本发明属于生物活性食品技术领域，具体涉及一种具有醒酒功能的复合酵素及其制备方法。
背景技术
中国酒文化历史悠久，深入人心，而醉酒和酒精中毒是我国长期存在的公共健康问题。解酒药物和食物的研发有迫切的社会需求及良好的经济预期。解酒的机制主要是强化乙醇脱氢酶氧化乙醇成乙醛，强化乙醛脱氢酶氧化乙醛为乙酸，其次是护胃保肝及抗自由基等。醉酒和酒精中毒是我国长期存在的公共健康问题。急性大量饮酒可引起恶心、呕吐、记忆力减退、注意力不集中等，而长期的饮酒将导致精神障碍、胃溃疡以及脂肪肝、酒精性肝炎、肝硬化等疾病。因此开发有效的解酒药物和食物受到人们的普遍重视。据统计，我国饮酒消费人数超过5亿人，愿意服用或已经服用过相关解酒产品的人数约占5%，市场前景相当乐观。
如今已研发出的国外主流解酒产品有德国酸菜解酒胶囊、俄罗斯ru21、新西兰莱福宝保肝丸、美国排毒养苷宝、日本万田酵素、日本sunnyhealth解酒片等;国内主要解酒产品有海王金樽、“陪酒师”解酒茶、酒伴侣、台湾森活酵素等。西方国家已开发的解酒药多为合成药，而亚洲国家侧重于中草药的研究开发。虽全国有大大小小的上百个解酒产品但无一强势产品，近年出现的解酒酵素制品表现出了其广阔的市场前景。
酵素又称为“酶”，是一种特殊的蛋白质，也是一种生物催化剂，它只存在于动物、植物及微生物的活动组织内，它承担人体内新陈代谢中各种化学反应，能增加组织各种生化反应(氧化、还原、分解、合成、转化)的速率，人体内凡是细胞的代谢，新生、分解、消化、合成等，都依靠酵素来完成，所以酵素又被称之为“生命之泉”。
酵素是由碳、氢、氮、氧原子组成的碳化合物即氨基酸。基本上构成氨基和羧基原子轩和，这是根据结合后的形态制作的。所有原子的种类大约有300种。这其中有20种氨基酸是人体所使用的。50多个这样的氨基酸分子结合在一起，像扭转项链一样复杂的连接起来而构成蛋白质。不同种类的氨基酸的组合构成各种各样的蛋白质。肌肉当然也是如此，而胶原以及某些荷尔蒙激素也是由蛋白质组成的。所有的酵素也都是蛋白质。根据酵素的种类，有的是由200或300种氨基酸连接而成，有的还是非常大的高分子构造。目前的合成及植物来源的解酒药尚无强势产品，因此具有醒酒功能的复合酵素以其天然的多酶解酒体系、多因子解酒体系应运而生，同时因其兼具护胃保肝、预防和治疗醉酒等作用，使其具有广阔的市场前景。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供一种具有醒酒功能的复合酵素及其制备方法，本发明的复合酵素能迅速消除症状，唤醒患者意识，能很好的缓解酒后头疼、口感、胃酸、无食欲等不适。本发明复合酵素服用方便且能够起到清热解毒作用，调节酒后人体的机能，提升人体免疫能力，无任何毒副作用，所以服用安全、有效、有益健康，兼具有醒酒和滋补保健的功效。
本发明的技术方案为：一种具有醒酒功能的复合酵素的制备方法，其特征在于，包含以下具体步骤：
s1、将按重量份数计滇橄榄37-55份、葛花11-19份、马齿苋12-24份、柑橘皮6-14份、胡萝卜12-18份、苹果3-7份洗净，滇橄榄去核，马齿苋去皮，所有用具要确保消毒后使用；晾晒沥干表面水份，破碎成浆液；
s2、微生态制剂的制备：
制备母发酵剂：以产铜醋杆菌（acetobacterketogenum）、粟酒裂殖酵母（schizosaccharomycespombelindner）、鲁克斯假丝酵母（candidacrusei）按质量比1：2：1复合成母发酵剂；所述培养基以s1步骤获得的浆液为基础；
s3、将步骤s1获得的培养基以及s2所得母发酵剂，放入所述发酵罐中，密封，在34-39°c条件下，发酵2-4天，以100目筛过滤，得到滤液；
s4、将所述滤液密封，25-28°c，低温二次发酵3-5天；15-20°c条件下，再密封静置沉淀5-10天；
s5、取步骤s4沉淀后的上清液20目过滤，消毒灭菌灌装成液体型复合酵素。
