一种乳酸菌猪用复合预混料及其制备方法与流程

文档序号:11255447阅读:347来源:国知局

本发明涉及一种乳酸菌猪用复合预混料及其制备方法,属于饲料技术领域。



背景技术:

随着人民物质生活水平的提高,对动物蛋白质的需求量越来越大.从而促进了养殖业和饲料工业的迅速发展。据各方面研究预测,我国到21世纪30年代。人口将由13亿增加到16亿,粮食总产量由5亿吨增长到7.2亿吨。其实际用于饲料量将由2.0亿吨增长到3.6亿吨。,到2030年,按16亿人口人均日消费动物性蛋白质25g计算,届时,全同至少约需消费1460万吨饲用蛋白质,其中尤其是赖氨酸、蛋氨酸等限制性氨基酸缺口更大。

近年来,随着许多国家限制和禁止使用抗生素以及饲料资源的日趋紧张,寻找高效、生态健康型饲料成为当务之急。乳酸菌是应用最早、最广泛的益生菌,是一类可利用碳水化合物发酵产生大量乳酸的细菌总称,且被广泛应用于乳制品等发酵食品和医药保健制品中。随着乳酸菌自身优良特性被不断深入了解,其在饲料领域的应用也具有巨大潜力。乳酸菌作为替代抗生素的新型饲料发酵剂,具有益生菌的效用,如维持动物胃肠道菌群平衡、提高机体免疫水平、促进动物生长和改善环境,且具有无残留、不产生耐药性和无毒害作用等优点,进而确保人类健康与生态环境的安全,同时,乳酸菌发酵饲料作为功能性饲料,其还具有气味香、适口性好、饲喂简单方便、消化率高、功效稳定等优势,具有良好的生产和应用价值。

乳酸菌应用于畜牧生产中已有多年,目前多数的产品为液体培养物,效果单一,达不到大量添加活菌剂于饲料的目的。



技术实现要素:

本发明的目的是提供一种乳酸菌猪用复合预混料及其制备方法,在原料中添加由特殊工艺制得的乳酸菌冻干粉,不仅可以改善肠道功能,减少氨气排放,还可以有驱虫作用,增强机体免疫力,提高机体应激性,改善猪肉嫩度,使熟肉的剪切力降低。

一种乳酸菌猪用复合预混料,由下列质量份数的原料制成:维生素20-30份、叶酸2-4份、泛酸钙9-11份、烟酸5-6份、无机矿物质7-9份、磷酸氢钙2-4份、氯化钠10-14份、赖氨酸15-20份、乳酸菌冻干粉15-20份、植酸酶7-9份、载体40-50份。

制备方法为:将所有原料混合均匀,即得。

所述的乳酸菌冻干粉的制备方法为:

(1)将植物乳杆菌进行菌种活化至三级种,培养基为常规乳酸菌培养基,培养方法为常规乳酸菌培养法;

(2)用发酵罐将活化好的植物乳杆菌进行发酵,每罐装发酵液20-30l,每1000ml发酵液组成为:蛋白胨15g,酵母膏15g,葡萄糖20g,磷酸二氢钾4g,吐温8010g,番茄汁100ml,搅匀后加入15ml中草药提取物,混合均匀后调ph至7.0,用水定容至1000ml,于121℃灭菌15min,冷至35℃,进行接种发酵;

(3)将活化好的植物乳杆菌按其发酵液总体积的10-20%体积接种量进行不通气发酵,罐压用氦气和氧气的混合气体维持,混合气体中氦气的体积比为1-3%;

(4)发酵参数:罐压0.01-0.10mpa、搅拌速度20-40r/min、温度37℃、ph5.5-6.5,发酵时间为15-20小时;

(5)发酵结束离心收集菌液,除去上清液得乳酸菌菌泥,将菌泥置于50-60℃的含磁场作用的恒温水浴中,磁场强度为0.4-0.6tb,同时用60w的红外灯泡垂直照射,处理30-40min,得到预处理后的菌泥;

(6)把预处理后的菌泥按菌泥总质量的重量百分比加入:10-12%甘露醇、10-12%葡聚糖、5-8%赖氨酸、5-8%球蛋白、2-3%明胶、0.5-1.5%茶多酚、0.5-1.5%植酸,混合均匀,得到菌泥混合物;

