一种增强抗病及免疫能力的观赏鱼饲料的制作方法

本发明涉及水产品饲料领域，具体涉及一种改善肠道健康和促进免疫功能的观赏鱼饲料。

背景技术：

观赏鱼是具有观赏价值的有鲜艳色彩或奇特形状的鱼类，随着人民消费水平的提升，观赏鱼已逐渐成为家庭消费的新时尚。目前观赏鱼饲料主要分为动物性饲料、植物性饲料、人工配合饲料三大类，人工配合饲料能有效的摒弃动植物饲料的诸多不足，依据观赏鱼对各种营养物质的需求和其生理、生长、消化吸收特点来人工配比、搭配，但目前市场上复合型的人工配合饲料常常有脂肪含量过高而导致鱼类脂质氧化损伤或者有对鱼类不利的添加剂。

因此，需要对现有鱼饲料进行改进，提高饲料蛋白含量，改善高脂肪对鱼类的氧化损伤，并提高鱼的机体免疫力和改善观赏鱼的肠道菌群来提高观赏鱼的抗炎，提高观赏鱼的成活率，提高饲料利用率，促进对营养物质的消化吸收。

技术实现要素：

本发明提供一种改善肠道健康和促进免疫功能的观赏鱼饲料，可改善高脂肪对鱼类的氧化损伤，并提高鱼的机体免疫力和改善观赏鱼的肠道菌群来提高观赏鱼的抗炎，提高观赏鱼的成活率，提高饲料利用率，促进对营养物质的消化吸收。

本发明的目的在于提供一种改善肠道健康和促进免疫功能的鱼饲料及其应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明一方面提供了一种改善肠道健康和促进免疫功能的鱼饲料，所述鱼饲料的原料组成为：按重量份数计，玉米粉30～40份、蝇蛆粉515份、黑曲霉酵母啤酒糟粉10～15份、微胶囊化油脂粉末20～25份、明胶4～6份、豆粕4～8份、复合预混料0.5～1份、ca(h2po4)21.4～1.6份和羧甲基纤维素4～6份；

所述微胶囊化油脂粉末的胶囊内含有棕榈油和亚麻籽油；

所述黑曲霉酵母啤酒糟粉的制备方法为：将黑曲霉和酵母的混合菌种接种于固体发酵培养基中进行发酵培养，发酵产物经干燥、粉碎得黑曲霉酵母啤酒糟粉。

优选的，上述鱼饲料由以下重量份数的原料混配而成：玉米粉40份、蝇蛆粉7份、黑曲霉酵母啤酒糟粉12份、微胶囊化油脂粉末25份、明胶6份、豆粕5份、复合预混料0.5份、ca(h2po4)21.5份和羧甲基纤维素5份。

优选的，所述棕榈油与亚麻籽油的质量比为32～35：21～24，所述微胶囊化油脂粉末以酪蛋白和糊精为囊壁材料。

优选的，所述微胶囊化油脂粉末的制备方法，具体包括以下步骤为：

微胶囊化油脂粉末的原料配比为：以重量份数计，棕榈油32～35份，亚麻籽油21～24份，酪蛋白10～15份和糊精30～35份，水分1.5～2份；

微胶囊化油脂粉末的制备：把酪蛋白和糊精进行混合并经过70～80℃加热溶解形成水相溶液，同时把棕榈油和亚麻籽油加热至70～80℃混合形成油相溶液，再将水相溶液和油相溶液混合形成料液，料液经胶体磨在20～40mpa下高压均质后，控制进风温度180～200℃，出风温度90～97℃对料液进行喷雾干燥，即得微胶囊化油脂粉末。

