本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种白芨提取物的提取方法及其美白养颜粥和制备方法。
背景技术：
“驻颜色”、“美容颜”、“健肌肤”体现了由古至今人们对美的不断追求，然而，伴随着社会发展脚步而来的环境问题却成为了人们求美道路上的一大障碍。皮肤长期暴露在外界有害因素(紫外线、化学物质等)之下能引起黑色素细胞中酪氨酸酶的过度表达，从而促进黑色素的产生。黑色素在皮肤真皮层的分布决定皮肤颜色的深浅。酪氨酸酶是黑色素合成过程中的关键酶，可催化l-酪氨酸生成多巴，多巴逐步氧化生成多巴醌，进而形成色素颗粒。人体酪氨酸酶的异常表达过量和催化活性升高不仅简单地使皮肤变黑，而且是引发皮肤黄褐斑、雀斑、老年斑及黑色素瘤等疾病的主要原因，严重地损害人体健康，而这个过程是可以预防与治疗的。
现在越来越多的人们认识到仅仅通过使用护肤品和化妆品是无法实现持久美白和美化肌肤效果的，只有结合内部调理，根本上减少影响美白的罪魁祸首-黑色素，肌肤才能真正展现由内而外的自然美白光彩。因此，有必要从安全、健康的基础上结合饮食，从美白的作用机理上去研发一款天然、高效、安全的美白养颜粥，以解决目前大多数人面临的护肤养颜难题。
目前存在一些现有技术对上述难题进行研究。如cn101899174a公开了用作化妆品原料的白芨多糖复合物及其制备方法，该发明经提取、酶处理、浓缩、干燥等步骤进行处理获得白芨多糖，然后将白芨多糖经过酶加工处理、色谱精制，制成小分子白芨多糖，白芨多糖复合物为最终提取物。该发明的美白作用的活性成分为多糖复合物，旨在化妆品中的应用。该现有技术存在如下缺点：①其制备的白芨多糖存在着高温作业，使部分热敏性活性成分的得到损失，有效成分提取得率低，且存在分离纯化困难，提取时间长等缺点；②其旨在化妆品中的应用，但仅仅通过使用化妆品是无法实现持久美白效果的，只有结合内部调理，才能实现由内而外的持久美白效果，而该发明的构思在饮食-粥的食品研发上未见揭示。
韩莹，张岩等在《贵阳医学院学报》(2014，39(1):77-79)发表《白芨水提取对黑素瘤与角质形成细胞共培养模型黑色合成的影响》，该技术采用水回流提取，浓缩，得到的白芨水提取物。该文章指出白芨水提取物抑制黑色素合成的半抑制浓度ic50约为0.5mg/ml，且该文章只是在抑制黑色素合成方面的研究，在美白的分子作用机制也未见阐明。该现有技术存在如下缺点：①其制备的白芨水提物存在着高温作业，使部分热敏性活性成分的得到损失，有效成分提取得率低，且存在分离纯化困难，提取时间长等缺点；②其白芨提取物抑制黑色素合成的作用效果不佳，美白功效上有待进一步提高；③该现有技术未阐明美白的分子作用机制，在饮食-粥的食品研发上也未见揭示。
cn106938008a公开了一种生态白芨口服冻干粉的加工工艺，该发明是将白芨块根切片，加入纯水榨成匀浆、过滤，再将匀浆进行纳米均质机破碎处理，低温冷冻、真空干燥，得到的白芨干粉。该发明未揭示白芨干粉的美白作用效果，旨在口服冻干粉的应用，存在如下缺点：制备的白芨干粉，有效成分提取得率低，制备时间长，且存在分离纯化困难，能源消耗大等缺点。
技术实现要素：
为此，本发明的目的之一在于提供一种白芨提取物、桑白皮提取物、葡萄籽提取物或高丽悬钩子果提取物的提取方法，本发明提供的提取方法采用生物酶解与超高压结合萃取技术制备白芨提取物，是一种绿色低温的萃取技术。
