本发明属于保健食品制备
技术领域：
，特别涉及一种调理肠胃功能酵素的制备方法。
背景技术：
：随着生活水平的提高，生活压力增大、环境污染等因素造成人体内源性酶减少，食品精加工又使外源性酶受到破坏，不合理的饮食结构引起营养素缺乏，使得肠胃功能絮乱、肠胃微生物群混乱导致肠胃炎、结肠炎等消化道和血液慢性疾病的发生率越来越高，机体易出现酶失衡或作用减弱，营养不均衡而呈现亚健康状态。酵素食品可以有效调整机体酶系和营养平衡，使人体保持健康状态，因此，酵素作为一种养生食品越来越受到认可和推崇。目前已在日本、美国、台湾等地盛行，而在中国大陆发展相对缓慢，绝大多数酵素食品都源自进口，市场价格昂贵，对其制备方法进行科学研究具有巨大的价值。发明专利cn201210317614.3安神健肠胃的桂圆酵素加工方法及配方，采取加工鲜水果（特别是菠萝）、桂圆干(或桂圆肉)、植物豆类等多种果蔬一起自然发酵而成，提取了其中的果蔬精华，该产品含有丰富的水果等植物水溶性纤维、充足的人体必需维生素、氨基酸、矿物质等微量元素；同时该发明设计使用多元化综合酵素、益生菌为主作用的合理配方，具有降火、润肠、通便、改善睡眠等功效，以肠胃系统为主(先养护肠道及菌相)，并辅以功能性食材，增进肠道蠕动将宿便解放出来。发明专利cn201610591537.9一种净化肠胃的多功能酵素及其制备方法，原料包括：玛卡、凤梨、车厘子、黑加仑、莲雾、柠檬、猕猴桃、牛油果、葡萄柚、番荔枝、小球藻粉、红豆、绿豆、黄豆、玉米、薏苡仁、白扁豆、当归、益母草、艾蒿、黄精和菊苣，该发明制得的多功能酵素能净化肠胃环境，清除肠道垃圾毒素，分解有害致癌物质与多余脂肪，起到安定肠道ph值及活性化肠道蠕动的功能。现有技术中，调理肠胃的酵素都是以多种药材结合果蔬食品进行发酵制备而得，原料用量大，营养成分多且复杂，针对性不强，同时因为原料多样性的限制导致发酵周期长，营养成分流失。技术实现要素：针对现有技术制备调理肠胃酵素存在的缺陷，本发明提供一种调理肠胃酵素的制备方法。本发明是通过以下技术方实现的：一种调理肠胃功能酵素的制备方法，由以下步骤制备而得：（1）按重量份数比，取葡萄柚15~20份，剥皮分离果粒和果皮，然后将果粒进行榨汁，所得果汁中保留果肉，同时将果皮晒干并粉碎成粉末，得到葡萄柚果汁和葡萄柚皮粉末；取麦芽10~20份，加水侵泡20~24h后取出捣碎，加入酵母菌进行发酵，得到麦芽发酵液，然后将麦芽发酵液与葡萄柚果汁混合均匀，按总液质量的6~8%加入膨润土，用醋酸调节ph至1~2，室温下搅拌浸提1~3h后，离心去除膨润土沉淀，得到提取液；（2）按重量份数比，取黄芩根15~20份，粉碎至粒度为40~50目后加入8~10倍量的蒸馏水，煎煮1.5~2h得到黄芩药液，待黄芩药液冷却至40~60℃后，于2000r/min下离心12~15分钟，取上清液，即得到黄芩提取液；按黄芩提取液的质量比加入1.0%蛋白胨，0.05%氯化钠，调节ph为7.0~8.6，高压灭菌并冷却至室温得到黄芩发酵液ⅰ，然后于黄芩发酵液ⅰ中接种复合菌ⅰ，在45~55℃、100~200r/min摇床上发酵4~6d，得到黄芩发酵液ⅱ；按黄芩发酵液ⅰ体积比计，所述复合菌ⅰ为4~6%的纳豆菌bacillusnatto菌液和3~5%鼠李糖乳杆菌lactobacillusrhamnosus菌液组合；（3）按重量份数比，取菜籽饼粕10~20份、茶饼粕10