优选的，固体发酵培养基中接入15wt％～20wt％的混合菌种。

优选的，所述混合菌种中黑曲霉种子液和酵母种子液的体积比为0.8～1.2：0.8～1.2。

优选的，所述黑曲霉种子液的制备方法为：取黑曲霉成熟孢子，接种于pb液体培养基中，27～29℃，160～200rpm培养22～26h；

优选的，所述酵母种子液的制备方法为：将酵母菌体，接种于lb液体培养基中，27～29℃，160～200rpm培养5～7h。

优选的，以重量份数计，所述固体发酵培养基由啤酒糟85～90份、麸皮4～6份和酵母泥4～6份组成。

优选的，所述发酵培养的温度为28～30℃，发酵培养的时间为4～6天。

优选的，所述发酵产物经冷冻或热风干燥至恒重后，粉碎得黑曲霉酵母啤酒糟粉。

优选的，所述复合预混料为市售鱼用复合预混料。

优选的，本发明所述酵母为啤酒酵母、葡萄汁酵母和鲁氏酵母中的至少一种。

本发明另一方面提供了上述任一项所述的鱼饲料在制备改善鱼类肠道菌群结构的鱼饲料中应用。

优选的，所述改善鱼类肠道菌群结构包括提升芽孢杆菌和类芽孢杆菌的丰度、下调假交替单胞菌属和玫瑰变色菌的丰度。

本发明再一方面提供了上述任一项所述的鱼饲料在制备减缓高脂肪所带来的氧化应激的鱼饲料中应用。

优选的，所述减缓高脂肪所带来的氧化应激包括降低鱼体mda、gsh-px、tnf-α的含量。

本发明再一方面提供了上述任一项所述的鱼饲料在制备降低体鱼体中酶acp、akp和/或lzm活性的鱼饲料中应用。

优选的，本发明所述鱼饲料用于观赏鱼的饲养，所述观赏鱼包括金鱼、锦鲤鱼。

本发明的有益效果是：

本发明是以观赏鱼的生长特性和观赏效果来配制，使观赏鱼的成活率提高，改善了观赏鱼的光泽，减缓了高脂肪所带来的氧化应激，降低了体内肿瘤坏死因子tnf-α的表达和免疫相关酶acp、akp和lzm的活性，同时改善了肠道菌群的结构，提升有益菌芽孢杆菌和类芽孢杆菌的丰度并降低有害菌假交替单胞菌属和玫瑰变色菌的丰度；本发明饲料大大促进观赏鱼的成活率和健康程度，能有效提高养殖观赏鱼的经济效益。

附图说明

图1为不同饲料对观赏鱼在致病菌中的存活率，图中本饲料指实施例饲料。

图2为不同饲料对观赏鱼在致病菌中的存活率，图中本饲料指实施例饲料。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例·1

本实施例的改善肠道健康和促进免疫功能的观赏鱼饲料(金鱼)，包括下述重量份数的原料组成的：玉米粉40份、蝇蛆粉7份、黑曲霉酵母啤酒糟粉12份、微胶囊化油脂粉末(含棕榈油和亚麻籽油，以酪蛋白和糊精粉为壁材料)25份、明胶6份、豆粕5份、复合预混料(为市售鱼用复合预混料)0.5份、ca(h2po4)21.5份和羧甲基纤维素5份。

其中，黑曲霉酵母啤酒糟粉的制备方法，具体包括以下步骤为：

(1)固体发酵培养基的准备：发酵底物为啤酒糟、麸皮和酵母泥，以重量份数计，啤酒糟90份，麸皮5份，酵母泥5份，121℃高温蒸汽灭菌20min。

(2)黑曲霉和酵母菌的种子液制备：从平板上刮取黑曲霉成熟孢子，接种于100mlpb液体培养基中，28℃，180rpm培养24h，得黑曲霉种子液；从平板上挑取啤酒酵母菌体，接种于100mllb液体培养基中，28℃，180rpm培养6h，得啤酒酵母种子液。

所述pb液体培养基的配方为：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂的比例为45g：92g：45g：120g：8000ml，并在119℃的环境中灭菌30min，获得pb培养基。

(3)黑曲霉酵母啤酒糟粉的制备：在步骤(1)得到的固体发酵培养基中加入15wt％～20wt％混合菌种，其中混合菌种黑曲霉种子液和啤酒酵母种子液的体积比为1：1，在温度28～30℃条件下发酵培养6天，制得黑曲霉酵母啤酒糟发酵物，经冷冻或热风干燥至恒重，经粉碎制得黑曲霉酵母啤酒糟粉。

