本发明涉及一种果蔬汁功能添加剂及其制备方法与应用，属于食品加工
技术领域：
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背景技术：
：年轻人崇尚快捷的生活，饮料几乎成为每天必须食物，但是现阶段饮料为了增加稳定性一般均加入一定量的防腐剂、助悬剂、抗氧化剂、人工色素、甜味剂等以增强产品保质期、稳定性及食用口感。现代医学研究证明：长期饮用含有以上化学成分饮料，对身体有一定危害，尤其未成年人，影响其发育，甚至出现严重疾病。随着人们对绿色健康产品的追求，开发相关天然替代产品意义重大。果汁稳定剂一般是增稠剂，防腐剂、助悬剂等，例如：稳定、助悬剂有黄原胶及复配乳化体系，大豆多糖；防腐剂主要采用山梨酸及盐类；甜味剂：采用甜蜜素、糖精、糖精钠、环己基氨基磺酸钠等；此外加入抗氧化剂抗坏血酸；着色剂胭脂红、柠檬黄、日落黄等；ph调剂剂等。以上作为果蔬汁添加剂大量使用，其中防腐剂、甜味剂、着色剂大多采用化学产品，其安全性一直受到质疑，尤其其中甜蜜素、山梨酸钾、合成着色剂具有潜在“三致”问题隐患。同时为了增加适口性增加大量糖分，易引起“三高”问题，所以也不适合长期饮用，对果蔬汁相关产业产生不好的影响，所以开发具有以上属性和功能的安全产品将具有广阔的市场。技术实现要素：本发明的目的是提供一种果蔬汁功能添加剂及其制备方法与应用，该果蔬汁功能添加剂绿色天然，制备方法简单，产品固态化易于保存，使用方便；具备良好的生物活性，可以提高产品保健功能性；可以广泛用于果汁添加剂，同时单独制备保健食品，有好的市场前景。本发明的第一个目的是提供一种果蔬汁功能添加剂。本发明提供的果蔬汁功能添加剂，它的活性成分为质量比为(5～15)：(10～30)：(5～12)：(2～5)：(5～10)的原花青素、花青素、总黄酮、总皂苷类和多糖。所述果蔬汁功能添加剂的活性成分具体可为下述1)-3)中的任一种：1)质量比为(6.2～7.18)：(20.8～22.5)：(6.28～7.12)：(4.12～4.32)：(8.15～8.97)的原花青素、花青素、总黄酮、总皂苷类和多糖；2)质量比为7.18：22.5：6.28：4.12：8.15的原花青素、花青素、总黄酮、总皂苷类和多糖；3)质量比为6.2：20.8：7.12：4.32：8.97的原花青素、花青素、总黄酮、总皂苷类和多糖。本发明的第二个目的是提供上述果蔬汁功能添加剂的制备方法。本发明提供的果蔬汁功能添加剂的制备方法，以质量份数计，制备所述果蔬汁功能添加剂的天然原料如下：黑加仑10～30份，蓝莓10～20份，蓝锭果10～20份，五味子5～10份，桦褐孔菌2～10份，山荆子2～10份和猕猴桃10～20份。制备所述果蔬汁功能添加剂的天然原料具体可为如下1)-3)中的任一种：1)黑加仑30份，蓝莓10～20份，蓝锭果10～20份，五味子5份，桦褐孔菌5～10份，山荆子5～10份和猕猴桃20份；2)黑加仑30份、蓝莓20份；蓝锭果10份、五味子5份、桦褐孔菌10份，山荆子5份和猕猴桃20份；3)黑加仑30份、蓝莓10份、蓝锭果20份、五味子5份、桦褐孔菌5份，山荆子10份和猕猴桃20份。本发明中，所述黑加仑、所述蓝莓、所述蓝锭果、所述五味子、所述猕猴桃和所述山荆子为果实，所述桦褐孔菌为子实体。所述猕猴桃具体可为野生猕猴桃。所述野生猕猴桃可为软枣猕猴桃、葛枣猕猴桃、狗枣猕猴桃和美丽猕猴桃中一种或多种。上述果蔬汁功能添加剂的制备方法，所述方法可包括如下步骤：(1)在所述天然原料和水组成的浆液中加入酶进行酶解，得到酶体系；(2)将所述酶体系灭活后加入提取剂进行提取，得到提取液；(3)从所述提取液中析出多糖；将所述析出多糖后的提取液进行干燥，得到干燥粉a；将所述多糖除去蛋白后进行干燥，得到干燥粉b；(4)将所述干燥粉a和干燥粉b混合，得到所述果蔬汁功能添加剂。上述的制备方法中，将所述天然原料分成三组：由黑加仑、蓝锭果和蓝莓组成的天然原料1、由五味子和桦褐孔菌组成的天然原料2、由山荆子和猕猴桃组成的天然原料3；步骤(1)的具体包括如下步骤：1-1)在所述天然原料1和水组成的浆液1中加入酶1进行酶解1，得到酶体系1；1-2)在所述天然原料2和水组成的浆液2中加入酶2进行酶解2，得到酶体系2；1-3)在所述天然原料3和水组成的浆液3中加入酶3进行酶解3，得到酶体系3；步骤(2)的具体包括如下步骤：2-1)将所述酶体系1灭活后加入提取剂1进行提取1，得到提取液1；2-2)将所述酶体系2灭活后加入提取剂2进行提取2，得到提取液2；2-3)将所述酶体系3灭活后加入提取剂3进行提取3，得到提取液3；步骤(3)的具体包括如下步骤：3-1)从所述提取液1中析出多糖1；将所述析出多糖1后的提取液1进行干燥a1得到干燥粉a1；将所述多糖1除去蛋白后进行干燥b1，得到干燥粉b1；3-2)从所述提取液2中析出多糖2；将所述析出多糖2后的提取液2进行干燥a2，得到干燥粉a2；将所述多糖2除去蛋白后进行干燥b2，得到干燥粉b2；3-3)从所述提取液3中析出多糖3；将所述析出多糖3后的提取液3进行干燥a3，得到干燥粉a3；将所述多糖3除去蛋白后进行干燥b3，得到干燥粉b3；3-4)所述干燥粉a1、所述干燥粉a2和所述干燥粉a3混合，得到所述干燥粉a；将所述干燥粉b1、所述干燥粉b2和所述干燥粉b3混合，得到所述干燥粉b。步骤1-1)中，所述天然原料1和水的比例可为1g：(1～5)ml，具体可为1g：(1～2)ml、1g：1ml或1g：2ml；所述浆液1的制备步骤可如下：将所述天然原料1冷冻后加入所述水进行打浆，得到浆液1；所述酶1可为果胶酶；所述浆液1与所述酶1的比例可为1g：(2～10)iu，具体可为1g：(2～3)iu、1g：2iu或1g：3iu；所述酶解1的温度可为30～60℃，具体可为45℃；时间可为1～2h，具体可为1.5～2h、1.5h或2h；ph值可为3～7，具体可为5～5.5、5或5.5。