【技术领域】
本发明涉及人体保健品技术领域，尤其涉及一种牡蛎低聚肽制品的制备方法。
背景技术：
牡蛎中富含蛋白质，性微寒，味咸，归肝经、胆经、肾经，具有增强免疫、镇静、抗实验性胃溃疡、抗动脉粥样硬化、抗炎和抗衰老作用，因此，其作为营养价值高的补品之一往往被人们青睐。牡蛎作为食物食用或药物服用，在口服过程中蛋白质一般要被消化液酶解为低聚肽或氨基酸而才被机体吸收和利用，由于人与人之间消化与吸收机能的差异，很难达到应有的药效。
而将牡蛎经过处理得到小分子牡蛎肽可以有效克服上述问题，为人类健康带来福音。因此，如何发明一种适合工业化生产、产品质量高的牡蛎低聚肽制品的制备方法是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明实施例提供了一种牡蛎低聚肽制品的制备方法。
一种牡蛎低聚肽制品的制备方法，至少包括如下步骤：
1)选取新鲜去壳后的牡蛎，粉碎处理后置于蒸汽压力为4.5-6.5mpa的条件下维持15-20min，然后瞬间弹射蒸汽爆破后得到固液混合物；
2)向固液混合物中加入混合酶，调节ph值为6-7，在40℃的恒温环境中酶解40min，得到第一酶解液，其中混合酶为括重量份数比为6:2:3:1的胶原蛋白酶、脂肪酶、糖元酶和核酸酶混合酶体系；保持温度与ph值不变，向第一酶解液中加入和混合酶等重量份的蛋白内切酶，酶解70min后得到第二酶解液；
3)向第二酶解液中加入和牡蛎重量份数比为1:200的中药提取物，不断搅拌升温至沸腾，并保持12min，然后降至室温，离心过滤后得到混合提取液；其中，中药提取物是通过如下步骤制备而成：
a、取干燥中药组合物进行粉碎，其中所述中药组合物为重量份数之比为10:1:1:2:3:5的党参、蛇含石、九节菖蒲、枳椇子、胡芦巴和代代花，然后加入体积分数为95％的乙醇水溶液回流提取3次，每次加入乙醇水溶液为干燥中药组合物5倍体积量，回流时间为2h；收集并合并提取液，减压浓缩至无醇，得稠浸膏；
b、将步骤a所得的稠浸膏混悬于干燥中药组合物1倍体积的水中，然后用石油醚萃取5次，每次加入石油醚的量为稠浸膏0.5倍体积量，萃取完毕后合并有机相，干燥，减压浓缩，得中药粗提取物；
c.将步骤b所得的中药粗提取物以0.8g/ml的浓度溶于乙酸乙酯中，上硅胶层析柱；
d.梯度洗脱：洗脱流量为6ml/min，先用石油醚洗脱10个柱体积，除去流分；再用体积比为5:1的石油醚和二氯甲烷混合液洗脱8个柱体积，收集流分；再用体积比为7:3:2的石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯的混合液洗脱6个柱体积，除去流分；再用体积比为3:6:2的石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯的混合液洗脱25个柱体积，收集流分，将收集的流分合并，减压浓缩，即得中药提取物；
4)将混合提取液进行分离、浓缩和干燥后，得到牡蛎低聚肽制品。
本发明还提供了一种牡蛎低聚肽制品与药学上可接受的辅料制成的软胶囊剂，所述软胶囊剂包括软胶囊填充物和囊材，所述软胶囊填充物包括如下重量份的原料：牡蛎低聚肽制品30份、稀释剂40份、崩解剂8份、粘合剂3份。
作为优选地，所述稀释剂为重量份数比为1:2的n-十二烷胺木糖甙和麻油的混合物；所述崩解剂为重量份数比为2:1:2的交联聚维酮、ot-75二辛基磺化琥珀酸钠和月桂酰肌氨酸的混合物。
作为优选地，所述囊材主要由如下重量份数的原料制备而成,明胶12份、胆固醇棕榈酸酯2份、出芽短梗孢糖3份、水8份、二氧化钛2.5份、三乙醇胺2份。
上述技术方案中的一个技术方案具有如下有益效果：
本发明提供了一种牡蛎低聚肽制品的制备方法，工艺先进、工序合理、可操作性强，易于工业化生产，该方法制备的牡蛎低具有较强具有增强性功能、滋阴补肾、抗亚健康、抑制体虚，添加的中药组份可以进一步提高牡蛎低聚肽的营养和滋补效果，另外，酶解中酶的组合和用量的选择，使得酶解效率和酶解程度高，且酶解物中氨基化学物的种类和数量多，口感好。
