本发明涉及虾病预防药物，尤其涉及一种预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂及其制备方法。
背景技术：
近年来，我国广西、广东、福建、浙江等省市不同程度出现了南美白对虾白便综合征，且逐年呈蔓延趋势，危害比较严重。南美白对虾白便综合征的主要症状为：患病南美白对虾的粪便细长呈白色(如棉线)，有黏性，浮在水面，大量聚集有恶臭散发(南美白对虾空肠白便的防治.科学养鱼，2013，2：62-62.)。目前，南美白对虾白便综合征主要采用恩诺沙星等抗生素(南美白对虾白便综合征病原霍乱弧菌的分离与药敏试验.动物医学进展，2016，37(2)：128-132.)或联合光合细菌+氧化钙+三黄散+氧氟沙星+小苏打等一些药物配合治疗(南美白对虾空肠白便的防治.科学养鱼，2013，2：62-62.南美白对虾拉白便治疗一例.当代水产，2011，10：38-38.)，或采用复合制剂(高浓噬菌蛭弧菌原粉+高浓复合芽孢杆菌原粉+维生素C原粉)(治疗南美白对虾白便病的复合制剂及其制备方法专利申请号：201310638319.2)进行治疗，但这些治疗制剂均用于南美白对虾白便综合征的治疗，属于南美白对虾发病后使用，使用或制备过程极其复杂，要么整个疗程涉及了至少5种以上药物，要么生产操作复杂，使用剂量较大，使用成本较高，从而加大了养殖户对该病的控制难度与成本。由于南美白对虾白便综合征具有发病急，危害大等特点，一旦发病，如不及时治疗，就会出现大规模死亡，无法控制。因此，开发预防南美白对虾白便综合征的饲料添加剂相对于其治疗制剂而言更为重要，但至今却没有任何该病的预防用制剂。鉴此，本发明制备了一种预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂，填补了预防南美白对虾白便综合征的产品空白。
技术实现要素：
为此，本发明所要解决的技术问题是提供一种预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂，克服现有技术存在的不足。
为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：
一种预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂，其特征在于按下列质量比的物质组成：噬菌蛭弧菌微胶囊4-6份，抗菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊4-6份；所述噬菌蛭弧菌微胶囊的浓度为3.69×107pfu/g～3.70×107pfu/g，所述抗菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊的浓度为1.91×109cfu/g。
在本发明的优选实施例中，所述噬菌蛭弧菌微胶囊5份，所述抗菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊5份。
在本发明的中用到的噬菌蛭弧菌微胶囊，在专利号为ZL201210383061.1的专利文献中有记载，用到的抗菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊，在专利号为ZL201210297950.6的专利文献中有记载。
另外，本发明还提供上述微生物饲料添加剂的制备方法，该制备方法为：
按上述质量比称取噬菌蛭弧菌微胶囊和抗菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊；先将蛭弧菌微胶囊和抗菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊在15-25℃条件下均匀搅拌混合，搅拌速度100-150r/min，搅拌时间0.5-1.0h，整个搅拌混合过程均处于密闭状态。
采用上述技术方案，经实验证明，本发明的微生物饲料添加剂具有预防南美白对虾白便综合征的显著效果，并且该微生物饲料添加剂安全无毒副作用，不会像化学药物一样引起病原菌产生耐药性和药物残留，而且能够克服所报道的预防南美白对虾白便综合征需要光合细菌+氧化钙+三黄散+氧氟沙星+小苏打等5种多的药物配合治疗才能起到效果的难题，与现有报道的南美白对虾白便综合征的治疗药物(高浓噬菌蛭弧菌原粉+高浓复合芽孢杆菌原粉+维生素C原粉)(治疗南美白对虾白便病的复合制剂及其制备方法专利申请号：201310638319.2)相比，操作更简便，用量更低，使用成本更低，更有利于南美白对虾健康养殖发展与养殖产量增加。