~20份，粉碎至50~100目后混合均匀，得到饼粕粉；将葡萄柚皮粉末、饼粕粉混合均匀，加入10~20倍量的水，混合均匀后高压灭菌，得到发酵液ⅲ，待其冷却后，接种复合菌ⅱ于35~40℃下进行发酵；按发酵液ⅲ体积比计，所述复合菌ⅱ为4~6%的枯草芽孢杆菌bacillussubtilis菌液和2~4%的黑曲霉aspergillusniger菌液组合；（4）发酵液ⅲ发酵6~7天后，加入提取液和黄芩发酵液ⅱ，同时加入发酵液ⅲ体积比5~10%的壳聚糖溶液，混合均匀继续发酵6~7天后，将发酵液过滤，得到澄清液，将澄清液于70~80℃下高压灭菌30~50min，冷却后即可得到调理肠胃的酵素。在步骤（1）中为了防止膨润土上吸附过多的提取物，可将第一次离心所得沉淀加入2倍量蒸馏水进行洗涤，再离心分离去除沉淀，将所得滤液与第一次离心分离所得滤液合并；作为本发明的进一步改进，步骤（1）所述葡萄柚果皮晒干至含水量为10~20%，粉碎至15~20目。粒度影响叶酸的浸出率，在15~20目叶酸能完整并最大化被提取浸出。作为本发明的进一步改进，步骤（1）所述麦芽加水浸泡的水温为15~20℃，具体发酵方法如下：将捣碎后的麦芽加入其质量1~1.5倍的水和1~1.2%的氯化钠，接种3%的酵母菌于35℃下发酵6h，得到麦芽发酵液。麦芽中的植酸随着麦芽的生长会逐渐减少，在低温下植酸活性降低，麦芽生长受到抑制，减少植酸的消耗；酵母发酵改变麦芽的结构和代谢，提高了植酸的产率。葡萄柚中含有叶酸成分，促进肠胃氨基酸和糖代谢，提高人体胆碱合成，从而促进脂肪代谢，叶酸还能促进菜籽饼粕和油茶饼粕分解释放植酸和茶皂素；麦芽和菜籽粕中含有丰富的植酸，能促进菌体发酵效率，从而提高酵素含量；植酸水解后的磷能提高发酵产物酶的活力，从而提高酵素的营养价值；天然膨润土能有效吸附提取液中的蛋白质杂质和色素，投加量6g/10ml的膨润土对蛋白质杂质和色素的吸附能力最大，提高了麦芽植酸的纯度。茶饼粕中含有茶皂素，具有消炎镇痛，健胃等功效，同时茶饼粕和菜籽粕是微生物发酵的良好碳源和氮源；作为本发明的进一步改进，步骤（1）所述的膨润土粒度为100~120目。作为本发明的进一步改进，步骤（2）所述复合菌ⅰ是由种龄为12~14h的纳豆菌bacillusnatto和种龄为14~16h鼠李糖乳杆菌lactobacillusrhamnosus组合。黄芩发酵液中的黄芩素能提高麦芽植酸溶出率；种龄为12~14h纳豆菌在发酵过程中会生成纳豆激酶、超氧化物歧化酶等多种活性酶，能有效地水解苷元中的葡萄糖醛酸键，将黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷转化成黄芩素和汉黄芩素；种龄为14~16h的鼠李糖乳酸菌发酵分泌鼠李糖脂能力最大，能提高纳豆菌的菌活力，使纳豆菌的代谢增强，从而促进黄芩苷和汉黄芩苷转化成黄芩素和汉黄芩素，减少总体发酵时间；鼠李糖乳杆菌是人体菌群之一，能提高反应体系中各种酶的活性和纳豆菌菌的数量，起到调节菌群的平衡，改善机体环境的作用。作为本发明的进一步改进，步骤（3）所述复合菌ⅱ为种龄为12~14h的枯草芽孢杆菌bacillussubtilis和的黑曲霉aspergillusniger组合。混合菌发酵茶饼粕和菜籽粕效果优于单菌发酵，利用进入对数生长期（种龄12~14h）的枯草芽孢杆菌和黑曲霉对茶饼粕和菜籽粕进行发酵，能最大化对其进行分解，产生各种酶和茶皂素与植酸。