一种增强免疫力的发酵植物饮料及其制备方法与流程

文档序号:12972539阅读:457来源:国知局
本发明属于植物饮料
技术领域
,具体涉及一种增强免疫力的发酵植物饮料及其制备方法。
背景技术
:现代社会竞争激烈,随着人们生活节奏的日益加快,来自生活、工作、学习等方面的压力和应激刺激日益强烈而持久,人们极易出现倦怠、疲惫,肌肉和精神的疲劳,工作欲望减退及工作效率下降等各种各样的疲劳症状,从而导致免疫功能低下,它不但使人们的生活质量降低,也制约了经济的发展,因此,增强机体免疫力,已经成为当务之急。中医认为疾病的发生、发展和转归取决于正邪的消长,从而提出了扶正祛邪的主要治病原则。在自然界中,机体与致病因子是不断进行斗争的,表现为“正邪分争”。人体内“正气”始终与外界存在的“邪气”抗争着,在致邪的环境中,有些人得病,有些人则不得病,有些人得病立即发病,有些人得病则不发病或缓慢发病,由于正邪分争过程中正气占据主要地位,正气总是战胜邪气,因此人群中健康是多见的和通常的,而疾病则是少见的和不通常的。增加体质,提高机体免疫能力,抵抗外邪、抗病毒能力是一种治疗原则,通过增强正气的方法,祛邪外出,恢复健康状态。公开号为cn105420033a的专利提供了一种椰枣玉竹气泡酒的酿制方法,采用新鲜椰枣和玉竹为原料,通过原料预处理、混合、发酵、装瓶、二次发酵、转瓶、除渣、包装,制备成果酒;添加了白花龙胆、白僵蚕、葶苈子、桃儿七、猫屎瓜、螃蟹甲、黄芪、小檗皮、胡桃仁、山药、红冬蛇菰、阿胶、甘草等中材药成分,充分利用了椰枣和玉竹的营养价值,所用原料与所添加中药成分协同增效,使得本发明的果酒不仅具有原料的既有营养成份,更具有润肺化痰、止咳生津的保健功效,有利于人体健康,而且制备方法科学、易行,可操作性强;成品果酒因通过了瓶中二次发酵,致使酒体含有大量二氧化碳,色泽莹润,并具丰富细腻的泡沫,酒体口感清新、绵甜,口味幽香,酒香果香并存,具有显著的经济价值。该发明存在如下问题:原料种类多;酿制过程采用多种酶制剂,价格贵;具体效果不明确;酿制时间长。公开号为cn105495230a的专利提供了一种乳酸菌发酵植物饮料及其制备方法。所述乳酸菌发酵植物饮料是由包括荠芋、麦芽、薏苡红、淡竹叶、茯苓、枸杞子、玉竹、山药、橙子、葛根、黑米和蜂蜜糖的原料经乳酸菌发酵制成。所述原料按重量份数计为:荠芋5~10份、麦芽5~10份、薏苡红10~20份、淡竹叶5~10份、茯苓5~10份、枸杞子10~20份、玉竹5~10份、山药10~20份、橙子15~25份、葛根10~20份、黑米30~50份、蜂蜜50~70份和糖10~20份;乳酸菌5~10份,其制备方法包括如下步骤:(1)将荠芋、麦芽、淡竹叶、玉竹、葛根洗净后,放入缸中浸泡3~5天;(2)将山药、茯苓和枸杞子煎煮后倒入上述缸中;将薏苡红和黑米蒸煮后倒入上述缸中,加入乳酸菌、蜂蜜,搅缸3天~5天,每天2次;然后静置4~5天;(3)再将橙子搅碎后加入到上述缸中,加入糖,搅缸后封缸发酵90~120天;(4)发酵结束后,将发酵所得干料分数缸,在各分缸中分别加入纯净水,搅缸均匀后继续封缸发酵7~10天,待发酵结束后,经过滤、灌装、灭菌得到乳酸菌发酵植物饮料。该发明所述乳酸菌发酵植物饮料中富含多种微量元素、维生素、有机酸和黄酮类物质,具有较强的抗氧化性能,具有提高人体免疫力的保健功能。该发明存在如下问题:该发明植物饮料虽然营养物质丰富,但是增强免疫力的效果不明确;原料荠芋、麦芽、淡竹叶、玉竹、葛根仅采用浸泡处理,在初始发酵阶段营养成分溶出困难,发酵效率低下;总发酵时间超过3个月,不利于工业化生产。技术实现要素:有鉴于此,本发明所要解决的技术问题是提供一种发酵植物饮料,具有增强人体免疫力的功效。为实现上述目的,本发明所采用的技术方案是:一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣20~30份、白扁豆20~30份、菊苣10~20份、厚朴花10~20份、槐实10~20份、玉竹5~15份、榧子5~15份、肉桂5~15份、薤白5~15份。优选地,所述增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣20份、白扁豆20份、菊苣10份、厚朴花10份、槐实10份、玉竹5份、榧子5份、肉桂5份、薤白5份。优选地,所述增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣30份、白扁豆30份、菊苣20份、厚朴花20份、槐实20份、玉竹15份、榧子15份、肉桂15份、薤白15份。优选地,所述增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣25份、白扁豆25份、菊苣15份、厚朴花15份、槐实15份、玉竹10份、榧子10份、肉桂10份、薤白10份。优选地,所述微生物为醋酸杆菌、酵母菌和芽胞杆菌。一种增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法,包括以下步骤:步骤s1:称取新鲜椰枣清洗,将表皮水分晾干,打浆,得到浆料;称取干燥的白扁豆、菊苣、厚朴花、槐实、玉竹、榧子、肉桂和薤白,混合,置于粉碎机中充分粉碎,得到粉料;步骤s2:将所述粉料加入浆料中,搅拌均匀,得到混合料,在所述混合料中选择性加入无菌水,使所述混合料的固体物质含量在30%以下,静置30~40分钟,微波辐照1~5分钟;步骤s3:在经过所述微波辐照后的料液中选择加入葡萄糖,使所述料液的总糖含量在20%以上,得到初始发酵液;步骤s4:将所述初始发酵液进行一次高温杀菌,冷却后,接入芽胞杆菌,恒温振荡发酵24~32小时,得一次发酵液;步骤s5:在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌,恒温发酵18~24小时,得二次发酵液;步骤s6:将所述二次发酵液进行固液分离,收集液体,加入澄清剂进行静置澄清,过滤得到澄清液;步骤s7:将所述澄清液进行二次高温杀菌,冷却,分装,即得。