本发明涉及一种大鲵蛋白肽粉产品及其制备方法，属于食品加工技术领域。
背景技术：
大鲵是现存个体最大的两栖动物，属国家二类保护动物。在我国广泛分布，主要产于长江、黄河及珠江中上游支流的山溪河流中，尤以四川、湖北、湖南、贵州、陕西等省为多。大鲵营养价值高，含有优质蛋白质和丰富的氨基酸、微量元素。其机体中含有50多种天然生物活性物。这些生物活性物在食用、药物、化妆品、健康食品等方面具有独特的研发价值。有文献报道从大鲵体表黏液中制备出大鲵低聚糖肽，通过小鼠抗疲劳实验，发现其具有抗疲劳功能。大鲵低聚糖肽还具有良好的吸湿性和较强的抗紫外线活性。
大鲵低聚糖肽中所含的18种氨基酸中除色氨酸未测出外，人体其它7种必需氨基酸(苏氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸)和组氨酸(婴儿所必需的氨基酸)的含量均较高。其中必需氨基酸中苏氨酸含量最为丰富，高达13.1％。其次是天冬氨酸/酰胺(asx)和谷氨酸/酰胺(glx)分别为11.2％和12.5％。而丝氨酸含量最低为0.2％。
桑叶是植物之王，有“人参热补，桑叶清补”之美誉，富含人体17种氨基酸，粗蛋白，粗脂肪，是国家卫生部确认的“药食同源”植物，被国际食品卫生组织列入“人类21世纪十大保健食品之一”，成为人类绿色新食品源。目前大部分地区将桑作为饲用栽培，每年除了桑叶饲养桑蚕外，很多桑叶都没得到有效利用。尽管许多研究已经报道桑有多种药理作用，抗过敏作用的研究也有报道。桑叶内含有1-脱氧野尻霉素(dnj)，是一种α-糖苷酶的抑制剂，仅存在于桑叶中，其含量约为100mg/100g。桑叶中不仅含有dnj，而且含有丰富的γ-氨基丁酸和植物淳，其含量是绿茶的3～4倍，具有降血糖、降血压、降血脂、延缓衰老等多种保健功效，对糖尿病、高血压、高血脂患者都有辅助治疗作用。
公开号为cn101812116a的中国公开了一种大鲵低聚糖肽、制备方法，按如下步骤进行：a.将大鲵黏液在0～10℃时进行匀浆；b.向匀浆中加入1～3倍体积ph7～8的0.01～0.1m磷酸缓冲液及与匀浆质量比为0.1～1％的复合酶，酶解12～48h；所述复合酶为将海洋碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶按活力单位比为3∶3∶2∶2比例混合；c.离心取上清，采用截留分子量为4000da以下的超滤膜分离器分离，取透过超滤膜的液体；d.通过sephadexlh-20分子筛层析柱，收集od280nm吸收峰；e.将所收集的液体通过大孔吸附树脂及活性炭后冷冻干燥，制得大鲵低聚糖肽。
公开号为cn101991038a的中国公开了一种大鲵低聚糖肽保健食品，按质量百分比计有效成份为：大鲵低聚糖肽10～80％、牡蛎多糖1～50％、贻贝多糖1～50％、维生素c1～50％和牛磺酸1～50％，其中大鲵黏液在0～10℃时进行匀浆，向匀浆中加入1～3倍体积ph7～8的0.01～0.1m磷酸缓冲液及与匀浆质量比为0.1～1％的复合酶，酶解12～48h，离心取上清，采用截留分子量为4000da以下的超滤膜分离器分离，取透过超滤膜的液体，通过sephadexlh-20分子筛层析柱，收集od280nm吸收峰，将所收集的液体通过大孔吸附树脂及活性炭后冷冻干燥，制得大鲵低聚糖肽。