为达上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种白芨提取物、桑白皮提取物、葡萄籽提取物或高丽悬钩子果提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)将充分干燥的白芨、桑白皮、葡萄籽或高丽悬钩子果粉碎过120～400目筛，用500～2000目袋子装好，加乙醇浸泡，提取；
(2)向步骤(1)提取混合物中加入生物酶，优选为溶解充分的生物酶，进行酶解；固体粉末生物酶加入蒸馏水溶解充分即可；
(3)将步骤(2)所得混合物在排除空气后进行超高压加压处理后快速卸掉压力；
(4)步骤(3)超高压处理后除去袋子，余下的溶液即为白芨提取液，浓缩干燥得到干粉状的白芨、桑白皮、葡萄籽或高丽悬钩子果提取物。
本发明白芨提取物、桑白皮、葡萄籽或高丽悬钩子果提取物采用生物酶解与超高压提取技术结合溶剂提取法可以快速高效的将白芨、桑白皮、葡萄籽或高丽悬钩子果有效成分提取出来。本发明提供的白芨美白作用效果的活性成分不仅仅为多糖，还包括一些多酚类物质、联苄类物质等，而这些物质存在于白芨多糖提取过后的废弃液中，本发明对白芨多糖及废弃液中的活性成分进行了充分利用，提高了白芨的利用率。本发明的工艺提取出的白芨提取物在美白养颜粥及保健品中应用，结合内部调理，实现由内而外的持久美白效果。
本发明制备的白芨提取物抑制黑色素合成的半抑制浓度ic50为0.18mg/ml左右，可见本发明制备的白芨提取物的美白作用效果较韩莹，张岩等人的白芨水提取物抑制黑色素合成的半抑制浓度显著提高了约2.8倍。
白芨、桑白皮、葡萄籽或高丽悬钩子果与乙醇水溶液的不同质量比对提取物的提取效率有重要影响：过低质量比导致提取不充分，即美白活性物质少，影响后期的美白作用效果；而过高的质量比导致浪费，造成提取成本的升高，且该参数与其他的参数设置有直接联系，相互配合取得了更好的美白效果。作为优选，步骤(1)中白芨、桑白皮、葡萄籽或高丽悬钩子果与乙醇水溶液的比为质量比1:2-20，优选为1:3～15，乙醇水溶液中乙醇的质量分数为30％～90％。乙醇的最终质量分数不同，提取出不同活性的物质，即生物活性物质不同，可造成美白作用效果的显著差异，本发明的上述范围效果最佳。
优选地，提取的时间为0.25h以上，优选为0.5～2h。
步骤(1)中粉碎可用粉碎机进行，粉碎成粉状。提取优选在搅拌下进行。袋子可使用纱布袋。
作为优选，步骤(2)中生物酶为纤维素酶、半纤维素梅、木聚糖酶、果胶酶、复合酶中一种或两种以上的组合。
优选地，生物酶的最终浓度为10u/ml～1000u/ml。不同酶活力的生物酶对提取物的提取效率有重要影响：过少的酶活力导致提取不充分，即美白活性物质少，影响后期的美白作用效果；而过多的酶活力导致浪费，造成提取成本的升高，且该参数与下面的参数设置有直接联系，相互配合取得了更好的美白效果。
优选地，酶解在25～60℃、ph＝4.0～5.5下进行0.25h以上，优选为0.5～5h。
酶解可在搅拌下进行。
作为优选，步骤(3)中超高压的压力为100～400mpa，超高压的保压时间为1～10min。
优选地，保压结束后在3秒时间内快速卸掉压力。
在一个实施例中，步骤(3)的具体过程为：将步骤(2)所得混合物一起装入超高压专用塑料袋中，排除塑料袋中的空气，封严塑料袋口，放入超高压加压舱；设定加压压力数值为100～400mpa，保压时间为1～10min；达到设定的保压时间后，在3秒时间内，快速卸掉压力。
作为优选，步骤(4)中浓缩为真空浓缩，干燥为低温喷雾干燥。
在一个优选实施例中，白芨提取物、桑白皮提取物、葡萄籽提取物或高丽悬钩子果提取物的提取方法如下：
