抗微生物的菌种组合物及其制备方法与流程

本公开涉及抗微生物的菌种组合物及其制备方法。特别地，本公开涉及抗细菌、抗真菌和/或抗病毒的菌种组合物及其制备方法。更具体地，本公开涉及抗霉菌的菌种组合物及其制备方法。

背景技术：

抗微生物物质是天然、半合成或者合成来源的并且能够杀灭或者抑制微生物生长的任何物质。抗微生物物质的主要类型包括消毒剂(例如漂白剂)、防腐剂和抗生素。

一般说来，消毒剂、防腐剂和抗生素的应用稍有不同。消毒剂是非选择性的并且被施用于非活体物体的表面以破坏存活在该物体上的微生物，防腐剂被用于破坏活体组织的表面上的微生物，例如手术期间，而抗生素则被用于消灭体内的细菌。此外，抗真菌剂和抗病毒剂被分别用于靶向体内和体外的真菌和病毒。

抗生素的一个问题在于它们不加区别地扫除有机体和/或微生物群系中所有易受影响的细菌，这既包括它们靶向的不良细菌也包括努力维持人体和动物体健康的有益细菌。特别地，所述有益细菌可以通过帮助吸收营养物、消化食物、平衡血糖、调节免疫系统和甚至平衡情感来支持人体和动物体的健康。抗生素的另一个问题是耐药性，其在抗生素使用的情况下细菌幸存并继续引起感染时发生。

目前希望获得对活体内的有益微生物具有较小影响或者没有影响同时表现出对广泛有害微生物的抑制或者杀灭活性的替代方案。为此，本领域使用了由天然物质制备的抗微生物的组合物。它们被用于若干工业领域，例如个人护理制品、食品应用、医药和保健。例如，在个人护理制品中，抗微生物制剂被用于帮助阻止或者消除表面病原菌的生长以及保护所述个人护理制品被破坏或者实质性地改善制品的保存期限。例如，us2016/0286820a1公开了用于个人护理制品的抗微生物和抗真菌组合物，其通过如下方式制备：将cocosnucifera椰子的白色果肉浸软以产生原料物质；将所述原料物质与细菌混合，并使用所述细菌发酵所述原料物质以产生发酵制品；和过滤所述发酵制品以澄清该制品和除去余下的原料物质以及制得所述组合物，该组合物在用于个人护理制品中表现出抗细菌作用和抗真菌作用。

不过，仍然需要获得由天然物质获得的抗微生物的菌种组合物，其可用于进一步的菌种繁殖，从而提供具有抑制或者消灭广泛的有害微生物例如细菌、真菌和/或病毒的活性但不会对宿主上的有益微生物造成损害或者损害很小的组合物。

发明概述

在第一方面中，本公开提供了一种由乳汁、生蛋以及植物部分制备抗微生物的菌种组合物的方法，其包括以下步骤：

1)提供包含乳汁、可发酵糖、以及分别来自乳杆菌属、双歧杆菌属和醋酸杆菌属的可食用菌种的乳品组合物，

2)将一部分所述乳品组合物(部分a)与米根霉、黑曲霉和/或米曲霉、以及来自酵母属的可食用菌种合并，和发酵以使得所述部分a组合物实质上变成凝乳，

3)将一部分所述乳品组合物(部分b)与生蛋组合，发酵以使得蛋壳充分地溶解到所述部分b组合物中，在基本上不影响所述蛋的生物膜的构造的情况下在所述生物膜上产生孔隙，和继续发酵所述部分b组合物直至所述生物膜的内表面出现钙粒，

4)将步骤2)所得的所述部分a组合物与步骤3)所得的所述部分b组合物合并，向其中引入所述植物部分和可发酵糖，从而形成其中酪蛋白位于上方的ab组合物，和

5)使得所述ab组合物发酵直至在上方形成能够继续生长的微生物膜和在下方形成液体部分，并且所述液体部分经检测为具有抗霉腐性能和具有≤大约3.0的ph。

在第二方面中，本公开提供了用于检测根据第一方面制备的菌种组合物及其衍生制品是否具有抗霉腐性能的方法，所述方法包括将一定量的所述组合物或者衍生制品的液体部分覆盖在酸奶上，和将所述液体部分和酸奶置于室温和开放条件下观察是否有霉菌生长出来。这里所述的衍生制品是指通过进一步繁殖所述菌种组合物而获得的制品。