(7)把菌泥混合物放入真空冻干机中冻干,先在-10℃条件下冻干20-30min,再在-50℃条件下冻干1-2h,最后在-80℃条件下冻干2-3h,冻干后研磨过筛得到乳酸菌冻干粉。

其中,中草药提取物由下列质量份数的原料制成:紫苏14-16份、香橼9-11份、莱菔子9-11份、昆布5-6份。

其中,中草药提取物的制备方法为:

(1)取紫苏和昆布分别粉碎,混合,用95%乙醇-丙酮混合液50-60℃浸提80-90min,料液比为1g:10-12ml,95%乙醇和丙酮的体积比为10:3-5,过滤,得到滤液ⅰ;

(2)取香橼粉碎,用60%乙醇70-80℃回流提取30-40min,料液比为1g:14-16ml,过滤,得到滤液ⅱ;

(3)把滤液ⅱ用相等体积的氯仿进行萃取,分离得到水层;

(4)把莱菔子粉碎,加入至滤液ⅰ中超声提取20-30min,过滤,得滤液ⅲ;

(5)把(3)步骤得到的水层和滤液ⅲ混合,离心分离,取上清液,即为中草药提取物。

所述的维生素由等质量的维生素a、维生素d3、维生素e、维生素k3、维生素b1、维生素b2、维生素b6组成。

所述的无机矿物质由等质量的硫酸铜、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、碘化钾、氯化钴组成。

所述的载体由等质量的玉米粉、稻壳粉、膨润土、沸石组成。

本发明制得的复合预混料在日粮中的添加量为5%。

植物乳杆菌可以在北京北纳创联生物技术研究院购买。

本发明的优点在于:

原料中添加多种微量元素、氨基酸及精选饲料酶,同时还添加乳酸菌冻干粉,乳酸菌冻干粉在培养过程中采用添加中药提取物的培养基,通入少量稀有气体,得到的菌泥经过磁场和红外光的预处理,添加特定的保护剂,采用阶段降温的冻干工艺,联合作用,制得的复合预混料不仅可以改善肠道功能,减少氨气排放,还可以有驱虫作用,增强机体免疫力,提高机体应激性,改善猪肉嫩度,使熟肉的剪切力降低。

具体实施例:

实施例1:

一种乳酸菌猪用复合预混料,由下列质量份数的原料制成:维生素20份、叶酸2份、泛酸钙9份、烟酸5份、无机矿物质7份、磷酸氢钙2份、氯化钠10份、赖氨酸15份、乳酸菌冻干粉15份、植酸酶7份、载体40份。

制备方法为:将所有原料混合均匀,即得。

所述的乳酸菌冻干粉的制备方法为:

(1)将植物乳杆菌进行菌种活化至三级种,培养基为常规乳酸菌培养基,培养方法为常规乳酸菌培养法;

(2)用发酵罐将活化好的植物乳杆菌进行发酵,每罐装发酵液20l,每1000ml发酵液组成为:蛋白胨15g,酵母膏15g,葡萄糖20g,磷酸二氢钾4g,吐温8010g,番茄汁100ml,搅匀后加入15ml中草药提取物,混合均匀后调ph至7.0,用水定容至1000ml,于121℃灭菌15min,冷至35℃,进行接种发酵;

(3)将活化好的植物乳杆菌按其发酵液总体积的10%体积接种量进行不通气发酵,罐压用氦气和氧气的混合气体维持,混合气体中氦气的体积比为1%;

(4)发酵参数:罐压0.01mpa、搅拌速度20r/min、温度37℃、ph5.5,发酵时间为15小时;

(5)发酵结束离心收集菌液,除去上清液得乳酸菌菌泥,将菌泥置于50℃的含磁场作用的恒温水浴中,磁场强度为0.4tb,同时用60w的红外灯泡垂直照射,处理30min,得到预处理后的菌泥;

(6)把预处理后的菌泥按菌泥总质量的重量百分比加入:10%甘露醇、10%葡聚糖、5%赖氨酸、5%球蛋白、2%明胶、0.5%茶多酚、0.5%植酸,混合均匀,得到菌泥混合物;

(7)把菌泥混合物放入真空冻干机中冻干,先在-10℃条件下冻干20min,再在-50℃条件下冻干1h,最后在-80℃条件下冻干2h,冻干后研磨过筛得到乳酸菌冻干粉。