(1)选取充分烘干干燥的白芨、桑白皮、葡萄籽或高丽悬钩子果，用粉碎机将原料粉碎成粉状，过120～400目筛，用500～2000目纱布袋装好，加3～15倍乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量分数为30％～90％)浸泡在反应釜中，搅拌提取0.5～2h；
(2)在反应釜中加入溶解充分的体积比为0.01％～1％的生物酶，所述生物酶为纤维素酶、半纤维素梅、木聚糖酶、果胶酶、复合酶中至少一种或几种，在25～60℃、ph＝4.0～5.5的条件下搅拌酶解0.5～5h；
(3)将反应釜中的混合物一起装入超高压专用塑料袋中，排除塑料袋中的空气，封严塑料袋口，放入超高压加压舱；设定加压压力数值为100～400mpa，保压时间为1～10min；达到设定的保压时间后，在3秒时间内，快速卸掉压力；
(4)超高压处理后，直接将纱布袋拿出，余下的溶液即为白芨提取液，真空浓缩，低温喷雾干燥，即得白芨提取物的粉末。
本发明的目的之一还在于提供一种白芨美白养颜粥，由如下重量的原料制成：糯米40～160份、食盐2～10份、胡萝卜3～10份、南瓜1～15份、香菇2～6份、薏仁2～12份、蜂蜜2～10份、白芨提取物0.5～20份、柳叶蜡梅叶提取物1～5份、桑白皮提取物0.5～5份、银杏叶提取物1～10份、葡萄籽提取物1～5份、甘草提取物1～8份、高丽悬钩子果提取物2～8份、茉莉花提取物1～15份和水600～1200份，其中白芨提取物采用本发明所述方法提取得到。
本发明的美白养颜粥美白功效成分以白芨提取物为主要原料，辅以其它天然植物原料制备而成，无副作用，长期食用能够清除体内过多自由基，抑制酪氨酸酶活性，减少黑色素沉淀，调理肠胃，达到由内而外持久的自然美白效果。
桑白皮提取物、葡萄籽提取物或高丽悬钩子果提取物可采用现有提取方法提取得到的产品，优选地，桑白皮提取物、葡萄籽提取物或高丽悬钩子果提取物采用本发明所述方法提取得到。
南瓜优选使用嫩南瓜。香菇优选使用新鲜香菇。
作为优选，柳叶蜡梅叶提取物、银杏叶提取物、甘草提取物或茉莉花提取物采取包括如下步骤的提取方法：
(1)将充分干燥的柳叶蜡梅叶、银杏叶、甘草或茉莉花粉碎过120～400目筛，用蒸汽对柳叶蜡梅叶处理；用500～2000目袋子装好，加水进行混合溶解；
(2)将步骤(1)所得混合物在微波中反应后除去袋子，余下的溶液即为柳叶蜡梅叶、银杏叶、甘草或茉莉花提取液，浓缩干燥得到干粉状的柳叶蜡梅叶提取物、银杏叶提取物、甘草提取物或茉莉花提取物。
作为优选，步骤(1)中蒸汽处理的温度为55～80℃，处理的时间为1～15min。
优选地，柳叶蜡梅叶、银杏叶、甘草或茉莉花与水的质量比为1:2～30，此参数的设置对提取物的提取效率有重要影响：过低质量比导致提取不充分，即美白活性物质少，影响后期的美白作用效果；而过高的质量比导致浪费，造成提取成本的升高，优选为1:5～20，此处的柳叶蜡梅叶、银杏叶、甘草或茉莉花为蒸汽处理前的量。
步骤(1)中粉碎可用粉碎机进行，粉碎成粉状。提取优选在搅拌下进行。袋子可使用纱布袋。使用的水优选为蒸馏水。
作为优选，步骤(2)中微波反应的功率为400～800w，反应时间为10～90s。
作为优选，步骤(2)中浓缩为真空浓缩，干燥为低温喷雾干燥。
在一个优选实施例中，柳叶蜡梅叶提取物、银杏叶提取物、甘草提取物或茉莉花提取物的提取方法如下：将干燥的柳叶蜡梅叶、银杏叶、甘草或茉莉花粉碎成粉状，过120～400目筛，用55～80℃的蒸汽对柳叶蜡梅叶处理1～15min；用500～2000目纱布袋装好，加5～20倍蒸馏水进行混合溶解；然后在功率为400～800w的微波中反应10～90s，直接将纱布袋拿出，余下的溶液即为柳叶蜡梅叶提取液，真空浓缩，低温喷雾干燥，即得柳叶蜡梅叶提取物、银杏叶提取物、甘草提取物或茉莉花提取物的干粉。
