本发明属于饲料添加剂
技术领域：
，具体涉及到一种提高日本鳗生长及抗病能力的饲料添加剂及其制备方法。
背景技术：
：脂肪酶又称三酰甘油酰基水解酶，是一类分解和合成脂肪的酶，它不仅可以催化酯水解反应还可以催化酯合成反应和转酯反应。脂肪酶属于一种消化酶，外源脂肪需要经过脂肪酶消化分解为游离脂肪酸、甘油和甘油单酯后才能被动物所利用，体内脂肪的储藏和动用也少不了脂肪酶，脂肪酶还参与细胞内脂类代谢。近年来，脂肪酶因其独特的生理功能与作用而被大量用在畜禽饲料中。而在水产养殖动物，尤其是目前我国高价值鱼种，比如日本鳗，欧洲鳗等的养殖中，关于脂肪酶的研究和应用还鲜有报道，这主要是由于这些养殖鱼类在消化系统发育过程中，缺少胃的分化，其消化道多为偏中性的环境，这与畜禽有着较大的差别，致使其适合其使用的脂肪酶的研究和开发比畜禽要复杂得多。脂肪酶可以促使脂肪释放出脂肪酸,同时补充部分必需脂肪酸等营养物质，改善肉质，降低鱼类脂肪肝的风险，保障健康，提高幼体成活率和生产性能。除此之外，水产饲料的加工工艺也与畜禽饲料的加工工艺有着非常大的差别，这也要求有适合于水产饲料加工工艺的脂肪酶。解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)为需氧革兰阳性菌，在自然界分布广泛，对人畜无毒害，不污染环境。其代谢产物丰富、有较强的抗逆性、生长快、稳定性好、产生抑菌物质；破坏细菌的生物被膜；调节动物免疫力。在动物生产中越来越受到重视，在水生动物养殖中对ba的研究稍多，发现其可显著增强鱼类抗病能力，提高存活率。selim将ba浓度为1×106cfu/g(g3组)和1×104cfu/g(g2组)添加到罗非鱼饲料中，结果饲喂15d后g3组的鱼血清杀菌能力显著提高、溶菌活性及no分析结果也明显高于g2组，30d后，g3组和g2组的鱼该指标增高更多，在试验末期有活力的吞噬细胞百分率明显下降，g1、g2、g3组鱼肾脏il-1和tnf-α的mrna水平依次增高，用鲁克尔耶氏菌(y.ruckeri)或产气荚膜梭菌攻毒后饲喂解淀粉芽孢杆菌的鱼存活率更高，说明ba可增强尼罗罗非鱼的免疫和抗病能力。das等的试验发现ba在体外可产生抗迟缓爱德华菌(e.tarda)、嗜水气单胞菌(aeromonashydrophila)、副溶血弧菌(vibrioparahaemolyticus)和哈维弧菌(v.hatveyi)的抑菌圈。在试验确定ba对卡特拉鱼比的安全性后，以1×109、1×108、1×107cfu/g的浓度将ba添加到饲料中，饲喂体重为25～30g的卡特拉鱼比4周和8周后检测，发现解淀粉芽孢杆菌可明显提高试验鱼的超氧阴离子和no的产量、提高髓过氧化物酶和总蛋白浓度、溶菌酶活性，提高其抵抗细菌的能力，浓度为1×109cfu/g时效果最明显。技术实现要素：本发明的目的是提供一种提高日本鳗生长及抗病能力的饲料添加剂，显著促进日本鳗的健康生长发育，有效提高机体免疫功能，且无毒副作用。本发明的第二个目的是提供一种提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂的制备方法。为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂，所述的饲料添加剂采用产自黑曲霉发酵生产的脂肪酶。由黑曲霉发酵生产脂肪酶活性高，达到10万u/g，具有极好的水解脂肪生成不饱和脂肪酸，这非常适合日本鳗等对不饱和脂肪酸需求含量较高的鱼类。添加该脂肪酶能够弥补内源性脂肪酶的不足，提高鱼类对饲料脂肪的消化率。所述的解淀粉芽孢杆菌，活菌数达到1.0*108cfu/g，对人畜无毒害，不污染环境。其代谢产物丰富、有较强的抗逆性、生长快、稳定性好、产生抑菌物质；破坏细菌的生物被膜；调节动物免疫力。进一步地，上述添加剂本发明所述的饲料添加剂还包括乳化剂、维生素e、氨基酸和载体，按重量百分比计，各组分含量为：脂肪酶2％-5％，乳化剂10％，解淀粉芽孢杆菌10％-20％，维生素e510％，赖氨酸5％，精氨酸10％，其余为载体。进一步地，所述乳化剂为蔗糖脂肪酸酯、大豆磷脂中的一种。添加乳化剂可以为脂肪酶作用的发挥创造良好的条件。