进一步的，步骤s3中包括加入所述母发酵剂3-8份。
进一步的，所述母发酵剂的浓度为3.4*105-4.1*106cfu/ml。
本发明还提供一种上述方法制备得到的酵素。
本发明的酵素具有在制备保健食品中的用途。
滇橄榄又名余甘子（phyllanthusembical），属大戟科油柑属，为落叶乔或灌木，果实富含维生素c，据分析每100g果肉维生素含量达500-l814mg，居一般水果之冠，蛋白质含量为2.18010，远高于一般水果；单糖含量为4.96%，双糖0.17%，纤维素18.76%、淀粉11.7%；单宁含量高达17.75%，其中有葡萄糖没食子鞣甙、没食子酸、并没食子酸、鞣料石精、原诃子酸．还含有独特超氧阴离子自由基的类sod活性物质，因此决定了其味酸涩，食后回甜生津的口感，并具有清炎利喉，止咳化痰，降血压及胆固醇，具有极高的营养和药用价值。
马齿苋(portulacaoleraceal.)别称马苋、五行草、长命菜、马齿草、马齿菜、酸菜、五行菜、猪肥菜，为马齿苋科(portulacease)马齿苋属(portulaca)。马齿苋科植物约有20属580种，在我国现有2属7种。马齿苋科植物原产于温带和热带地区，除高寒地区外，全球各地均有分布，被列为世界第八大最普通的植物。马齿苋的药用价值早在药典和中药词典中就有明确记载，《本草纲目》和《本宝本草》等都记载马齿苋性寒、味酸，具有清热解毒之功效，治疗肠炎、痢疾、蛇虫咬伤、急性和亚急性皮炎等疾病。近年的药理研究表明，马齿苋具有抗菌、降血脂、抗衰老、松弛肌肉、抗炎、镇痛以及促进伤口愈合等功效。马齿苋营养丰富，含有丰富的矿质元素如钙、镁、钾、锌、铜、铁、锰、硒等，并且马齿苋的多糖、蛋白质、甾酮、总黄酮含量高，氨基酸种类齐全，富含ω-3-不饱和脂肪酸、α-亚麻酸、β-亚麻酸，还含有萜类、生物碱并含有去甲肾上腺素、褪黑激素等保健营养成分，具有改善血液循环、提高人体免疫力、防治心血管疾病、抑制微生物生长等多重功效。
葛花是重要的野生植物之一,生长在豆科植物野藤或甘葛藤上,是一种干燥花,又称葛条花,味道香甜,品性寒凉。葛花的主要功效是解酒醒脾,此外,还具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗过敏、改善记忆力等功效。野葛花主要分布在广东、广西、四川、云南等地,但除新疆、西藏、青海外,基本上到处都能看见它的身影。在葛花中起氧化还原作用的是皂角苷和异黄酮类物质。皂角苷和异黄酮类物质不仅可以加快酒精的氧化,还能使乙醇失去毒性,对胃肠黏膜起到收缩和保护作用。饮酒前服用含有葛花成分的食物或药品,可预先在肝脏和胃中形成一层生物保护膜,发挥保肝养胃的功效,同时增大酒量;酒后服用含有葛花成分的食物或药品,可以改善醉酒的症状,起到解酒保肝的作用。但目前仍未有通过发酵的方式制备葛花醒酒产品的报道。
柑橘种类繁多,应用广泛,其皮渣占果实的20%~30%,具有很好的应用价值。柑橘皮的主要成分有香精油、色素、果胶、橙皮苷、膳食纤维、黄酮类化合物等,具有抑菌、消炎、抗病毒、抗氧化、治疗肠道疾病、维持血管渗透压、降低血管脆性等作用。
乙醇在体内代谢会产生·oh，是引起肝细胞损伤的重要诱因之一。通过本申请发明人大量创造性研究发现，本发明复合酵素醒酒能力与清除·oh能力之间存在一定关系。本申请发明人通过研究发现，本发明复合酵素能够直接激活小鼠体内adh活性，从而加速乙醇在体内的代谢，并且可以用本发明对adh的体外激活率作为衡量醒酒活性的主要指标。
本发明独创性的将滇橄榄、葛花、马齿苋、柑橘皮、胡萝卜、苹果作为组分原料，组分之间在发明人通过大量的创造性劳动复合成的优势母发酵剂中发酵并达到协效复配的效果，滇橄榄、葛花、马齿苋、柑橘皮内的功能成分能够在发酵过程中发挥功效，同时胡萝卜、苹果能够改善产品的口感，发酵出的复合酵素可激活体内adh活性，提供体内清除·oh的能力，达到唤醒患者意识，能很好的缓解酒后头疼、口感、胃酸、无食欲等不适。