作为本发明的进一步改进，步骤（4）所述的壳聚糖脱乙酰度为50~60%。壳聚糖具有很好的酶吸附力，能将发酵液中的酶进行吸附，提高发酵酶量；壳聚糖的吸附作用还能使发酵液澄清，降低下游工程的成本；脱乙酰度50~60%的壳聚糖水溶性最好，能有效的溶解于发酵液中；本发明的有益效果：通过微生物发酵特定原料产生不同的酶和其他副产物，促进了发酵效率，缩短了发酵周期；中药和果蔬的中有效成分通过微生物发酵能完整的保留其活性，提高了酵素的保健效用；利用榨油副产物饼粕作为培养基发酵提取茶皂素和植酸促进体系发酵菌的生长和效率，提高了资源利用率。具体实施方式下面结合实施例对本发明进一步说明。实施例1（1）按重量份数比，取葡萄柚15份，剥皮分离果粒和果皮，然后将果粒进行榨汁，所得果汁中保留果肉，同时将果皮晒干至含水量为10%，并粉碎成15目的粉末，得到葡萄柚果汁和葡萄柚皮粉末；取麦芽10份，加水侵泡20h后取出捣碎，加入酵母菌进行发酵，得到麦芽发酵液，然后将麦芽发酵液与葡萄柚果汁混合均匀，按总液质量的6%加入粒度为100目的膨润土，用醋酸调节ph至1~2，室温下搅拌浸提1h后，离心去除膨润土沉淀，得到提取液；所述麦芽加水浸泡的水温为15~20℃，具体发酵方法如下：将捣碎后的麦芽加入其质量1倍的水和1%的氯化钠，接种3%的酵母菌于35℃下发酵6h，得到麦芽发酵液。（2）按重量份数比，取黄芩根15份，粉碎至40目后加入8倍量的蒸馏水，煎煮1.5h得到黄芩药液，待黄芩药液冷却至40℃后，于2000r/min下离心12~15分钟，取上清液，即得到黄芩提取液；按黄芩提取液的质量比加入1.0%蛋白胨，0.05%氯化钠，调节ph为7.0~8.6，高压灭菌并冷却至室温得到黄芩发酵液ⅰ，然后于黄芩发酵液ⅰ中接种复合菌ⅰ，在45℃、100~200r/min摇床上发酵4d，得到黄芩发酵液ⅱ；按黄芩发酵液ⅰ体积比计，所述复合菌ⅰ为4%种龄为12h的纳豆菌bacillusnatto菌液和3%种龄为14h鼠李糖乳杆菌lactobacillusrhamnosus菌液组合；（3）按重量份数比，取菜籽饼粕10份、茶饼粕10份，粉碎至50目后混合均匀，得到饼粕粉；将葡萄柚皮粉末、饼粕粉混合均匀，加入10倍量的水，混合均匀后高压灭菌，得到发酵液ⅲ，待其冷却后，接种复合菌ⅱ于35℃下进行发酵；按发酵液ⅲ体积比计，所述复合菌ⅱ为4%种龄为12h的枯草芽孢杆菌bacillussubtilis菌液和2~4%种龄为12h的黑曲霉aspergillusniger菌液组合；（4）发酵液ⅲ发酵6天后，加入提取液和黄芩发酵液ⅱ，同时加入发酵液ⅲ体积比5%脱乙酰度为50%的壳聚糖溶液，混合均匀继续发酵7天后，将发酵液过滤，得到澄清液，将澄清液于70℃下高压灭菌30min，冷却后即可得到调理肠胃的酵素。实施例2（1）按重量份数比，取葡萄柚20份，剥皮分离果粒和果皮，然后将果粒进行榨汁，所得果汁中保留果肉，同时将果皮晒干至含水量为20%，并粉碎成20目的粉末，得到葡萄柚果汁和葡萄柚皮粉末；取麦芽20份，加水侵泡24h后取出捣碎，加入酵母菌进行发酵，得到麦芽发酵液，然后将麦芽发酵液与葡萄柚果汁混合均匀，按总液质量的8%加入粒度为120目的膨润土，用醋酸调节ph至1~2，室温下搅拌浸提3h后，离心去除膨润土沉淀，得到提取液；所述麦芽加水浸泡的水温为20℃，具体发酵方法如下：将捣碎后的麦芽加入其质量1.5倍的水和1.2%的氯化钠，接种3%的酵母菌于35℃下发酵6h，得到麦芽发酵液。