进一步地，所述的维生素e5为一种脂溶性维生素，不仅具有促进饲料中脂肪消化吸收的作用，而且还具有较好的抗氧化作用，能够防止饲料中脂肪氧化的发生，从而保证了脂肪的品质和稳定性。本发明中，赖氨酸对鱼类的生长起到了重要作用。它是肉碱生产的一个重要组成部分。肉碱负责将一些不饱和脂肪酸转化为能量，还有助于降低胆固醇水平。还能和其他营养一起形成胶原蛋白。精氨酸能增强鱼鳃组织物理屏障功能，提高吞噬细胞吞噬能力和杀菌活性，提高抗菌物质杀菌活性和免疫球蛋白含量，以增强鱼类非特异性和特异性免疫功能。同时，精氨酸具有抗炎作用，能保护鱼体免受免疫应答的自我损伤。进一步地，所述的载体为可溶性淀粉，因其自身不易被氧化，也不与本发明中其它物质发生反应，有利于维护本发明产品在运输、贮存中的稳定性。乳化剂和载体的加入有助于脂肪酶和解淀粉芽孢杆菌的分散均一性和稳定性。一种饲料添加剂的制备方法，分别取脂肪酶、解淀粉芽孢杆菌、乳化剂、维生素e、赖氨酸、精氨酸及载体充分混合并冻干制成粉状物，即得到本发明所述的饲料添加剂。所述饲料添加剂在饲料中的质量添加比例为1.0-2.0％。本发明的有益效果在于：本发明的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂中，产自黑曲霉的脂肪酶，活力达到10万u/g,生产成本低，具有极好的水解脂肪生成不饱和脂肪酸，这非常适合日本鳗等对不饱和脂肪酸需求含量较高的鱼类。添加该脂肪酶能够弥补内源性脂肪酶的不足，提高鱼类对饲料脂肪的消化率。生物利用度高，无药物残留，无毒副作用，对水体环境无污染，使用方便，安全可靠。解淀粉芽孢杆菌对人畜无毒害，不污染环境。其代谢产物丰富、有较强的抗逆性、生长快、稳定性好、产生抑菌物质；破坏细菌的生物被膜；调节日本鳗免疫力，增强鳗鱼对致病菌的抵抗能力，从而提升存活率。具体实施方式下面结合具体实施方式对本发明作进一步说明。以下实施例中所用的试剂均为市购产品。本发明利用解淀粉芽孢杆菌的共性，而并非某一个特殊菌株的性质，解淀粉芽孢杆菌可采用中国典型培养物保藏中心保藏的菌株，例如cctccno:m2013375解淀粉芽孢杆菌等，或各个公司销售的菌株，例如北京科为博生物科技有限公司。产自黑曲霉的脂肪酶具有以下共性：活力达到10万u/g,具有极好的水解脂肪生成不饱和脂肪酸，能够弥补内源性脂肪酶的不足，提高鱼类对饲料脂肪的消化率。因此，本发明不对用于产生脂肪酶的黑曲霉菌株进行限定，任意黑曲霉生产的脂肪酶均可用于本发明。实施例1本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂，饲料添加剂由以下成分组成：产自黑曲霉(济宁诺维信生物工程有限公司)的脂肪酶、解淀粉芽孢杆菌(cctccno:m2013375)、蔗糖脂肪酸酯、维生素e5，氨基酸，载体。本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂的制备方法：按质量百分数100％计，分别取脂肪酶2％，蔗糖脂肪酸酯10％，解淀粉芽孢杆菌10％，维生素e510％，赖氨酸5％，精氨酸10％，可溶性淀粉53％，充分混合并冻干制成粉状物，即得到本发明所述的饲料添加剂。本实施例的的饲料添加剂在制备提高日本鳗生长和抗病性能的饲料的应用，所述饲料添加剂在饲料中的质量添加比例为1.0％。实施例2本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂，饲料添加剂由以下成分组成：产自黑曲霉(cctccno：m206021)的脂肪酶、解淀粉芽孢杆菌(cctccno:m2013375)、蔗糖脂肪酸酯、维生素e5，氨基酸，载体。本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂的制备方法：按质量百分数100％计，分别取脂肪酶2％，蔗糖脂肪酸酯10％，解淀粉芽孢杆菌10％，维生素e510％，赖氨酸5％，精氨酸10％，可溶性淀粉53％，充分混合并冻干制成粉状物，即得到本发明所述的饲料添加剂。本实施例的的饲料添加剂在制备提高日本鳗生长和抗病性能的饲料的应用，所述饲料添加剂在饲料中的质量添加比例为2.0％。