本发明的另一个目的在于提供一种本发明所述的白芨美白养颜粥的制备方法，包括如下步骤：
(1)将糯米、薏仁放入锅中，加水，先大火烧开，再用小火煮20～40min，熬制成粥；
(2)将胡萝卜和嫩南瓜切丁、香菇切片，放入步骤(1)熬制的粥中，继续煮沸1～10min后，加入盐和蜂蜜，搅拌均匀；
(3)向步骤(2)熬制的粥锅中加入提取物干粉，加粉结束后继续搅拌均匀得到所述的白芨美白养颜粥。所得白芨美白养颜粥冷却至室温后可包装，灭菌以存储更长时间。灭菌可采用巴氏灭菌。
本发明提供的白芨美白养颜粥的制备方法简单，各项参数容易控制，能源消耗少，所制得的粥品质高、口感好、能够最大限度保证原料的营养成分和功效成分，美白养颜效果显著。
糯米、薏仁应淘洗干净后入锅。
步骤(3)中各提取物干粉缓慢撒入锅中，边加边搅拌。干粉也可以换算成相当量的提取液添加。
加粉结束后继续搅拌1～10min。
本发明提供的白芨美白养颜粥的配方，不含任何添加剂，富含多种营养成分，且通过多种纯天然植物有效成分的配伍，使各有效成分相互协调，充分发挥各组分的系统配合作用，能有效清除体内自由基，减少黑色素沉淀，调理肠胃，达到由内而外持久的自然美白效果。
本发明提供的白芨等提取物制备方法，提取效率高，时间短，能源消耗少；避免了热敏性活性成分的损失；料液分离迅速；同时超高压处理还能起到灭菌作用，避免了提取物应长期放置而产生变质问题。
本发明提供的白芨美白养颜粥的制备方法，所制得的粥品质高、口感好，最大程度保留了原料的有效成分，使各原料的效果得到最大程度的发挥，美白养颜效果显著。
附图说明
图1为在0.05～0.2mg/ml浓度下，白芨提取物对b16细胞活性的关系图；
图2为经bsre干预后，b16细胞中黑色素的含量随着干预浓度的增加而减少的关系图；
图3为经bsre干预后，随着干预浓度的增加其对酪氨酸酶活力的抑制作用关系图；
图4为白芨提取物(bletillastriatarootextract,bsre)美白作用的分子机理。
具体实施方式
为便于理解本发明，本发明列举实施例如下。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅用于帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
一种白芨美白养颜粥，由如下重量的原料制成：糯米80份、食盐2份、胡萝卜5份、嫩南瓜3份、香菇3份、薏仁5份、蜂蜜6份、白芨提取物2份、柳叶蜡梅叶提取物2份、桑白皮提取物1份、银杏叶提取物3份、葡萄籽提取物2份、甘草提取物1份、高丽悬钩子果提取物3份、茉莉花提取物1份和水800份。
所述白芨美白养颜粥的制备方法，其包括如下步骤：
(1)选取充分烘干干燥的白芨，用粉碎机将原料粉碎成粉状，过300目筛，用1000目纱布袋装好，加5倍质量比的质量分数为30％的乙醇浸泡在反应釜中，搅拌提取1h。然后在反应釜中加入溶解充分的纤维素酶，纤维素酶的最终浓度为100u/ml，在50℃、ph＝5.0的条件下搅拌酶解3h。然后将反应釜中的混合物一起装入超高压专用塑料袋中，排除塑料袋中的空气，封严塑料袋口，放入超高压加压舱；设定加压压力数值为200mpa，保压时间为3min；达到设定的保压时间后，在3秒时间内，快速卸掉压力。超高压处理后，直接将纱布袋拿出，余下的溶液即为白芨提取液，真空浓缩，低温喷雾干燥，即得白芨提取物的粉末。按照相同的操作方法分别制备桑白皮、葡萄籽和高丽悬钩子果提取物的干粉。