在第三方面中，本公开提供了一种通过第一方面的方法制备的抗微生物的菌种组合物，其特性为1)在进一步菌种繁殖时微生物膜能够形成并且增厚，2)能够杀灭以霉菌代表的有害微生物，3)能够发酵有机物质，和4)能够发酵直至ph≤大约3.0。

在第四方面中，本公开提供了由第三方面的菌种组合物进一步发酵葡萄获得的组合物，其中所述发酵在包含所述抗微生物的菌种组合物的液体部分、可发酵糖、水和葡萄的组合物的基础上进行直至在上方形成能够继续生长的微生物膜和在下方形成液体部分，并且所述液体部分经检测为具有抗霉腐性能和具有≤大约3.0的ph。

在第五方面中，本公开提供了第四方面的组合物在健康保健和/或食品的防腐保鲜中的用途。

附图说明

图1说明了在本公开描述的方法中出现的所希望的钙粒的实例(a)以及不希望的钙粒的实例(b)。

图2示出了分别通过水处理和通过实施例1获得的菌种组合物的液体部分处理的酸奶样品。

图3示出了分别通过水处理和通过实施例1获得的菌种组合物的液体部分处理的市售获得的酸奶样品。

发明详述

术语“抗微生物”在本公开中是指具有杀灭或者抑制对人体和/或动物体有害的微生物的特性，其中所述有害微生物包括，但不限于，细菌、真菌如霉菌、和病毒。在本公开的一些实施方案中，所述有害微生物是指引起感染的微生物。在本公开的一些实施方案中，所述有害微生物是指霉菌，特别是绿霉菌和黑霉菌。在糖尿病及其并发症的情况下，所述有害微生物可能包括金黄葡萄球菌、肠球菌、铜绿色假单胞菌、大肠杆菌、克雷白杆菌、和变形杆菌。在湿疹的情况下，所述有害微生物可能包括孢疹病毒、金黄葡萄球菌和癣菌。

术语“菌种组合物”在本公开中是指包含多于一个菌种的菌种制品，其可以用于进一步的菌种繁殖。

在第一方面中，本公开提供了一种由乳汁、生蛋以及植物部分制备抗微生物的菌种组合物的方法，其包括以下步骤：

1)提供包含乳汁、可发酵糖、以及分别来自乳杆菌属、双歧杆菌属和醋酸杆菌属的可食用菌种的乳品组合物，

2)将一部分所述乳品组合物(部分a)与米根霉、黑曲霉和/或米曲霉、以及来自酵母属的可食用菌种合并，和发酵以使得所述部分a组合物实质上变成凝乳，

3)将一部分所述乳品组合物(部分b)与生蛋组合，发酵以使得蛋壳充分地溶解到所述部分b组合物中，在基本上不影响所述蛋的生物膜的构造的情况下在所述生物膜上产生孔隙，和继续发酵所述部分b组合物直至所述生物膜的内表面出现钙粒，

4)将步骤2)所得的所述部分a组合物与步骤3)所得的所述部分b组合物合并，向其中引入所述植物部分和可发酵糖，从而形成其中酪蛋白位于上方的ab组合物，和

5)使得所述ab组合物发酵直至在上方形成能够继续生长的微生物膜和在下方形成液体部分，并且所述液体部分经检测为具有抗霉腐能力和具有≤大约3.0的ph。

对于第一方面的方法而言，有可能添加或者存在其它不会实质上影响制备过程的物质，例如其他益生菌，如来自芽孢桿菌属的益生菌。另外，在步骤1)中，所述乳品组合物可以包含适量的新鲜发酵的酸奶。

本公开中使用的措词“乳汁”可以选自，例如但不限于，牛乳、山羊乳、绵羊乳、和它们的组合。此外，所述乳汁可以为经过加工的或者未经过加工的。在第一方面的一些实施方案中，所述乳汁可以为市售可得的，例如品牌的牛奶。优选地，除了乳汁之外，可以添加适量的新鲜发酵的酸奶。

在第一方面的一些实施方案中，所述乳品组合物基本上由乳汁、可发酵糖、以及分别来自乳杆菌属、双歧杆菌属和醋酸杆菌属的可食用菌种组成。在第一方面的另一些实施方案中，所述乳品组合物基本上由乳汁、酸奶、可发酵糖、以及分别来自乳杆菌属、双歧杆菌属和醋酸杆菌属的可食用菌种组成。