步骤1-2)中，所述天然原料2和水的比例可为1g：(1～5)ml，具体可为1g：(2～3)ml、1g：2ml或1g：3ml；所述浆液2的制备步骤可如下：将所述天然原料2粉碎后加入所述水，搅拌，得到所述浆液2。所述粉碎的目数具体可为20～30目，如25目；所述酶2可为纤维素酶；所述浆液2与所述酶2的比例可为1g：(2～12)iu，具体可为1g：(2～4)iu、1g：2iu或1g：4iu；所述酶解2的温度可为30～70℃，具体可为55℃；时间可为1～2h，具体可为1.5～2h、1.5h或2h；ph值可为4～7，具体可为4.8。步骤1-3)中，所述天然原料3和水的比例可为1g：(1～5)ml，具体可为1g：(2～4)ml、1g：2ml或1g：4ml；所述浆液3的制备步骤可如下：将所述天然原料3冷冻后加入所述水进行打浆，得到浆液3；所述酶3可为果胶酶；所述浆液3与所述酶3的比例可为1g：(2～10)iu，具体可为1g：(3～4)iu、1g：3iu或1g：4iu；所述酶解3的温度可为30～60℃，具体可为45℃；时间可为1～2h，具体可为1～2h、1h或2h；ph值可为3～7，具体可为5。步骤2-1)中，所述提取1可为超声波提取；所述超声波提取的条件可如下：时间为20～60min(如30～40min、30min或40min)，温度为10～45℃(如30～40℃、30℃或40℃)，功率为200～1000w(如300～500w、300w或500w)；所述提取剂1为质量浓度为20～60％的乙醇水溶液(如30％～40％、30％或40％)；料液比为1g：(5～20)ml(如1g：(10～12)ml、1g：10ml或1g：12ml)。步骤2-2)中，所述提取2可为超声波提取；所述超声波提取的条件可如下：时间为30～90min(如50～60min、50min或60min)，温度为10～40℃(如30～40℃、30℃或40℃)，功率为200～1000w(如300～400w、300w或400w)；所述提取剂2为质量浓度为20～40％(如30％)的乙醇水溶液；料液比为1g：(8～25)ml(如1g：10～15ml、1g：10ml或1g：15ml)。步骤2-3)中，所述提取3可为闪式提取；所述闪式提取的条件可如下：时间为100～600s(如200～300s、200s或300s)，温度为10～40℃(如20～30℃、20℃或30℃)，电压为180～220v(如220v)；所述提取剂3为质量浓度为30～50％(如30％～40％、30％或40％)的乙醇水溶液，料液比为1g：(5～15)ml(如1g：10～12ml、1g：10ml或1g：12ml)。步骤3-1)中，所述析出多糖1采用醇沉法。所述析出多糖1前包括回收乙醇的步骤。所述干燥a1可为冷冻干燥。所述除去蛋白可采用seavge法。所述干燥b1为冷冻干燥。步骤3-2)中，所述析出多糖2采用醇沉法。所述析出多糖2前包括回收乙醇的步骤。所述干燥a2可为喷雾干燥。所述除去蛋白可采用seavge法。所述干燥b2为冷冻干燥。步骤3-3)中，所述析出多糖3采用醇沉法。所述析出多糖3前包括回收乙醇的步骤。所述干燥a3可为冷冻干燥。所述除去蛋白可采用seavge法。所述干燥b3可为冷冻干燥。本发明中，1iu果胶酶是指在特定条件(50℃)其它为最适条件作用ph范围：ph3.0～5.5；作用温度范围为40～55℃)下，1分钟催化果胶水解生成1ug半乳糖醛酸所需的酶量；1iu纤维素酶是指在特定条件(25℃，其它为最适条件作用ph范围：ph2.5～7.5，最适ph为4.8；作用温度范围：30～75℃，最适温度为55～60℃。)下，在1分钟内能转化1微摩尔的羧甲基纤维素钠为纤维二糖和葡萄糖所需的酶量。上述的制备方法中，所述灭活的温度可为80～100℃，具体可为80℃；时间可为2～10min，具体可为2min。本发明的第三个目的是提供上述果蔬汁功能添加剂在下述a1)-a4)中的至少一种或制备具有下述a1)-a4)中至少一种功能的产品中的应用：a1)提高果蔬汁稳定性；a2)提高果蔬汁质量；a3)抑制致病菌；a4)抑制微生物。本发明中，果蔬汁可为水果汁和/或蔬菜汁。本发明的第四个目的是提供一种果蔬汁饮料，它包含上述果蔬汁功能添加剂。所述果蔬汁饮料中，所述果蔬汁功能添加剂的质量百分含量可为1％～5％，具体可为1％、2％、3％、4％或5％。本发明的第五个目的是提供上述果蔬汁功能添加剂在制备具有如下b1)-b5)中至少一种功能的产品中的应用：b1)抗氧化；b2)抗疲劳；b3)抗肿瘤；b4)抑菌；b5)改善亚健康症状。所述抗氧化体现在清除超氧阴离子自由基、羟基自由基和dpph自由基中的至少一种。所述抗疲劳体现在提高活动耐力、降低活动后血清中乳酸含量和降低活动后血液中尿素氮的含量中的至少一种。所述肿瘤可为癌；所述癌可为肝癌。所述菌可为细菌。所述细菌可为大肠杆菌escherichiacoli、变形杆菌proteusvulgaris、枯草杆菌bacillussubtilis或金黄色葡萄球菌staphyloccocusaureusrosenbach。所述亚健康症状为如下症状中的至少一种：血压高或临界、血糖高或临界、血脂高或临界、入睡困难、便秘、食欲不振、神疲乏力眼睛干涩、耳鸣、记忆力差、夜尿多腰膝酸软、畏寒肢冷、盗汗、口干。所述产品可为保健食品。本发明的第六个目的是提供一种具有如下c1)-c5)中至少一种功能的产品，它以上述果蔬汁功能添加剂为活性成分：c1)抗氧化；c2)抗疲劳；c3)抗肿瘤；c4)抑菌；c5)改善亚健康症状。所述抗氧化体现在清除超氧阴离子自由基、羟基自由基和dpph自由基中的至少一种。