实施例3本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂，饲料添加剂由以下成分组成：产自黑曲霉(济宁诺维信生物工程有限公司)的脂肪酶、解淀粉芽孢杆菌(cctccno:m2013375)、蔗糖脂肪酸酯、维生素e5，氨基酸，载体。本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂的制备方法：按质量百分数100％计，分别取脂肪酶5％，蔗糖脂肪酸酯10％，解淀粉芽孢杆菌20％，维生素e510％，赖氨酸5％，精氨酸10％，可溶性淀粉40％，充分混合并冻干制成粉状物，即得到本发明所述的饲料添加剂。本实施例的的饲料添加剂在制备提高日本鳗生长和抗病性能的饲料的应用，所述饲料添加剂在饲料中的质量添加比例为2.0％。实施例4本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂，饲料添加剂由以下成分组成：产自黑曲霉(济宁诺维信生物工程有限公司)的脂肪酶、解淀粉芽孢杆菌(cctccno:m2014200)、蔗糖脂肪酸酯、维生素e5，氨基酸，载体。本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂的制备方法：按质量百分数100％计，分别取脂肪酶酶5％，蔗糖脂肪酸酯10％，解淀粉芽孢杆菌20％，维生素e510％，赖氨酸5％，精氨酸10％，可溶性淀粉40％，充分混合并冻干制成粉状物，即得到本发明所述的饲料添加剂。本实施例的的饲料添加剂在制备提高日本鳗生长和抗病性能的饲料的应用，所述饲料添加剂在饲料中的质量添加比例为1.0％。实施例5本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂，饲料添加剂由以下成分组成：产自黑曲霉(济宁诺维信生物工程有限公司)的脂肪酶、解淀粉芽孢杆菌(北京雷力集团技术研发中心)、蔗糖脂肪酸酯、维生素e5，氨基酸，载体。本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂的制备方法：按质量百分数100％计，分别取脂肪酶2％，蔗糖脂肪酸酯10％，解淀粉芽孢杆菌20％，维生素e510％，赖氨酸5％，精氨酸10％，可溶性淀粉43％。充分混合并冻干制成粉状物，即得到本发明所述的饲料添加剂。本实施例的的饲料添加剂在制备提高日本鳗生长和抗病性能的饲料的应用，所述饲料添加剂在饲料中的质量添加比例为1.0％。实施例6本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂，饲料添加剂由以下成分组成：产自黑曲霉(济宁诺维信生物工程有限公司)的脂肪酶、解淀粉芽孢杆菌(cgmccno.9649)、大豆磷脂、维生素e5，氨基酸，载体。本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂的制备方法：按质量百分数100％计，分别取脂肪酶5％，大豆磷脂10％，解淀粉芽孢杆菌10％，维生素e510％，赖氨酸5％，精氨酸10％，可溶性淀粉50％。充分混合并冻干制成粉状物，即得到本发明所述的饲料添加剂。本实施例的的饲料添加剂在制备提高日本鳗生长和抗病性能的饲料的应用，所述饲料添加剂在饲料中的质量添加比例为1.0％。实施例7本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂，饲料添加剂由以下成分组成：产自黑曲霉(济宁诺维信生物工程有限公司)的脂肪酶、解淀粉芽孢杆菌(cctccno:m2013375)、大豆磷脂、维生素e5，氨基酸，载体。本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂的制备方法：按质量百分数100％计，分别取脂肪酶2％，大豆磷脂10％，解淀粉芽孢杆菌20％，维生素e510％，赖氨酸5％，精氨酸10％，可溶性淀粉43％。充分混合并冻干制成粉状物，即得到本发明所述的饲料添加剂。