其中,中草药提取物由下列质量份数的原料制成:紫苏14份、香橼9份、莱菔子9份、昆布5份。

其中,中草药提取物的制备方法为:

(1)取紫苏和昆布分别粉碎,混合,用95%乙醇-丙酮混合液50℃浸提80min,料液比为1g:10ml,95%乙醇和丙酮的体积比为10:3,过滤,得到滤液ⅰ;

(2)取香橼粉碎,用60%乙醇70℃回流提取30min,料液比为1g:14ml,过滤,得到滤液ⅱ;

(3)把滤液ⅱ用相等体积的氯仿进行萃取,分离得到水层;

(4)把莱菔子粉碎,加入至滤液ⅰ中超声提取20min,过滤,得滤液ⅲ;

(5)把(3)步骤得到的水层和滤液ⅲ混合,离心分离,取上清液,即为中草药提取物。

所述的维生素由等质量的维生素a、维生素d3、维生素e、维生素k3、维生素b1、维生素b2、维生素b6组成。

所述的无机矿物质由等质量的硫酸铜、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、碘化钾、氯化钴中组成。

所述的载体由等质量的玉米粉、稻壳粉、膨润土、沸石组成。

实施例2:

一种乳酸菌猪用复合预混料,由下列质量份数的原料制成:维生素25份、叶酸3份、泛酸钙10份、烟酸5.5份、无机矿物质8份、磷酸氢钙3份、氯化钠12份、赖氨酸18份、乳酸菌冻干粉18份、植酸酶8份、载体45份。

制备方法为:将所有原料混合均匀,即得。

所述的乳酸菌冻干粉的制备方法为:

(1)将植物乳杆菌进行菌种活化至三级种,培养基为常规乳酸菌培养基,培养方法为常规乳酸菌培养法;

(2)用发酵罐将活化好的植物乳杆菌进行发酵,每罐装发酵液25l,每1000ml发酵液组成为:蛋白胨15g,酵母膏15g,葡萄糖20g,磷酸二氢钾4g,吐温8010g,番茄汁100ml,搅匀后加入15ml中草药提取物,混合均匀后调ph至7.0,用水定容至1000ml,于121℃灭菌15min,冷至35℃,进行接种发酵;

(3)将活化好的植物乳杆菌按其发酵液总体积的15%体积接种量进行不通气发酵,罐压用氦气和氧气的混合气体维持,混合气体中氦气的体积比为2%;

(4)发酵参数:罐压0.05mpa、搅拌速度30r/min、温度37℃、ph6,发酵时间为18小时;

(5)发酵结束离心收集菌液,除去上清液得乳酸菌菌泥,将菌泥置于55℃的含磁场作用的恒温水浴中,磁场强度为0.5tb,同时用60w的红外灯泡垂直照射,处理35min,得到预处理后的菌泥;

(6)把预处理后的菌泥按菌泥总质量的重量百分比加入:11%甘露醇、11%葡聚糖、6%赖氨酸、6%球蛋白、2.5%明胶、1%茶多酚、1%植酸,混合均匀,得到菌泥混合物;

(7)把菌泥混合物放入真空冻干机中冻干,先在-10℃条件下冻干25min,再在-50℃条件下冻干1.5h,最后在-80℃条件下冻干2.5h,冻干后研磨过筛得到乳酸菌冻干粉。

其中,中草药提取物由下列质量份数的原料制成:紫苏15份、香橼10份、莱菔子10份、昆布5.5份。

其中,中草药提取物的制备方法为:

(1)取紫苏和昆布分别粉碎,混合,用95%乙醇-丙酮混合液55℃浸提85min,料液比为1g:11ml,95%乙醇和丙酮的体积比为10:4,过滤,得到滤液ⅰ;

(2)取香橼粉碎,用60%乙醇75℃回流提取35min,料液比为1g:15ml,过滤,得到滤液ⅱ;

(3)把滤液ⅱ用相等体积的氯仿进行萃取,分离得到水层;

(4)把莱菔子粉碎,加入至滤液ⅰ中超声提取25min,过滤,得滤液ⅲ;

(5)把(3)步骤得到的水层和滤液ⅲ混合,离心分离,取上清液,即为中草药提取物。

所述的维生素由等质量的维生素a、维生素d3、维生素e、维生素k3、维生素b1、维生素b2、维生素b6组成。

所述的无机矿物质由等质量的硫酸铜、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、碘化钾、氯化钴中组成。