公开号为cn102676622a的中国公开了一种大鲵纳米肽及大鲵酒，按如下步骤制备：a.将宰杀后的大鲵洗净，取大鲵肉冷冻干燥至水分小于1％，将冻干的大鲵肉超微粉碎成500～5000目的超微粉；b.将大鲵超微粉球磨成50～200nm的大鲵纳米粉；c.向大鲵纳米粉中加入ph7～8的0.01～0.1m磷酸缓冲液及复合酶，酶解12～48h，所述大鲵纳米粉与0.01～0.1m磷酸缓冲液的质量比为1：1～10，所述复合酶添加量为10～25活力单位/大鲵纳米粉(g)，所述复合酶为将海洋酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶按活力单位比为3：3：4比例混合；d.离心取上清，采用截留分子量为4000da以下的超滤膜分离器分离，取透过超滤膜的液体，将所收集的液体通过大孔吸附树脂及活性炭后冷冻干燥，制得大鲵纳米肽。
公开号为cn103609832a的中国公开了一种大鲵活性蛋白粉及其制备方法，由包括以下步骤的方法制成：(1)将大鲵原料制成肉糜，加入大鲵原料重量3.5～4.5倍的水，搅拌均匀，所述大鲵原料为大鲵肉和大鲵混合原料，所述大鲵混合原料为大鲵皮、大鲵肝、大鲵分泌物、大鲵血、大鲵胃、大鲵骨的一种或多种，大鲵肉与大鲵混合原料的重量配比为90～98％：2～10％；(2)加入大鲵原料重量0.3～0.5％复合蛋白酶，在温度45℃～55℃，ph6～7下酶解反应3-5h，水解液煮沸灭酶5-10min，过滤即可得到大鲵活性蛋白水解液，所述复合蛋白酶为碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶的混合物；(3)将鲵活性蛋白水解液在80-100℃灭酶、过滤，浓缩干燥，得大鲵蛋白粉；步骤(1)中，所述大鲵原料中大鲵肉与大鲵皮、大鲵肝、大鲵分泌物、大鲵血、大鲵胃、大鲵骨的重量配比为100：0.5～2:0.5～1：0.1～0.5:0.5～1:0.5～1:0.5～2。
公开号为cn104206641a的中国公开了一种大鲵蛋白多肽粉及其制备方法，是将大鲵肉糜与水以固液比1∶2～1∶5的比例混合，加入肉糜质量0.1％～0.55％的柠檬酸钾、肉糜质量0.1％～1％的中性蛋白酶或风味蛋白酶进行酶解，酶解ph为6.5～7.5，温度为40～60℃，酶解时间1～3h；再加入大鲵肉糜质量0.1％～5％的复合蛋白酶，维持温度在40～60℃，继续酶解2～3h。酶解后产物加热至100℃，维持10～15min，过滤得蛋白多肽水解液，加入大鲵肉糜质量0.1％～3％的活性炭，过滤，得蛋白多肽水解液，进行减压真空浓缩，真空冷冻干燥，得大鲵蛋白多肽粉。
公开号为cn104432083a的中国公开了一种大鲵多肽抗氧化口服液的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1)选取人工饲养大鲵肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净沥干后，加入质量为大鲵肉2倍的纯净水进行匀浆处理；2)按质量比2:1的比例，将纯净水加入步骤1)匀浆处理后的大鲵肉，再加入复合酶进行酶解，复合酶用量为沥干大鲵肉质量的0.5％-2％，酶解温度为50-60℃，酶解时间为5-7h，酶解完毕加热酶解液到90℃以上灭酶10-20min，得大鲵酶解多肽液；3)微滤：将步骤2)所得大鲵酶解多肽液经0.45μm微滤膜进行微滤，取滤液；4)超滤：将步骤3)所得滤液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲵多肽液，备用；5)先将大鲵多肽液、白砂糖、苹果汁、柠檬酸、β-环状糊精和水混合均匀，再加入黄原胶溶液，并混合均匀，按质量百分数计，各组分的比例为