(2)将干燥的柳叶蜡梅叶粉碎成粉状，过300目筛，用60℃的蒸汽对柳叶蜡梅叶处理5min；用1000目纱布袋装好，加7倍质量比的蒸馏水进行混合溶解；然后在功率为400w的微波中反应30s，直接将纱布袋拿出，余下的溶液即为柳叶蜡梅叶提取液，真空浓缩，低温喷雾干燥，即得柳叶蜡梅叶提取物的干粉。按照相同的操作方法分别制备银杏叶、甘草和茉莉花提取物的干粉。
(3)将糯米、薏仁淘洗干净放入锅中，加水，先大火烧开，在用小火煮20min，熬制成粥。
(4)将胡萝卜和嫩南瓜切丁、香菇切片，再放入步骤(3)熬制的粥中，继续煮沸3min后，加入盐和蜂蜜，搅拌均匀。
(5)向步骤(4)熬制的粥锅中加入步骤(1)、(2)制备的提取物干粉，各提取物干粉缓慢撒入锅中，边加边搅拌，加粉结束后继续搅拌2min。冷却至室温，包装，采用巴氏灭菌，即制得白芨美白养颜粥。
实施例2
一种白芨美白养颜粥，由如下重量的原料制成：糯米100份、食盐6份、胡萝卜8份、嫩南瓜5份、香菇5份、薏仁8份、蜂蜜2份、白芨提取物10份、柳叶蜡梅叶提取物2份、桑白皮提取物3份、银杏叶提取物3份、葡萄籽提取物2份、甘草提取物2份、高丽悬钩子果提取物2份、茉莉花提取物2份和水1000份。
所述白芨美白养颜粥的制备方法，其包括如下步骤：
(1)选取充分烘干干燥的白芨，用粉碎机将原料粉碎成粉状，过300目筛，用800目纱布袋装好，加10倍质量比的质量分数为50％的乙醇浸泡在反应釜中，搅拌提取0.5h。然后在反应釜中加入溶解充分纤维素酶，纤维素酶的最终浓度为1000u/ml，在40℃、ph＝4.0的条件下搅拌酶解1h。然后将反应釜中的混合物一起装入超高压专用塑料袋中，排除塑料袋中的空气，封严塑料袋口，放入超高压加压舱；设定加压压力数值为300mpa，保压时间为2min；达到设定的保压时间后，在3秒时间内，快速卸掉压力。超高压处理后，直接将纱布袋拿出，余下的溶液即为白芨提取液，真空浓缩，低温喷雾干燥，即得白芨提取物的粉末。按照相同的操作方法分别制备桑白皮、葡萄籽和高丽悬钩子果提取物的干粉。
(2)将干燥的柳叶蜡梅叶粉碎成粉状，过200目筛，用70℃的蒸汽对柳叶蜡梅叶处理5min；用800目纱布袋装好，加10倍质量比的蒸馏水进行混合溶解；然后在功率为600w的微波中反应30s，直接将纱布袋拿出，余下的溶液即为柳叶蜡梅叶提取液，真空浓缩，低温喷雾干燥，即得柳叶蜡梅叶提取物的干粉。按照相同的操作方法分别制备银杏叶、甘草和茉莉花提取物的干粉。
(3)将糯米、薏仁淘洗干净放入锅中，加水，先大火烧开，在用小火煮30min，熬制成粥。
(4)将胡萝卜和嫩南瓜切丁、香菇切片，再放入步骤(3)熬制的粥中，继续煮沸5min后，加入盐和蜂蜜，搅拌均匀。
(5)向步骤(4)熬制的粥锅中加入步骤(1)、(2)制备的提取物干粉，各提取物干粉缓慢撒入锅中，边加边搅拌，加粉结束后继续搅拌3min。冷却至室温，包装，采用巴氏灭菌，即制得白芨美白养颜粥。
实施例3
一种白芨美白养颜粥，由如下重量的原料制成：糯米100份、食盐6份、胡萝卜3份、嫩南瓜8份、香菇2份、薏仁10份、蜂蜜1份、白芨提取物5份、柳叶蜡梅叶提取物3份、桑白皮提取物5份、银杏叶提取物2份、葡萄籽提取物5份、甘草提取物1份、高丽悬钩子果提取物1份、茉莉花提取物1份和水1100份。
所述白芨美白养颜粥的制备方法，其包括如下步骤：