本公开使用的措词“生蛋”是指未经烹饪的带有蛋壳的蛋类。其可以源自下蛋的动物，并且可以包括，但不限于，家禽蛋，例如鸡蛋和鸭蛋。

术语“植物”在本公开中是指新鲜的植物，并且可以包括，但不限于，水果植物。术语“植物部分”在本公开中可以包括植物的某部分，例如但不限于，植物的枝叶、植物的果实和种子。在第一方面的一些实施方案中，所述植物可以为葡萄果实。所述葡萄可以为源自例如，但不限于，西拉子、赤霞珠、雷司令、霞多丽、黑皮诺品种的葡萄。

措辞“半开放”在本公开中是指发酵期间待发酵的物料与周围环境有一定的相通并且不是完全开放的，目的是通气和防止昆虫尤其果蝇进入。在此情况下，空气中的有益细菌例如酵母菌可能在所述方法的过程中参与发酵，而来自空气的有害菌则会被杀死。另外，所述发酵可以在室温下进行。

措词“可发酵糖”在本公开中是指易于参与酸奶发酵的糖类。所述可发酵糖可以包括，但不限于，葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、半乳糖、棉子糖、及它们的组合。在第一方面的一些实施方案中，所使用的蔗糖可以源自例如，但不限于，甘蔗糖和甜菜糖。

对步骤1)中可发酵糖的量没有特别的限制。一般地，用于步骤1)的可发酵糖的量能够使得所述乳品组合物有明显的甜味。在第一方面的一些实施方案中，用于步骤1)的可发酵糖的量可以为相对于所述乳品组合物的重量而言至少大约1.0％重量。在第一方面的一些实施方案中，用于步骤1)的可发酵糖的量可以为相对于所述乳品组合物的重量而言至少大约5.0％重量。在第一方面的另一些实施方案中，用于步骤1)的可发酵糖的量可以为相对于所述乳品组合物的重量而言大约10.0％重量。在第一方面的一些其它实施方案中，用于步骤1)的可发酵糖的量可以为相对于所述乳品组合物的重量而言大约15.0％重量。

术语“乳杆菌属”在本公开中可以包括，但不限于，例如干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)、瑞士乳杆菌(lactobacillushelveticus)、约氏乳杆菌(lactobacillusjohnsonii)、副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)、鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)、和它们的组合。

术语“双歧杆菌属”在本公开中可以包括，但不限于，例如乳双歧杆菌(bifidobacteriumlactis)、球双岐杆菌(bifidobacteriumglobosum)、长双歧杆菌.(bifidobacteriumlongum)、短双歧杆菌.(bifidobacteriumbreve)、两歧双歧杆菌(bifidobacteriumbifidum)、婴儿双歧杆菌(bifidobacteriuminfantis)和它们的组合。

术语“醋酸杆菌属”在本公开中可以包括，但不限于，例如巴氏醋酸杆菌(acetobacterpasteurianus)、氧化醋酸杆菌(acetobacteroxydans)、许氏醋酸杆菌(acetobacterschutzenbachii)、奥尔兰醋酸杆菌(acetobacterorleanense)、攀膜醋酸杆菌(acetobacterscendens)、乙酸醋酸杆菌(acetobacteraceti)、木醋杆菌(acetobacterxylinum)、和它们的组合。

对于步骤1)而言，对分别来自乳杆菌属、双歧杆菌属和醋酸杆菌属的可食用菌种的比例没有特别的限制，其可以例如为大约1:1:1或者1:2:1。另外，所述菌种的总量可以适当地变化，只要该量不会负面地影响步骤2)的发酵。具体地，所述总量可以相对于所述乳汁组合物的重量而言为大约0.1-5.0％重量，优选地大约1.0-4.0％重量。

在步骤2)中，将一部分所述乳品组合物(部分a)与米根霉、黑曲霉和/或米曲霉、以及来自酵母属的可食用菌种合并，发酵以使得所述部分a组合物实质上变成凝乳。所述发酵可以在半开放的条件下进行。另外，可以根据需要向其中添加可发酵糖。在第一方面的一些实施方案中，步骤2)中的发酵在大约22℃至大约32℃的温度下条件下进行，所述温度例如为大约22℃，大约23℃，大约24℃，大约25℃，大约26℃，大约27℃，大约28℃，大约29℃，大约30℃，大约31℃，或者大约32℃。在第一方面的一些实施方案中，步骤2)中的发酵在室温下进行。在第一方面的一些实施方案中，步骤2)中的发酵直至使得所述凝乳的ph为大约4.0至大约4.5。

