骤(4)的混匀物冷却至50-60℃时，向其中加入乳酸，乳酸的添加量为乳酸与步骤(4)所得的混匀物的体积比为1:14，混匀，从水浴震荡锅中取出，密封，常温条件下焖12小时；
(6)将步骤(2)、步骤(3)以及步骤(5)所得的产物混合均匀，超声波震荡处理15分钟，再放振荡器中以120r/min的转速常温震荡12h，再将混合产物放入离心机中，以5000r/min离心分离5-10min，取所得上清液，即为目标产物。
一种上述制备方法所制得的复合酸化剂。
实施例5
一种抑制黄曲霉菌的复合酸化剂，其制备方法如下：
(1)按照配比称取以下质量份数的各组分：青蒿10份、败酱草14份、浒苔10份、枇杷叶15份、艾叶5份、姜黄2份；
(2)将称量好的青蒿、败酱草、浒苔分别研磨粉碎，混合均匀，向混合物中加入质量为混合物总质量的1.7倍的0.13mol/L的柠檬酸溶液，密封，然后放振荡器中以140r/min的转速常温震荡10h；
(3)将称量好的枇杷叶刷去绒毛，用水洗净，切丝，晒干，将枇杷叶丝放入砂锅中，加入质量为枇杷叶丝质量的10倍的清水，常温浸泡6小时，大火烧开后文火煎煮20分钟，冷却至室温，再加入质量为枇杷叶丝质量的1.7倍的甲酸，搅匀，盖上盖，焖50-60分钟；
(4)将称量好的艾叶和姜黄混合，研成碎末，加入质量为艾叶和姜黄总质量的6倍的清水，放入水浴震荡锅内70-80℃、140r/min浸泡35分钟，冷却至50-60℃；
(5)当步骤(4)的混匀物冷却至50-60℃时，向其中加入乳酸，乳酸的添加量为乳酸与步骤(4)所得的混匀物的体积比为1:15，混匀，从水浴震荡锅中取出，密封，常温条件下焖12小时；
(6)将步骤(2)、步骤(3)以及步骤(5)所得的产物混合均匀，超声波震荡处理15分钟，再放振荡器中以110r/min的转速常温震荡12h，再将混合产物放入离心机中，以5000r/min离心分离5-10min，取所得上清液，即为目标产物。
一种上述制备方法所制得的复合酸化剂。
实施例6
一种抑制黄曲霉菌的复合酸化剂，其制备方法如下：
(1)按照配比称取以下质量份数的各组分：青蒿10份、败酱草12份、浒苔9份、枇杷叶18份、艾叶3份、姜黄1份；
(2)将称量好的青蒿、败酱草、浒苔分别研磨粉碎，混合均匀，向混合物中加入质量为混合物总质量的2倍的0.10mol/L的柠檬酸溶液，密封，然后放振荡器中以130r/min的转速常温震荡12h；
(3)将称量好的枇杷叶刷去绒毛，用水洗净，切丝，晒干，将枇杷叶丝放入砂锅中，加入质量为枇杷叶丝质量的10倍的清水，常温浸泡5小时，大火烧开后文火煎煮20分钟，冷却至室温，再加入质量为枇杷叶丝质量的1.8倍的甲酸，搅匀，盖上盖，焖60分钟；
(4)将称量好的艾叶和姜黄混合，研成碎末，加入质量为艾叶和姜黄总质量的6倍的清水，放入水浴震荡锅内70-80℃、130r/min浸泡30分钟，冷却至50-60℃；
(5)当步骤(4)的混匀物冷却至50-60℃时，向其中加入乳酸，乳酸的添加量为乳酸与步骤(4)所得的混匀物的体积比为1:13，混匀，从水浴震荡锅中取出，密封，常温条件下焖12小时；
(6)将步骤(2)、步骤(3)以及步骤(5)所得的产物混合均匀，超声波震荡处理15分钟，再放振荡器中以140r/min的转速常温震荡12h，再将混合产物放入离心机中，以5000r/min离心分离5-10min，取所得上清液，即为目标产物。
一种上述制备方法所制得的复合酸化剂。
抑菌实验
培养基：察氏培养基，加热溶解，分装后121℃灭菌15-20min。
菌种为：黄曲霉菌(ATCC28539)，购自北纳创联生物技术研究院。
菌悬液制备：用接种环挑取3-4环培养5天左右的黄曲霉菌孢子，置于10ml带无菌玻璃珠的无菌水中，采用活菌计数法测定菌数，制成菌体浓度为106-107CFU/ml的均匀菌悬液。
抑菌圈实验：取0.1ml菌悬液滴入察氏培养基，涂布均匀，即为含菌平板。实验组处理如下：用灭菌去离子水分别将本发明实施例1-实施例6所制得的抑制黄曲霉菌的复合酸化剂溶解稀释至体积百分比为2％，将灭菌滤纸片(d＝6mm)分别用体积百分比为2％的本发明实施例1-实施例6所制得的抑制黄曲霉菌的复合酸化剂浸泡1h，取出分别贴于各处理组的含菌平板的琼脂表面中央。对照组处理如下：将灭菌滤纸片(d＝6mm)用灭菌去离子水浸泡1h，取出贴于含菌平板的琼脂表面中央。每个实验组和对照组分别设置3个平行。将各处理组的培养皿置于28℃条件下恒温培养，倒置培养5天后用游标卡尺(精度为0.02mm)测量抑菌圈大小，计算平均值，并记录。
无抑菌圈以“-”表示；
抑菌圈直径7-9mm为轻度抑菌，以“+”表示；
抑菌圈直径10～15mm为中度抑菌，以“++”表示；
抑菌圈直径＞15mm为高度抑菌，以“+++”表示；
实验结果见表1：
表1本发明的抑制黄曲霉菌的复合酸化剂对黄曲霉的抑制效果
由表1可知，本发明的抑制黄曲霉菌的复合酸化剂对黄曲霉具有显著的抑菌效果。
最低抑菌浓度实验
培养基：察氏培养基，加热溶解，分装后121℃灭菌15-20min。
菌种为：黄曲霉菌(ATCC28539)，购自北纳创联生物技术研究院。
菌悬液制备：用接种环挑取3-4环培养5天左右的黄曲霉菌孢子，置于10ml带无菌玻璃珠的无菌水中，采用活菌计数法测定菌数，制成菌体浓度为106-107CFU/ml的均匀菌悬液。
将本发明实施例1-实施例6的抑制黄曲霉菌的复合酸化剂用灭菌去离子水分别进行50倍、100倍、200倍、400倍、800倍、1000倍、1500倍稀释。取0.1ml菌悬液滴入已灭菌冷却凝固的培养基中，涂布均匀，得含菌平板。吸取各稀释液0.1ml，于无菌条件下涂布到含菌平板的琼脂表面，倒置培养5天(培养温度28℃)，以不生长菌的样品的浓度为抑制黄曲霉菌的复合酸化剂的最低抑菌浓度(MIC)。实验结果见下表(表2)：
表2本发明的抑制黄曲霉菌的复合酸化剂对黄曲霉的MIC
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进应视为本发明的保护范围。