(1)选取充分烘干干燥的白芨，用粉碎机将原料粉碎成粉状，过400目筛，用1000目纱布袋装好，加7倍质量比的质量分数为70％的乙醇浸泡在反应釜中，搅拌提取1h。然后在反应釜中加入溶解充分的纤维素酶、半纤维素梅、木聚糖酶和果胶酶，各种酶的最终浓度为100u/ml，在37℃、ph＝5.5的条件下搅拌酶解2h。然后将反应釜中的混合物一起装入超高压专用塑料袋中，排除塑料袋中的空气，封严塑料袋口，放入超高压加压舱；设定加压压力数值为300mpa，保压时间为5min；达到设定的保压时间后，在3秒时间内，快速卸掉压力。超高压处理后，直接将纱布袋拿出，余下的溶液即为白芨提取液，真空浓缩，低温喷雾干燥，即得白芨提取物的粉末。按照相同的操作方法分别制备桑白皮、葡萄籽和高丽悬钩子果提取物的干粉。
(2)将干燥的柳叶蜡梅叶粉碎成粉状，过200目筛，用80℃的蒸汽对柳叶蜡梅叶处理5min；用1000目纱布袋装好，加7倍质量比的蒸馏水进行混合溶解；然后在功率为800w的微波中反应20s，直接将纱布袋拿出，余下的溶液即为柳叶蜡梅叶提取液，真空浓缩，低温喷雾干燥，即得柳叶蜡梅叶提取物的干粉。按照相同的操作方法分别制备银杏叶、甘草和茉莉花提取物的干粉。
(3)将糯米、薏仁淘洗干净放入锅中，加水，先大火烧开，在用小火煮40min，熬制成粥。
(4)将胡萝卜和嫩南瓜切丁、香菇切片，再放入步骤(3)熬制的粥中，继续煮沸7min后，加入盐和蜂蜜，搅拌均匀。
(5)向步骤(4)熬制的粥锅中加入步骤(1)、(2)制备的提取物干粉，各提取物干粉缓慢撒入锅中，边加边搅拌，加粉结束后继续搅拌5min。冷却至室温，包装，采用巴氏灭菌，即制得白芨美白养颜粥。
对比例1
与实施例3相同，除了不加入各个提取物。
对比例2
与实施例3相同，除了不加入白芨提取物。
实施例4
细胞的培养和传代：以含10％的小牛血清作为基础培养基，将b16细胞置于37℃、5％co2且相对饱和湿度的培养箱中培养。待细胞生长至80％时，用0.25％胰蛋白酶(含0.05％edta)消化细胞，传代培养，收集复苏后传代培养3代以上的对数期细胞，用于后续试验。
细胞活力的测定：取对数生长期的b16细胞，以1x105个/ml接种于96孔板中。待细胞完全贴壁良好后(约24h)，更换含不同浓度白芨提取物(0、0.05、0.1、0.2mg/ml)的完全培养液。培养24h后，每孔加入mtt溶液20μl，继续培养3h,然后去除孔内的液体，每孔中加入200μldmso使紫色结晶充分溶解，于570nm波长处测各孔的od值。细胞活力/％＝(样品组od570nm)/(对照组od570nm)x100。
细胞内黑色素含量的测定：取对数生长期的b16细胞，以1x105个/ml接种于6孔板中，每孔2ml，置于培养箱培养过夜。待细胞完全贴壁良好后，用紫外诱导处理，并设立对照组、实施案例3制备的白芨提取物处理组、阳性对照熊果苷处理组，其中样品组加入2ml含有不同浓度白芨提取物(0、0.05、0.1、0.2mg/ml)的培养液，阳性对照组加入2ml含有熊果苷(0.1mg/ml)的培养液，对照组不加药物，以新鲜培养基代替。培养48h后，弃上清液，用pbs清洗3次，用胰蛋白酶消化，收集细胞于离心管中，12,000rpm离心15min，弃上清液，加入1ml含有10％dmso的1mol/lnaoh溶液，80℃水浴1h，分别移入96孔培养板中，于405nm波长处测各孔的od值。黑色素相对含量/％＝(样品组od405nm)/(对照组od405nm)x100。
细胞内酪氨酸酶活性的测定：细胞处理方法同4.3。培养48h后，弃上清液，每孔加入含有1％tritonx-100pbs缓冲液450μl，加入50μl1mg/ml的左旋多巴(l-dopa)，37℃孵育1h后，分别移入96孔培养板中，于475nm波长处测各孔的od值。酪氨酸酶活性/％＝(样品组od475nm)/(对照组od475nm)x100。