本发明采用微生态发酵技术，把微生态制剂与新鲜水果蔬菜相结合，制造“复合酵素”补充剂，即微生态可食用酵素。
本发明的复合酵素能迅速消除症状，唤醒患者意识，能很好的缓解酒后头疼、口感、胃酸、无食欲等不适。本发明复合酵素服用方便且能够起到清热解毒作用，调节酒后人体的机能，提升人体免疫能力，无任何毒副作用，所以服用安全、有效、有益健康，兼具有醒酒和滋补保健的功效。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1
本实施例提供一种具有醒酒功能的复合酵素的制备方法，其特征在于，包含以下具体步骤：
s1、将按重量份数计滇橄榄45份、葛花16份、马齿苋15份、柑橘皮8份、胡萝卜16份、苹果5份洗净，滇橄榄去核，马齿苋去皮，所有用具要确保消毒后使用；晾晒沥干表面水份，破碎成浆液；
s2、微生态制剂的制备：
制备母发酵剂：以产铜醋杆菌（acetobacterketogenum）、粟酒裂殖酵母（schizosaccharomycespombelindner）、鲁克斯假丝酵母（candidacrusei）按质量比1：2：1复合成母发酵剂；所述培养基以s1步骤获得的浆液为基础；
s3、将步骤s1获得的培养基以及s2所得母发酵剂，放入所述发酵罐中，密封，在36°c条件下，发酵3天，以100目筛过滤，得到滤液；
s4、将所述滤液密封，26°c，低温二次发酵4天；18°c条件下，再密封静置沉淀7天；
s5、取步骤s4沉淀后的上清液20目过滤，消毒灭菌灌装成液体型复合酵素。
进一步的，步骤s3中包括加入所述母发酵剂5份。
进一步的，所述母发酵剂的浓度为1.2*106cfu/ml。
本发明还提供一种上述方法制备得到的酵素。
本发明的酵素具有在制备保健食品中的用途。
实施例2
本实施例提供一种具有醒酒功能的复合酵素的制备方法，其特征在于，包含以下具体步骤：
s1、将按重量份数计滇橄榄37份、葛花11份、马齿苋12份、柑橘皮6份、胡萝卜12份、苹果3份洗净，滇橄榄去核，马齿苋去皮，所有用具要确保消毒后使用；晾晒沥干表面水份，破碎成浆液；
s2、微生态制剂的制备：
制备母发酵剂：以产铜醋杆菌（acetobacterketogenum）、粟酒裂殖酵母（schizosaccharomycespombelindner）、鲁克斯假丝酵母（candidacrusei）按质量比1：2：1复合成母发酵剂；所述培养基以s1步骤获得的浆液为基础；
s3、将步骤s1获得的培养基以及s2所得母发酵剂，放入所述发酵罐中，密封，在34°c条件下，发酵2天，以100目筛过滤，得到滤液；
s4、将所述滤液密封，25°c，低温二次发酵3天；15°c条件下，再密封静置沉淀5天；
s5、取步骤s4沉淀后的上清液20目过滤，消毒灭菌灌装成液体型复合酵素。
进一步的，步骤s3中包括加入所述母发酵剂3份。
进一步的，所述母发酵剂的浓度为4.1*106cfu/ml。
本发明还提供一种上述方法制备得到的酵素。
本发明的酵素具有在制备保健食品中的用途。
实施例3
本实施例提供一种具有醒酒功能的复合酵素的制备方法，其特征在于，包含以下具体步骤：
s1、将按重量份数计滇橄榄55份、葛花19份、马齿苋24份、柑橘皮14份、胡萝卜18份、苹果7份洗净，滇橄榄去核，马齿苋去皮，所有用具要确保消毒后使用；晾晒沥干表面水份，破碎成浆液；
s2、微生态制剂的制备：
制备母发酵剂：以产铜醋杆菌（acetobacterketogenum）、粟酒裂殖酵母（schizosaccharomycespombelindner）、鲁克斯假丝酵母（candidacrusei）按质量比1：2：1复合成母发酵剂；所述培养基以s1步骤获得的浆液为基础；
s3、将步骤s1获得的培养基以及s2所得母发酵剂，放入所述发酵罐中，密封，在39°c条件下，发酵4天，以100目筛过滤，得到滤液；
s4、将所述滤液密封，28°c，低温二次发酵5天；20°c条件下，再密封静置沉淀10天；