对于步骤2)而言，所述发酵使得所述部分a组合物实质上变成凝乳。也就是说，所述发酵使得至少约95重量％、优选地至少约98重量％、更优选地约100重量％的所述部分a组合物变成凝乳。

措词“来自酵母属的可食用菌”在本公开中包括用于酿酒(例如葡萄酒、白酒、啤酒)和烘焙(例如烤面包)的酵母菌。具体地，实例可以包括，但不限于，酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)、贝酵母(saccharomycesbayanus)、卡尔酵母(saccharomycescarlsbergensis)、布拉地氏酵母菌(saccharomycesboulardii)、真贝酵母菌(saccharomyceseubayanus)、和它们的组合。

步骤2)中所使用的米根霉、黑曲霉和/或米曲霉、以及可食用的酵母菌的总量可以为所述部分a组合物的大约0.5～8wt％，优选地大约0.8～5wt％。米根霉、米曲霉和/或黑曲霉、以及酵母菌之间的比例可以适当地变化，例如其可以为大约1：1：1或者2：1：2。

对于步骤3)而言，将一部分所述乳品组合物(部分b)与生蛋组合，发酵以使得蛋壳充分地溶解到所述部分b组合物中，在基本上不影响所述蛋的生物膜的构造的情况下在所述生物膜上产生孔隙，和继续发酵所述部分b组合物直至所述生物膜的内表面出现钙粒。另外，可以根据需要向其中添加可发酵糖。所述发酵可以在半开放的条件下进行。添加的生蛋的数目使得在蛋壳充分地溶解到所述部分b组合物中和在所述生蛋的生物膜上产生孔隙之后经过发酵能够在所述生物膜的内表面出现如图1(a)所示的钙粒。如图1(b)所示的钙粒是不希望的，其可能在加入蛋壳和/或加入熟蛋的情况下产生。所述如图1(a)所示的钙粒的特征在于其在所述生物膜的内表面上形成，是基本上圆滑的，并且可以继续长大。优选地，当蛋壳全部溶解到部分b中后立即在所述生蛋的生物膜上产生孔隙，例如刺破。在第一方面的一些实施方案中，步骤3)中的发酵在大约22℃至大约32℃的温度下条件下进行，所述温度例如为大约22℃，大约23℃，大约24℃，大约25℃，大约26℃，大约27℃，大约28℃，大约29℃，大约30℃，大约31℃，或者大约32℃。在第一方面的一些实施方案中，步骤3)中的发酵在室温下进行。

在第一方面的一些实施方案中，所述部分a组合物和所述部分b组合物可以分别为所述乳品组合物的一半量。在第一方面的另一些实施方案中，所述部分a组合物和所述部分b组合物可以分别为所述乳品组合物的一部分，并且所述部分a组合物与所述部分b组合物的重量比为大约1：1。

对于步骤4)而言，将步骤2)所得的所述部分a组合物与步骤3)所得的所述部分b组合物合并，向其中引入所述植物部分以及可发酵糖，从而形成其中酪蛋白位于上方的ab组合物。所述植物部分不必过分清洗，其带有的菌种可能有助于步骤5)的发酵。对于步骤4)而言，为了使得酪蛋白位于所述ab组合物的上方，引入可发酵糖直至相对于所述部分a组合物和所述部分b组合物的总量为大约10重量％～饱和量。优选地，引入可发酵糖直至相对于所述部分a组合物和所述部分b组合物的总量为饱和量。重要的是所述可发酵糖的添加使得酪蛋白位于ab组合物的上方和乳清位于下方。