所述抗疲劳体现在提高活动耐力、降低活动后血清中乳酸含量和降低活动后血液中尿素氮的含量中的至少一种。所述肿瘤可为癌；所述癌可为肝癌。所述菌可为细菌。所述细菌可为大肠杆菌escherichiacoli、变形杆菌proteusvulgaris、枯草杆菌bacillussubtilis或金黄色葡萄球菌staphyloccocusaureusrosenbach。所述亚健康症状为如下症状中的至少一种：血压高或临界、血糖高或临界、血脂高或临界、入睡困难、便秘、食欲不振、神疲乏力眼睛干涩、耳鸣、记忆力差、夜尿多腰膝酸软、畏寒肢冷、盗汗、口干。所述产品可为保健食品。所述保健食品中，所述果蔬汁功能添加剂的质量百分含量可为30％～40％，如40％。所述保健食品的剂型可为散剂、片剂、胶囊剂、液体制剂等。所述保健食品的剂型为片剂；以质量份数计，所述保健食品由下述组分制成：果蔬汁功能添加剂30～40份、碳酸氢钠20～30份、柠檬酸10～20份、粘合剂3份、润滑剂1份(如硬脂酸镁)、木糖醇10～25份、1.40～2.27份的无水乙醇和0.07～0.12份的水；所述粘合剂可为质量比为1：1的聚乙烯吡咯烷酮(pvp)和聚乙二醇4000(peg4000)。本发明具有如下有益效果：本发明采用天然提取物组成新的功能添加剂，降低相关化学食品添加剂的量，尤其去除防腐剂及助悬稳定剂，可以实现果蔬汁绿色产业化生产，同时由于果蔬汁功能添加剂中含有大量活性成分，添加果蔬汁后可以提高相关产品保健功能，补充相关营养成分缺陷，提高产品附加值。同时产品为固体，便于储存，方便运输适合企业工业化生产。发明所使用的提取工艺，相对较为独立，可以实现产品多元化，一定程度提高相关工艺产品的附加值。此外，相关天然材料国内有一资源储量，开发利用可以加快相关产业升级，产生良好的社会及经济效益。附图说明图1为本发明果蔬汁功能添加剂的工艺流程图。图2为原花青素标准溶液的色谱图。图3为实施例1中制备得到的果蔬汁功能添加剂中原花青素的色谱图。图4为实施例1制备得到的含果蔬汁功能添加剂的桃汁中的总菌落数随时间的变化图。图5为实施例1制备得到的含果蔬汁功能添加剂的桃汁中的霉菌随时间的变化图。图6为实施例1制备得到的含果蔬汁功能添加剂的桃汁中酵母菌数随时间的变化图。图7为实施例2中制备得到的果蔬汁功能添加剂中原花青素的色谱图。图8为实施例2制备得到的含果蔬汁功能添加剂的橙汁中的总菌落数随时间的变化图。图9为实施例2制备得到的含果蔬汁功能添加剂的橙汁中的霉菌随时间的变化图。图10为实施例2制备得到的含果蔬汁功能添加剂的橙汁中酵母菌数随时间的变化图。图11为实施例3中不同浓度的果蔬汁功能添加剂与超氧阴离子自由基的清除率的关系曲线。图12为实施例3中不同浓度的果蔬汁功能添加剂与羟基自由基的清除率的关系曲线。图13为实施例3中不同浓度的果蔬汁功能添加剂与dpph自由基的清除率的关系曲线。图14为实施例3中不同浓度的果汁与超氧阴离子自由基的清除率的关系曲线。图15为实施例3中不同浓度的果汁与羟基自由基的清除率的关系曲线。图16为实施例3中不同浓度的果汁与dpph自由基的清除率的关系曲线。图17为实施例3中不同浓度的功能添加剂药液(实施例1)对人肝癌细胞hepg2的抑制率。图18为实施例3中不同浓度的功能添加剂药液(实施例1)对人肝癌细胞smmc-7221的抑制率。图19为实施例3中不同浓度的功能添加剂药液(实施例2)对人肝癌细胞hepg2的抑制率。图20为实施例3中不同浓度的功能添加剂药液(实施例2)对人肝癌细胞smmc-7221的抑制率。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例所用的主要仪器：t650ct超声波萃取装置，上海启前电子技术公司；jhbe-50a闪式提取器，西安麒麟实验仪器有限公司，2695e高效液相色谱，美国waters公司，fsh-2型可调高速匀浆器，江苏省金坛市环宇科学仪器厂；gtr16-2全自动高速冷冻离心机；t6紫外可见分光光度计，北京谱析；pb-10型酸度计，德国赛多利斯；40b万能粉碎机，江阴市丰悦机械制造有限公司，果汁加工由黑龙江北悦食品有限公司提供设备及条件。下述实施例中检测方法：采用硝酸铝-亚硝酸钠比色法测定总黄酮；采用液相色谱法研究测定原花青素、花青素含量；采用硫酸-苯酚比色法测定多糖；香草醛-高氯酸比色法测定总皂苷类。具体步骤如下：1、总黄酮测定采用亚硝酸钠-硝酸铝法。以芦丁为对照品，在500nm测定总黄酮。添加剂测定：精确称量一定量添加剂，用60％甲醇定容至100ml容量瓶中，移取1ml母液于25ml比色管依据上面方法测定含量。2、原花青素、花青素测定：(1)原花青素依据gbt22244-2008方法仪器：液相色谱：waterse2695；检测器：紫外检测器。色谱条件：柱温35℃，色谱柱为c18(4.6×250um，5um)，低酸柱；流动相a为甲酸水(8％+73％)溶液，流动相b为甲醇(13％)，流动相c为异丙醇(6％)；流速为1ml/min；检测波长为525nm；进样量为10ul。对照品：原花青素，取10ml棕色容量瓶，取色素10mg加10％盐酸甲醇水溶液稀释至刻度，制成系列对照品液。以进样量为10ul，依据保留时间研究原花青素含量。(2)花青素测定花青素依据ph示差法测定。仪器：pb-01型酸度计，t6紫外分光光度计。校正因子测定：飞燕草素，取10ml棕色容量瓶，取色素各10mg加10％盐酸甲醇水溶液稀释至刻度，制成对照品液，在ph1.0和ph4.5下，测定花青素含量并计算相关系数。样品处理及测定：待测样品，粉碎，过30-40目筛，精密称定0.5g-1g粉末。乙醇盐酸溶液溶解，在ph1.0和ph4.5下，测定花青素含量。3、多糖测定：采用苯酚-硫酸显色法。