【具体实施方式】
为了更好的理解本发明的技术方案，下面对本发明实施例进行详细描述。
应当明确，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明实施例中使用的术语是仅仅出于描述特定实施例的目的，而非旨在限制本发明。在本发明实施例和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”、“所述”和“该”也旨在包括多数形式，除非上下文清楚地表示其他含义。
应当理解，本文中使用的术语“和/或”仅仅是一种描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，a和/或b，可以表示：单独存在a，同时存在a和b，单独存在b这三种情况。另外，本文中字符“/”，一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
实施例1
本发明提供了一种牡蛎低聚肽制品的制备方法，至少包括如下步骤：
1)选取新鲜去壳后的牡蛎，粉碎处理后置于蒸汽压力为4.5-6.5mpa的条件下维持15-20min，然后瞬间弹射蒸汽爆破后得到固液混合物；
2)向固液混合物中加入混合酶，调节ph值为6-7，在40℃的恒温环境中酶解40min，得到第一酶解液，其中混合酶为括重量份数比为6:2:3:1的胶原蛋白酶、脂肪酶、糖元酶和核酸酶混合酶体系；保持温度与ph值不变，向第一酶解液中加入和混合酶等重量份的蛋白内切酶，酶解70min后得到第二酶解液；
3)向第二酶解液中加入和牡蛎重量份数比为1:200的中药提取物，不断搅拌升温至沸腾，并保持12min，然后降至室温，离心过滤后得到混合提取液；其中，中药提取物是通过如下步骤制备而成：
a、取干燥中药组合物进行粉碎，其中所述中药组合物为重量份数之比为10:1:1:2:3:5的党参、蛇含石、九节菖蒲、枳椇子、胡芦巴和代代花，然后加入体积分数为95％的乙醇水溶液回流提取3次，每次加入乙醇水溶液为干燥中药组合物5倍体积量，回流时间为2h；收集并合并提取液，减压浓缩至无醇，得稠浸膏；
b、将步骤a所得的稠浸膏混悬于干燥中药组合物1倍体积的水中，然后用石油醚萃取5次，每次加入石油醚的量为稠浸膏0.5倍体积量，萃取完毕后合并有机相，干燥，减压浓缩，得中药粗提取物；
c.将步骤b所得的中药粗提取物以0.8g/ml的浓度溶于乙酸乙酯中，上硅胶层析柱；
d.梯度洗脱：洗脱流量为6ml/min，先用石油醚洗脱10个柱体积，除去流分；再用体积比为5:1的石油醚和二氯甲烷混合液洗脱8个柱体积，收集流分；再用体积比为7:3:2的石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯的混合液洗脱6个柱体积，除去流分；再用体积比为3:6:2的石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯的混合液洗脱25个柱体积，收集流分，将收集的流分合并，减压浓缩，即得中药提取物；
4)将混合提取液进行分离、浓缩和干燥后，得到牡蛎低聚肽制品。
本发明实施例所提供的牡蛎低聚肽制品的制备方法，将牡蛎低聚肽与经过配伍的其他中药组份提取物联合制备的方式获得最终的牡蛎低聚肽制品，有效减少制备步骤，在牡蛎低聚肽和中药提取物相互协同的作用下，二者有效组份可以更好地被人体所吸收。本发明实施例经过大量实验、合理的统筹和对比总结而出，具有工艺简单、提取次数少、产率高、条件温和等优点；所述纯化精制步骤合理，纯化产率较高，具有更高的活性成分，可适于工业化生产。
实施例2