具体实施方式
材料与方法
1.1实验材料
噬菌蛭弧菌微胶囊，浓度(即菌含量)为3.69×107pfu/g～3.70×107pfu/g(噬菌蛭弧菌微胶囊的制备方法专利号：ZL201210383061.1)，由上海海洋大学提供。
抗菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊，浓度(即菌含量)为1.91×109cfu/g(抗菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊的制备方法专利号：ZL201210297950.6)，由上海海洋大学提供。
白便综合征病原菌霍乱弧菌菌悬液，由上海海洋大学水生动物病原库提供。
南美白对虾配合饲料，购于广东海大集团容川饲料有限公司。
健康南美白对虾，共300尾，由慈溪龙武渔业专业合作社提供。
恩诺沙星原粉，含量大于99.7％，购于浙江国邦药业有限公司。
治疗南美白对虾白便病的复合制剂(治疗南美白对虾白便病的复合制剂的制备方法专利申请号：201310638319.2)，购于上海绿奥生物科技有限公司。
1.2预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂的制备
将噬菌蛭弧菌微胶囊、抗菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊按质量比5：5均匀搅拌混合，即为预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂。具体操作为：先将50公斤抗菌解淀粉芽孢杆菌微胶囊与50公斤噬菌蛭弧菌微胶囊均匀搅拌混合，搅拌混合过程处于密闭状态，温度15-25℃，搅拌速度100-150r/min，搅拌时间0.5-1.0h。
1.3健康南美白对虾的选取
选取活力好、无病伤、体质健壮、大小均匀的健康南美白对虾，养殖于容量为60L的玻璃水族缸中，每个水族缸30尾，进行预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂对南美白对虾白便综合征的预防效果试验。
1.4预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂的应用效果
试验前，分别制备菌饵和菌药混合饵。即将浓度为2.0×108cfu/mL的白便综合征病原菌霍乱弧菌菌悬液均匀喷洒在南美白对虾配合饲料上制成有毒菌饵，使有毒菌饵的霍乱弧菌含量为1.0×108cfu/g饲料；将浓度为2.0×108cfu/mL的白便综合征病原菌霍乱弧菌菌悬液均匀喷洒在南美白对虾配合饲料上制成有毒菌饵，然后再将恩诺沙星原粉与有毒菌饵均匀混合制成有毒菌-恩诺沙星混合饵，使有毒菌-恩诺沙星混合饵中霍乱弧菌的含量为1.0×108cfu/g饲料，恩诺沙星的终剂量为1.0g/Kg饲料；将浓度为2.0×108cfu/mL的白便综合征病原菌霍乱弧菌菌悬液均匀喷洒在南美白对虾配合饲料上，然后再将治疗南美白对虾白便病的复合制剂与南美白对虾配合饲料均匀混合制成有毒菌-治疗南美白对虾白便病的复合制剂混合饵，使有毒菌-治疗南美白对虾白便病的复合制剂混合饵中霍乱弧菌的含量为1.0×108cfu/g饲料，治疗南美白对虾白便病的复合制剂的终剂量为5.0g/Kg饲料；将浓度为2.0×108cfu/mL的白便综合征病原菌霍乱弧菌菌悬液均匀喷洒在南美白对虾配合饲料上，然后再将预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂与南美白对虾配合饲料均匀混合制成有毒菌-微生物饲料添加剂混合饵，使有毒菌-微生物饲料添加剂混合饵中霍乱弧菌的含量为1.0×108cfu/g饲料，预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂的终剂量分别为1.0g/Kg饲料、2.0g/Kg饲料、3.0g/Kg饲料。