所述的载体由等质量的玉米粉、稻壳粉、膨润土、沸石组成。

实施例3:

一种乳酸菌猪用复合预混料,由下列质量份数的原料制成:维生素20份、叶酸4份、泛酸钙9份、烟酸6份、无机矿物质7份、磷酸氢钙4份、氯化钠10份、赖氨酸20份、乳酸菌冻干粉15份、植酸酶9份、载体40份。

制备方法为:将所有原料混合均匀,即得。

所述的乳酸菌冻干粉的制备方法为:

(1)将植物乳杆菌进行菌种活化至三级种,培养基为常规乳酸菌培养基,培养方法为常规乳酸菌培养法;

(2)用发酵罐将活化好的植物乳杆菌进行发酵,每罐装发酵液20l,每1000ml发酵液组成为:蛋白胨15g,酵母膏15g,葡萄糖20g,磷酸二氢钾4g,吐温8010g,番茄汁100ml,搅匀后加入15ml中草药提取物,混合均匀后调ph至7.0,用水定容至1000ml,于121℃灭菌15min,冷至35℃,进行接种发酵;

(3)将活化好的植物乳杆菌按其发酵液总体积的20%体积接种量进行不通气发酵,罐压用氦气和氧气的混合气体维持,混合气体中氦气的体积比为1%;

(4)发酵参数:罐压0.01mpa、搅拌速度40r/min、温度37℃、ph5.5,发酵时间为20小时;

(5)发酵结束离心收集菌液,除去上清液得乳酸菌菌泥,将菌泥置于50℃的含磁场作用的恒温水浴中,磁场强度为0.6tb,同时用60w的红外灯泡垂直照射,处理30min,得到预处理后的菌泥;

(6)把预处理后的菌泥按菌泥总质量的重量百分比加入:10%甘露醇、12%葡聚糖、5%赖氨酸、8%球蛋白、2%明胶、1.5%茶多酚、0.5%植酸,混合均匀,得到菌泥混合物;

(7)把菌泥混合物放入真空冻干机中冻干,先在-10℃条件下冻干20min,再在-50℃条件下冻干2h,最后在-80℃条件下冻干2h,冻干后研磨过筛得到乳酸菌冻干粉。

其中,中草药提取物由下列质量份数的原料制成:紫苏14份、香橼11份、莱菔子9份、昆布6份。

其中,中草药提取物的制备方法为:

(1)取紫苏和昆布分别粉碎,混合,用95%乙醇-丙酮混合液50℃浸提90min,料液比为1g:10ml,95%乙醇和丙酮的体积比为10:5,过滤,得到滤液ⅰ;

(2)取香橼粉碎,用60%乙醇70℃回流提取40min,料液比为1g:14ml,过滤,得到滤液ⅱ;

(3)把滤液ⅱ用相等体积的氯仿进行萃取,分离得到水层;

(4)把莱菔子粉碎,加入至滤液ⅰ中超声提取30min,过滤,得滤液ⅲ;

(5)把(3)步骤得到的水层和滤液ⅲ混合,离心分离,取上清液,即为中草药提取物。

所述的维生素由等质量的维生素a、维生素d3、维生素e、维生素k3、维生素b1、维生素b2、维生素b6组成。

所述的无机矿物质由等质量的硫酸铜、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、碘化钾、氯化钴中组成。

所述的载体由等质量的玉米粉、稻壳粉、膨润土、沸石组成。

实施例4:

一种乳酸菌猪用复合预混料,由下列质量份数的原料制成:维生素30份、叶酸4份、泛酸钙11份、烟酸6份、无机矿物质9份、磷酸氢钙4份、氯化钠14份、赖氨酸20份、乳酸菌冻干粉20份、植酸酶9份、载体50份。

制备方法为:将所有原料混合均匀,即得。

所述的乳酸菌冻干粉的制备方法为:

(1)将植物乳杆菌进行菌种活化至三级种,培养基为常规乳酸菌培养基,培养方法为常规乳酸菌培养法;

(2)用发酵罐将活化好的植物乳杆菌进行发酵,每罐装发酵液30l,每1000ml发酵液组成为:蛋白胨15g,酵母膏15g,葡萄糖20g,磷酸二氢钾4g,吐温8010g,番茄汁100ml,搅匀后加入15ml中草药提取物,混合均匀后调ph至7.0,用水定容至1000ml,于121℃灭菌15min,冷至35℃,进行接种发酵;