本实施例的的饲料添加剂在制备提高日本鳗生长和抗病性能的饲料的应用，所述饲料添加剂在饲料中的质量添加比例为2.0％。实施例8本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂，饲料添加剂由以下成分组成：产自黑曲霉(济宁诺维信生物工程有限公司)的脂肪酶、解淀粉芽孢杆菌(cctccno:m2013375)、大豆磷脂、维生素e5，氨基酸，载体。本实施例的提高日本鳗生长和抗病性能的饲料添加剂的制备方法：按质量百分数100％计，分别取脂肪酶2％，大豆磷脂10％，解淀粉芽孢杆菌20％，维生素e510％，赖氨酸5％，可溶性淀粉53％。充分混合并冻干制成粉状物，即得到本发明所述的饲料添加剂。本实施例的的饲料添加剂在制备提高日本鳗生长和抗病性能的饲料的应用，所述饲料添加剂在饲料中的质量添加比例为2.0％。以日本鳗为实验对象，检测实施例1-8所得的饲料添加剂的性能，具体如下：1)供试鳗鱼：浙江省嘉兴海宁市马家坝河畔养殖基地日本鳗，挑选700尾，分为7组。每组700尾，且均重相差不大(每尾约20克)。2)使用方法：空白组使用福建天马鳗鱼饲料，按空白组方法进行每天喂食一次(早上7:00，下午17:00)，每天喂食量为鱼体重的4％；实验例也按对照组方法进行喂食，其中实验例1是在饲料中按质量比例添加1.0％的实施例1制备的饲料添加剂；实验例2是在渔场自制饲料中按质量比例添加2.0％的实施例2制备的饲料添加剂；实验例3是在渔场自制饲料中按质量比例添加2.0％的实施例3制备的饲料添加剂；实验例4是在渔场自制饲料中按质量比例添加1.0％的实施例4制备的饲料添加剂；实验例5是在渔场自制饲料中按质量比例添加1.0％的实施例5制备的饲料添加剂；实验例6是在渔场自制饲料中按质量比例添加1.0％的实施例6制备的饲料添加剂；实验例7是在渔场自制饲料中按质量比例添加2.0％的实施例7制备的饲料添加剂；实验例8是在渔场自制饲料中按质量比例添加2.0％的实施例8制备的饲料添加剂；3)试验时间：56天。生长性能试验结果如表1所示：表1试验结果统计表空白例实验例1实验例2实验例3实验例4实验例5实验例6实验例7实验例8初重(g)20.1±0.220.4±0.120.4±0.419.8±0.219.4±0.220.5±0.120.7±0.220.3±0.320.6±0.4终重(g)35.5±2.4c36.5±1.1a37.8±1.8b39.4±1.4a36.5±1.1a37.5±1.2a38.5±1.1a38.1±1.4a38.0±1.4a增重(g)15.4±1.6c16.1±1.5c17.0±1.5b19.3±1.1a17.1±1.3a17.0±1.3a18.8±1.2a17.8±1.5a17.4±1.2a嗜水气单胞菌(atccstrain7966t)感染后的存活率：分别从空白例和实验例中随机选取30条日本鳗鱼，注射嗜水气单胞菌(atccstrain7966t)，每尾鱼腹腔注射100μl，浓度为1×106cells/ml，继续饲养，观察和记录实验对象的存活率，如表2所示。表2，各组日本鳗经嗜水气单胞菌(atccstrain7966t)感染后的存活率组别24小时后存活率72小时后存活率10天后存活率空白例60％33.3％10％实验例173.3％60％53.3％实验例286.6％60％56.6％实验例393.3％86.6％73.3％实验例480％73.3％63.3％实验例590％73.3％56.6％实验例686.6％73.3％66.7％实验例786.6％80％76.7％实验例890％73.3％56.6％本次试验结果经统计学分析发现：实施例8中由于没有添加精氨酸，整体效果与实施例6存在显著性差异。在本发明，缺少任意一种组分，均会对效果产生显著性差异，本发明中各个组分相互协效，提高日本鳗生长和抗病性能。实验例3、实验例6、实验例7中日本鳗增重率相比空白组有明显的提升，实验鱼的体型正常。实验例3和实验例7与空白组对比，日本鳗的存活率提高的最为显著。综合生长性能和抗病性能，说明在实验例3饲料添加剂制备方法和添加质量分数最为合理，能够显著提高日本鳗生长和抗病性能。当前第1页12