一种马蹄皮提取物及其应用的制作方法

【技术领域】

本发明涉及食品加工领域，具体涉及一种马蹄皮提取物及其应用。

背景技术：

中国马蹄产量占全球95％以上，且已有研究表明马蹄皮含有丰富的活性物质。

丙烯酰胺是一种会对动物的皮肤、生殖器官、神经等造成损伤且会长期沉积在动物体内的致癌物质。自2002年瑞典科学家发现高温加工食品中含有丙烯酰胺以来，通过添加植物提取物来减少油炸食品中的丙烯酰胺含量已成为广大学者研究的热点。

油条是我国城市居民最常用的早餐食品，而油条也是丙烯酰胺含量较高的食品之一。因此研究马蹄皮提取物对油条中丙烯酰胺含量的影响,具有重要的现实意义。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种马蹄皮提取物及其应用。该马蹄皮提取物对丙烯酰胺的生成有抑制作用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种马蹄皮提取物，按照如下方法制备：、

称取马蹄皮粉，加入体积浓度为75％的乙醇提取，提取液减压浓缩回收乙醇，得马蹄皮提取物。

一种马蹄皮提取物，按照如下方法制备：

称取马蹄皮粉，加入体积浓度为75％的乙醇提取，提取液减压浓缩回收乙醇，所得浸膏物加在大孔树脂上，用体积浓度为25％-95％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收乙醇，即得马蹄皮提取物。

本发明还提供了上述马蹄皮提取物在抑制丙烯酰胺中的应用。

本发明所述抑制丙烯酰胺为抑制在油条制作中产生的丙烯酰胺的应用。

本发明所述油条制作包括如下步骤：

(1)将本发明所述的马蹄皮提取物加水制成10.0、5.0、1.0×10^-1、1.0×10^-3或1.0×10^-5mg/ml浓度的稀释液；

(2)将面粉、盐、糖、油、泡打粉、小苏打、酵母和步骤(1)得到的稀释液混合，和面，经醒面后进行油炸，得到所述油条。

进一步地，所述稀释液与所用面粉的质量比为510ml：1000g。

进一步地，所述油炸温度为180℃，时间为50s。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

本发明从马蹄皮提取获得的马蹄皮提取物对丙烯酰胺的生成有抑制作用，可用于开发绿色、安全、高效的丙烯酰胺天然抑制剂。

【附图说明】

图1：丙烯酰胺标准曲线。

图2：丙烯酰胺标准品的高效液相色谱图。

图3：油条样品中的丙烯酰胺高效液相色谱图。

图4：不同浓度马蹄皮提取物对丙烯酰胺的抑制效果。

图5：不同浓度马蹄皮提取物的丙烯酰胺抑制率比较。

【具体实施方式】

实施例

1材料与方法

1.1材料与仪器

马蹄皮粉(广西贺州市芳林乡所产马蹄，削皮、晒干、粉碎而得马蹄皮粉)；甲醇(gr，天津科密欧)；丙烯酰胺标准品(纯度≥99.5％，天津光复)；正己烷(西陇科学股份有限公司)；乙醇(均为ar，广东化工试剂工程技术研究开发中心)；大孔树脂(d101型，天津光复)。

r-1020型旋转蒸发仪郑州长城科工贸；lc-2030c3d型高效液相色谱仪日本岛津制作所；tc-c18(4.6×250mm，5μm)型c18柱美国安捷伦；s228-45202-58型dad检测器日本岛津；希波式0.45μm型针筒过滤器天津富集；loc-40型离心机安微中科中佳；pa2004n型电子天平上海菁海；10、100、1000、5000μl型移液枪赛默飞世尔。

1.2实验方法

1.2.1丙烯酰胺标准曲线的绘制

取0.0050g丙烯酰胺标准品溶解于50.0ml含5％甲醇的水溶液，制成100μg/ml丙烯酰胺标准储备液，再进一步稀释成浓度为24.0、12.0、6.0、3.0、1.5、0.75μg/ml的标准溶液，按以下色谱条件进行hplc测定，以色谱峰面积对浓度作标准曲线。

1.2.2马蹄皮提取物及其稀释液的制备

(1)称取5.0kg马蹄皮粉，加入提取罐中，用75％乙醇(3×25l)，减压浓缩回收乙醇，得马蹄皮提取物a0.47kg。

(2)步骤(1)的马蹄皮提取物a加在大孔树脂上，分别用25％、55％、95％体积浓度的乙醇洗脱，收集对应的洗脱液，减压浓缩回收乙醇，对应得到马蹄皮提取物b、马蹄皮提取物c、马蹄皮提取物d。

(3)把马蹄皮提取物a、马蹄皮提取物b、马蹄皮提取物c和马蹄皮提取物d分别稀释成浓度为10.0、5.0、1.0×10^-1、1.0×10^-3、1.0×10^-5mg/ml的马蹄皮提取物稀释液各30.0ml备用。