本发明还提供了一种牡蛎低聚肽制品与药学上可接受的辅料制成的软胶囊剂，所述软胶囊剂包括软胶囊填充物和囊材，所述软胶囊填充物包括如下重量份的原料：牡蛎低聚肽制品30g、稀释剂40g、崩解剂8g、粘合剂3g。
实施例3
本实施例软胶囊填充物的重量组成为：牡蛎低聚肽制品30g，重量份数比为1:2的n-十二烷胺木糖甙和麻油的混合物40g，重量份数比为2:1:2的交联聚维酮、ot-75二辛基磺化琥珀酸钠和月桂酰肌氨酸的混合物8g，粘合剂3g。
胶囊囊材的重量组成为：明胶12g、胆固醇棕榈酸酯2g、出芽短梗孢糖3g、水8g、二氧化钛2.5g、三乙醇胺2g。
制备方法：
1)将明胶、胆固醇棕榈酸酯、水和三乙醇胺常规混合并加热熔融成胶液后，加入二氧化钛和出芽短梗孢糖混合均匀后，过胶体磨后压制成胶皮待用；
2)取实施例1所制备的牡蛎低聚肽制品，以及重量份数比为1:2的n-十二烷胺木糖甙和麻油的混合物，二者混合均匀后，粉碎成微粉待用；将重量份数比为2:1:2的交联聚维酮、ot-75二辛基磺化琥珀酸钠和月桂酰肌氨酸的混合物溶于质量分数为70％的乙醇溶液中形成混合溶液，将微粉溶于混合溶液中混合均匀，然后制成湿丸，将湿丸与重量份数比为2:1:2的交联聚维酮、ot-75二辛基磺化琥珀酸钠和月桂酰肌氨酸的混合物，以及粘合剂3g混合均匀，干燥后得微丸；
3)将微丸与步骤1)所得的胶皮压制，即得软胶囊剂。
对比例1
本实施例软胶囊填充物的重量组成为：牡蛎低聚肽制品30g，n-十二烷胺木糖甙40g，重量份数比为2:1:2的交联聚维酮、ot-75二辛基磺化琥珀酸钠和月桂酰肌氨酸的混合物8g，粘合剂3g。
对比例2
本实施例软胶囊填充物的重量组成为：牡蛎低聚肽制品30g，麻油40g，重量份数比为2:1:2的交联聚维酮、ot-75二辛基磺化琥珀酸钠和月桂酰肌氨酸的混合物8g，粘合剂3g。
对比例3
本实施例软胶囊填充物的重量组成为：牡蛎低聚肽制品30g，重量份数比为1:2的n-十二烷胺木糖甙和麻油的混合物40g，重量份数比为1:1的交联聚维酮和月桂酰肌氨酸的混合物8g，粘合剂3g。
对比例4
本实施例软胶囊填充物的重量组成为：牡蛎低聚肽制品30g，重量份数比为1:2的n-十二烷胺木糖甙和麻油的混合物40g，ot-75二辛基磺化琥珀酸钠8g，粘合剂3g。
对比例5
本实施例软胶囊填充物的重量组成为：牡蛎低聚肽制品30g，甘露醇40g，重量份数比为2:1:2的交联聚维酮、ot-75二辛基磺化琥珀酸钠和月桂酰肌氨酸的混合物8g，粘合剂3g。
对比例6
本实施例软胶囊填充物的重量组成为：牡蛎低聚肽制品30g，重量份数比为1:2的n-十二烷胺木糖甙和麻油的混合物40g，交联聚乙烯吡咯烷酮8g，粘合剂3g。
对照例7
将实施例1中的中药组合物为重量份数之比调整为8:3:2:10:4:3的党参、蛇含石、九节菖蒲、枳椇子、胡芦巴和代代花，其他和实施例1保持一致，制得牡蛎低聚肽制品。
对照例8
将实施例1中的加入中药组合物这一步骤去除添加并制备中药组合物这一步骤，其他和实施例1保持一致，制得不含中药提取物的牡蛎低聚肽制品。
对照例9
将实施例1中向第二酶解液中加入和牡蛎重量份数比为1:200的中药提取物的比例调整为1:250，其他和实施例1保持一致，制得牡蛎低聚肽制品。
对照例10
将实施例1中向第二酶解液中加入和牛骨重量份数比为1:200的中药提取物的比例调整为1:150，其他和实施例1保持一致，制得牡蛎低聚肽制品。
实验1、胶囊剂的崩解时限效果测定
根据中国药典中的规定，测胶囊剂的崩解时限测其对药物组合物的乳化效果。
分别取以上实施例3、对比例3、对比例4和对比例6提供的胶囊剂，分别测试崩解时限，测试数据结果如下：
不同辅料对片剂崩解时限的影响