其中，微胶囊化油脂粉末的制备方法，具体包括以下步骤为：

(1)微胶囊化油脂粉末的原料配比为：以重量份数计，棕榈油33份，亚麻籽油22份，酪蛋白13.5份和糊精29.7份，水分1.8份；

(2)微胶囊化油脂粉末的制备：把酪蛋白和糊精进行混合并经过70～80℃加热溶解形成水相溶液，同时把棕榈油和亚麻籽油在油相罐加热至70～80℃混合形成油相溶液，再将水相溶液和油相溶液混合形成料液，料液经胶体磨在40mpa下高压均质后，控制进风温度190℃，出风温度97℃对料液进行喷雾干燥，即得微胶囊化油脂粉末。

制作方法：将所述饲料的各组成成分按上述重量份比例混配在一起并通过搅拌使其均匀混合，加入适量水做成饲料团，将饲料团放入造粒机中造粒，然后将颗粒筛选、装袋即可。

对于本发明饲料使观赏鱼的成活率提高的检验，以普通鱼饲料组(市售)和本饲料分别喂养100只观赏鱼(金鱼)，并且观赏鱼均暴露于致病菌嗜水气单胞菌，进行成活率检测。

成数率检测结果如图1所示，发现食用本发明饲料后，观赏鱼在致病菌(嗜水气单胞菌)中的存活率明显优于市售普通鱼饲料，且在第10天的存活率是普通饲料的291.7％。

为了进一步检测本发明饲料是否具有减缓高脂肪所带来的氧化应激、降低体内肿瘤坏死因子tnf-α的表达，以及本发明免疫饲料对相关酶acp、akp和lzm的活性影响。设置了以下实验，以普通油脂的鱼饲料和本发明饲料分别喂养15只观赏鱼(金鱼)，其他喂养条件均相同，在第八周进行脂质氧化指标中血清和肝脏mda以及肝脏中gsh-px基因相对表达量的测定、肝脏和脾脏中肿瘤坏死因子tnf-α表达的测定以及免疫相关酶acp、akp和lzm的活性测定。

经检测发现：喂食本发明饲料后，观赏鱼的血清mda的含量降低了6.7％、肝脏mda的含量降低了33.6％，并且gsh-px的相对表达量下调了46.1％；也发现了喂食本发明饲料后，观赏鱼的肝脏和脾脏中tnf-α表达量分别减少了35.2％和59.4％,；同时也发现喂食本饲料后，观赏鱼血清中的免疫相关酶acp、akp和lzm的活性分别降低了28.1％、33.0％和52.5％。

为了进一步检测本发明饲料是否具有改善鱼类肠道菌群结构的作用，设置了以下实验，以普通油脂的鱼饲料和本饲料分别喂养15只观赏鱼(金鱼)，并对第八周得到的两组鱼的肠内容物，并进一步检测其肠道菌群。

经检测发现：喂食本发明饲料后，相较于普通饲料组，观赏鱼的肠道菌群的结构得到了改善，有益菌芽孢杆菌和类芽孢杆菌的相对丰度分别提升了256.2％和162.5％，并且有害菌假交替单胞菌属和玫瑰变色菌的相对丰度分别下调了71.2％和81.5％。

实施例2

本实施例的改善肠道健康和促进免疫功能的观赏鱼饲料，包括下述重量份数的原料组成的：玉米粉40份、蝇蛆粉7份、黑曲霉酵母啤酒糟粉12份、微胶囊化油脂粉末(含棕榈油和亚麻籽油，以酪蛋白和糊精粉为壁材料)25份、明胶6份、豆粕5份、复合预混料0.5份、ca(h2po4)21.5份和羧甲基纤维素5份。

其中，黑曲霉酵母啤酒糟粉的制备方法，具体包括以下步骤为：

(1)固体发酵培养基的准备：发酵底物为啤酒糟、麸皮和酵母泥，以重量份数计，啤酒糟90份，麸皮5份，酵母泥5份，121℃高温蒸汽灭菌20min。

(2)黑曲霉和酵母菌的种子液制备：从平板上刮取黑曲霉成熟孢子，接种于100mlpb液体培养基中，28℃，180rpm培养24h，得黑曲霉种子液；从平板上挑取葡萄汁酵母菌体，接种于100mllb液体培养基中，28℃，180rpm培养6h，得葡萄汁酵母种子液。

(3)黑曲霉酵母啤酒糟粉的制备：在步骤(1)得到的固体发酵培养基中加入15wt％～20wt％混合菌种，其中混合菌种黑曲霉种子液和葡萄汁酵母种子液的体积比为1：1，在温度28～30℃条件下发酵培养6天，制得黑曲霉酵母啤酒糟发酵物，经冷冻或热风干燥至恒重，经粉碎制得黑曲霉酵母啤酒糟粉。