优选地,步骤s2中所述微波辐照的功率为500~700w,频率为2000~2500mhz。优选地,步骤s4中所述一次高温杀菌的温度为105~110℃,时间为18~20分钟。优选地,步骤s7中所述二次高温杀菌的温度为105~110℃,时间为18~20分钟。与现有技术相比,本发明的有益效果如下:1)本发明增强免疫力的发酵植物饮料所用原料椰枣补中益气、白扁豆健脾和中,合为君药,菊苣清肝健胃、厚朴花理气宽中、槐实清热泻火,合为臣药,玉竹生津养阴、榧子润燥通便、肉桂暖脾胃、薤白行气导滞,合为佐使药,诸药合用,扶正祛邪,益气养阴,疏肝健脾,清热解毒,增强人体免疫力,改善人体微循环。本发明各原料药材的药理如下:椰枣:为椰枣树的新鲜果实,即鲜椰枣,性甘、温,无毒。功用:补中益气,止咳润肺,化痰平喘。椰枣含蛋白质、脂肪、多糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、氨基酸,类胡萝卜素,以及少量维生素b1、维生素b2、维生素c等。果实为浆果,长圆形或长圆状椭圆形,似枣子,长3.5-7厘米,成熟时深橙黄色,果肉肥厚;白扁豆:别名:扁豆、藊豆、南扁豆、蛾眉豆、眉豆。豆科草本植物扁豆dolichoslablabl.的成熟种子。性微温,味甘。归脾经、胃经。健脾化湿、和中消暑;立冬前后采摘成熟荚果,晒干,取出种子,再晒干;菊苣:菊科植物菊苣cichoriumintybusl_的地上部分。性凉,味微苦、咸。清肝利胆、健胃消食、利尿消肿;夏季采收,切段,晒干。厚朴花:别名:调羹花。木兰料植物凹叶厚朴magnoliaofficinalisrehd.etwils.var.bilobarehd.etwils.的花蕾。性温,味苦。归脾经、胃经。芳香化湿,理气宽中;春末夏初采收,置笼中蒸至上汽后约10分钟取出,晾干;槐实:别名:槐子、槐角、槐荚、槐豆。豆科植物槐sophorajaponical.的成熟果实。性寒,味苦。归肝经、大肠经。清热泻火、凉血止血;冬季采收成熟果实,除去杂质,晒干;玉竹:别名:玉术、玉竹参、连州竹、玉竹面。百合科植物玉竹polygonatumodoratum(mill.)druce.的根茎。性微寒,味甘。归肺经、胃经。养阴润燥、生津止渴;秋季采挖,除去须根,洗净,蒸透,揉至半透明,晾干。榧子:别名:香榧子、木榧子、大榧子。红豆杉科植物榧torreyagrandisfort.的干燥成熟种子。性味:甘、涩、平。归肺经、胃经、大肠经。甘香质润,性平不偏,既杀虫消积,又润肠燥而通便,还润肺燥而止咳;秋季种子成熟时采收,除去肉质假种皮,洗净,晒干;肉桂:别名:菌桂、大桂、筒桂、辣桂、玉桂、牡桂、紫桂、桂皮。为樟科植物肉桂cinnamomumcassiapresl的干燥树皮。性大热,味辛、甘。归肾经、脾经、心经、肝经。补火助阳,引火归元,散寒止痛,温通经脉;多于秋季剥取,阴干,除去杂质及粗皮,用时捣碎;薤白:别名:薤根、蕌头、小独蒜、野蒜、薤白头。百合科植物小根蒜alliummacrostemonbge.或薤alliumchinenseg.don的鳞茎。性温,味辛、苦。归心经、肺经、胃经、大肠经。通阳散结、行气导滞。北方多在春季,南方多在夏、秋季采收。连根挖起,除去茎叶及须根,洗净,用沸水煮透,晾干。2)本发明通过反复试验发现采用醋酸杆菌、酵母菌和芽胞杆菌为发酵微生物,并且以芽胞杆菌为一阶段发酵微生物,以醋酸杆菌、酵母菌为二阶段发酵微生物,通过工艺搭配和参数优化,制得饮料产品口感纯正,温和不刺激,在室温及冷藏条件下稳定性好,对原料的功效起到明显的强化和辅助作用。经过动物实验发现,本发明增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠具有免疫增强作用。具体实施方式为了更好地理解本发明,下面结合实施例进一步清楚阐述本发明的内容,但本发明的保护内容不仅仅局限于下面的实施例。在下文的描述中,给出了大量具体的细节以便提供对本发明更为彻底的理解。然而,对于本领域技术人员来说显而易见的是,本发明可以无需一个或多个这些细节而得以实施。本发明提供了一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣20~30份、白扁豆20~30份、菊苣10~20份、厚朴花10~20份、槐实10~20份、玉竹5~15份、榧子5~15份、肉桂5~15份、薤白5~15份。本发明还提供了上述增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法,包括以下步骤:步骤s1:称取新鲜椰枣清洗,将表皮水分晾干,打浆,得到浆料;称取干燥的白扁豆、菊苣、厚朴花、槐实、玉竹、榧子、肉桂和薤白,混合,置于粉碎机中充分粉碎,得到粉料;步骤s2:将所述粉料加入浆料中,搅拌均匀,得到混合料,在所述混合料中选择性加入无菌水,使所述混合料的固体物质含量在30%以下,静置30~40分钟,微波辐照1~5分钟;步骤s3:在经过所述微波辐照后的料液中选择加入葡萄糖,使所述料液的总糖含量在20%以上,得到初始发酵液;步骤s4:将所述初始发酵液进行一次高温杀菌,冷却后,接入芽胞杆菌,恒温振荡发酵24~32小时,得一次发酵液;步骤s5:在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌,恒温发酵18~24小时,得二次发酵液;步骤s6:将所述二次发酵液进行固液分离,收集液体,加入澄清剂进行静置澄清,过滤得到澄清液;步骤s7:将所述澄清液进行二次高温杀菌,冷却,分装,即得。