从表中可看出，本发明实施例3提供的片剂与对比例3、对比例4和对比例6提供的胶囊剂相比，本发明使用重量份数比为2:1:2的交联聚维酮、ot-75二辛基磺化琥珀酸钠和月桂酰肌氨酸的混合物作为崩解剂，可以有效降低药物组合物在胶囊剂中的崩解时限，崩解效果远高于常用崩解剂交联聚乙烯吡咯烷酮，且三者进行特定配比的崩解效果也远高于单一组份或者任意两种组分，由此可以证明，交联聚维酮、ot-75二辛基磺化琥珀酸钠和月桂酰肌氨酸三者之间具有协同作用，本发明提供的胶囊剂能够快速崩解，能够使药效成分充分快速到达人体所需病理部位，达到缓解症状的目的。
试验例2、胶囊剂的体外释放度测定试验
药物组合物的释放度检测：参照2010版《中国药典》附录xixd体外药物释放度检查。
分别取以上实施例3、对比例1、对比例2和对比例5提供的胶囊剂，并将取出的胶囊剂分别置入溶出仪中，于1h、2h、4h、6h、12h、16h、24h分别取样，并将取出的样品用高效液相色谱法检测溶出百分率，并计算药物的累积释放百分率。
从表中可以看出实施例3的药物组合物在10h内全部释放，对照例5的药物组合物在6h内全部释放，对照例1和对照例2的药物组合物的胶囊剂在24小时之内仅分别释放了90％和85％，因此，本发明提供的胶囊剂在添加重量份数比为2:1:2的交联聚维酮、ot-75二辛基磺化琥珀酸钠和月桂酰肌氨酸的混合物后，能够显著提高胶囊剂原料的稳定性，起到缓释效果，促进中药主料中活性成分的吸收，同时，参照上表，可以发现特定组分的交联聚维酮、ot-75二辛基磺化琥珀酸钠和月桂酰肌氨酸三者具有协同作用，缺少任意其中一种组份，其释放效果均不理想。
实验例3、对肾虚的效果
(一)肾虚的症状
肾阳虚的症状为腰酸、四肢发冷、畏寒，甚至还有水肿，为“寒”的症状，性功能不好也会导致肾阳虚；肾阴虚的症状为“热”，主要有腰酸、燥热、盗汗、虚汗、头晕、耳鸣等。
(二)试验人群
300例符合肾虚症状的受试者，年龄均在25-60岁之间。
(三)分组
将300例肾虚受试者随机分成试验组50人、对照组a-对照组e各50人；试验组使用本发明实施例1制备的牡蛎低聚肽制品；对照组a服用同仁堂出售的牡蛎肽；对照组b使用本发明对照例7制备的牡蛎低聚肽制品；对照组c使用本发明对照例8制备的牡蛎低聚肽制品；对照组d使用本发明对照例9制备的牡蛎低聚肽制品；对照组e使用本发明对照例10制备的牡蛎低聚肽制品；均使用6个月。
(四)功能评价
1、疗效观测
依据中医治疗脾胃虚弱的临床研究指导原则，特制定症状体证分级及疗效判断标准
a、畏冷程度为评分标准
剧烈畏冷4分
重度畏冷3分
中度畏冷2分
轻度畏冷1分
正常0分
b、以性生活频率为评分标准
无4分
极少3分
较少2分
略少1分
正常频率0分
c、以腰膝酸软状况为评分标准
剧烈不适4分
重度不适3分
中度不适2分
轻度不适1分
正常0分
2、疗效判断
显效：临床症状、体证积分减少≥70％；
有效：临床症状、体证积分减少50-70％；
无效：临床症状、体证积分减少≤50％
(五)结果
调节肾虚的效果比较
(六)结论
试验组制备的牡蛎低聚肽制品，牡蛎低聚肽和中药提取物通过特定的配比，可显著改善患者肾虚的各项体证。对照组a为其他的牡蛎肽产品，效果很低，从对照组b可以看出，当调节中药提取物中的中药配比，有效率会随之下降，对照组c为单一的牡蛎低聚肽制品，效果降低更为明显，对照组c和对照组d改变了牡蛎低聚肽制品和中药提取物配比，对于有效率的影响也是很明显的。本发明实施例1中特定的中药组份，特定的牡蛎低聚肽制品和中药提取物，使得二者之间具有协同吸收，释放更多有效成分的功效。
本发明实施例提供的牡蛎低聚肽制品的制备方法，工艺先进、工序合理、可操作性强，易于工业化生产，该方法制备的牡蛎低具有较强具有增强性功能、滋阴补肾、抗亚健康、抑制体虚，添加的党参、蛇含石、九节菖蒲、枳椇子、胡芦巴和代代花等中药组份可以与牡蛎低聚肽进行协同，互相促进吸收，可以进一步提高保健品的营养和滋补效果，另外，酶解中酶的组合和用量的选择，使得酶解效率和酶解程度高，且酶解物中氨基化学物的种类和数量多，口感好。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。