其中，微胶囊化油脂粉末的制备方法，具体包括以下步骤为：

(1)微胶囊化油脂粉末的原料配比为：以重量份数计，棕榈油33份，亚麻籽油22份，酪蛋白12.5份和糊精30.5份，水分2份；

(2)微胶囊化油脂粉末的制备：把酪蛋白和糊精进行混合并经过70～80℃加热溶解形成水相溶液，同时把棕榈油和亚麻籽油在油相罐加热至70～80℃混合形成油相溶液，再将水相溶液和油相溶液混合形成料液，料液经胶体磨在40mpa下高压均质后，控制进风温度180℃，出风温度95℃对料液进行喷雾干燥，即得微胶囊化油脂粉末。

制作方法：将所述饲料的各组成成分按上述重量份比例混配在一起并通过搅拌使其均匀混合，加入适量水做成饲料团，将饲料团放入造粒机中造粒，然后将颗粒筛选、装袋即可。

对于本发明饲料使观赏鱼的成活率提高的检验，以普通鱼饲料组(市售)和本饲料分别喂养100只观赏鱼(金鱼)，并且观赏鱼均暴露于致病菌嗜水气单胞菌，进行成活率检测。

成活率检测结果如图2所示，发现食用本发明饲料后，观赏鱼在致病菌中的存活率明显优于普通鱼饲料，且在第十天的存活率是普通饲料的287.5％。

为了进一步检测本发明饲料是否具有减缓高脂肪所带来的氧化应激、降低体内肿瘤坏死因子tnf-α的表达，以及本发明免疫饲料对相关酶acp、akp和lzm的活性影响。设置了以下实验。以普通油脂的鱼饲料和本饲料分别喂养15只观赏鱼(金鱼)，其他喂养条件均相同，并在第八周进行脂质氧化指标中血清和肝脏mda以及肝脏中gsh-px基因相对表达量的测定、肝脏和脾脏中肿瘤坏死因子tnf-α表达的测定以及免疫相关酶acp、akp和lzm的活性测定。

经检测发现：喂食本饲料后，观赏鱼的血清mda的含量降低了7.2％、肝脏mda的含量降低了32.7％，并且gsh-px的相对表达量下调了48.3％；也发现了喂食本饲料后，观赏鱼的肝脏和脾脏中tnf-α表达量分别减少了33.2％和55.8％,；同时也发现喂食本饲料后，观赏鱼血清中的免疫相关酶acp、akp和lzm的活性分别降低了30.4％、33.5％和50.6％。

为了进一步检测本发明饲料是否具有改善鱼类肠道菌群结构的作用，设置了以下实验，以普通油脂的鱼饲料和本饲料分别喂养15只观赏鱼(金鱼)，并对第八周得到的两组鱼的肠内容物，并进一步检测其肠道菌群。

经检测发现：喂食本饲料后，相较于普通饲料组，观赏鱼的肠道菌群的结构得到了改善，有益菌芽孢杆菌和类芽孢杆菌的相对丰度分别提升了248.6％和148.2％，并且有害菌假交替单胞菌属和玫瑰变色菌的相对丰度分别下调了74.1％和79.4％。

综上所述，本发明是以观赏鱼的生长特性和观赏效果来配制，使观赏鱼的成活率提高，改善了观赏鱼的光泽，减缓了高脂肪所带来的氧化应激，降低了体内肿瘤坏死因子tnf-α的表达和免疫相关酶acp、akp和lzm的活性，同时改善了肠道菌群的结构，提升有益菌芽孢杆菌和类芽孢杆菌的丰度并降低有害菌假交替单胞菌属和玫瑰变色菌的丰度；本发明营养成分均匀，大大促进观赏鱼的成活率和健康程度，能有效提高养殖观赏鱼的经济效益。

本发明提供了一种改善肠道健康和促进免疫功能的观赏鱼饲料，可改善高脂肪对鱼类的氧化损伤，并提高鱼的机体免疫力和改善观赏鱼的肠道菌群来提高观赏鱼的抗炎，提高观赏鱼的成活率，提高饲料利用率，促进对营养物质的消化吸收。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。