本发明涉及一种保健食品及其制备方法和应用。
背景技术：
越来越多的研究显示抗氧化是预防衰老的重要步骤，因为自由基或氧化剂可以通过对人体内细胞组织的氧化损伤而对生物体产生一系列的损害，加速机体的衰老过程并诱发各种疾病。因此，应摄取足够的抗氧化剂，减少自由基的产生或加速其清除，以对抗自由基的副作用，延缓机体衰老。
人们在自然的食物中找到了抗氧化剂，例如茶多酚、生物类黄酮、类胡萝卜素、维生素c、维生素e等，这些取自天然食品中的抗氧化剂较为安全，成为了抗氧化剂的最佳选择。如何在天然食品中获取更多的抗氧化剂，是目前研究人员重点要解决的问题。
另外，现有的抗氧化剂普遍存在不耐高温的问题，它们在高温下(100℃)会失去抗氧化活性。其保存期限也较短，在不添加延长保质期物质的情况下，一般为7～10天。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种新的天然具有抗氧化功能的食品及其制备方法和应用，扩增了天然抗氧化剂的种类，同时解决现有的天然抗氧化剂高温下易失去抗氧化活性，保存期限短的问题。
本发明具有抗氧化功能的保健食品按质量份数包括50～70份的欧洲醋栗提取物、70～90份的金癞瓜籽提取物、5～8份的榛仁多糖和5～10份的龙葵多糖。
进一步的，所述欧洲醋栗提取物的制备方法，包括以下步骤：
取欧洲醋栗果实，清洗后自然晾干，用组织搅碎机制成匀浆，将匀浆加入圆底烧瓶中，加入乙酸乙酯，加热回流提取2～3h，冷却后滤出提取液，残渣重复提取一次，合并两次的提取液，回收乙酸乙酯得浸膏，粉碎至60～80目，得到提取物。
进一步的，所述金癞瓜籽提取物的制备方法，包括以下步骤：
将金癞瓜切开，取其中红色的金癞瓜籽，放入-80℃冰箱冷冻过夜，然后进行冷冻干燥，之后研磨成粉末，得到金癞瓜籽冻干粉；
向金癞瓜籽冻干粉之后加入乙醇，加热到60℃提取2～3h，过滤得到乙醇提取液，重复提取2～3次后合并提取液，加热至60℃抽真空回流回收乙醇，再用乙酸乙酯萃取，将萃取液至的乙酸乙酯回收后用水溶解，然后通过大孔树脂纯化，用60～80％的乙醇洗脱，最后将洗脱液浓缩、干燥、粉碎，得到提取物。
进一步的，所述榛仁多糖的制备方法，包括以下步骤：
将榛仁干燥、粉碎，加入石油醚，于40～70℃加热回流提取2～3次，每次2～5h，过滤，合并滤液，于50～60℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂榛仁；
将脱脂榛仁加入蒸馏水，于80～90℃水浴提取3次，合并提取液，浓缩，加入等体积的三氯乙酸(15％)，12～14h后离心，取上清液，向上清液中加入3倍体积的95％乙醇，静置过夜，离心收集沉淀，依次用乙醚、无水乙醇洗涤，共3～5次，真空冻干得到粉末，即为榛仁多糖。
进一步的，所述龙葵多糖的制备方法，包括以下步骤：
龙葵全草氯仿-甲醇(2:1)脱脂，脱色，用80％乙醇加热回流提取2～3次，过滤后得到残渣；
取干燥后的残渣，加入15倍量的蒸馏水煎煮2次，每次4h，合并提取液，减压浓缩，加入95％乙醇至最终乙醇体积分数为80％，4℃静置过夜，离心收集沉淀，依次用乙醚、无水乙醇洗涤，共3～5次，真空冻干得到粉末，即为龙葵多糖。
上述具有抗氧化功能的保健食品的制备方法，包括以下步骤：
一、按质量份数称取50～70份的欧洲醋栗提取物、70～90份的金癞瓜籽提取物、5～8份的榛仁多糖和5～10份的龙葵多糖；
二、将称取的欧洲醋栗提取物、金癞瓜籽提取物、榛仁多糖和龙葵多糖充分混合，然后添加乙醇，于混合机中搅拌制成软材，将软材用16目筛网制粒，然后将颗粒在60～70℃下干燥至水分低于3％，再用14目筛网整粒，将得到的颗粒在混合机至混合后分装，即得到具有抗氧化功能的保健食品。
上述方法的原料中还可加入稳定剂和甜味剂，以增加口感和提高稳定性。所述稳定剂为黄胶原、辛烯基琥珀酸淀粉钠等，甜味剂为甜菊糖甙、三氯蔗糖、罗汉果甙等。
上述保健食品在制备降血脂的食品及保健品中的应用。
本发明的有益效果：
本发明提供一种具有抗氧化功能的保健食品组合物，经过试验证实，该组合物的羟基自由基的清除率达到95％以上，超氧阴离子的清除率达到85％以上，h2o2的清除率达到90％以上。