以葡萄糖为对照品，490nm处测定。添加剂检测：功能添加剂，粉碎，过30-40目筛，精密称定2g粉末。热水溶解加无水乙醇至60％以上，静置12h，离心，冷冻干燥，再取适量热水超声溶解，定容于1000ml容量瓶中，移取上清0.5-1ml上清，依法检测。4、总皂苷测定：采用香草醛-高氯酸比色法，以熊果苷为对照品，在550nm处测定。添加剂检测：功能添加剂，粉碎，过30-40目筛，精密称定1g粉末。热水溶解冷却至室温，依次氯仿、正丁醇萃取，回收相关溶剂，合并萃取物，甲醇溶解定容100ml容量瓶中，移取上清0.5-1ml上清，依法检测。采用通用急毒试验规则研究提取物急性毒性；采用dpph法、领苯三酚自氧化法、fenton法研究抗氧化活性；mtt法研究抑制肿瘤活性；同时对亚健康人群进行随机试验，检验其临床价值。实施例1、制备功能添加剂及含有该功能添加剂的桃汁一、制备功能添加剂原料配方：黑加仑30份、蓝莓20份；蓝锭果10份、五味子5份、桦褐孔菌10份，狗枣猕猴桃20份，山荆子5份。将天然原料分成三组：由黑加仑、蓝锭果和蓝莓组成的天然原料1、由五味子和桦褐孔菌组成的天然原料2、由山荆子和猕猴桃组成的天然原料3。按照图1所示流程图制备功能添加剂，具体步骤如下：(1)在天然原料和水组成的浆液中加入酶进行酶解，得到酶体系；具体步骤如下：1-1)按照上述配方将冷冻后的黑加仑、蓝莓、蓝锭果，依据1g：1ml料液比加入纯化水，打浆备用，作为果浆1；依据2iu/g(酶/果浆1)添加对应果胶酶(食品级果胶酶，酶的活力10万iu/g，购自济南天本生物科技有限公司)，酶解温度45℃，ph为5，酶解1.5h，获得酶体系1；1-2)按照上述配方将将五味子、桦褐孔菌，粉碎过25目筛，依据1g：2ml料液比加入纯化水，搅拌均匀，作为果浆2；依据4iu/g(酶/果浆2)添加纤维素酶(食品级纤维素酶，酶的活力140万iu/g，购自郑州奇华顿化工产品有限公司)，酶解温度55℃，ph值为4.8，酶解1.5h，获得酶体系2；1-3)按照上述配方将将冷冻后的狗枣猕猴桃、山荆子，依据1g：2ml料液比加入纯化水，打浆备用，作为果浆3；依据3iu/g(酶/果浆3)添加对应果胶酶(食品级果胶酶，酶的活力10万iu/g，购自济南天本生物科技有限公司)，酶解温度45℃，ph为5，酶解1h，获得酶体系3；(2)将酶体系灭活后加入提取剂进行提取，得到提取液；具体如下：2-1)将酶体系1加热温度至80℃，灭活2min，搅拌备用；在上述灭活后的酶体系1中，封闭条件下加入食品级无水乙醇使质量浓度为40％，超声进行功能添加剂提取，提取时间30min，提取功率300w，提取温度30℃，料液比1g：10ml，得到提取液1；2-2)将酶体系2加热温度至80℃，灭活2min，搅拌备用；在上述灭活后的酶解体系2中，封闭条件下加入食品级无水乙醇使质量浓度为30％，超声进行功能添加剂提取，提取时间50min，提取功率400w，提取温度30℃，料液比1g：15ml，得到提取液2；2-3)将酶体系3加热温度至80℃，灭活2min，搅拌备用；在上述灭活后的酶解体系3中，封闭条件下加入食品级无水乙醇使质量浓度为40％，采用闪式提取法进行功能添加剂提取，提取时间200s，提取电压220v，提取温度20℃，料液比1g：10ml，得到提取液3；(3)从提取液中析出多糖；将析出多糖后的提取液进行干燥，得到干燥粉a；将多糖除去蛋白后进行干燥，得到干燥粉b；具体如下：3-1)回收提取液1中的乙醇，浓缩至原体积1/10，加入无水乙醇，析出多糖1，多糖1用seavge法除蛋白，回收seavge法溶剂，离心，-20℃下预冻2h，冷冻干燥获得冻干粉b1(多糖)；滤液于-20℃下预冻2h，冷冻干燥获得冻干粉a1；3-2)回收提取液2中的乙醇，浓缩至原体积1/10，加入无水乙醇，析出多糖，多糖用seavge法除蛋白，回收seavge法溶剂，离心，-20℃下预冻2h，冷冻干燥获得冻干粉b2(多糖)；滤液50℃下喷雾干燥获得喷雾粉a2；3-3)回收提取液3中的乙醇，浓缩至原体积1/8，加入无水乙醇，析出多糖，多糖用seavge法除蛋白，回收seavge法溶剂，离心，-20℃下预冻2h，冷冻干燥获得冻干粉b3(多糖)；滤液于-20℃下预冻2h，冷冻干燥获得冻干粉a3。3-4)将冻干粉a1、喷雾粉a2和冻干粉a3粉碎后混合均匀，得到干燥粉a；将冻干粉b1、冻干粉b2和冻干粉b3粉碎后混合均匀，得到冻干粉b(多糖)。(4)将干燥粉a和冻干粉b混合均匀，得到果蔬汁功能添加剂。依据前面功能成分测定方法其所得产物中各种功能成分的含量，测定结果如下：原花青素7.18％，花青素22.5％，总黄酮6.82％，总皂苷(萜)类4.12％，多糖8.15％。其中，原花青素标准溶液的色谱图如图2所示，本实施例中原花青素溶液的色谱图如图3所示。二、含功能添加剂的桃汁的制备及稳定性测试1、制备桃汁按照如下步骤制备桃汁：(1)桃子经过纯化水清洗、去核、加入l-抗坏血酸作为护色剂(2g/1000g)，打浆，依据比例加入果胶酶2iu/g、纤维素酶4iu/g，ph为4，酶解2h，得到果汁酶解液：(2)将上述酶解体系快速升温80℃，灭活2min得到酶灭活果汁；(3)将上述酶灭活果汁，通过过滤设备快速过滤，得到浓缩果汁。(4)在上述浓缩果汁中依据比例(果汁30％，水：58％，蔗糖5％，山梨酸钾1％，其他稳定剂6％(3％黄原胶，1％cmc-na，1％甜蜜素，0.1％柠檬黄，0.9％柠檬酸)获得稀释果汁，过滤，装瓶、115℃灭菌，20min得到桃果汁，命名果汁0。2、制备含功能添加剂的桃汁按照如下步骤制备含功能添加剂的桃汁：在上述桃汁的制备方法中(3)所得浓缩果汁中分别按照浓缩汁总质量的1％，2％，3％，4％，5％比例加入功能添加剂，然后加入与上述步骤(4)中等量的蔗糖，其他由纯化水等质量替代，即获得稀释果汁，过滤，装瓶、115℃灭菌，20min得到含功能添加剂果汁1，2，3，4，5。