（2）按重量份数比，取黄芩根20份，粉碎至50目后加入10倍量的蒸馏水，煎煮2h得到黄芩药液，待黄芩药液冷却至60℃后，于2000r/min下离心15分钟，取上清液，即得到黄芩提取液；按黄芩提取液的质量比加入1.0%蛋白胨，0.05%氯化钠，调节ph为8.6，高压灭菌并冷却至室温得到黄芩发酵液ⅰ，然后于黄芩发酵液ⅰ中接种复合菌ⅰ，在55℃、100~200r/min摇床上发酵4~6d，得到黄芩发酵液ⅱ；按黄芩发酵液ⅰ体积比计，所述复合菌ⅰ为6%种龄为14h的纳豆菌bacillusnatto菌液和5%种龄为16h鼠李糖乳杆菌lactobacillusrhamnosus菌液组合；（3）按重量份数比，取菜籽饼粕20份、茶饼粕20份，粉碎至100目后混合均匀，得到饼粕粉；将葡萄柚皮粉末、饼粕粉混合均匀，加入20倍量的水，混合均匀后高压灭菌，得到发酵液ⅲ，待其冷却后，接种复合菌ⅱ于40℃下进行发酵；按发酵液ⅲ体积比计，所述复合菌ⅱ为6%种龄为14h的枯草芽孢杆菌bacillussubtilis菌液和4%种龄为14h的黑曲霉aspergillusniger菌液组合；（4）发酵液ⅲ发酵7天后，加入提取液和黄芩发酵液ⅱ，同时加入发酵液ⅲ体积比10%脱乙酰度为60%的壳聚糖溶液，混合均匀继续发酵7天后，将发酵液过滤，得到澄清液，将澄清液于80℃下高压灭菌50min，冷却后即可得到调理肠胃的酵素。实施例3（1）按重量份数比，取葡萄柚18份，剥皮分离果粒和果皮，然后将果粒进行榨汁，所得果汁中保留果肉，同时将果皮晒干至含水量为15%，并粉碎成20目的粉末，得到葡萄柚果汁和葡萄柚皮粉末；取麦芽15份，加水侵泡20h后取出捣碎，加入酵母菌进行发酵，得到麦芽发酵液，然后将麦芽发酵液与葡萄柚果汁混合均匀，按总液质量的7%加入粒度为110目的膨润土，用醋酸调节ph至1~2，室温下搅拌浸提2h后，离心去除膨润土沉淀，得到提取液；所述麦芽加水浸泡的水温为15℃，具体发酵方法如下：将捣碎后的麦芽加入其质量1.2倍的水和1.1%的氯化钠，接种3%的酵母菌于35℃下发酵6h，得到麦芽发酵液。（2）按重量份数比，取黄芩根18份，粉碎至15目后加入9倍量的蒸馏水，煎煮2h得到黄芩药液，待黄芩药液冷却至50℃后，于2000r/min下离心13分钟，取上清液，即得到黄芩提取液；按黄芩提取液的质量比加入1.0%蛋白胨，0.05%氯化钠，调节ph为7.6，高压灭菌并冷却至室温得到黄芩发酵液ⅰ，然后于黄芩发酵液ⅰ中接种复合菌ⅰ，在50℃、100~200r/min摇床上发酵5d，得到黄芩发酵液ⅱ；按黄芩发酵液ⅰ体积比计，所述复合菌ⅰ为5%种龄为13h的纳豆菌bacillusnatto菌液和4%种龄为15h鼠李糖乳杆菌lactobacillusrhamnosus菌液组合；（3）按重量份数比，取菜籽饼粕15份、茶饼粕16份，粉碎至80目后混合均匀，得到饼粕粉；将葡萄柚皮粉末、饼粕粉混合均匀，加入15倍量的水，混合均匀后高压灭菌，得到发酵液ⅲ，待其冷却后，接种复合菌ⅱ于37℃下进行发酵；按发酵液ⅲ体积比计，所述复合菌ⅱ为5%种龄为13h的枯草芽孢杆菌bacillussubtilis菌液和3%种龄为13h的黑曲霉aspergillusniger菌液组合；（4）发酵液ⅲ发酵6天后，加入提取液和黄芩发酵液ⅱ，同时加入发酵液ⅲ体积比7%脱乙酰度为55%的壳聚糖溶液，混合均匀继续发酵7天后，将发酵液过滤，得到澄清液，将澄清液于75℃下高压灭菌40min，冷却后即可得到调理肠胃的酵素。