其中,步骤s1中新鲜椰枣需去核,在密闭环境中打浆。粉碎优选采用超微粉碎的方法,粉碎粒度达到微米级,营养成分更易于溶出。步骤s2中所述混合料的固体物质含量采用固液分离的方法进行测定,等于固液分离收集的固体物质质量/混合料的总质量×100%;采用无菌水调整使得所述混合料的固体物质含量在20%以下,以免固体物质含量过大,影响微生物发酵品质。微波辐照作为一种辅助提取手段,有助于提高混合料中水溶性营养成分的溢出和扩散,使得营养成分能够更充分地被提取出来,提高饮料的营养价值,其中,本发明结合原料特性,通过大量试验确定:微波辐照的功率为500~700w,频率为2000~2500mhz。步骤s3中所述料液的总糖含量采用菲林试剂滴定法进行测定;采用葡萄糖调整总糖含量(质量百分含量)在15%以上,若料液的总糖含量经测定在15%以上,则无需添加葡萄糖。料液采用柠檬酸或柠檬酸钠进行ph调节。步骤s4中所述一次高温杀菌的温度为105~110℃,时间为18~20分钟;优选为105℃,20分钟;在一次高温杀菌过程中不仅杀灭了初始发酵液中的有害微生物,而且在此高温过程中部分原料可能发生熟化和其他反应。一次高温杀菌结束后,置于无菌环境中冷却,冷却至温度不高于微生物发酵温度。所述芽孢杆菌可选择枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌中的一种或两种以上的组合物,优选为复合芽孢杆菌。本发明下述实施例中所用芽孢杆菌均由上海阳农生物科技有限公司提供,主要成分为枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌等,有效活菌数≥100亿/ml。所述芽胞杆菌的接种量为2.0~2.5%,优选为2.3%。所述恒温振荡发酵具体可在恒温摇床中进行发酵,发酵温度为30~35℃,摇床转速为150~200rpm,发酵时间为24~32小时。本发明接种量是指移入种子液的体积与接种后培养液体积的比值。步骤s5中一次发酵液无需处理,在无菌环境下接种酵母菌和醋酸杆菌。酵母菌和醋酸杆菌均可通过市场购买获得,本领域技术人员根据常规技术知识可进行扩大培养以提高发酵效率。所述酵母菌的浓度为0.5×106~1×106cfu/ml,所述醋酸杆菌(acetobacteraceti)的浓度为1×106~3×106cfu/ml,所述酵母菌的接种量为1.0~1.5%,所述醋酸杆菌的接种量0.3~0.5%。恒温发酵的温度为28~32℃,时间为18~24小时。步骤s6中所述固液分离可采用过滤或抽滤实现;澄清剂选择ztc天然澄清剂和101系列澄清剂,优选为ztc-ⅲ型澄清剂,可通过市场购买获得。本发明中澄清剂的加入质量是二次发酵液进行固液分离后所收集液体体积的0.1~0.3%。步骤s7中二次高温杀菌的温度为105~110℃,时间为10~20s;冷却后进行分装。本发明可选择在步骤s6与步骤s7之间增加调配步骤,具体是:在所述澄清液中加入调配剂进行调配,主要是调节产品的口感和营养,调配剂可以是糖、酸、营养剂等,糖可选择白砂糖、麦芽糖、蔗糖等,酸可选择柠檬酸等,营养剂可选择天然维生素、微量元素等。经过调配后,本发明增强免疫力的发酵植物饮料可适用于某种或某些营养元素缺乏的人群。实施例1一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣25份、白扁豆25份、菊苣15份、厚朴花15份、槐实15份、玉竹10份、榧子10份、肉桂10份、薤白10份。一种增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法,包括以下步骤:步骤s1:称取新鲜椰枣清洗,将表皮水分晾干,打浆,得到浆料;称取干燥的白扁豆、菊苣、厚朴花、槐实、玉竹、榧子、肉桂和薤白,混合,置于粉碎机中充分粉碎,得到粉料;步骤s2:将所述粉料加入浆料中,搅拌均匀,得到混合料,测定混合料的固体物质含量,加入无菌水,调节所述混合料的固体物质含量为30.0%,静置35分钟,微波辐照2分钟;步骤s3:测定经过所述微波辐照后的料液的总糖含量,加入葡萄糖,调节所述料液的总糖含量为20.0%,得到初始发酵液;步骤s4:将所述初始发酵液进行一次高温杀菌,所述一次高温杀菌的温度为105℃,时间为20分钟,冷却后,接入芽胞杆菌,所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌,有效活菌数为100亿/ml,接种量为2.3%,在恒温摇床中进行发酵,发酵温度为32℃,摇床转速为180rpm,发酵时间为28小时,得一次发酵液;步骤s5:在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌,所述酵母菌的浓度为0.8×106cfu/ml,接种量为1.3%,所述醋酸杆菌的浓度为2×106cfu/ml,接种量0.4%,恒温发酵的温度为30℃,时间为20小时,得二次发酵液;步骤s6:将所述二次发酵液进行固液分离,收集液体,加入0.2%的ztc-ⅲ型澄清剂进行静置澄清,过滤得到澄清液;步骤s7:将所述澄清液进行二次高温杀菌,所述二次高温杀菌的温度为105℃,时间为15s,冷却,分装,即得。实施例2一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣20份、白扁豆20份、菊苣10份、厚朴花10份、槐实10份、玉竹5份、榧子5份、肉桂5份、薤白5份。