本发明经过科学配比，各组分协同作用、互补互促，更加有效的对抗自由基的能力，能够起到抗氧化、延缓衰老的功效。本发明的组合物还能够降血脂，能够有效的预防心脑血管疾病，更好的维护心脑血管系统的健康。
本发明的保健食品组合物能够耐高温，在121℃的高温下，仍具有较高的抗氧化能力。
本发明的保健食品组合物在常温下具有较长的存储期限，在不添加任何延长保质期物质的前提下，储存30～60天，仍具有较高的抗氧化能力。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式具有抗氧化功能的保健食品按质量份数包括50～70份的欧洲醋栗提取物、70～90份的金癞瓜籽提取物、5～8份的榛仁多糖和5～10份的龙葵多糖。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述欧洲醋栗提取物的制备方法，包括以下步骤：
取欧洲醋栗果实，清洗后自然晾干，用组织搅碎机制成匀浆，将匀浆加入圆底烧瓶中，加入乙酸乙酯，加热回流提取2～3h，冷却后滤出提取液，残渣重复提取一次，合并两次的提取液，回收乙酸乙酯得浸膏，粉碎至60～80目，得到提取物。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述金癞瓜籽提取物的制备方法，包括以下步骤：
将金癞瓜切开，取其中红色的金癞瓜籽，放入-80℃冰箱冷冻过夜，然后进行冷冻干燥，之后研磨成粉末，得到金癞瓜籽冻干粉；
向金癞瓜籽冻干粉之后加入乙醇，加热到60℃提取2～3h，过滤得到乙醇提取液，重复提取2～3次后合并提取液，加热至60℃抽真空回流回收乙醇，再用乙酸乙酯萃取，将萃取液至的乙酸乙酯回收后用水溶解，然后通过大孔树脂纯化，用60～80％的乙醇洗脱，最后将洗脱液浓缩、干燥、粉碎，得到提取物。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述榛仁多糖的制备方法，包括以下步骤：
将榛仁干燥、粉碎，加入石油醚，于40～70℃加热回流提取2～3次，每次2～5h，过滤，合并滤液，于50～60℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂榛仁；
将脱脂榛仁加入蒸馏水，于80～90℃水浴提取3次，合并提取液，浓缩，加入等体积的质量浓度15％的三氯乙酸，12～14h后离心，取上清液，向上清液中加入3倍体积的95％乙醇，静置过夜，离心收集沉淀，依次用乙醚、无水乙醇洗涤，共3～5次，真空冻干得到粉末，即为榛仁多糖。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述龙葵多糖的制备方法，包括以下步骤：
龙葵全草氯仿-甲醇(2:1)脱脂，脱色，用80％乙醇加热回流提取2～3次，过滤后得到残渣；
取干燥后的残渣，加入15倍量的蒸馏水煎煮2次，每次4h，合并提取液，减压浓缩，加入95％乙醇至最终乙醇体积分数为80％，4℃静置过夜，离心收集沉淀，依次用乙醚、无水乙醇洗涤，共3～5次，真空冻干得到粉末，即为龙葵多糖。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式六：本实施方式具有抗氧化功能的保健食品的制备方法，包括以下步骤：
一、按质量份数称取50～70份的欧洲醋栗提取物、70～90份的金癞瓜籽提取物、5～8份的榛仁多糖和5～10份的龙葵多糖；
二、将称取的欧洲醋栗提取物、金癞瓜籽提取物、榛仁多糖和龙葵多糖充分混合，然后添加乙醇，于混合机中搅拌制成软材，将软材用16目筛网制粒，然后将颗粒在60～70℃下干燥至水分低于3％，再用14目筛网整粒，将得到的颗粒在混合机至混合后分装，即得到具有抗氧化功能的保健食品。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式六不同的是：原料中还加入稳定剂，所述稳定剂为黄胶原或辛烯基琥珀酸淀粉钠。其它与具体实施方式六相同。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式六或七不同的是：原料中还加入甜味剂，所述甜味剂为甜菊糖甙、三氯蔗糖或罗汉果甙。其它与具体实施方式六或七相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式六不同的是：所述欧洲醋栗提取物的制备方法，包括以下步骤：