设置1个阴性对照组、2个阳性对照组、1个低剂量试验组、1个中剂量试验组和1个高剂量试验组，每个试验组放入健康南美白对虾30尾。阴性对照组每日投喂南美白对虾有毒菌饵，投喂量为虾总体重的2％；阳性对照组1每日投喂南美白对虾有毒菌-恩诺沙星混合饵，投喂量为虾总体重的2％；阳性对照组2每日投喂南美白对虾有毒菌-治疗南美白对虾白便病的复合制剂混合饵，投喂量为虾总体重的2％；低剂量试验组每日投喂南美白对虾含1.0g/Kg饲料预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂的有毒菌-微生物饲料添加剂混合饵，投喂量为虾总体重的2％；中剂量试验组每日投喂含2.0g/Kg饲料预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂的有毒菌-微生物饲料添加剂混合饵，投喂量为虾总体重的2％；高剂量试验组每日投喂南美白对虾含3.0mg/Kg饲料预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂的有毒菌-微生物饲料添加剂混合饵，投喂量为虾总体重的2％。每个组(阴性对照组、阳性对照组、低剂量试验组、中剂量试验组、高剂量试验组)均连续投喂18d，试验期间每3天统计各组南美白对虾的死亡数目，计算死亡率和有效保护率。试验期间连续曝气，不换水，水温控制在为28℃。
2.实验结果
实验结果见表1(预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂对南美白对虾白便综合征的预防效果)。实验结果表明，阴性对照组和阳性对照组1中的南美白对虾出现了典型的白便综合征症状，出现了较高的死亡率，而在南美白对虾配合饲料中分别添加了治疗南美白对虾白便病的复合制剂以及1.0g/Kg饲料、2.0g/Kg饲料、3.0g/Kg饲料的预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂均能够显著减少南美白对虾白便综合征的发病率，由此减少白便综合征导致的南美白对虾的死亡率：连续投喂18d，投喂量为虾总体重的2％，1.0g/Kg饲料、2.0g/Kg饲料、3.0g/Kg饲料剂量的预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂使南美白对虾因白便综合征导致的死亡率分别较阴性对照组减少了30％、76.67％、76.67％，5g/Kg饲料剂量的治疗南美白对虾白便病的复合制剂使南美白对虾因白便综合征导致的死亡率较阴性对照组减少了52.17％，尤其是2.0g/Kg饲料、3.0g/Kg饲料剂量的预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂的试验组中南美白对虾均未发病，有效保护率达到了100％，这显著优于5g/Kg饲料剂量的治疗南美白对虾白便病的复合制剂的效果。根据农业部发布的《渔用药品临床药效试验技术规范》中关于抗微生物药物的效果评价标准：有效率在85％以上为显效，60％-85％为有效，故预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂预防南美白对虾白便综合征的有效剂量最终确定为2.0g/Kg饲料和3.0g/Kg饲料。
表1：预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂对南美白对虾白便综合征的预防效果
3.结论
本发明制备了一种预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂，该微生物饲料添加剂安全无毒副作用，在连续投喂18d，投喂量为虾总体重的2％，2.0g/Kg饲料、3.0g/Kg饲料剂量下对南美白对虾白便综合征具有良好的预防效果，显著优于恩诺沙星和治疗南美白对虾白便病的复合制剂的预防效果。本发明制备的预防南美白对虾白便综合征的微生物饲料添加剂用于南美白对虾白便综合征的预防，安全无毒副作用，与现有报道的南美白对虾白便综合征的治疗药物(南美白对虾空肠白便的防治.科学养鱼，2013，2：62-62.南美白对虾拉白便治疗一例.当代水产，2011，10：38-38.)相比，不会像化学药物一样引起病原菌产生耐药性和药物残留、水质和水产品污染，而且能够克服所报道的控制南美白对虾白便综合征需要光合细菌+氧化钙+三黄散+氧氟沙星+小苏打等5种多的药物配合使用才能起到效果的难题，与现有报道的南美白对虾白便综合征的治疗药物(高浓噬菌蛭弧菌原粉+高浓复合芽孢杆菌原粉+维生素C原粉)((治疗南美白对虾白便病的复合制剂及其制备方法专利申请号：201310638319.2))相比，操作更简便，用量更低，使用成本更低，更有利于南美白对虾健康养殖发展与养殖产量增加。
但是，本技术领域中的普通技术人员应当认识到，以上，只要在本发明的实质精神范围内，对以上所述实施例的变化、变型都将落在本发明的权利要求保护范围内。