本发明属于发酵饲料
技术领域：
，具体涉及一种用于提高猪肉品质的发酵饲料及其制备方法和应用。
背景技术：
：我国是猪肉生产大国，猪肉产量占世界总产量的50%左右。同时猪是我国人民膳食结构中肉食品的主要来源之一，猪肉消费在肉类消费中占绝对主导地位，其肉品质的好坏影响着我们每一个人的健康。猪肉品质的评价指标主要有猪肉肉色评分、大理石花纹评分、屠宰后ph、剪切力、滴水损失；肌肉肌内脂肪水平、肌肉脂肪酸构成及含量等。随着生活水平的提高，人们对猪肉品质的要求日益提高，猪肉品质改善措施也随之增加。相对于其他调控措施，营养调控具有易执行和见效快的优点，目前主要集中在饲粮水平、发酵饲料、功能性添加剂的改进。近年来，发酵饲料已成为饲料产业发展的新方向。饲喂发酵饲料增加肠道内乳酸菌及各种风味物质的含量，这些风味物质经肠道吸收进入门脉循环在肌肉内被沉积和利用，提升了肌肉的品质和风味。已有研究表明，果渣、桑粉、中草药等饲料经发酵后可通过提高猪肉中某些脂肪酸和风味氨基酸含量，改善肉品质。但是果渣、桑粉等饲料原料来源不稳定、成分不明确、且大多是地方性原料，而玉米、豆粕作为主要的饲料原料，其性质稳定、来源广泛，易于发酵，便于推广。虽然近几年发酵饲料产品层出不穷，但是其生产工艺存在较大差异，品质良莠不齐。在使用发酵饲料提高育肥猪肉品质的相关报道和专利方面，cn105767547a所公开的一种育肥猪健康环保型发酵配合饲料的制备方法中，发酵饲料的制备需两次发酵，过程繁琐，不利于大规模进行。cn106615806a所公开的一种改善猪肉品质的生物发酵饲料及其生产方法和应用中，育肥猪生长指标与本发明结果相似，但是发酵饲料中豆粕用量为75-80%，成本相对较高。cn108185182a所公开一种能改善猪肉品质的tmpf生物发酵配合饲料的制备中，对于肉品质的衡量仅限于剪切力，难以证明其对肉品质其他指标的整体影响。因此，集约简便的生产工艺，科学稳定的产品指标及明确有效的使用方法是发酵饲料开发的方向。技术实现要素：为了克服现有技术的不足，本发明要解决的技术问题是提供一种用于提高猪肉品质的发酵饲料及其制备方法和应用。一种用于提高猪肉品质的发酵饲料制备方法，原料经枯草芽孢杆菌zjuaf-3和戊糖片球菌zjuaf-4发酵后，含有丰富益生菌、有机酸以及不饱和脂肪酸，其中戊糖片球菌（pediococcuspentosaceus）zjuaf-4，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年11月21日，保藏编号为cgmccno：16767；枯草芽孢杆菌（bacillussubtilissubsp.subtilis）zjuaf-3为现有菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2016年8月8号，保藏编号为cgmccno：12825，首次公开在cn106167782a（高效降解豆粕抗原蛋白的芽孢杆菌及其发酵豆粕的方法）；步骤如下：1）配制混合发酵液枯草芽孢杆菌发酵液和戊糖片球菌发酵液混合得到混合发酵液，其中枯草芽孢杆菌活菌数应达到1.0×108~1.0×1010cfu/ml，戊糖片球菌数应达到1.0×109~1.0×1010cfu/ml。2）发酵饲料的制备发酵原料按质量百分比预混合，包括玉米15%～20%，豆粕15%～20%，麸皮40%～50%，大豆皮15%～20%，随后添加步骤1）配制的混合发酵液，添加量为总体系的10%，并接入适量温水，使总水分含量占发酵体系总质量的35%～40%，搅拌混匀，得到发酵体系，堆式发酵24～48h，待饲料ph降至4.8左右时得到发酵饲料。