为保证本发明制备的酵素安全性，通过如下实验对其进行评价：1、模拟胃液及肠液的耐受试验取100g/l的盐酸16.4ml加蒸馏水稀释，使ph值分别为1.5、2.5和3.5，取100ml稀盐酸溶液，分别加入1g胃蛋白酶，使其充分溶解，得模拟胃液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。取磷酸二氢钾6.8g，加水500ml使溶解，用0.1mol/l氢氧化钠溶液调节ph值至6.8；另取胰蛋白酶10g，加水100ml使溶解，将两液混合后，加水稀释至1000ml，得模拟肠液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。分别取1ml实施例1~3制备的酵素溶液加入到9ml的模拟胃液中(即十倍逐级稀释)，并迅速在振荡器上充分混匀，然后置于30~45℃静置培养2~4h。分别在1h、2h、3h、4h的时候取出培养液并立即计数残存活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明，活菌存活率分别为98.6％和98.9％。然后取在人工胃液中消化不同时间的培养液各1ml，分别接种于9mlph值为6.8的人工肠液中，置于30~45℃静置培养2~4h，并分别在0、3、6、24h取样，测定其活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明活菌存活率均为99％。2、依据《保健食品检与评价技术规范》的通便功能检测方法对实施例1~3获得的酵素进行评价，具体如下：试验方法：1.1实验动物选用成年雌性小鼠，体重18～22g，每组10只；方法为经口灌胃给予造模药物复方地芬诺酯，建立小鼠便秘模型，灌胃墨汁，测定小鼠的首粒排黑便排便时间、5小时内排便粒数和排便重量，来反映模型小鼠的排便情况。1.2分组情况为：组1：灌胃实施例1的酵素；组2：灌胃实施例2的酵素；组3：灌胃实施例3的酵素；上述组别小鼠每日服用两次，每次10ml，用温开水稀释后服用；组4：模型对照组，灌胃等量的生理盐水；组5：空白对照组，灌胃等量的生理盐水。1.3模型建立给受试样品7天后，各组小鼠禁食不禁水16小时。组5空白对照组给蒸馏水，组1~4灌胃给予复方地芬诺酯。1.4指标测定的具体方法组1~4给复方地芬诺酯0.5小时后，组1~5均给小鼠用墨汁灌胃，动物均单笼饲养，正常饮水进食，从灌墨汁开始，记录每只小鼠首粒排黑便时间，5小时内排黑便粒数及重量。具体结果如表1。表1各组小鼠排便结果组别首粒排黑便时间（h）5小时内排黑便粒数5小时内排黑便重量（g）10.80182.50±0.5120.83162.20±0.5330.78192.54±0.4344.2050.88±0.2551.05142.11±0.44由上述结果可知，由本发明实施例1~3所得的酵素润肠通便效果较为显著，甚至优于组5空白对照组。尽管已经描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。当前第1页12