：大鲵多肽液20-50％、白砂糖8-12％、苹果汁3-5％、柠檬酸0.01-0.03％、β-环状糊精0.5-1％、黄原胶0.05-0.15％，余量为纯净水；6)将步骤5)所得物采用500目滤布过滤，然后进行灌装；7)将步骤6)所得物进行高温高压杀菌，杀菌方式为：升温10min，于110-115℃、0.07mpa杀菌15-40min，分级冷却10min，冷却至中心温度小于40℃，即得大鲵多肽抗氧化口服液成品；所述复合酶，按质量比计，由以下酶组成：中性蛋白酶:木瓜蛋白酶:风味蛋白酶＝2:1:1。
公开号为cn104988199a的中国公开了一种大鲵黏液蛋白肽的制备方法，1)电击刺激法采集大鲵粘液，冻干得粘液冻干粉；2)将所得粘液冻干粉加入50～120倍质量的蒸馏水中，再加入黏液冻干粉质量10％-30％的碱性蛋白酶，调节ph至9～9.5，在40～60℃温度条件下酶解1～3h，再将混合液煮沸1～2min，冷却至19～25℃；3)将步骤2)处理完成的混合液在3000-4500r/min条件下，离心10～20min，取清液，调节清液ph值为4～5，在40～45℃温度条件下，加入1％～2％活性碳，搅拌45～60min进行脱色脱腥，然后在3000-4500r/min条件下，离心10-15min，过0.45μm滤膜得滤液；4)将步骤3)处理完成的滤液在30℃-60℃温度条件下旋转蒸发浓缩至原样1/7～1/8，将浓缩液用塑料袋密封，在温度19～25℃，压力150-250mpa条件下，杀菌1-5min，在洁净环境下，真空冷冻干燥、粉碎得到粘液蛋白肽粉。
公开号为cn105018555a的中国公开了一种大鲵皮胶原蛋白肽的制备方法，将大鲵皮脱脂并进行脱腥，再用碱液去黑皮及杂蛋白，然后在温度20～25℃，压力150-300mpa条件下保压10～60min，调节超高压处理过的大鲵皮ph至8～10，加入皮料重量2％～3％的碱性蛋白酶，在温度45～50℃条件下，持续搅拌酶解3～6小时，再将混料煮沸1～2min，冷却至40℃，再调节混料ph至4～5，加入混料质量1％的活性炭，搅拌脱色；将处理完成的混料在转速3000-4500r/min条件下，离心10～15min，再依次经0.45μm的滤膜微滤、截留分子量为4～5kd的超滤膜超滤、截留分子量为2-3kd的纳滤膜纳滤得滤液，再将滤液浓缩至原样的二分之一，将浓缩液冻干并粉碎即得大鲵皮胶原蛋白肽粉。本发明制备胶原蛋白肽分子量小，90％以上分子量小于1000道尔顿。
公开号为cn105399815a的中国公开了一种大鲵胶原糖肽，按如下方法制备：a.以大鲵皮为原料，制得大鲵皮酸溶性胶原蛋白；b.以大鲵皮酸溶性胶原蛋白为原料，制得大鲵皮胶原蛋白肽；c.将10g牡蛎多糖加入到100ml0.01mol/lph6.5的磷酸钠缓冲液中，搅拌2h，加入5g大鲵胶原蛋白肽及10g牡蛎多糖，继续搅拌2h，4℃静置过夜，再60℃搅拌4h，冷却至室温，9000r/min离心30min，得上清液，冷冻干燥上清液即得到大鲵胶原糖肽。
公开号为cn106107397a的中国公开了一种大鲵蛋白肽粉固体饮料的制备方法，包括以下步骤：(1)、将大鲵蛋白肽粉2-5％、菊粉5-15％、火龙果10-20％、茶多酚2-5％、水苏糖2-4％、蜂蜜粉5-15％、风味调和剂35-75％加入混合器内混合均匀，得到混合物；(2)、将步骤(1)得到的混合物进行紫外线杀菌后装袋既得。