一种增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法,包括以下步骤:步骤s1:称取新鲜椰枣清洗,将表皮水分晾干,打浆,得到浆料;称取干燥的白扁豆、菊苣、厚朴花、槐实、玉竹、榧子、肉桂和薤白,混合,置于粉碎机中充分粉碎,得到粉料;步骤s2:将所述粉料加入浆料中,搅拌均匀,得到混合料,测定混合料的固体物质含量,加入无菌水,调节所述混合料的固体物质含量为29.3%,静置32分钟,微波辐照3分钟;步骤s3:测定经过所述微波辐照后的料液的总糖含量,加入葡萄糖,调节所述料液的总糖含量为24.3%,得到初始发酵液;步骤s4:将所述初始发酵液进行一次高温杀菌,所述一次高温杀菌的温度为110℃,时间为18分钟,冷却后,接入芽胞杆菌,所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌,有效活菌数为105亿/ml,接种量为2.0%,在恒温摇床中进行发酵,发酵温度为30℃,摇床转速为150rpm,发酵时间为24小时,得一次发酵液;步骤s5:在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌,所述酵母菌的浓度为0.5×106cfu/ml,接种量为1.5%,所述醋酸杆菌的浓度为1×106cfu/ml,接种量0.5%,恒温发酵的温度为28℃,时间为24小时,得二次发酵液;步骤s6:将所述二次发酵液进行固液分离,收集液体,加入0.1%的ztc-ⅲ型澄清剂进行静置澄清,过滤得到澄清液;步骤s7:将所述澄清液进行二次高温杀菌,所述二次高温杀菌的温度为110℃,时间为10s,冷却,分装,即得。实施例3一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣30份、白扁豆30份、菊苣20份、厚朴花20份、槐实20份、玉竹15份、榧子15份、肉桂15份、薤白15份。一种增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法,包括以下步骤:步骤s1:称取新鲜椰枣清洗,将表皮水分晾干,打浆,得到浆料;称取干燥的白扁豆、菊苣、厚朴花、槐实、玉竹、榧子、肉桂和薤白,混合,置于粉碎机中充分粉碎,得到粉料;步骤s2:将所述粉料加入浆料中,搅拌均匀,得到混合料,测定混合料的固体物质含量,加入无菌水,调节所述混合料的固体物质含量为29.5%,静置30分钟,微波辐照5分钟;步骤s3:测定经过所述微波辐照后的料液的总糖含量,加入葡萄糖,调节所述料液的总糖含量为21.2%,得到初始发酵液;步骤s4:将所述初始发酵液进行一次高温杀菌,所述一次高温杀菌的温度为108℃,时间为20分钟,冷却后,接入芽胞杆菌,所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌,有效活菌数为100亿/ml,接种量为2.5%,在恒温摇床中进行发酵,发酵温度为32℃,摇床转速为200rpm,发酵时间为32小时,得一次发酵液;步骤s5:在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌,所述酵母菌的浓度为1×106cfu/ml,接种量为1.0%,所述醋酸杆菌的浓度为3×106cfu/ml,接种量0.3%,恒温发酵的温度为32℃,时间为18小时,得二次发酵液;步骤s6:将所述二次发酵液进行固液分离,收集液体,加入0.28%的ztc-ⅲ型澄清剂进行静置澄清,过滤得到澄清液;步骤s7:将所述澄清液进行二次高温杀菌,所述二次高温杀菌的温度为108℃,时间为20s,冷却,分装,即得。实施例4一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣23份、白扁豆23份、菊苣12份、厚朴花12份、槐实12份、玉竹7份、榧子7份、肉桂7份、薤白7份。一种增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法,包括以下步骤:步骤s1:称取新鲜椰枣清洗,将表皮水分晾干,打浆,得到浆料;称取干燥的白扁豆、菊苣、厚朴花、槐实、玉竹、榧子、肉桂和薤白,混合,置于粉碎机中充分粉碎,得到粉料;步骤s2:将所述粉料加入浆料中,搅拌均匀,得到混合料,测定混合料的固体物质含量,加入无菌水,调节所述混合料的固体物质含量为28.9%,静置40分钟,微波辐照1分钟;步骤s3:测定经过所述微波辐照后的料液的总糖含量,加入葡萄糖,调节所述料液的总糖含量为21.2%,得到初始发酵液;步骤s4:将所述初始发酵液进行一次高温杀菌,所述一次高温杀菌的温度为105℃,时间为20分钟,冷却后,接入芽胞杆菌,所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌,有效活菌数为110亿/ml,接种量为2.1%,在恒温摇床中进行发酵,发酵温度为34℃,摇床转速为180rpm,发酵时间为30小时,得一次发酵液;步骤s5:在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌,所述酵母菌的浓度为0.6×106cfu/ml,接种量为1.2%,所述醋酸杆菌的浓度为1.5×106cfu/ml,接种量0.4%,恒温发酵的温度为30℃,时间为20小时,得二次发酵液;步骤s6:将所述二次发酵液进行固液分离,收集液体,加入0.30%的101系列澄清剂进行静置澄清,过滤得到澄清液;步骤s7:将所述澄清液进行二次高温杀菌,所述二次高温杀菌的温度为110℃,时间为10s,冷却,分装,即得。