所述的步骤1）配制混合发酵液：包括（1）发酵培养基的配制和（2）菌种活化及接种；（1）发酵培养基的配制发酵培养基的配制，其中芽孢杆菌活化培养基含有酵母粉0.5-2%、葡萄糖0.5-2%、蛋白胨1-5%、磷酸二氢钾0.1-0.5%、硫酸镁0.05-0.1%；戊糖片球菌活化培养基含有酵母粉0.5-2%、葡萄糖0.5-2%、番茄粉0.5-1%、磷酸二氢钾0.1-0.5%；（2）发酵菌液的制备枯草芽孢杆菌经活化和纯化培养后，挑单菌落于lb培养基，37℃，150rpm，培养12h，待od值达到1.0左右时，按0.1%接种入发酵培养基，于37℃通气培养24h，即得到枯草芽孢杆菌发酵液，最优的枯草芽孢杆菌活菌数应达到1.0×108~1.0×1010cfu/ml；戊糖片球菌经活化和纯化培养后，挑单菌落于mrs培养基，静置培养24h，将活化后的种子液按0.1%接入发酵培养基，静置培养24h，每隔12h轻微搅拌一次，使物料均匀，使菌浓度达到1.0×109~1.0×1010cfu/ml，随后将上述活化好的发酵液混合，接入适量水，混合均匀，得到混合发酵液。一种根据所述的发酵饲料制备方法得到的发酵饲料，含有：枯草芽孢杆菌活菌数≥1.2×109cfu/g，戊糖片球菌活菌数≥2.3×109cfu/g，甲酸含量≥45.12mg/100g，乙酸含量≥98.79mg/100g，丙酸含量≥1.22mg/100g，乳酸含量≥138.45mmol/kg，丁酸≥2.98mg/100g，油酸提高3.98%，亚油酸提高7.15%，亚麻酸提高0.29%。一种所述的发酵饲料的应用，用于提高育肥猪生长性能和肉品质，具体如下：将育肥猪日粮中蛋白原料以发酵饲料进行等氮替代，替代量占育肥猪日粮总重的2％～10％。所述的应用，发酵饲料的含水量为35%～40%。所述的应用，育肥猪日粮中添加发酵饲料，增加猪肉中不饱和脂肪酸含量，增加猪肉风味。本发明以育肥猪日粮配方参照美国nrc（2012）标准，根据能量、蛋白相近原则，将发酵饲料按比例添加育肥猪日粮中，混合均匀，低温（65℃）制粒。本发明优点在于：本发明可以在降低育肥猪增重耗料比的同时，提高肌肉中不饱和脂肪酸含量，显著提高眼肌面积、肉色、肌内脂肪、多汁性等肉质指标；本发明的改善猪肉品质的生物发酵饲料可等氮替代猪饲料中2％-10％的蛋白原料。具体实施方式以下结合实施例对本发明做进一步的阐述。实施例1一种用于提高育肥猪肉品质的发酵饲料，制备方法如下：（1）发酵培养基的配制发酵培养基的配制，其中芽孢杆菌活化培养基含有酵母粉0.5-2%、葡萄糖0.5-2%、蛋白胨1-5%、磷酸二氢钾0.1-0.5%、硫酸镁0.05-0.1%；戊糖片球菌活化培养基含有酵母粉0.5-2%、葡萄糖0.5-2%、番茄粉0.5-1%、磷酸二氢钾0.1-0.5%；（2）发酵菌液的制备枯草芽孢杆菌经活化和纯化培养后，挑单菌落于lb培养基，37℃，150rpm，培养12h，待od值达到1.0左右时，按0.1%接种入发酵培养基，于37℃通气培养24h，即得到枯草芽孢杆菌发酵液，最优的枯草芽孢杆菌活菌数应达到1.0×108~1.0×1010cfu/ml；戊糖片球菌经活化和纯化培养后，挑单菌落于mrs培养基，静置培养24h，将活化后的种子液按0.1%接入发酵培养基，静置培养24h，每隔12h轻微搅拌一次，使物料均匀，使菌浓度达到1.0×109~1.0×1010cfu/ml，随后将上述活化好的发酵液混合，接入适量水，混合均匀，得到混合发酵液；（3）发酵饲料的制备发酵原料按质量百分比预混合，包括玉米15%～20%，豆粕15%～20%，麸皮40%～50%，大豆皮15%～20%，随后添加步骤（2）配制的混合发酵液，添加量为总体系10%，并接入适量温水，使总水分含量占发酵体系总质量的35%～40%，搅拌混匀，得到发酵体系；将上述发酵体系按厚度1.0米左右，起始温度25℃，堆料发酵24～48h，每隔5-8小时翻料一次，待槽内饲料ph降至4.8左右时得到发酵饲料。表1.