1.2.3油条工艺流程

以面粉25g，盐0.3g，糖0.5g，油1g，泡打粉0.5g，小苏打0.15g,酵母0.1g为配方原料。

制作包括如下步骤：

(1)按1.2.2的方法获得马蹄皮提取物稀释液；

(2)将面粉、盐、糖、油、泡打粉、小苏打、酵母和步骤(1)得到马蹄皮提取物稀释液(对照组加等体积的水)混合，和面，经醒面后进行油炸，得到所述油条。

其中马蹄皮提取物稀释液与所用面粉的质量比为510ml：1000g。

1.2.4实验样品的制备

预实验结果表明，油条油炸温度为180℃，油条时间为50s的条件下所得油条色泽金黄、油条风味浓郁和韧度最佳，本文按此条件制备油条样品。

1.2.5丙烯酰胺检测的色谱条件

色谱柱：反相c18柱；流动相：水:甲醇(v:v，95:5)；进样方式：自动进样；进样量：10.0μl；流速：0.6ml/min；检测器：dad检测器；检测波长：210nm；柱温：30℃。

1.2.6样品前处理

油条样品的前处理步骤参照一下步骤：将样品置于碾钵中，捣碎混匀后准确称取样品2.0g于50ml离心管中,加水至20ml,磁力搅拌30min(700r/min)，然后在离心4000r/min，离心10min，得离心液16ml，取离心液5ml于分离漏斗中，并加入5ml正己烷进行萃取，取下层液用旋转蒸发仪除去正己烷，最后用蒸馏水定容至5ml过0.45μm水系针筒式微孔滤膜，按1.2.5的方法测定丙烯酰胺色谱峰面积。每组平行实验3次。

1.2.7丙烯酰胺含量的计算

根据标准曲线由色谱峰面积计算丙烯酰胺浓度。

样品中丙烯酰胺含量(μg/g)＝(c×5ml×16/5)÷2g

式中：c—样品中丙烯酰胺色谱峰面积对应标准曲线中丙烯酰胺的浓度，μg/ml。

1.2.8抑制率的计算

对各组丙烯酰胺含量进行测定，与空白对照组进行对比，计算不同马蹄皮活性成分对丙烯酰胺的抑制率。

抑制率(％)＝[(am0-am)/am0]×100％

am-实验组丙烯酰胺含量；am0-空白对照组丙烯酰胺含量。

2结果与分析

2.1丙烯酰胺标准曲线的绘制

取0.0050g丙烯酰胺标准品溶解于50.0ml含5％甲醇的水溶液，制成100μg/ml丙烯酰胺标准储备液，再进一步稀释成浓度为24.0、12.0、6.0、3.0、1.5、0.75μg/ml的标准溶液，按以下色谱条件进行hplc测定，以色谱峰面积对浓度作标准曲线(如图1所示)。

由图1可知，在1.2.6的条件下进行检测，将1.2.1的中配好的标准储备液稀释成浓度为24.0、12.0、6.0、3.0、1.5、0.75μg/ml的标准溶液。按照1.2.6色谱条件进行hplc测定，作出峰面积对浓度的标准曲线，得出直线回归方程y＝2059.4x-286.49，r²＝0.9999。结果表明，在0.75μg/ml～24.0μg/ml的浓度范围内线性相关性良好。

2.2丙烯酰胺高效液相色谱

由图2可见，丙烯酰胺标准品的高效液相色谱峰峰形良好，保留时间为8.8min。图2为丙烯酰胺标品在1.2.5条件下的高效液相色谱图，图3为180℃下油炸50s后的油条样品按照相同条件下进行hplc分析检测丙烯酰胺含量的色谱图，经过图2与图3的比对可见，丙烯酰胺标品出峰时间为8.8min，图3中对应的色谱峰可见目标峰峰型良好，丙烯酰胺峰与其它杂峰能够很好地分离，此样品方法与条件适用于油条中丙烯酰胺含量的检测。

2.3不同浓度添加物抑制丙烯酰胺形成的效果

把马蹄皮提取物a、马蹄皮提取物b、马蹄皮提取物c、马蹄皮提取物d分别加水稀释，以10.0、5.0、1.0×10^-1、1.0×10^-3、1.0×10^-5mg/ml的浓度分别添加到油条原料里(对照组加等体积的水)，按1.2.3步骤制作，在180℃下油炸50s制成油条，再按照1.2.6步骤进行样品前处理，然后按1.2.5步骤进行hplc分析检测油条样品中丙烯酰胺，按1.2.7计算丙烯酰胺的含量，按1.2.8计算抑制率，结果见图4和图5。

由图4可知，马蹄皮75％乙醇总提取物及其经大孔树脂的不同浓度的乙醇洗脱液作为添加物加入油条原料中对油条油炸过程丙烯酰胺的形成均有抑制作用，但这些添加物浓度与丙烯酰胺含量之间呈非线性关系。由图4、图5看出，在所有马蹄皮提取物中，25％、95％的乙醇洗脱液获得的马蹄皮提取物最佳抑制浓度均为0.1mg/ml，此时达到最大抑制率28.77％和16.04％，可见抑制效果最好的添加物为25％的乙醇洗脱液获得的马蹄皮提取物，添加物浓度再继续增加时对丙烯酰胺的抑制效果逐渐减弱。

结论：在油炸油条体系中，不同浓度的马蹄皮提取物对丙烯酰胺生成均有抑制作用，其中25％体积浓度的乙醇洗脱液获得的马蹄皮提取物抑制丙烯酰胺形成的效果最好，其最佳抑制浓度为0.1mg/ml，丙烯酰胺抑制率为28.77％。

上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。