实施例5一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣28份、白扁豆28份、菊苣18份、厚朴花18份、槐实18份、玉竹13份、榧子13份、肉桂13份、薤白13份。一种增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法,包括以下步骤:步骤s1:称取新鲜椰枣清洗,将表皮水分晾干,打浆,得到浆料;称取干燥的白扁豆、菊苣、厚朴花、槐实、玉竹、榧子、肉桂和薤白,混合,置于粉碎机中充分粉碎,得到粉料;步骤s2:将所述粉料加入浆料中,搅拌均匀,得到混合料,测定混合料的固体物质含量,加入无菌水,调节所述混合料的固体物质含量为29.7%,静置38分钟,微波辐照2分钟;步骤s3:测定经过所述微波辐照后的料液的总糖含量,加入葡萄糖,调节所述料液的总糖含量为25.2%,得到初始发酵液;步骤s4:将所述初始发酵液进行一次高温杀菌,所述一次高温杀菌的温度为105℃,时间为20分钟,冷却后,接入芽胞杆菌,所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌,有效活菌数为100亿/ml,接种量为2.5%,在恒温摇床中进行发酵,发酵温度为32℃,摇床转速为200rpm,发酵时间为28小时,得一次发酵液;步骤s5:在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌,所述酵母菌的浓度为0.9×106cfu/ml,接种量为1.2%,所述醋酸杆菌的浓度为2.5×106cfu/ml,接种量0.4%,恒温发酵的温度为32℃,时间为20小时,得二次发酵液;步骤s6:将所述二次发酵液进行固液分离,收集液体,加入0.21%的101系列澄清剂进行静置澄清,过滤得到澄清液;步骤s7:将所述澄清液进行二次高温杀菌,所述二次高温杀菌的温度为105℃,时间为15s,冷却,分装,即得。实施例6一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣25份、白扁豆28份、菊苣16份、厚朴花15份、槐实17份、玉竹12份、榧子12份、肉桂10份、薤白10份。本实施例增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法参阅实施例1,不再赘述。实施例7一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣26份、白扁豆24份、菊苣16份、厚朴花15份、槐实16份、玉竹12份、榧子13份、肉桂9份、薤白11份。本实施例增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法参阅实施例1,不再赘述。实施例8一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣27份、白扁豆27份、菊苣19份、厚朴花18份、槐实18份、玉竹13份、榧子13份、肉桂12份、薤白12份。本实施例增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法参阅实施例1,不再赘述。对比例1:省略白扁豆一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣25份、菊苣15份、厚朴花15份、槐实15份、玉竹10份、榧子10份、肉桂10份、薤白10份。增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法参阅实施例1。对比例2:省略菊苣、厚朴花和槐实一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣25份、白扁豆25份、竹10份、榧子10份、肉桂10份、薤白10份。增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法参阅实施例1。对比例3:省略玉竹、榧子、肉桂和薤白一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣25份、白扁豆25份、菊苣15份、厚朴花15份、槐实15份。增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法参阅实施例1。对比例4:省略菊苣一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣25份、白扁豆25份、厚朴花15份、槐实15份、玉竹10份、榧子10份、肉桂10份、薤白10份。增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法参阅实施例1。对比例5:省略肉桂一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣25份、白扁豆25份、菊苣15份、厚朴花15份、槐实15份、玉竹10份、榧子10份、薤白10份。增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法参阅实施例1。对比例6:省略椰枣和白扁豆一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:菊苣15份、厚朴花15份、槐实15份、玉竹10份、榧子10份、肉桂10份、薤白10份。增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法参阅实施例1。