s5、取步骤s4沉淀后的上清液20目过滤，消毒灭菌灌装成液体型复合酵素。
进一步的，步骤s3中包括加入所述母发酵剂8份。
进一步的，所述母发酵剂的浓度为3.4*105cfu/ml。
本发明还提供一种上述方法制备得到的酵素。
本发明的酵素具有在制备保健食品中的用途。
实施例4
本实施例提供一种具有醒酒功能的复合酵素的制备方法，其特征在于，包含以下具体步骤：
s1、将按重量份数计滇橄榄41份、葛花13份、马齿苋17份、柑橘皮9份、胡萝卜14份、苹果4份洗净，滇橄榄去核，马齿苋去皮，所有用具要确保消毒后使用；晾晒沥干表面水份，破碎成浆液；
s2、微生态制剂的制备：
制备母发酵剂：以产铜醋杆菌（acetobacterketogenum）、粟酒裂殖酵母（schizosaccharomycespombelindner）、鲁克斯假丝酵母（candidacrusei）按质量比1：2：1复合成母发酵剂；所述培养基以s1步骤获得的浆液为基础；
s3、将步骤s1获得的培养基以及s2所得母发酵剂，放入所述发酵罐中，密封，在36°c条件下，发酵3天，以100目筛过滤，得到滤液；
s4、将所述滤液密封，26°c，低温二次发酵4天；18°c条件下，再密封静置沉淀7天；
s5、取步骤s4沉淀后的上清液20目过滤，消毒灭菌灌装成液体型复合酵素。
进一步的，步骤s3中包括加入所述母发酵剂7份。
进一步的，所述母发酵剂的浓度为7.3*105cfu/ml。
本发明还提供一种上述方法制备得到的酵素。
本发明的酵素具有在制备保健食品中的用途。
实施例5
本实施例提供一种具有醒酒功能的复合酵素的制备方法，其特征在于，包含以下具体步骤：
s1、将按重量份数计滇橄榄49份、葛花18份、马齿苋21份、柑橘皮13份、胡萝卜15份、苹果6份洗净，滇橄榄去核，马齿苋去皮，所有用具要确保消毒后使用；晾晒沥干表面水份，破碎成浆液；
s2、微生态制剂的制备：
制备母发酵剂：以产铜醋杆菌（acetobacterketogenum）、粟酒裂殖酵母（schizosaccharomycespombelindner）、鲁克斯假丝酵母（candidacrusei）按质量比1：2：1复合成母发酵剂；所述培养基以s1步骤获得的浆液为基础；
s3、将步骤s1获得的培养基以及s2所得母发酵剂，放入所述发酵罐中，密封，在36°c条件下，发酵3天，以100目筛过滤，得到滤液；
s4、将所述滤液密封，26°c，低温二次发酵4天；18°c条件下，再密封静置沉淀7天；
s5、取步骤s4沉淀后的上清液20目过滤，消毒灭菌灌装成液体型复合酵素。
进一步的，步骤s3中包括加入所述母发酵剂4份。
进一步的，所述母发酵剂的浓度为3.6*106cfu/ml。
本发明还提供一种上述方法制备得到的酵素。
本发明的酵素具有在制备保健食品中的用途。
对比例1
本实施例提供一种具有醒酒功能的复合酵素的制备方法，其特征在于，包含以下具体步骤：
s1、将按重量份数计葛花16份、马齿苋15份、柑橘皮8份、胡萝卜16份、苹果5份洗净，滇橄榄去核，马齿苋去皮，所有用具要确保消毒后使用；晾晒沥干表面水份，破碎成浆液；
s2、微生态制剂的制备：
制备母发酵剂：以产铜醋杆菌（acetobacterketogenum）、粟酒裂殖酵母（schizosaccharomycespombelindner）、鲁克斯假丝酵母（candidacrusei）按质量比1：2：1复合成母发酵剂；所述培养基以s1步骤获得的浆液为基础；
s3、将步骤s1获得的培养基以及s2所得母发酵剂，放入所述发酵罐中，密封，在36°c条件下，发酵3天，以100目筛过滤，得到滤液；
s4、将所述滤液密封，26°c，低温二次发酵4天；18°c条件下，再密封静置沉淀7天；
s5、取步骤s4沉淀后的上清液20目过滤，消毒灭菌灌装成液体型复合酵素。
进一步的，步骤s3中包括加入所述母发酵剂5份。