3、稳定性测试(1)依据gbt10789-2015《饮料通则》、gb2760-2014《食品添加剂使用卫生标准》、gb19297-2003《果、蔬汁饮料卫生标准》讨论感官指标(色泽、口感、组织状态、杂质等)，结果如下表1；理化指标(果汁含量、可溶性固形物、总酸、总砷、铅、铜)结果如下表2；微生物指标(菌落总数，大肠菌群，霉菌、酵母、致病菌)等，结果如图4、5、6。表1、感官要求表1显示随着功能添加剂比例增加果汁颜色逐步变深被花青素、花色苷颜色覆盖，表现出较好的外观颜色；随着采样时间后移与果汁0对比添加功能添加剂能很好改善果汁稳定性。表2、理化指标表2显示随着功能添加剂比例增加，果汁含量、固形、总酸略有增加，其中重点检查的重金属离子有不同程度减低，这与产品含有典型花青素物质有一定关系，多酚类物质有一定金属离子螯能力，通过二次过滤时有效减低其含量，所以添加功能剂后产品质量得到进一步提高。微生物指标属于行业强制实施指标，通过对大肠杆菌(3个内)及致病菌(沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌，不得检出)，均符合相关强制要求。其中添加达到5％以上后，放置18月均检不出以上微生物，说明添加剂有好的致病菌抑制能力。图4、5、6显示功能添加有好的抑制相关微生物作用，于常规添加苯甲酸钠防腐剂产品果汁0相比，效果显著，在2月至8月微生物总数均一定程度下降，产品在5％以上时抑菌能力有显著改善。同时添加剂果汁具有出好的持续抑菌能力。实施例2、制备果蔬汁功能添加剂及含有该功能添加剂的橙汁一、制备果蔬汁功能添加剂原料配方：黑加仑30份、蓝莓10份、蓝锭果20份、五味子5份、桦褐孔菌5份，软枣猕猴桃20份，山荆子10份。将天然原料分成三组：由黑加仑、蓝锭果和蓝莓组成的天然原料1、由五味子和桦褐孔菌组成的天然原料2、由山荆子和猕猴桃组成的天然原料3。按照图1所示流程图制备果蔬汁功能添加剂，具体步骤如下：(1)在天然原料和水组成的浆液中加入酶进行酶解，得到酶体系；具体步骤如下：1-1)按照上述配方将冷冻后的黑加仑、蓝莓、蓝锭果，依据1g：2ml料液比加入纯化水，打浆备用，作为果浆1；依据3iu/g(酶/果浆1)添加对应果胶酶(食品级果胶酶，酶的活力10万iu/g，购自济南天本生物科技有限公司)，酶解温度45℃，ph为5.5，酶解2h，获得酶体系1；1-2)按照上述配方将五味子、桦褐孔菌，粉碎过25目筛，依据1g：3ml料液比加入纯化水，搅拌均匀，作为果浆2；依据2iu/g(酶/果浆2)添加纤维素酶(食品级纤维素酶，酶的活力140万iu/g，购自郑州奇华顿化工产品有限公司)，酶解温度为55℃，ph值为4.8，酶解2h，获得酶体系2；1-3)按照上述配方将冷冻后的软枣猕猴桃、山荆子，依据1g：4ml料液比加入纯化水，打浆备用，作为果浆3；依据4iu/g(酶/果浆3)添加对应果胶酶(食品级果胶酶，酶的活力10万iu/g，购自济南天本生物科技有限公司)，酶解温度45℃，ph为5，酶解2h，获得酶体系3；(2)将酶体系灭活后加入提取剂进行提取，得到提取液；具体如下：2-1)将酶体系1加热温度至80℃，灭活2min，搅拌备用；在上述灭活后的酶体系1中，封闭条件下加入食品级乙醇(95％)使质量浓度为30％，超声进行功能添加剂提取，提取时间40min，提取功率500w，提取温度40℃，料液比1g：12ml，得到提取液1；2-2)将酶体系2加热温度至80℃，灭活2min，搅拌备用；在上述灭活后的酶解体系2中，封闭条件下加入食品级乙醇(95％)使质量浓度为30％，超声进行功能添加剂提取，提取时间60min，提取功率300w，提取温度40℃，料液比1g：10ml，得到提取液2；2-3)将酶体系3加热温度至80℃，灭活2min，搅拌备用；在上述灭活后的酶解体系3中，封闭条件下加入食品级乙醇(95％)使质量浓度为30％，采用闪式提取法进行功能添加剂提取，提取时间300s，提取电压220v，提取温度30℃，料液比1g：12ml。(3)从提取液中析出多糖；将析出多糖后的提取液进行干燥，得到干燥粉a；将多糖除去蛋白后进行干燥，得到干燥粉b；具体如下：3-1)回收提取液1中的乙醇，浓缩至原体积1/8，加入无水乙醇，析出多糖1，多糖1用seavge法除蛋白，回收seavge法溶剂，离心，-20℃下预冻4h，冷冻干燥获得冻干粉b1(多糖)；滤液于-20℃下预冻4h，冷冻干燥获得冻干粉a1；3-2)回收提取液2中的乙醇，浓缩至原体积1/8，加入无水乙醇，析出多糖2，多糖2用seavge法除蛋白，回收seavge法溶剂，离心，-20℃下预冻4h，冷冻干燥获得冻干粉b2(多糖)；滤液50℃下喷雾干燥获得喷雾粉a2；3-3)回收提取液3中的乙醇，浓缩至原体积1/8，加入无水乙醇，析出多糖3，多糖3用seavge法除蛋白，回收seavge法溶剂，离心，-20℃下预冻4h，冷冻干燥获得冻干粉b3(多糖)；滤液于-20℃下预冻4h，冷冻干燥获得冻干粉a3。3-4)将冻干粉a1、喷雾粉a2和冻干粉a3粉碎后混合均匀，得到干燥粉a；将冻干粉b1、冻干粉b2和冻干粉b3粉碎后混合均匀，得到冻干粉b(多糖)。(4)将干燥粉a和冻干粉b混合均匀，得到果蔬汁功能添加剂。依据前面功能成分测定方法其所得产物中各种活性成分的含量，测定结果如下：原花青素6.2％，花青素20.8％，总黄酮7.12％，总皂苷(萜)类4.32％，多糖8.97％。其中，原花青素标准溶液的色谱图如图2所示，本实施例中原花青素溶液的色谱图如图7所示。