对于步骤5)而言，使得所述ab组合物发酵直至在所述ab组合物的上方形成能够继续生长的微生物膜和在下方形成液体部分，并且所述液体部分经检测为具有抗霉腐性能和具有≤大约3.0、优选地≤大约2.5、更优选地≤大约2.0的ph。所述发酵可以在半开放的条件下进行。在第一方面的一些实施方案中，步骤5)中的发酵在大约22℃至大约32℃的温度下条件下进行，所述温度例如为大约22℃，大约23℃，大约24℃，大约25℃，大约26℃，大约27℃，大约28℃，大约29℃，大约30℃，大约31℃，或者大约32℃。在第一方面的一些实施方案中，步骤5)中的发酵在室温下进行。由此可以获得所希望的菌种组合物，所述菌种组合物的特性为1)在进一步菌种繁殖时微生物膜能够形成并且增厚，2)能够杀灭以霉菌代表的有害微生物，3)能够发酵有机物质，和4)能够发酵直至ph≤大约3.0。通常地，所述微生物膜是白色的，光滑的，有光泽的，其可以不断生长变厚。较强的酸性条件对于步骤5)的发酵是有利的。在所述发酵过程中，检测所述液体部分是否变得具有抗霉腐性是重要的，这可以通过下文所述的方法进行。

术语“抗霉腐”在本公开中旨在与有机物质关联并且是指杀灭或者抑制霉菌(例如绿霉菌和黑霉菌)的活性。其可以通过下文就霉菌而言描述的方法衡量。所述有机物质包括，但不限于，各种食物例如水、酸奶和水果等。

在第二方面的一些实施方案中，该抗霉腐性能检测方法用于检验所述菌种组合物及其衍生制品是否对以霉菌为代表的有害微生物具有抑制或者杀灭活性。多种物质例如酸奶可以作为基底进行抗霉腐检测。准备装有一定量酸奶的若干相同容器，然后以一定厚度的待测物质覆盖所述酸奶表面，其中待测物质的覆盖厚度可以为例如大约0.5-1cm。所述待测物质可以包括源自本文第一方面中的步骤5)的液体部分。另外，可以进行对照实验。所采用的对照待测物质可以包括例如水。然后将所有样品置于室温和开放条件下。随着液面蒸发，霉菌及其它有害微生物将可能生长出来。经过一段时间，如果没有观察到霉菌及其它有害微生物生长出来，则初步认为待测物质具有抗霉腐性能。另外，根据出现霉菌的快慢以及微生物斑的大小和数目等可以判断待测物质的抗霉腐性能。

在第三方面中，所述抗微生物的菌种组合物的特性为1)在进一步菌种繁殖时微生物膜能够形成并且增厚，2)能够杀灭以霉菌代表的有害微生物，3)能够发酵有机物质，和4)能够发酵直至ph≤大约3.0。

就第四方面而言，所获得的菌种组合物可以用于进一步发酵葡萄，从而提供对广泛的有害微生物例如细菌、真菌和/或病毒具有抑制或者杀灭活性但不会对宿主上的有益微生物造成损害或者损害很小的组合物。所述发酵在包含所述抗微生物的菌种组合物的液体部分、可发酵糖、水和葡萄的组合物的基础上进行直至在上方形成能够继续生长的微生物膜和在下方形成液体部分，并且所述液体部分经检测为具有抗霉腐性能和具有≤大约3.0的ph。所述发酵可以在半开放条件下进行。在第四方面的一些实施方案中，发酵在大约22℃至大约32℃的温度下条件下进行，所述温度例如为大约22℃，大约23℃，大约24℃，大约25℃，大约26℃，大约27℃，大约28℃，大约29℃，大约30℃，大约31℃，或者大约32℃。在第四方面的一些实施方案中，发酵在室温下进行。在第四方面的一些实施方案中，所述发酵在由所述抗微生物的菌种组合物的液体部分、可发酵糖、水和葡萄组成的组合物的基础上进行。在第四方面的一些实施方案中，所述发酵可以采用重量比大约1：1的所述抗微生物的菌种组合物的液体部分和含有可发酵糖的水以及适量的葡萄。所述葡萄的用量可以根据所使用的容器而选定。由此获得的组合物可以作为长期繁殖的基础菌种。

在第五方面中，本公开提供了第四方面的组合物在健康保健和/或食品的防腐保鲜中的用途。据信所述组合物中的成分具有协同效应、可以明显地改善体内的新陈代谢、和维持肠道内有益微生物群落。在一些实施方案中，所述组合物可以用来帮助缓解或者改善病症，例如卵巢癌、ii型糖尿病及其并发症、以及湿疹和皮肤创伤。