尽管大鲵蛋白含量相当丰富，营养成分更优于其它动物性产品，但从上述文献资料表明在糖肽方面研究较多，相关其它功能性成份开发相当薄弱，并且在加工过程中营养成份损失严重，产品的开发附加值低，导致大鲵附加值低，制约了大鲵产业发展。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是：针对现有大鲵加工过程中营养损失严重的窘境，提供一种工艺合理、操作简单、工艺周期短、大鲵糖肽等营养成分流失少、营养价值高的大鲵蛋白肽粉的制备方法。
本发明提供一种大鲵蛋白肽粉产品及其制备方法，包括下述步骤：
(1)取新鲜大鲵或大鲵下脚料加水进行磨浆，加入水的体积与大鲵的重量比为5～10l∶1kg，再加入两至四倍体积的石油醚进行脱脂，静置20～30min去除上层石油醚溶液，下层溶液在20～30℃保温搅拌30～60min，三层纱布过滤1次，微滤1次，得大鲵滤液ⅰ和滤渣ⅰ；
(2)桑叶加水在70～90℃高温搅拌提取60～120min，加入水的体积与桑叶的重量比为5～10l∶1kg，三层纱布过滤1次，微滤1次，得桑叶滤液和桑叶滤渣，桑叶滤液经薄膜蒸发浓缩仪进行浓缩至干，得桑叶提取物；
(3)滤液ⅰ加入两至五倍体积的乙醇，静置20～25min，4000～8000rpm离心20～30min，得到沉淀ⅱ和上清液ⅱ；
(4)沉淀ⅱ加入水进行溶解，4000～8000rpm离心20～30min，得到上清液ⅲ和沉淀ⅲ，其中加入水的体积与沉淀ⅱ的重量比为0.5～2l∶1kg；
(5)沉淀ⅲ加入水进行悬浮，再加入胰蛋白酶在35～45℃下水解4～4.5h，其中胰蛋白酶的终浓度达到300u/l以上，得酶解液ⅰ，其中加入水的体积与沉淀ⅲ的重量比为3～6l∶1kg；
(6)上清液ⅱ进行减压浓缩去除乙醇，再加入到滤渣ⅰ中，其中加入体积与滤渣ⅰ的重量比为100l∶30～45kg，再加入桑叶滤渣，90～110℃高温处理20～30min，冷却后加入中性蛋白酶在35～45℃下水解4～4.5h，其中中性蛋白酶的终浓度达到100u/l以上，得酶解液ⅱ,其中加入桑叶滤渣与滤渣ⅰ的重量比为20～35kg∶100kg；
(7)将酶解液加热到85～90℃，充分搅拌下保温15～18min，4000～8000rpm离心20～30min，得到上清液ⅳ；
(8)将上清液ⅲ、上清液ⅳ进行混合，并在60～75℃、薄膜蒸发浓缩仪上浓缩至干，再粉碎即可获得大鲵提取物，其中上清液ⅲ与上清液ⅳ混合比例为1l：0.1～3l；
(9)桑叶提取物再与大鲵提取物进行混合得大鲵蛋白肽粉产品，其中大鲵提取物与桑叶提取物重量比为2～6kg∶1kg。
在一个具体实施方案中，其中步骤(4)所获得上清液ⅲ可以直接口服，或做为面膜等护肤材料使用。
在一个具体实施方案中，其中步骤(5)所获得酶解液ⅰ可以直接作为小肽口服液使用，也可以直接浓缩至干使用或添加到其它保健品中。
在一个具体实施方案中，其中步骤(6)所获得酶解液ⅱ可以直接作为小肽口服液使用，也可以直接浓缩至干使用或添加到其它保健品中。
在一个具体实施方案中，其中步骤(7)所述酶解液是指酶解液ⅰ和酶解液ⅱ。
在一个具体实施方案中，其中步骤(7)所述酶解液ⅰ与酶解液ⅱ的混合比例为1l：0.5～8l。
在一个具体实施方案中，其中步骤(8)所述获得产品，可以直接使用，也可以加水配制成口服液食用，也可以添加到其它保健品中。
上述所获得各种产品可以应用在制备清除自由基产品中，也可以应用在制备提高机体免疫力产品中，还可以应用在制备促进皮肤纤维原细胞增殖产品中。
技术效果
1、本发明充分利用了大鲵中蛋白质和多糖以及黄酮类物质，又克服了传统工艺过程中大鲵产生的鱼腥味，非常适合糖尿病人食用。