二、含功能添加剂的橙汁的制备及稳定性测试1、制备橙汁按照如下步骤制备橙汁：(1)橙子经过纯化水清洗、去皮、加入l-抗坏血酸作为护色剂(0.5g/1000g)，打浆，依据比例加入果胶酶3iu/g、淀粉酶4iu/g，ph为4，酶解3h，得到果汁酶解液：(2)将上述酶解体系快速升温80℃，灭活2min得到酶灭活果汁；(3)将上述酶灭活果汁，通过过滤设备快速过滤，得到浓缩果汁。(4)在上述浓缩果汁中依据比例(果汁30％，水：56％，蔗糖8％，山梨酸钾1％，其他稳定剂5％(2％黄原胶，1％cmc-na，1％甜蜜素，0.1％柠檬黄，0.9％柠檬酸钠)获得稀释果汁，装瓶、115℃灭菌，20min得到橙汁，命名果汁0。2、制备含功能添加剂的橙汁按照如下步骤制备含功能添加剂的橙汁：在上述橙汁的制备方法中(3)所得浓缩果汁中分别按照浓缩汁总质量的1％，2％，3％，4％，5％比例加入功能添加剂，然后加入与上述步骤(4)中等量的蔗糖，其他由纯化水替代，即获得稀释果汁，过滤，装瓶、115℃灭菌，20min得到含功能添加剂果汁1，2，3，4。3、稳定性测试(1)依据gbt10789-2015《饮料通则》、gb2760-2014《食品添加剂使用卫生标准》、gb19297-2003《果、蔬汁饮料卫生标准》讨论感官指标(澄清度、口感、组织状态、杂质等)，结果如下表3；理化指标(果汁含量、可溶性固形物、总酸、总砷、铅、铜)结果如下表4；微生物指标(菌落总数，大肠菌群，霉菌、酵母、致病菌)等。结果如图8、9、10。表3、感官要求表3显示随着功能添加剂比例增加果汁颜色逐步变深被花青素、花色苷颜色覆盖，表现出较好的外观颜色，略稀释显示酒红色；随着采样时间后移与果汁0对比添加功能添加剂能很好改善果汁稳定性，但是由于本批次含有较多多糖，所以储存至12月时会出现微量多糖沉淀，但是不影响果汁本身品质。表4、理化指标表4显示随着功能添加剂比例增加，果汁含量、固形、总酸略有增加，其中重点检查的重金属离子有不同程度减低，这与产品含有典型花青素物质有一定关系，多酚类物质有一定金属离子螯能力，通过二次过滤时可以减少其含量，所以添加功能剂后产品质量及安全性得到进一步提高。微生物指标属于行业强制实施指标，通过对大肠杆菌(3个内)及致病菌(沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌，不得检出)，均符合相关强制要求。其中添加达到5％以上后，放置18月时抽样均检不出要上微生物，说明添加剂有好的致病菌抑制能力。图8、9、10显示功能添加有好的抑制相关微生物作用，于常规添加苯甲酸钠防腐剂产品果汁0相比，效果显著，在2月至8月菌落总数均一定程度下降，同时添加剂果汁具有出好的持续抑菌能力，尤其霉菌抑制方面。实施例3、应用试验一、急毒试验急性毒性试验：依据gb15193.1-2014规定，采用改进寇氏法进行急性毒性试验测算ld50，数据采用spss处理。选择体重18～22克健康小鼠，性别相同或雌雄各半，组间剂量比值1：0.8，dn和dm的剂量范围内设7个剂量组3000mg/kg，3750mg/kg，4688mg/kg，5860mg/kg，7325mg/kg，9156mg/kg，11445mg/kg，具体数据如下表5，经过计算ld50＝7710mg/kg，参照国家急性毒性(ld50)剂量分级标准可知功能添加剂属于实际无毒物。表5、实施例1功能添加剂对小鼠死亡率的影响组别小鼠(只)剂量mg/kg对数剂量死亡数死亡率(p)p211030003.4810.10.0121037503.5710.10.0131046883.6720.20.0441058603.7730.30.0951073253.8640.40.1661091563.9650.50.25710114454.0670.70.49实施例2中制备得到的功能添加剂对小鼠死亡率的影响与表1无明显差异。为了评价其进一步评价急性毒性，进行28天经口实验，将40只sd大鼠雌雄对半，随机分为空白组、实验组(功能添加剂)各20只，实验前禁食、不禁水6h。实验组(是指上述实施例1或2得到的果汁功能添加剂)在1d内分3次给予(功能添加剂粉碎过150目，灭菌蒸馏水，高速匀浆机处理获得悬浊液)悬浊液灌胃，每次0.045g/ml，最大胃容量4ml/100g，两次灌胃间隔6h，灌胃后禁食、不禁水4h；空白组给予等量生理盐水灌胃，方法同实验组。灌胃后，连续28d观察三组大鼠毛发、呼吸、进食、二便、口鼻分泌物、精神状态及体质量变化，每天上、下午各1次；并记录其症状出现、恢复及死亡时间。体重测量：从第1次灌胃开始记录，在灌胃后1、3、5、7d各测量一次。实验结束次日采用脱臼法处死大鼠，对其外表和全身各脏器进行解剖及肉眼观察，发现异常组织再进行病理学检查。实验组的最大给药量是0.045g/ml×40ml/kg(最大胃容量)×3次＝5.4g/kg，是成人每日推荐常用量(1g/60kg)的324倍。第1天小鼠自由活动减少，食量下降，出现色素粪便、肛门部位皮毛多污染。第2～3天后动物的活动、食量、粪便等皆恢复正常，与对照组比较，无差异。20只受试大鼠均无死亡，第28天结束实验，解剖大鼠，肉眼观察其心、肝、脾、肺、肾、肠等脏器，与对照组比较，皆未发现明显病变和差异。二、抗氧化研究抗氧化活性测定：采用邻苯三酚自氧化速率测定超氧阴离子自由基的清除作用；邻二氮菲-feso4-h2o2体系研究羟基自由基清除能力；dpph自由基清除能力。功能添加剂抗氧化能力测定：精密称取研碎后的功能添加剂2.500g，用20ml40％乙醇水溶液，在常温下超声提取10min，过滤后，滤渣再提取一次，合并滤液，弃去滤渣。将所得滤液，加40％的乙醇棕色容量瓶定容至25ml备用。实验结果如图11-13所示。