实施例

实施例1–抗微生物的菌种组合物的制备

向3升发酵罐中装入2升品牌的全脂鲜奶、200g蔗糖和30g的干酪乳杆菌、乳双歧杆菌以及氧化醋酸杆菌(重量比为大约1：1：1)，从而提供乳品组合物。将一半量的所述乳品组合物(部分a)与12g的酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)、米根霉(rhizopusoryzae)和黑曲霉(aspergillusniger)(重量比为大约1：1：1)合并，并于室温下半开放发酵以产生实质上变成凝乳的部分a。将另一半量的所述乳品组合物(部分b)与4个生鸡蛋合并，于室温下半开放发酵以使得蛋壳充分地溶解到所述部分b组合物中，在基本上不影响生蛋的生物膜的构造的情况下用刀尖刺破所述生蛋的生物膜，继续发酵所述部分b组合物直至所述生物膜的内表面上出现钙粒。将实质上变成凝乳的所述部分a组合物与其中出现钙粒的所述部分b组合物合并，向其中加入蔗糖至饱和，并向其中加入大约0.5kg西拉子葡萄，从而形成酪蛋白位于上方的ab组合物。将所述ab组合物于室温下半开放发酵直至在所述ab组合物的上方形成能够继续生长的微生物膜和在下方形成液体部分，并且所述液体部分经检测为具有抗霉腐性能和具有大约3.0的ph。

实施例2–抗霉腐性能检测

以酸奶作为基底的抗霉腐检测方法如下。在4个相同容器中注入少量原味酸奶，然后以1cm厚度的由实施例1获得的液体部分和1cm厚度的水分别覆盖容器中所述酸奶的表面。然后将所述容器置于室温和开放条件下。随着液面蒸发，观察到霉菌及其它有害微生物在以水覆盖的容器中生长出来。令人惊讶地观察到用源自实施例1的液体部分处理的酸奶中不会生长出霉菌等有害微生物，即使在夏天亦是如此。如果有霉菌生长的话，一般在处理后5-10天左右出现。结果示于图2中。左边的样品为经过水处理的并且不加盖的，而右边的样品为经过源自实施例1的液体部分处理的并且不加盖的。

实施例3–抗霉腐效果

对澳大利亚墨尔本市和阿德莱德超市里的所有酸奶进行实施例2中的抗霉腐性能的检测。实验结果如图3所示。从上方数第二行和第四行样品均经过实施例1获得的液体部分处理，并且显示出抗霉腐效果。

实施例4–由所述抗微生物菌种组合物的发酵/繁殖获得的组合物的用途

通过在由实施例1获得的抗微生物的菌种组合物的液体部分中进一步发酵葡萄而制备组合物。所述发酵以如下方式进行：将500g由实施例1获得的液体部分、500g具有10wt％蔗糖的水和100g葡萄装入发酵罐以形成一组合物，使得该组合物在半开放条件下于室温发酵直到在所述组合物的上方形成能够继续生长的微生物膜和在下方形成液体部分，并且所述液体部分经检测为具有抗霉腐性能和具有≤大约3.0的ph。

ii型糖尿病的治疗效果

糖尿病并发症的治疗效果

患者e经历糖尿病并发症大约1年左右，例如足指疼痛和可见的脓疮。当在他的双脚上施用如上文制得的组合物的当天，脓液从所述疮中流出。在连续施用20天之后，他的伤口结疤，并且伤口消肿。医学检查显示脓液中没有病菌，但是他的骨头中存在病菌。然而，经过服用抗生素14天之后，他的病症没有得到实质性缓解，反而带给他许多副作用例如头晕、心脏难受、便秘、肛门突出和腰痛等。之后该患者重新开始服用如上文制得的组合物6个多月，他惊讶地发现那些副作用消失了，并且血糖指数稳定在4.2-6.2。值得注意的是，这帮助避免了脚部伤口溃烂以致于需要截肢的情况。

卵巢癌的治疗效果

患者f于2016年7月9日被诊断为卵巢癌四期。她感觉全身无力并且没有食欲。尽管经历了一年的化疗，她的症状日益恶化。然而，在施用如上制备的组合物之后，她的状况好转了。需要注意的是血液中癌细胞指数的正常范围是0-35。

本领域技术人员应该理解，本公开的内容不限于在所描述的特定应用中的用途。本公开的内容也不限于就本文所描述或说明的特定元件和/或特征相关的优选实施方案。将理解本公开不限于已经公开的一个或多个实施方案，而是能够在不偏离权利要求书描述和限定的范围内作出多种重新配置、变换和替换。

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