饲料发酵前后的营养成分变化指标单位未发酵饲料发酵饲料水分%38.7537.23粗蛋白%18.3621.44ph-6.504.80甲酸mg/100g—45.12乙酸mg/100g—98.79丙酸mg/100g—1.22丁酸mg/100g—2.98乳酸mmol/kg—138.45枯草芽孢杆菌cfu/g＜1.2×1051.2×109戊糖片球菌cfu/g＜1.2×1042.3×109由表1可知，与未发酵饲料相比，发酵后饲料粗蛋白提高了3.08%；发酵24h后，甲酸含量积累到45.12mg/100g，乙酸含量积累到98.79mg/100g，丙酸含量积累到1.22mg/100g，乳酸含量积累到138.45mmol/kg,丁酸含量积累到2.98mg/100g，饲料ph达到4.80；枯草芽孢杆菌和戊糖片球菌的数量分别达到1.2×109和2.3×109cfu/g。综上，所得到的发酵饲料有机酸、益生菌含量丰富，饲料适口性增加。表2.饲料发酵前后的脂肪酸含量的变化指标单位未发酵饲料发酵饲料软脂酸%1.821.61硬脂酸%17.9816.16油酸%20.0524.03亚油酸%40.1947.34亚麻酸%2.713.00从上表中可以看出，饲料发酵后不饱和脂肪酸增加，油酸、亚油酸、亚麻酸分别提高了3.98%、7.15%、0.29%，脂肪酸组成改善。本实施例的特点在于用混合发酵培养液发酵饲料原料，富含益生菌和有机酸，改善了饲料原料脂肪酸组成，增加饲料的营养价值，以及饲料的适口性。实施例2对照组育肥猪日粮配方为：67.11％的玉米、4％的麸皮、8％的米糠、6％的米糠粕、10.94%豆粕、0.87%碳酸氢钙、0.35%食盐、0.73%的石粉、2%的预混料，于搅拌机内，充分混匀。5%发酵饲料育肥猪日粮的配方为：69.62％的玉米、3.5％的麸皮、6％的米糠粕、11.90%豆粕、5%发酵饲料、0.87%碳酸氢钙、0.35%食盐、0.76%的石粉、2%的预混料，于搅拌机内，充分混匀，即得到发酵饲料含量为5％的育肥猪饲料。10%发酵饲料育肥猪日粮的配方为：71.42％的玉米、3.5％的麸皮、11.08%豆粕、10%发酵饲料、0.87%碳酸氢钙、0.35%食盐、0.78%的石粉、2%的预混料，于搅拌机内，充分混匀，即得到发酵饲料含量为10％的育肥猪饲料。实施例3对照组育肥猪日粮配方为：67.11％的玉米、4％的麸皮、8％的米糠、6％的米糠粕、10.94%豆粕、0.87%碳酸氢钙、0.35%食盐、0.73%的石粉、2%的预混料，于搅拌机内，充分混匀。2%发酵饲料育肥猪日粮的配方为：72.72％的玉米、3.50％的麸皮、6％的米糠粕、11.80%豆粕、2%发酵饲料、0.87%碳酸氢钙、0.35%食盐、0.76%的石粉、2%的预混料，于搅拌机内，充分混匀，即得到发酵饲料含量为2％的育肥猪饲料。4%发酵饲料育肥猪日粮的配方为：70.42％的玉米、3.50％的麸皮、6％的米糠粕、12.10%豆粕、4%发酵饲料、0.87%碳酸氢钙、0.35%食盐、0.76%的石粉、2%的预混料，于搅拌机内，充分混匀，即得到发酵饲料含量为4％的育肥猪饲料。8%发酵饲料育肥猪日粮的配方为：72.60％的玉米、3.50％的麸皮、11.90%豆粕、8%发酵饲料、0.87%碳酸氢钙、0.35%食盐、0.78%的石粉、2%的预混料，于搅拌机内，充分混匀，即得到发酵饲料含量为8％的育肥猪饲料。应用试验1验证实施例2对杜长大三元育肥猪应用试验试验方法：对照组、5%发酵饲料组、10%发酵饲料组各取200头杜长大三元育肥猪进行试验。预饲一周后，开始正式饲喂，饲喂期39天。试验猪以栏为单位进行饲喂，自由采食和饮水。记录耗料量、健康状况等。试验结束后，每组随机取8头进行肉质测定。表3.本发明实施例2提供的含发酵饲料日粮对育肥猪生产性能的影响指标单位对照组5%发酵饲料组10%发酵饲料组始均重kg90.1890.7590.65末均重kg123.33124.31127.62平均日增重kg0.850.860.95平均日采食量kg2.652.662.75耗料增重比-3.133.092.90结果分析由表3可知，10%发酵饲料组和对照组相比，育肥猪采食量和日增重提高，料肉比降低，饲料利用率较高，实施例2所述改善育肥猪生长性能的生物发酵饲料提高育肥猪生长性能。表4.