果汁抗氧化能力测定：将浓缩桃果汁过滤，获得澄清原果汁，纯水稀释10倍，作为空白组，添加1％，2％，3％，4％，5％功能添加剂的果汁，纯水稀释10倍，作为研究组。依据功能添加方法测定其抗氧化能力。实验结果如图14-16所示。通过上述抗氧化实验结果，显著发现其提取物具有典型抗氧化活性，有良好的dpph，羟基自由基，超氧自由基清除能力，其急毒试验显示属于实际无毒物质，所以具有潜在保健品开发价值。当添加入果汁时与未添加果汁的抗氧化能力存在显著差异，所以功能添加剂不仅提高果汁稳定性，而且增加果汁保健功能。三、抗疲劳研究1、游泳耐力实验选择昆明种白鼠体重30-42g，雌雄各半，每组5只。空白对照组每天用生理盐水灌胃；实验组每天分别一次性灌胃剂量处置，给药剂量200,300,500mg/kg/d，在灌服20d后，三组动物同池游泳，水温25℃，水深大约为小鼠体长的2.5倍，室温15℃，小鼠游泳到力竭取出(小鼠力竭为：小白鼠游泳步态，身体不能保持平衡，但呼吸心跳存在。)试验条件：将小鼠放置在游泳箱中游泳。①水深：45±1.0cm；②水温：25±1.0℃；将小白鼠放入温度为25±1.0℃，水深40cm的水中进行游泳实验，强迫进行游泳，直到体力消耗殆尽出现力竭状态为止，记录小鼠开始游泳到体力耗尽沉入水面10s不能浮出水面为止的时间，该时间为小鼠的游泳时间。实验结果见表6。表6、游泳试验结果2、生理指标测定(1)血乳酸(lac)含量测定试验(血乳酸检测试剂盒：北京索莱宝科技有限公司,bc2230)通过尾部采血，测定小鼠静息期，游泳(30min)停止后50min时的血乳酸含量。乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使nad+还原生成nadh和h+，在340nm处有特征吸收峰，再与经同样处理的标准液比色，即可求出无负重小白鼠的血乳酸的含量。实验依据如下步骤：①尾部断尾取血2-4ml，4000r/min，离心10min获得血清，-20℃存储；②取四支试管分别定为测定管、对照管、标准管、空白管。测定管中加入10ul血清，ld(乳酸)显色液500ul；标准管中加入10ul乳酸标准液，ld(乳酸)显色液500ul；空白管中加入10ul蒸馏水，ld显色液500ul；对照管10ul血清。37℃水浴5min，立即加入终止液3.0ml。冷却至室温后，在340纳米处测定吸光值(a1、a2、a3、a4)，以蒸馏水校正吸光度，分别读出的吸光度a。依据公式：乳酸(mmol/l)＝(a1-a2)/(a3-a4)计算。实验结果见表7。表7、对小鼠血乳酸水平的影响(x±s)(2)血尿素氮(bun)含量测定试验通过尾部采血，测定无负重小白鼠静息期，游泳(60min)停止后50min时的血尿素氮含量，采用二乙酰一肟-硫氨脲法。血液中的尿素在强酸的条件下与二乙酰一肟共热反应，生成红色复合物(即杨氏反应)。和经同样处理的标准液比色，即可求出无负重小白鼠血液中尿素氮的含量。取三支试管分别定为测定管、标准管、空白管。测定管中加入水0.48ml，新鲜血液0.02ml，10％三氯醋酸0.05ml；标准管中什么也不加入；空白管中加入水0.05ml。分别离心10分钟(3000转/分)后，只有测定管中取上清液0.50ml于另一只管，接着在标准管中加入0.50ml的尿素氮标准应用液，再在每个管内加入0.50ml的二乙酰一肟液和4.00ml的混合酸液。沸水浴10分钟，冷却，用比色皿，以空白管校正吸光度，分别读出的吸光度(a测、a标)。依据公式：血清尿素(mmol/l)＝(a测/a标)×5mmol/l计算。实验结果见表8。表8、对小鼠血尿素氮水平的影响(x±s)以上数据显示其功能产品具有显著抗疲劳生理活性，可以增加果汁保健功能。四、抑菌研究(1)抑菌效果采用无菌水配制60mg/ml抑菌液体(溶质为实施例1中制备得到的功能提取剂)，灭菌后备用，以无菌水作为对照液。其中大肠杆菌(escherichiacoli)，变形杆菌(proteusvulgaris)，枯草杆菌(bacillussubtilis)，金黄色葡萄球菌(staphyloccocusaureusrosenbach)，均由牡丹江师范学院生科院微生物实验室提供。在无菌操作条件下，将培养基熔化，每个培养皿倒入20ml，待培养基凝固。吸取制备好的菌悬液0.1ml，接种到培养基表面，快速用灭菌涂布棒涂布均匀。待菌悬液完全渗入后，用沾有抑菌液直径9mm无菌滤纸片3个和对照组一个置于平板上，37℃恒温培养24h，用十字交叉法测量抑菌圈直径，计算平均值。实验结果见表9。表9、对供试细菌的抑菌效果注：－代表没有抑菌圈。将上述抑菌液体中的溶质替换为实施例2中制备得到的功能添加剂，进行抑菌实验，实验结果见表10。表10、对供试细菌的抑菌效果注：－代表没有抑菌圈。(2)最低抑菌浓度无菌水配制100mg/ml抑菌液体(溶质为实施例1中制备得到的功能提取剂)，取灭菌试管按每组7支进行分组。每支试管中加入灭菌的液体培养基1ml，向第1支试管中加入1ml药液，混匀后吸出1ml加至2号试管中，如此稀释至第6管。则各管药物稀释倍数依次为2、4、8、16、32、64药液浓度分别为50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625mg/ml。然后向各管中加入0.2ml的菌悬液液。第7管放入1ml灭菌水为对照组，摇匀取出1ml，再加0.2ml的菌悬液，置于37℃培养24h后观察。实验结果见表11。表11、最低抑菌浓度的测定注：+代表有菌落出现，－代表无菌落。从以上数据可以得出：大肠杆菌的最低抑菌浓度为6.25mg/ml，对枯草杆菌的最低抑菌浓度为12.5mg/ml，对变形杆菌的最低抑菌浓度为3.125mg/ml，对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为6.25mg/ml，其显示出较好抑菌效果。