2、该方法避免了大鲵蛋白营养成分的流失，将大鲵经过高温处理、酶解等深加工处理，实现大鲵的综合加工，过程易控制，便于工业化生产，也增加了大鲵加工附加值。
3、该法能避免高温和酸碱处理下多糖的降解，又能根据不同需求调节产品中多糖含量，又通过蛋白质先变性再水解方式以提高了小肽产率。
具体实施方式
以下用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限制本发明。
实施例1
取新鲜的大鲵加700l水进行磨浆，再加入两至四倍体积的石油醚进行脱脂，静置20～30min去除上层石油醚溶液，下层溶液在25℃保温搅拌60min，三层纱布过滤1次，网筛为100目微滤机进行微滤1次，得740l大鲵滤液ⅰ和50kg滤渣ⅰ。
100kg桑叶加600l水在85℃高温搅拌提取120min，三层纱布过滤1次，微滤1次，得约530l桑叶滤液和桑叶滤渣，桑叶滤液经薄膜蒸发浓缩仪进行浓缩至干，得桑叶提取物。
滤液ⅰ加入乙醇1600l，静置25min，7000rpm离心24min，得到24.6kg沉淀ⅱ和2280l上清液ⅱ。沉淀ⅱ加入20l水进行溶解，8000rpm离心20min，得到23l上清液ⅲ和22.4kg沉淀ⅲ；沉淀ⅲ加入80l水进行悬浮，再加入胰蛋白酶在40℃下水解4h，其中胰蛋白酶的终浓度达到400u/l左右，得酶解液ⅰ；上清液ⅱ进行减压浓缩去除乙醇得450l浓缩液，再将450l浓缩液加入到180kg滤渣ⅰ中，再加入40kg桑叶滤渣，100℃高温处理25min，冷却后加入中性蛋白酶在40℃下水解4.5h，其中中性蛋白酶的终浓度达到150u/l，得酶解液ⅱ。
将30l酶解液ⅰ和30l酶解液ⅱ合并，加热到90℃，充分搅拌下保温15min，6000rpm离心30min，得到上清液ⅳ；将10l上清液ⅲ与20l上清液ⅳ进行混合，并在75℃，用型号为dsl5薄膜蒸发浓缩仪浓缩至干，再粉碎即可获得大鲵提取物。取10kg桑叶提取物，再与55kg大鲵提取物进行混合，得大鲵蛋白肽粉产品。
实施例2
取新鲜的大鲵加900l水进行磨浆，再加入两至四倍体积的石油醚进行脱脂，静置20～30min去除上层石油醚溶液，下层溶液在30℃保温搅拌60min，三层纱布过滤1次，网筛为150目微滤机进行微滤1次，得980l大鲵滤液ⅰ和60kg滤渣ⅰ。
150kg桑叶加900l水在90℃高温搅拌提取100min，三层纱布过滤1次，微滤1次，得约800l桑叶滤液和桑叶滤渣，桑叶滤液经薄膜蒸发浓缩仪进行浓缩至干，得桑叶提取物。滤液ⅰ加入乙醇2000l，静置25min，8000rpm离心25min，得到38.5kg沉淀ⅱ和2850l上清液ⅱ。
沉淀ⅱ加入40l水进行溶解，8000rpm离心20min，得到45l上清液ⅲ和34.5kg沉淀ⅲ；沉淀ⅲ加入120l水进行悬浮，再加入中性蛋白酶在45℃下水解4.5h，其中胰蛋白酶的终浓度达到450u/l，得酶解液ⅰ；上清液ⅱ进行减压浓缩去除乙醇得750l浓缩液，再将750l浓缩液再加入到300kg滤渣ⅰ中，再加入70kg桑叶滤渣，110℃高温处理20min，冷却后加入中性蛋白酶在45℃下水解4.5h，其中中性蛋白酶的终浓度达到250u/l，得酶解液ⅱ。
将30l酶解液ⅰ和30l酶解液ⅱ合并，加热到90℃，充分搅拌下保温18min，8000rpm离心20min，得到上清液ⅳ；将10l上清液ⅲ与20l上清液ⅳ进行混合，并在70℃，用型号为dsl5薄膜蒸发浓缩仪浓缩至干，再粉碎即可获得大鲵提取物。15kg桑叶提取物，再与65kg大鲵提取物进行混合，得大鲵蛋白肽粉产品。