对比例7一种增强免疫力的发酵植物饮料,由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成:椰枣25份。增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法参阅实施例1。对比例8一种增强免疫力的发酵植物饮料,原料组成与实施例1相同。增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法,与实施例1不同的是:步骤s2中省略调节混合料的固体物质含量,同时,步骤s3中省略调节料液的总糖含量。对比例9一种增强免疫力的发酵植物饮料,原料组成与实施例1相同。增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法,与实施例1不同的是:一次性接入芽胞杆菌、酵母菌和醋酸杆菌,采用下述步骤替代实施例1中的步骤s4和步骤s5,具体为:将所述初始发酵液进行一次高温杀菌,所述一次高温杀菌的温度为105℃,时间为20分钟,冷却后,接入芽胞杆菌、酵母菌和醋酸杆菌,所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌,有效活菌数为100亿/ml,接种量为2.3%,所述酵母菌的浓度为0.8×106cfu/ml,接种量为1.3%,所述醋酸杆菌的浓度为2×106cfu/ml,接种量为0.4%,在恒温摇床中进行发酵,发酵温度为30℃,摇床转速为180rpm,发酵时间为48小时,得发酵液。对比例10一种增强免疫力的发酵植物饮料,原料组成与实施例1相同。增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法,与实施例1不同的是:改变芽胞杆菌、酵母菌和醋酸杆菌的接入顺序,采用下述步骤替代实施例1中的步骤s4和步骤s5,具体为:步骤s4’:将所述初始发酵液进行一次高温杀菌,所述一次高温杀菌的温度为105℃,时间为20分钟,冷却后接入酵母菌和醋酸杆菌,所述酵母菌的浓度为0.8×106cfu/ml,接种量为1.3%,所述醋酸杆菌的浓度为2×106cfu/ml,接种量0.4%,恒温发酵的温度为30℃,时间为20小时,得一次发酵液;步骤s5’:在所述一次发酵液中接入芽胞杆菌,所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌,有效活菌数为100亿/ml,接种量为2.3%,在恒温摇床中进行发酵,发酵温度为32℃,摇床转速为180rpm,发酵时间为28小时,得二次发酵液。对比例11一种增强免疫力的发酵植物饮料,原料组成与实施例1相同。增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法,与实施例1不同的是:采用硅藻土作为澄清剂,用下述步骤替代实施例1中的步骤s6,具体为:将所述二次发酵液进行固液分离,收集液体,加入0.15%的硅藻土进行静置澄清,过滤得到澄清液。对比例12一种增强免疫力的发酵植物饮料,原料组成与实施例1相同。增强免疫力的发酵植物饮料的制备方法,与实施例1不同的是:省略澄清步骤,用下述步骤替代实施例1中的步骤s6,具体为:将所述二次发酵液进行固液分离,收集液体。产品效果评价1、经检测,本发明感官要求和理化要求符合gbt10789-2015和gb/t31326-2014植物饮料的相关规定。2、取本发明实施例1及对比例1~10制得产品检测增强免疫功能,实验设对照组,实验方法为:实验动物:balb/c小鼠,体重18~22g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,spf级。实验动物房许可证号:syxk(豫)2012-0005,屏障环境。将小鼠分为四批,每批140只,每批按体重随机分为14组,每组10只。大、中、小剂量实验组、对比1~10组及空白组,分别灌服实验组植物饮料(0.5g/kg、1.0g/kg、3.0g/kg,0.2ml/10g),对比1~10组(均为3.0g/kg,0.2ml/10g)及同体积蒸馏水。免疫一批进行小鼠碳廓清试验;免疫二批进行迟发型变态反应、抗体生成细胞检测、hc50测定;免疫三批进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验;免疫四批进行cona诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、nk细胞活性测定。经口给予每日一次,灌胃量为20ml/kg,连续灌胃30天后测定相应的免疫指标。实验结果:1)增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠体重的影响上述实验方法连续喂养30天,每周称一次,记录各批小鼠分别在试验初始、中期和末期的体重。结果发现,各组小鼠的初始体重均衡可比;各剂量组小鼠的中期体重及末期体重与空白组比较差异均无显著意义(p>0.05),说明本试验条件下增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠体重无明显影响。2)增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠脏器/体重比值的影响将小鼠连续灌胃30天,称重后脱臼处死,取脾脏与胸腺,滤纸吸干表面血污称重,计算脾脏/体重比值和胸腺体重比值。结果发现,各组小鼠的脏器/体重比重比值与空白组比较差异均无显著意义(p>0.05),说明本试验条件下增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠脏器/体重比值无明显作用。