将上述抑菌液体中的溶质替换为实施例2中制备得到的功能添加剂，测试其最低抑菌浓度，实验结果与表11相同。五、抗肿瘤研究人肝癌细胞hepg2、smmc-7221(由牡丹江师范学院细胞实验室提供)。取10个100ml容量瓶，分别配置浓度为62.5mg/ml，125mg/ml，187.5mg/ml，250mg/ml，312.5mg/ml药液(采用实施例1中制备得到的功能添加剂，以无菌水为溶剂)备用，采用mtt法测定抗肿瘤效果。向96孔板中的40个实验孔里按次序分别加入90μl不同浓度梯度的上述药液，其中每个浓度加2个孔且剩余的8个孔分成2组为对照组，对照组不加药品，加完提取液后将细胞放到培养箱里培养24h。24h后，即可向实验的所有48个孔中加入mtt，每个孔中加入10μl的mtt。在加入mtt时需要关闭无菌操作室内所有灯光。避光加完mtt后需要再继续把细胞放到恒温培养箱内培养4h。4h后将培养后的细胞取出，吸出上清液。再向孔中加入100μl的dmso，并轻轻用手指敲细胞板的底部。最后用490nm波长下的酶标仪测出各孔的吸光度值，再用吸光度值计算出细胞的抑制率。细胞抑制率＝(对照组平均值-加药组平均值/对照组平均值)×100％其结果如图17，图18。实施例2制备得到的功能添加剂的对细胞的抑制率见图19和图20。通过以上研究其以上获得产品具有一定抗肿瘤活性，有一定开发前景。六、临床研究1、研究对象：保健食品对照组：亚健康人群(表现为易感冒、易疲劳、睡眠质量差、精力差、记忆力差、血糖血脂高或临界值)，共30例，平均年龄45岁，其中女性15例，平均年龄42岁，男性15例，平均年龄48岁。安慰剂组：10例，年龄32-52岁，平均年龄45.3岁。2、相关片剂制备：a、原料选择：选取柠檬酸，nahco3，pvp，peg4000(6000)，乙醇，木糖醇等辅料均为食用级。b、主要仪器：恒温水浴锅；真空干燥箱；zp-5旋转压片机、160b摇摆式颗粒机，上海天峰制药设备有限公司；e2695高效液相色谱，美国waters公司；t6紫外可见分光光度计，北京谱析通用仪器有限公司；pb-10型酸度计，德国赛多利斯等。将上述实施例中制备的功能添加剂(花青素可为10～30％，总黄酮可为5～12％，总皂苷2～5％，多糖5～10％)粉依据以下比例制成片剂。以质量份数计，该片剂由下述组分制成：功能添加剂30～40份、碳酸氢钠20～30份、柠檬酸10～20份、粘合剂(由质量比为pvp和peg4000组成)3份、润滑剂1份、木糖醇10～25份、1.40～2.27份的无水乙醇和0.07～0.12份的水。具体如下：100g功能添加剂、50g碳酸氢钠、37.5g柠檬酸、7.5g粘合剂(pvp与peg4000质量比1：1)、2.5g的硬脂酸镁、55g木糖醇、5g的95％乙醇水溶液。依次加入木糖醇、碳酸氢钠、柠檬酸、以乙醇为润湿剂、pvp与peg4000为粘合剂、在制粒机上湿法一步制粒，45℃下烘干，以16目筛子整粒，可得泡腾颗粒剂，压片机压片，共制100片，片重2.5g。3、研究方法：观察对象确定：中医科诊断以上病例，符合慢性疲劳亚健康综合征特征。服药周期为4周，为消除心理因素，采用随机抽取10例为安慰剂组(可溶淀粉替代主要成分)，各组分质量具体如下：100g淀粉、50g碳酸氢钠、37.5g柠檬酸、7.5g粘合剂(pvp与peg4000比例1：1)、2.5g的硬脂酸镁、55g木糖醇、5g的95％乙醇水溶液。4、使用方法：4周为一个疗程，每日2次，早晚各一片(2.5g)，置于200ml水中，50s左右就可直接服用。安慰剂组同样片剂大小对照。5、临床功效判断标准：(1)显著：主要症状明显改善或消失，或主要症状2项，次要症状3项明显改善。(2)有效：主要症状改善，或好转一级(由重变轻或消失)，主要症状改善，次要症状1-2项改善。(3)无效：主要症状无改善。主要症状和次要症状根据亚健康人群标志性症状判断。6、功效结果：(1)功能食品组结果如下表12：由表12可以看出，功能食品总的有效率在80％，主要症状改善较为明显。表12、功能食品对照组功效结果表12中，*数量越多表示症状越主要。(2)安慰剂对照组结果如下表13：表13、安慰剂对照组功效结果表13中，*数量越多表示症状越主要。由表13可见，空白组明显不如功能食品组结果。7、临床总功效结果见表14。表14、总有效率分析分组显著有效无效总有效率保健食品组(30例)16(53.33％)12(40.0％)2(6.67％)28(93.3％)安慰剂组(10例)0(0％)1(10％)9(90％)1(10％)由表14可以看出，其保健食品组总有效率达到93.3％，说明与安慰剂组差异明显，有明确的疗效。通过30例，临床研究保健食品组总有效率在93.3％，服用4周后病例出现精神旺盛，食欲改善，记忆力增强，同时没有不良反应出现。所以本品有抗疲劳(主要亚健康体现)辅助治疗功能，对有亚健康有明显改善作用。8、典型病例(1)张xx，女，43岁，药企中层干部，平时工作忙，压力大，服用前有明显畏寒、眼睛干涩、易感冒、便秘、易上火、神疲乏力、腰膝酸软等症状，服用4周后畏寒、神疲乏力等症状消失，疲劳、腰膝酸软有明显改善。(2)肖xx，男，47岁，公务员，工作忙，压力大，经常熬夜，服用前有明显畏寒、入睡难，血糖处于临界，食欲不振，神疲乏力，盗汗。服用3周后、神疲乏力等症状消失，睡眠质量提高显著，血糖回归正常，食欲改善，盗汗现象减轻。(3)杨x，男，39岁，药品销售大区经理，服用前食欲不振、夜尿频繁、口干、血糖、血脂处于临界、脂肪肝等，服用60天后神疲乏力等症状消失，血糖回复正常，精力明显好转、脂肪肝明显减轻。当前第1页12