取欧洲醋栗果实，清洗后自然晾干，用组织搅碎机制成匀浆，将匀浆加入圆底烧瓶中，加入乙酸乙酯，加热回流提取2～3h，冷却后滤出提取液，残渣重复提取一次，合并两次的提取液，回收乙酸乙酯得浸膏，粉碎至60～80目，得到提取物。其它与具体实施方式六相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式六不同的是：所述金癞瓜籽提取物的制备方法，包括以下步骤：
将金癞瓜切开，取其中红色的金癞瓜籽，放入-80℃冰箱冷冻过夜，然后进行冷冻干燥，之后研磨成粉末，得到金癞瓜籽冻干粉；
向金癞瓜籽冻干粉之后加入乙醇，加热到60℃提取2～3h，过滤得到乙醇提取液，重复提取2～3次后合并提取液，加热至60℃抽真空回流回收乙醇，再用乙酸乙酯萃取，将萃取液至的乙酸乙酯回收后用水溶解，然后通过大孔树脂纯化，用60～80％的乙醇洗脱，最后将洗脱液浓缩、干燥、粉碎，得到提取物。其它与具体实施方式六相同。
具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式六不同的是：所述榛仁多糖的制备方法，包括以下步骤：
将榛仁干燥、粉碎，加入石油醚，于40～70℃加热回流提取2～3次，每次2～5h，过滤，合并滤液，于50～60℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂榛仁；
将脱脂榛仁加入蒸馏水，于80～90℃水浴提取3次，合并提取液，浓缩，加入等体积的质量浓度15％的三氯乙酸，12～14h后离心，取上清液，向上清液中加入3倍体积的95％乙醇，静置过夜，离心收集沉淀，依次用乙醚、无水乙醇洗涤，共3～5次，真空冻干得到粉末，即为榛仁多糖。其它与具体实施方式六相同。
具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式六不同的是：所述龙葵多糖的制备方法，包括以下步骤：
龙葵全草氯仿-甲醇(2:1)脱脂，脱色，用80％乙醇加热回流提取2～3次，过滤后得到残渣；
取干燥后的残渣，加入15倍量的蒸馏水煎煮2次，每次4h，合并提取液，减压浓缩，加入95％乙醇至最终乙醇体积分数为80％，4℃静置过夜，离心收集沉淀，依次用乙醚、无水乙醇洗涤，共3～5次，真空冻干得到粉末，即为龙葵多糖。其它与具体实施方式六相同。
具体实施方式十三：本实施方式具有抗氧化功能的保健食品在制备降血脂的食品及保健品中的应用。
下面对本发明的实施例做详细说明，以下实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方案和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1：
本实施例具有抗氧化功能的保健食品组合物由600g欧洲醋栗提取物、800g金癞瓜籽提取物、50g榛仁多糖和70g龙葵多糖组成。
其中所述欧洲醋栗提取物的制备方法，包括以下步骤：
取欧洲醋栗果实，清洗后自然晾干，用组织搅碎机制成匀浆，将匀浆加入圆底烧瓶中，加入乙酸乙酯，加热回流提取2h，冷却后滤出提取液，残渣重复提取一次，合并两次的提取液，回收乙酸乙酯得浸膏，粉碎至60目，得到欧洲醋栗提取物。
所述金癞瓜籽提取物的制备方法，包括以下步骤：
将金癞瓜切开，取其中红色的金癞瓜籽，放入-80℃冰箱冷冻过夜，然后进行冷冻干燥，之后研磨成粉末，得到金癞瓜籽冻干粉；
向金癞瓜籽冻干粉之后加入乙醇，加热到60℃提取2h，过滤得到乙醇提取液，重复提取3次后合并提取液，加热至60℃抽真空回流回收乙醇，再用乙酸乙酯萃取，将萃取液至的乙酸乙酯回收后用水溶解，然后通过大孔树脂纯化，用80％的乙醇洗脱，最后将洗脱液浓缩、干燥、粉碎，得到金癞瓜籽提取物。