(3)将活化好的植物乳杆菌按其发酵液总体积的20%体积接种量进行不通气发酵,罐压用氦气和氧气的混合气体维持,混合气体中氦气的体积比为3%;

(4)发酵参数:罐压0.10mpa、搅拌速度40r/min、温度37℃、ph6.5,发酵时间为20小时;

(5)发酵结束离心收集菌液,除去上清液得乳酸菌菌泥,将菌泥置于60℃的含磁场作用的恒温水浴中,磁场强度为0.6tb,同时用60w的红外灯泡垂直照射,处理40min,得到预处理后的菌泥;

(6)把预处理后的菌泥按菌泥总质量的重量百分比加入:12%甘露醇、12%葡聚糖、8%赖氨酸、8%球蛋白、3%明胶、1.5%茶多酚、1.5%植酸,混合均匀,得到菌泥混合物;

(7)把菌泥混合物放入真空冻干机中冻干,先在-10℃条件下冻干30min,再在-50℃条件下冻干2h,最后在-80℃条件下冻干3h,冻干后研磨过筛得到乳酸菌冻干粉。

其中,中草药提取物由下列质量份数的原料制成:紫苏16份、香橼11份、莱菔子11份、昆布6份。

其中,中草药提取物的制备方法为:

(1)取紫苏和昆布分别粉碎,混合,用95%乙醇-丙酮混合液60℃浸提90min,料液比为1g:12ml,95%乙醇和丙酮的体积比为10:5,过滤,得到滤液ⅰ;

(2)取香橼粉碎,用60%乙醇80℃回流提取40min,料液比为1g:16ml,过滤,得到滤液ⅱ;

(3)把滤液ⅱ用相等体积的氯仿进行萃取,分离得到水层;

(4)把莱菔子粉碎,加入至滤液ⅰ中超声提取30min,过滤,得滤液ⅲ;

(5)把(3)步骤得到的水层和滤液ⅲ混合,离心分离,取上清液,即为中草药提取物。

所述的维生素由等质量的维生素a、维生素d3、维生素e、维生素k3、维生素b1、维生素b2、维生素b6组成。

所述的无机矿物质由等质量的硫酸铜、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、碘化钾、氯化钴中组成。

所述的载体由等质量的玉米粉、稻壳粉、膨润土、沸石组成。

对比例1:

一种乳酸菌猪用复合预混料,由下列质量份数的原料制成:维生素40份、叶酸1份、泛酸钙15份、烟酸3份、无机矿物质10份、磷酸氢钙1份、氯化钠6份、赖氨酸10份、乳酸菌冻干粉25份、植酸酶5份、载体35份。

其余同实施例1。

对比例2:

一种乳酸菌猪用复合预混料,

其中,中草药提取物由下列质量份数的原料制成:香橼10份、莱菔子10份、昆布5.5份。

其中,中草药提取物的制备方法为:

(1)昆布分别粉碎,混合,用95%乙醇-丙酮混合液55℃浸提85min,料液比为1g:11ml,95%乙醇和丙酮的体积比为10:4,过滤,得到滤液ⅰ;

(2)取香橼粉碎,用60%乙醇75℃回流提取35min,料液比为1g:15ml,过滤,得到滤液ⅱ;

(3)把滤液ⅱ用相等体积的氯仿进行萃取,分离得到水层;

(4)把莱菔子粉碎,加入至滤液ⅰ中超声提取25min,过滤,得滤液ⅲ;

(5)把(3)步骤得到的水层和滤液ⅲ混合,离心分离,取上清液,即为中草药提取物。

其余同实施例2。

对比例3:

一种乳酸菌猪用复合预混料,

所述的乳酸菌冻干粉的制备方法为:

(1)将植物乳杆菌进行菌种活化至三级种,培养基为常规乳酸菌培养基,培养方法为常规乳酸菌培养法;

(2)用发酵罐将活化好的植物乳杆菌进行发酵,每罐装发酵液25l,每1000ml发酵液组成为:蛋白胨15g,酵母膏15g,葡萄糖20g,磷酸二氢钾4g,吐温8010g,番茄汁100ml,搅匀后加入15ml中草药提取物,混合均匀后调ph至7.0,用水定容至1000ml,于121℃灭菌15min,冷至35℃,进行接种发酵;