3)增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠碳廓清试验的影响小鼠尾静脉注射1:3稀释的印度墨汁,按每10g体重0.1ml计算,待墨汁注入,立即计时;注入墨汁后2、10min,分别从内眦静脉丛取血20μl,并立即将其加到2ml0.1%碳酸钠溶液中;用半自动生化分析仪在600nm波长处测光密度值,以碳酸钠溶液作空白对照;将小鼠处死,取肝脏和脾脏,用滤纸吸干脏器表面血污,称重;计算吞噬指数,结果用方差分析统计。表1增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠碳廓清能力(吞噬指数a)的作用,注:*表示p<0.05。由表1可知,大剂量实验组小鼠碳廓清能力(吞噬指数a)高于空白组,差异有统计学意义(p<0.05),说明增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠碳廓清能力有增强作用,该项实验结果为阳性。4)增强免疫力的发酵植物饮料对绵羊红细胞(srbc)诱导小鼠dth(足跖增厚法)的影响取羊血,用生理盐水洗涤3次(2000r/min,10分钟),每只小鼠经腹腔注射2%(v/v,用生理盐水配制)压积srbc0.2ml,致敏后4天,测量左右足跖部厚度,同一部位测量三次,取平均值;然后在测量部位皮下注射20%(v/v,用生理盐水配制)压积srbc20μl,于注射后24小时测量左右足跖部厚度,以统计前后足跖部厚度的差值来表示dth的程度。表2增强免疫力的发酵植物饮料对绵羊红细胞诱导小鼠dth的作用,注:*表示p<0.05,**表示p<0.01。由表2可知,中剂量实验组和大剂量实验组小鼠的足跖肿胀度均高于空白组,差异有统计学意义(p<0.05),说明增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠的迟发型变态反应能力有增强作用,该项实验结果为阳性。5)增强免疫力的发酵植物饮料对抗体生成细胞的影响将压积srbc用生理盐水配成2%的细胞悬液,每只鼠腹腔注射0.2ml进行免疫,5天后,将小鼠颈椎脱臼处死,取出脾脏,放在盛有hank’s液的研磨器内,轻轻磨碎脾脏,制成细胞悬液,经200目筛网过滤,离心(1000r/min)10min,用hank’s液洗2遍,最后将细胞悬浮在8mlrpmi1640培养液中;将表层培养基(1g琼脂糖加双蒸水至100ml)加热溶解后,放45℃水浴保温,与等量ph7.2~7.4、2倍浓度的hank’s液混合,分装小试管,每管0.5ml,再向管内加50μl10%srbc(v/v,用sa液配制),25μl脾细胞悬液,迅速混匀,倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上,做平行片,待琼脂凝固后,将玻片水平扣放在片架上,放入二氧化碳培养箱中温育1.5h,然后用sa缓冲液稀释的补体(1:6)加入到玻片架凹槽内,继续温育1.5h后,计数溶血空斑数。表3增强免疫力的发酵植物饮料对抗体生成细胞数的影响,注:*表示p<0.05。由表3可知,大剂量实验组小鼠溶血空斑数高于空白组,差异有显著意义(p<0.05),说明增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠抗体生成细胞的生成有促进作用,该项实验结果为阳性。6)增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠血清溶血素(半数溶血值hc50)的影响将压积srbc用生理盐水配成2%的细胞悬液,每只鼠腹腔注射0.2ml进行免疫,5天后,摘眼球取血,分离血清;血清用sa缓冲液稀释600倍,去稀释后的血清1ml,依次加入10%srbc0.5ml,补体1ml(用sa缓冲液按1:6稀释),另设不加血清对照管(用sa缓冲液代替)。置37℃恒温水浴25min,冰浴终止反应。2000r/min离心10分钟,取上清液1ml,都氏剂3ml于试管内,同时取10%srbc(v/v)0.25ml,加都氏剂至4ml于另一试管中,充分混匀,放置10min后,于540nm处测定各管的光密度值。样品hc50=样品光密度值/srbc半数溶血时的光密度值×稀释倍数表4增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠半数溶血值(hc50)的作用,注:*表示p<0.05。由表4可知,大剂量实验组小鼠hc50高于空白组,差异有显著意义(p<0.05),说明增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠半数溶血值有明显增高作用,该项实验结果为阳性。7)增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(体外法)的影响实验前4天给每只小鼠腹腔注射20%压积绵羊红细胞0.2ml,用颈椎脱臼法处死小鼠,经腹腔注射给予小鼠韩勇5%小牛血清的hank’s液5ml/只,轻揉腹部20次后抽取腹腔清洗液2ml,取0.5ml腹腔清洗液加入盛有hank’s液配制成的1%srbc悬液0.5ml的试管内,混匀,取混悬液0.5ml涂片,放入垫有湿纱布的瓷盘内,置37℃温箱内15分钟,取出后用生理盐水从玻片背面冲洗,固定,染色,阅片;计算吞噬率和吞噬指数。表5增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验的影响,注:*表示p<0.05。