所述榛仁多糖的制备方法，包括以下步骤：
将榛仁干燥、粉碎，加入石油醚，于50℃加热回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，于60℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂榛仁；
将脱脂榛仁加入蒸馏水，于80℃水浴提取3次，合并提取液，浓缩，加入等体积的三氯乙酸(15％)，12h后离心，取上清液，向上清液中加入3倍体积的95％乙醇，静置过夜，离心收集沉淀，依次用乙醚、无水乙醇洗涤，共3次，真空冻干得到粉末，即为榛仁多糖。
所述龙葵多糖的制备方法，包括以下步骤：
龙葵全草氯仿-甲醇(2:1)脱脂，脱色，用80％乙醇加热回流提取3次，过滤后得到残渣；
取干燥后的残渣，加入15倍量的蒸馏水煎煮2次，每次4h，合并提取液，减压浓缩，加入95％乙醇至最终乙醇体积分数为80％，4℃静置过夜，离心收集沉淀，依次用乙醚、无水乙醇洗涤，共3次，真空冻干得到粉末，即为龙葵多糖。
一、将本实施例的保健食品组合物加入蒸馏水至适量浓度，对保健食品组合物进行抗氧化能力测定，具体如下：
(一)清除羟基自由基能力测定
样品管：取2ml邻二氮菲溶液，向其中加入磷酸盐溶液(ph7.4)3ml，混匀后加入feso4溶液1ml，充分混匀后加入1.5ml组合物溶液，之后加超纯水，最后加2mlh2o2混合均匀，保温反应1h后，在536nm下测定数值。
空白管：用超纯水代替组合物溶液和h2o2溶液，测定方法同上。
损伤管：用超纯水代替组合物溶液，测定方法同上，并设3个重复取平均值。
试验结果：
对羟基自由基的清除能力较强，浓度为15mg/ml时，羟基自由基的清除率达到95.23％，高于同等实验条件下vc的清除率(92.89％)。
(二)清除超氧阴离子能力测定
取4ml组合物溶液，向其中加入5mltris-hcl缓冲液(ph8.2)，混匀后于水浴中保温15min，然后加入0.15ml邻苯三酚溶液，之后用0.8mlhcl溶液终止其反应，于335nm波长下测定。其中用超纯水作为对照，用tris缓冲液作为空白，重复3次试验取平均值。
试验结果：
对超氧阴离子的清除能力较强，浓度为15mg/ml时，超氧阴离子的清除率达到87.35％，高于同等实验条件下vc的清除率(85.13％)。
(三)清除h2o2能力的测定
取ph7.4磷酸盐缓冲液将组合物溶液稀释为试验浓度，同样取磷酸盐缓冲液将h2o2溶液稀释至40mmol/l。之后取稀释后的组合物溶液3ml，与0.6mlh2o2溶液充分混匀，静置后于230nm波长下测定其吸光值，其中以h2o2溶液自身的吸光值作为对照，重复3次试验取平均值。
试验结果：
对h2o2的清除能力较强，浓度为15mg/ml时，h2o2的清除率达到90.38％，与同等实验条件下vc的清除率(90.76％)相当。
二、对本实施例保健食品进行食用安全性检测，具体如下：
(一)试验材料
样品：将本实施例具有抗氧化功能的保健食品溶解于蒸馏水之后，配制成所需浓度，4℃保存，给药前水浴加热至37℃。
受试动物：健康的icr品系小鼠，体重18～22g，雌雄各半。
(二)试验方法
饲喂本实施例保健食品前后，实验小鼠雌雄分笼，全价颗粒饲料喂养，自由饮水，室温20～25℃，实验室相对湿度为50％～70％。
将小鼠随机分为2组：(1)本实施例保健食品组；(2)空白对照组。试验前禁食12h，用0.5g/ml的本实施例保健食品，第一天一次灌胃给药0.5ml/10g；空白对照组给予等量的蒸馏水。连续观察14d，记录受试小鼠行为、活动、摄食量、体重、粪便、死亡等情况，未死亡小鼠于14d后进行尸检。
试验结果：
本试验用最大给药量饲喂小鼠，给药当天见小鼠毛色光滑，活动、摄食量、粪便均正常，第二天活动、摄食量、体重增长、粪便等均正常，与空白对照组比较无明显差异，且两周内无死亡及其它异常发生，两组同时处死后进行尸检，各主要脏器(心、肝、脾、肺、肾)经肉眼观察未见异常改变，与空白对照组比较无明显差异。