进一步的，所述母发酵剂的浓度为1.2*106cfu/ml。
本发明还提供一种上述方法制备得到的酵素。
本发明的酵素具有在制备保健食品中的用途。
对比例2
本实施例提供一种具有醒酒功能的复合酵素的制备方法，其特征在于，包含以下具体步骤：
s1、将按重量份数计滇橄榄45份、葛花16份、马齿苋15份、胡萝卜16份、苹果5份洗净，滇橄榄去核，马齿苋去皮，所有用具要确保消毒后使用；晾晒沥干表面水份，破碎成浆液；
s2、微生态制剂的制备：
制备母发酵剂：以产铜醋杆菌（acetobacterketogenum）、粟酒裂殖酵母（schizosaccharomycespombelindner）、鲁克斯假丝酵母（candidacrusei）按质量比1：2：1复合成母发酵剂；所述培养基以s1步骤获得的浆液为基础；
s3、将步骤s1获得的培养基以及s2所得母发酵剂，放入所述发酵罐中，密封，在36°c条件下，发酵3天，以100目筛过滤，得到滤液；
s4、将所述滤液密封，26°c，低温二次发酵4天；18°c条件下，再密封静置沉淀7天；
s5、取步骤s4沉淀后的上清液20目过滤，消毒灭菌灌装成液体型复合酵素。
进一步的，步骤s3中包括加入所述母发酵剂5份。
进一步的，所述母发酵剂的浓度为1.2*106cfu/ml。
本发明还提供一种上述方法制备得到的酵素。
本发明的酵素具有在制备保健食品中的用途。
对比例3
本实施例提供一种具有醒酒功能的复合酵素的制备方法，其特征在于，包含以下具体步骤：
s1、将按重量份数计滇橄榄45份、葛花16份、马齿苋15份、柑橘皮8份、胡萝卜16份、苹果5份洗净，滇橄榄去核，马齿苋去皮，所有用具要确保消毒后使用；晾晒沥干表面水份，破碎成浆液；
s2、微生态制剂的制备：
制备母发酵剂：以粟酒裂殖酵母（schizosaccharomycespombelindner）、鲁克斯假丝酵母（candidacrusei）按质量比1：1复合成母发酵剂；所述培养基以s1步骤获得的浆液为基础；
s3、将步骤s1获得的培养基以及s2所得母发酵剂，放入所述发酵罐中，密封，在36°c条件下，发酵3天，以100目筛过滤，得到滤液；
s4、将所述滤液密封，26°c，低温二次发酵4天；18°c条件下，再密封静置沉淀7天；
s5、取步骤s4沉淀后的上清液20目过滤，消毒灭菌灌装成液体型复合酵素。
进一步的，步骤s3中包括加入所述母发酵剂5份。
进一步的，所述母发酵剂的浓度为1.2*106cfu/ml。
本发明还提供一种上述方法制备得到的酵素。
本发明的酵素具有在制备保健食品中的用途。
醒酒效果测试
1.对羟自由基(·oh)抑制率测定
采用脱氧核糖-铁体系法，测定实施例1-5以及对比例1-3分别对·oh的抑制率。
2.对乙醇脱氢酶体外激活率的测定
adh活性的测定如下：1.5ml32mmol/lph8.8的磷酸盐缓冲液，1.0ml27mmol/lnad+溶液，0.5ml体积分数11.5%乙醇溶液和0.1ml1mg/ml测试样品溶液混匀，25℃温育5min后，加入0.1mladh(0.64μg/ml)。空白组以0.1mlh2o代替0.1ml测试样品，其他操作相同。摇匀后立即于340nm波长下测定其吸光度，每隔10s读数一次，连续测定5min，取最初线性部分计算还原型辅酶ⅰ(nadh)的生成量。
adh活力/(u/ml)=δa×v×df/(6.22×0.1)
adh激活率/%=[(up－uc)/uc]×100
式中：δa为每分钟吸光度增加的值；v为反应总体积(ml)；df为稀释倍数；0.1为酶溶液的体积/ml；up和uc分别为测试样品组和空白组的adh活力；6.22为nadh在340nm的毫摩尔消光系数。
3.实验结果
实验结果如下表所示。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。需注意的是，本发明中所未详细描述的技术特征，均可以通过本领域任一现有技术实现。