(3)将活化好的植物乳杆菌按其发酵液总体积的15%体积接种量进行不通气发酵,罐压用氦气和氧气的混合气体维持,混合气体中氦气的体积比为2%;

(4)发酵参数:罐压0.05mpa、搅拌速度30r/min、温度37℃、ph6,发酵时间为18小时;

(5)发酵结束离心收集菌液,除去上清液得乳酸菌菌泥,按菌泥总质量的重量百分比加入:11%甘露醇、11%葡聚糖、6%赖氨酸、6%球蛋白、2.5%明胶、1%茶多酚、1%植酸,混合均匀,得到菌泥混合物;

(6)把菌泥混合物放入真空冻干机中冻干,先在-10℃条件下冻干25min,再在-50℃条件下冻干1.5h,最后在-80℃条件下冻干2.5h,冻干后研磨过筛得到乳酸菌冻干粉。

其余同实施例2。

对比例4:

一种乳酸菌猪用复合预混料,

所述的乳酸菌冻干粉的制备方法为:

(1)将植物乳杆菌进行菌种活化至三级种,培养基为常规乳酸菌培养基,培养方法为常规乳酸菌培养法;

(2)用发酵罐将活化好的植物乳杆菌进行发酵,每罐装发酵液30l,每1000ml发酵液组成为:蛋白胨15g,酵母膏15g,葡萄糖20g,磷酸二氢钾4g,吐温8010g,番茄汁100ml,搅匀后加入15ml中草药提取物,混合均匀后调ph至7.0,用水定容至1000ml,于121℃灭菌15min,冷至35℃,进行接种发酵;

(3)将活化好的植物乳杆菌按其发酵液总体积的20%体积接种量进行不通气发酵,罐压用氦气和氧气的混合气体维持,混合气体中氦气的体积比为3%;

(4)发酵参数:罐压0.10mpa、搅拌速度40r/min、温度37℃、ph6.5,发酵时间为20小时;

(5)发酵结束离心收集菌液,除去上清液得乳酸菌菌泥,将菌泥置于60℃的含磁场作用的恒温水浴中,磁场强度为0.6tb,同时用60w的红外灯泡垂直照射,处理40min,得到预处理后的菌泥;

(6)把预处理后的菌泥按菌泥总质量的重量百分比加入:12%甘露醇、12%葡聚糖、8%赖氨酸、8%球蛋白、3%明胶,混合均匀,得到菌泥混合物;

(7)把菌泥混合物放入真空冻干机中冻干,先在-10℃条件下冻干30min,再在-50℃条件下冻干2h,最后在-80℃条件下冻干3h,冻干后研磨过筛得到乳酸菌冻干粉。

其余同实施例4。

对比例5:

一种乳酸菌猪用复合预混料,

所述的乳酸菌冻干粉的制备方法为:

(1)将植物乳杆菌进行菌种活化至三级种,培养基为常规乳酸菌培养基,培养方法为常规乳酸菌培养法;

(2)用发酵罐将活化好的植物乳杆菌进行发酵,每罐装发酵液30l,每1000ml发酵液组成为:蛋白胨15g,酵母膏15g,葡萄糖20g,磷酸二氢钾4g,吐温8010g,番茄汁100ml,搅匀后加入15ml中草药提取物,混合均匀后调ph至7.0,用水定容至1000ml,于121℃灭菌15min,冷至35℃,进行接种发酵;

(3)将活化好的植物乳杆菌按其发酵液总体积的20%体积接种量进行不通气发酵,罐压用氦气和氧气的混合气体维持,混合气体中氦气的体积比为3%;

(4)发酵参数:罐压0.10mpa、搅拌速度40r/min、温度37℃、ph6.5,发酵时间为20小时;

(5)发酵结束离心收集菌液,除去上清液得乳酸菌菌泥,将菌泥置于60℃的含磁场作用的恒温水浴中,磁场强度为0.6tb,同时用60w的红外灯泡垂直照射,处理40min,得到预处理后的菌泥;

(6)把预处理后的菌泥按菌泥总质量的重量百分比加入:12%甘露醇、12%葡聚糖、8%赖氨酸、8%球蛋白、3%明胶、1.5%茶多酚、1.5%植酸,混合均匀,得到菌泥混合物;