毒性评价：
本发明具有抗氧化功能的保健食品灌胃给药的最大给药量试验结果表明，所用小鼠给药后均无明显的毒性反应，2周内没有死亡。因此本发明的保健食品食用安全。
实施例2：
本实施例具有抗氧化功能的保健食品组合物由500g欧洲醋栗提取物、700g金癞瓜籽提取物、80g榛仁多糖和60g龙葵多糖组成。
其中欧洲醋栗提取物、金癞瓜籽提取物、榛仁多糖和龙葵多糖的制备方法同实施例1。
(一)对本实施例的保健食品组合物进行体外抗氧化活性试验，对本实施例各组分的协同抗氧化作用进行验证，具体如下：
对比例1：以500g麦芽糊精代替500g欧洲醋栗提取物，其他组分均与实施例2相同。
对比例2：以700g麦芽糊精代替700g金癞瓜籽提取物，其他组分均与实施例2相同。
对比例3：以80g麦芽糊精代替80g榛仁多糖，其他组分均与实施例2相同。
对比例4：以60g麦芽糊精代替60g龙葵多糖，其他组分均与实施例2相同。
对比例5：以麦芽糊精代替代替实施例2制备的组合物。
分别取等量组合物，用30％的乙醇溶液溶解，分别测定其清除dpph和abts+的活性及总抗氧化能力(大鼠血清及总抗氧化能力试剂盒均为购买得到)，其结果如表1所示。
表1
由表1结果可以看出，本发明的组合物中各个组分协同作用，互相促进，表现出显著的抗氧化能力，抗氧化功效显著优于对比例。
(二)进行耐高温试验
将本实施例的保健食品分别置于室温、60℃、121℃的环境温度下，测定其清除dpph和abts+的活性及总抗氧化能力(大鼠血清及总抗氧化能力试剂盒均为购买得到)，其结果如表2所示。
表2
由表2结果可以看出，本发明的组合物在121℃的高温下，仍具有较高的抗氧化能力，说明本发明的保健食品能够耐高温。
(三)进行长期储存试验
将本实施例的保健食品在常温下分别储存10天、15天、30天以后，测定其清除dpph和abts+的活性及总抗氧化能力(大鼠血清及总抗氧化能力试剂盒均为购买得到)，其结果如表3所示。
表3
由表2结果可以看出，本发明的组合物在常温下储存30～60天，仍具有较高的抗氧化能力，说明本发明的保健食品具有较长的存储期限。
实施例3：
本实施例具有抗氧化功能的保健食品组合物由600g欧洲醋栗提取物、900g金癞瓜籽提取物、50g榛仁多糖和100g龙葵多糖组成。
其中欧洲醋栗提取物、金癞瓜籽提取物、榛仁多糖和龙葵多糖的制备方法同实施例1。
(一)动物
icr小鼠，雌雄各半，体重18～22g。
(二)方法
将小鼠随机分为正常对照组和高脂饲料组，正常对照组动物从试验开始至结束用普通饲料喂养，其余动物均喂高脂醇饲料(高脂饲料配方：胆固醇1％、蛋黄粉10％、猪油10％、基础饲料79％)，3周后测量体重，高脂饲料组动物体重高于正常对照组，经t检验，数据差异具有显著意义(见表4)，确定已形成高脂血症模型，再将高脂饲料组动物按体重随机分为模型对照组、阳性药对照组、组合物高剂量组、组合物中剂量组、组合物低剂量组，动物继续给予高脂饲料，模型对照组每天给予相应体积的溶媒，组合物高剂量组以45mg/kg·d的剂量进行组合物灌胃给药，组合物中剂量组以15mg/kg·d的剂量进行组合物灌胃给药，组合物低剂量组以5mg/kg·d的剂量进行组合物灌胃给药，阳性药对照组给予5mg/kg·d的洛伐他汀，正常对照组给予等体积的溶媒。20d后，各组小鼠均禁食12h，眼眶取血，肝素抗凝，抗凝血液离心分离血浆由于血脂测定。其中ldl-c、hdl-c、tc、tg的测定按照试剂盒的说明方法进行，结果如表4所示。
表4
备注：与模型对照组相比，*p<0.05，**p<0.01。
试验结果表明，组合物给药组、阳性药对照组的血浆中tg、tc、ldl-c均较模型对照组有所降低，数据差异有显著意义。组合物各个给药组与阳性药对照组的血浆中hdl-c较较模型对照组有所升高，数据差异有显著意义。说明本实施例的组合物能够降低营业性高血脂小鼠的血浆总胆固醇、总甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇等指标，升高高密度脂蛋白胆固醇水平，具有较好的降血脂作用。