本发明实施例2所述含发酵饲料日粮对育肥猪肉品质的影响指标单位对照组5%发酵饲料组10%发酵饲料组ph45min-6.396.406.44ph24h-5.775.805.90肉色亮度值l*-42.0441.4841.27肉色红度值a*-12.3612.6914.18肉色黄度值b*-11.5311.3211.09肉色评分-2.333.273.65大理石纹评分-2.203.253.44滴水损失%3.343.202.70剪切力n44.0342.1937.98肌苷酸mg/g2.192.382.55肌内脂肪%1.671.852.22棕榈油酸%2.302.492.56油酸%42.3243.8845.91亚油酸%2.802.933.32亚麻酸%0.290.350.44花生四烯酸%0.300.340.41由表4可知，10%发酵饲料组和对照组相比，肉色和嫩度改善，滴水损失降低，肌内脂肪、肌苷酸、不饱和脂肪酸含量提高。应用试验2验证实施例3对杜长大三元育肥猪应用试验试验方法：对照组、2%发酵饲料组、4%发酵饲料组与8%发酵饲料组各取100头杜长大三元育肥猪进行试验。初重89kg左右，预饲一周后，开始正式饲喂，饲养期35天。试验猪以栏为单位进行饲喂，自由采食和饮水。记录耗料量、健康状况等。试验结束后，每组随机取12头进行肉质测定。表5本发明实施例3提供的含发酵饲料日粮对育肥猪生长性能的影响指标单位对照组2%发酵饲料组4%发酵饲料组8%发酵饲料组初重kg89.6289.8489.7488.94末重kg120.25120.90122.25126.50平均日增重kg0.880.900.931.07平均日采食量kg2.762.762.782.87耗料增重比-3.143.072.992.68由表5可知，与对照组相比，8%发酵饲料组改善猪肉品质的生物发酵饲料，育肥猪日采食量和日增重提高，料肉比降低，实施例3所述改善猪肉品质的生物发酵饲料提高育肥猪生长性能。表6本发明实施例3提供的含发酵饲料日粮对育肥猪血清抗氧化能力的影响组别单位对照组2%发酵饲料组4%发酵饲料组8%发酵饲料组超氧化物歧化酶u/ml62.6069.3483.3697.83谷胱甘肽过氧化物酶u/ml272.29275.01281.61310.22过氧化氢酶u/ml5.765.846.027.36丙二醛nmol/ml5.885.614.824.52由表6可知，8%发酵饲料组和对照组相比，育肥猪血清sod、cat、gsh-px水平提高，而mda水平降低，提示实施例3所述改善猪肉品质的生物发酵饲料提高育肥猪血清抗氧化能力。表7本发明实施例3提供的含发酵饲料日粮对育肥猪肉品质的影响指标单位对照组2%发酵饲料组4%发酵饲料组8%发酵饲料组ph45min-6.246.256.266.34ph24h-5.715.685.735.70肉色亮度值l*-41.3441.3841.4542.07肉色红度值a*-12.7212.8012.9913.88肉色黄度值b*-11.4211.3911.2611.19肉色评分-2.102.212.662.86大理石纹评分-2.062.172.303.10滴水损失%3.533.513.372.79剪切力n45.6644.0643.3240.80肌苷酸mg/g2.152.172.212.42肌内脂肪%1.711.751.822.16棕榈油酸%2.272.332.382.50油酸%43.8843.9143.9545.63亚油酸%2.762.812.903.17亚麻酸%0.290.300.320.39花生四烯酸%0.290.300.310.35由表7可知，8%发酵饲料组和对照组相比，育肥猪肉色和嫩度改善，肌苷酸、肌内脂肪、不饱和脂肪酸含量提高，滴水损失降低。以上结果表明，实施例3所述改善猪肉品质的生物发酵饲料，饲喂育肥猪通过提高肉色，减少滴水损失，增加不饱和脂肪酸含量，改善猪肉品质。结论：饲料中添加本发明饲料添加剂能增加饲料营养价值，提高育肥猪血清抗氧化水平，改善育肥猪生长性能和肉品质。当前第1页12