(7)把菌泥混合物放入真空冻干机中冻干,在-80℃条件下冻干4h,冻干后研磨过筛得到乳酸菌冻干粉。

其余同实施例4。

试验例1:粪尿中含磷、氮量及熟肉剪切力实验

选择江西派尼生物科技有限公司下属养殖场平均体重约55kg的杜长大健康猪600头,随机分成10组,每组6个重复,每个重复10头,公母各半,其中包括一个空白对照组和9个试验组。空白对照组猪日粮中不添加任何酶制剂;其余7个试验组猪日粮中分别添加了实施例1-4和对比例1-5制得的复合预混料;生猪自由采食和饮水,按常规进行免疫及驱虫,试验期为20天。在试验开始后每天采集各组猪的粪尿混合物,风干后测定其含磷量和含氮量,计算平均值和粪尿中含磷量(含氮量)降低率,结果分别见表1、表2。

第20天时每组随机选取8头试验猪,共计80头进行屠宰,宰后立即于右胴体第6~12肋处取背最长肌,室温(25℃)下散热2h,然后迅速移至4℃冰箱内保存。保存72小时后取2块3cm厚的背最长肌,分别置于蒸煮袋中(与水隔绝),肉样中心插入温度计,放入75℃水浴锅中加热约30min,待肉样中心温度达到70℃时,持续10min,取出;冷却至室温,每块背最长肌沿肌纤维方向钻取6块直径×长度=1.27cm×2.5cm肉样;所取肉样于4℃冰箱中过夜,于第2天,以嫩度计沿肌纤维垂直方向测定剪切力,并计算平均值,结果见表3。

其中:粪尿中含磷(氮)量降低率(%)=[1-试验组粪尿中含磷(氮)量平均值/空白对照组粪尿中含磷(氮)量平均值]×100%

剪切力值降低率(%)=[1-试验组剪切力值/空白对照组剪切力值]×100%

从表1、2可知,本发明制得的复合预混料(实施例1-4)可以明显降低健康猪粪尿中的含磷量和含氮量,效果优于对比例1(原料配比不同)、对比例2(乳酸菌发酵液中中草药提取液不同)、对比例3(乳酸菌冻干前未进行预处理)、对比例4(冻干采用保护剂不同)和对比例5(直接降温冻干),尤其是以实施例2的效果最优,可见本发明原料的配比、乳酸菌培养基、乳酸菌冻干的预处理、冻干采用保护剂及冻干的降温工艺均对制得的复合预混料的降低磷、氮量的排放有影响,因此本发明采用了一定的原料配比、选用特定的乳酸菌培养基、乳酸菌冻干前的预处理工艺、冻干的保护剂及冻干的降温工艺,制得的复合预混料可以明显降低健康猪粪尿中的含磷量和含氮量,降低磷、氨排放。

从表3可知,本发明制得的复合预混料(实施例1-4)可以明显降低熟肉剪切力,效果优于对比例1(原料配比不同)、对比例2(乳酸菌发酵液中中草药提取液不同)、对比例3(乳酸菌冻干前未进行预处理)、对比例4(冻干采用保护剂不同)和对比例5(直接降温冻干),尤其是以实施例2的效果最优,可见本发明原料的配比、乳酸菌培养基、乳酸菌冻干的预处理、冻干采用保护剂及冻干的降温工艺均对制得的复合预混料对熟肉的剪切力有影响,因此本发明采用了一定的原料配比、选用特定的乳酸菌培养基、乳酸菌冻干前的预处理工艺、冻干的保护剂及冻干的降温工艺,制得的复合预混料可以明显降低熟肉剪切力,改善猪肉的嫩度。

试验例2:抗应激动物实验

(1)对小鼠负重游泳的影响

小鼠100只,18-22g,雌雄各半,随机分为实施例1-4组、对比例1-5组、对照组共10组,每组各10只。实施例1-3组和对比例1-3组分别按各组制得的产品0.5g/kg灌胃,对照组按0.5g/kg蒸馏水灌胃。每日给药1次,连续7d。于末次给药30min后,按小鼠体重的10%增加负荷,即将负重物束于小鼠尾根部。然后将小鼠单个放入水温为25±1℃、水深20cm的水槽中。小鼠头部沉入水巾10s不能浮出水面者即为体力耗竭,记录小鼠游泳时间。