由表5可知,大剂量实验组小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬百分率及吞噬指数与空白组相比,差异有显著意义(p<0.05),说明增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力有升高作用,该项实验结果为阳性。8)增强免疫力的发酵植物饮料对cona诱导的小鼠淋巴细胞转化试验的影响无菌取脾,置于盛有适量无菌hank’s液的研磨器中,轻轻将脾脏磨碎,制成细胞悬液;经200目筛网过滤,用hank’s液洗2次,每次离心10min(1000r/min);然后将细胞悬浮于2ml的完全培养液中,计数活细胞数,调整细胞浓度为3×106个/ml;再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔1ml,在其中一孔加75μlcona液(相当于7.5μg/ml),另一孔作为对照,置5%co2,37℃co2培养箱中培养72h,培养结束前4h,每孔轻轻吸去上清液0.7ml,加入0.7ml不含小牛血清的rpmi1640培养液,同时加入mtt(5mg/ml)50μl/孔,继续培养4h,培养结束后,每孔加入1ml酸性异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶完全溶解。用半自动生化分析仪以570nm处测定光密度值。淋巴细胞的增殖能力用加cona孔的光密度值减去不加cona孔的光密度值表示。表6增强免疫力的发酵植物饮料对cona诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验的影响,注:*表示p<0.05,**表示p<0.01。由6可知,中剂量实验组和大剂量实验组cona诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力高于空白组,差异有显著意义(p<0.01),说明增强免疫力的发酵植物饮料对cona诱导的小鼠脾淋巴细胞转化有增强作用,该项实验结果为阳性。9)增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠nk细胞活性的影响无菌取脾,置于盛有适量无菌hank’s液的研磨器中,轻轻将脾脏磨碎,制成细胞悬液。经200目筛网过滤,用hank’s液洗2次,每次离心10min(1000r/min),最后用rpmi1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/ml;取靶细胞和效应细胞各100μl(效靶比50:1),加入u型96孔培养板中;靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl,靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%np40各100μl;上述各项均设三个复孔,于37℃、5%co2培养箱中培养4h,然后将96孔培养板以1500r/min离心5min,每孔吸取上清100μl置平底96孔培养板中,同时加入ldh基质液100μl,反应3min,每孔加入1mol/l的hcl30μl,在酶标仪490nm处测定光密度值(od)。nk细胞活性(%)=(反应孔od-自然释放孔od)/(最大释放孔od-自然释放孔od)×100%表7增强免疫力的发酵植物饮料对小鼠nk细胞活性的影响,注:*表示p<0.05。由表7可知,大剂量实验组小鼠nk细胞活性与空白组相比,差异有显著意义(p<0.05),说明本发明增强免疫力的发酵植物饮料对nk细胞活性有增强作用,该项实验结果为阳性。结论:根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中增强免疫力功能评价标准判定,增强免疫力的发酵植物饮料在细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞功能、nk细胞活性四个方面结果为阳性,该受试物对小鼠有增强免疫力的作用。对比1~10组均未在细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞功能和nk细胞活性这四个测定项目中任两项实验结果同时为阳性,故对小鼠无增强免疫力的作用。3、取本发明实施例1和对比例11~12制得产品分别分成两组,一组在温度25℃±2℃下直接进行浊度测定,浊度值如表8所示;另一组在2℃的冰箱中放置1天,浊度值如表9所示。表8温度25℃±2℃下不同澄清方法对浊度的影响组别浊度值(ntu)实施例112.1对比例11103.2对比例12470.1表92℃的冰箱中放置1天后不同澄清方法对浊度的影响组别浊度值(ntu)实施例114.1对比例11302.5对比例12620.3上述结果显示,温度25℃±2℃下采用本发明实施例1澄清方法对植物饮料澄清,浊度值是最低的,澄清效果最好;2℃的冰箱中放置1天后,实施例1的浊度有稍许升高,但是与对比例11和对比例12相比,浊度变化最小,澄清效果较稳定。最后说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换,只要不脱离本发明技术方案的精神和范围,均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。当前第1页12
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