westernblot检测脂肪细胞相关蛋白质的表达：裂解b16细胞，提取细胞总蛋白，通过bio-rad蛋白试验进行蛋白定量。配置10％的分离胶和5％的浓缩胶，上样，进行sds-page电泳，半干式转移至pvdf膜，5％脱脂奶粉室温封闭3h，接着用含有酪氨酸酶(tyrosinase),酪氨酸酶及其相关蛋白1(trp-1)和2(trp-2)，β-actin的一抗进行免疫印迹。用1:5000稀释的相对应二抗孵育1h，pbst缓冲液洗清，暗房中滴加发光底物混合物于膜上，用x光曝光、显影及定影，即可显示目的条带。
图1显示在实施案例3制备的白芨提取物0.05～0.2mg/ml浓度下，白芨提取物对b16细胞活性无显著影响，且无剂量效应。当白芨提取物浓度达到0.2mg/ml时，bsre的b16的细胞活力为102.93％，与对照组相比，无统计学差异(p<0.05)。以上说明，白芨提取物在0.2mg/ml浓度内，对b16细胞无明显毒性作用。通过本实验确认了白芨提取物的无毒剂量范围，说明了白芨提取物的美白作用是通过调节酪氨酸酶及tyrosinase、trp-1、trp-2蛋白水平，来达到美白的作用，而非通过增加浓度从而增加毒性达到美白作用的。
图2显示经bsre干预后，b16细胞中黑色素的含量，随着干预浓度的增加，抑制作用增强，黑色素积累减少。与空白对照组相比，bsre在浓度0.05、0.1、0.2mg/ml处理条件下，其黑色素含量分别下降了13.18％、35.40％、54.18％；阳性对照熊果苷在0.1mg/ml处理条件下，黑色素含量下降了32.58％；说明实施案例3制备的白芨提取物在抑制皮肤黑色素合成的作用效果上，与目前市场上广泛用于美白化妆品的熊果苷的美白效果相当，是优良的美白活性物质。
图3显示为经实施案例3制备的bsre干预后，随着干预浓度的增加，其对酪氨酸酶活力的抑制作用不断增强，呈明显的剂量依赖关系。与空白对照组相比，bsre在浓度0.05、0.1、0.2mg/ml处理条件下，其酪氨酸酶活力分别下降了16.55％、39.06％、50.44％，且具有显著性差异(p<0.05)。
图4为实施案例3制备的白芨提取物(bletillastriatarootextract,bsre)美白作用的分子机理，bsre通过抑制紫外光照引起的tyrosinase,trp-1,trp-2蛋白水平的过度表达，达到了皮肤美白的效果，充分说明本发明制备的白芨提取物是一种天然、安全且有效的美白功能性成分。
实施例5
选择100位志愿者(女性50名，男性50名)，年龄20～30岁。志愿者多为由于长期日晒或面对电脑，皮肤表现为较为黝黑、暗沉发黄。志愿者受试期间不得服用有关其它有美容作用的护肤品或保健品。试验期间不改变原来的生活习惯和饮食习惯。随时将100位志愿者分为试验组和对照组，每组50名。按照每日1次，每次250g，连续服用15天为一个疗程，连续食用4个疗程。试验组服用本发明实施例3制得的美白养颜粥，对照组1服用对比例1制得的粥，对照组2服用对比例2制得的粥。
试验前后观察记录受试着面色及肤质改善情况。试验结果如表1：
表1
试验结果表明，本发明实施例提供的白芨美白养颜粥通过本发明提供的白芨提取物及其与其他各组分的相互配合能够有效减少黑色素沉着，改善人体皮肤状况，调理肠胃，达到由内而外持久的自然美白效果。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。