(2)对小鼠耐缺氧的影响

小鼠100只,18-22g,雌雄各半,随机分为实施例1-4组、对比例1-5组、对照组共10组,每组各10只。实施例1-3组和对比例1-3组分别按各组制得的产品0.5g/kg灌胃,对照组按0.5g/kg蒸馏水灌胃。每日给药1次,连续7d。于末次给药30min后,将小鼠放人盛有10g钠石灰的广口瓶内(每瓶只放1只小鼠),用凡士林涂抹瓶口盖严,使之不漏气。以呼吸停止为死亡判断指标,记录小鼠存活时间。

(3)对小鼠耐高温的影响

小鼠100只,18-22g,雌雄各半,随机分为实施例1-4组、对比例1-5组、对照组共10组,每组各10只。实施例1-3组和对比例1-3组分别按各组制得的产品0.5g/kg灌胃,对照组按0.5g/kg蒸馏水灌胃。每日给药1次,连续7d。于末次给药30min后,将小鼠单个放人45℃的恒温箱内。观察小鼠,以呼吸停止为死亡判断指标,记录小鼠存活时间。试验数据采用spss13.0分析软件进行统计分析。结果如表4所示。

试验从抗疲劳、耐缺氧、耐高温3个方面研究了本发明对动物机体抗应激反应能力的影响。从表4数据可以看出,本发明实施例1-4可以明显提高小鼠的负重游泳时间、缺氧存活时间和高温存活时间,而且优于对比例1(原料配比不同)、对比例2(乳酸菌发酵液中中草药提取液不同)、对比例3(乳酸菌冻干前未进行预处理)、对比例4(冻干采用保护剂不同)和对比例5(直接降温冻干),尤其是以实施例2的效果最优,可见本发明原料的配比、乳酸菌培养基、乳酸菌冻干的预处理、冻干采用保护剂及冻干的降温工艺均对制得的复合预混料的抗应激性有影响,因此本发明采用了一定的原料配比、选用特定的乳酸菌培养基、乳酸菌冻干前的预处理工艺、冻干的保护剂及冻干的降温工艺,制得的复合预混料具有较强的抗疲劳、耐缺氧、耐高温等抗应激的作用,可使处于应激状态下的机体体力增强,耐疲劳能力增强,耗氧降低,耐高温环境,对机体重要器官起保护作用。

试验例3:驱虫实验

试验前对猪只进行粪便检查,选择每克粪便中含虫卵数(epg,单位:个/g)大于200的体重为53.6±2.8kg的200头猪为本试验用猪,将其随机分为10组,其中9个试验组,1个对照组,每组20头,公母各半。9个试验组猪日粮中分别添加了实施例1-4和对比例1-5制得的复合预混料,对照组不添加复合预混料,其他同试验组。驱虫前(第0天)和投药后第7天对各猪只直肠采粪,记录各组epg平均值。投药后第15天分别用沉淀和漂浮集卵法查找虫卵,以此作为驱虫后的指标。注意观察投药后猪只的临床反应,并观察其饮食、精神、排尿、排粪等情况。结果由表5、6所示。

虫卵减少率=[(驱虫前epg-驱虫后epg)/驱虫前epg]×100%

虫卵转阴率=[虫卵转阴动物数/试验动物数]×100%

本次试验发现寄生虫有蛔虫、肺线虫、食道口线虫、鞭虫、姜片吸虫、棘头虫和猪小袋纤毛虫等。从表5、6可知,投药第7天检查虫卵本发明制得的复合预混料(实施例1-4)可以明显降低虫卵的数量,且每组中各猪只的饮食正常、精神状态良好、排尿和排粪情况正常,未见任何毒副反应,效果优于对比例1(原料配比不同)、对比例2(乳酸菌发酵液中中草药提取液不同)、对比例3(乳酸菌冻干前未进行预处理)、对比例4(冻干采用保护剂不同)和对比例5(直接降温冻干),尤其是以实施例2的效果最优,可见本发明原料的配比、乳酸菌培养基、乳酸菌冻干的预处理、冻干采用保护剂及冻干的降温工艺均对制得的复合预混料的驱虫效果有影响,因此本发明采用了一定的原料配比、选用特定的乳酸菌培养基、乳酸菌冻干前的预处理工艺、冻干的保护剂及冻干的降温工艺,制得的复合预混料可以明显降低猪只粪便中的虫卵,有明显的驱虫效果。

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