一种用于增强哺乳动物的免疫力的组合物的制作方法

本发明涉及一种用于增强哺乳动物的免疫力的组合物，特别是食用或药用组合物。

背景技术：

增强机体免疫力，对机体正常的生理功能的保持具有重要作用。

β-葡聚糖是由葡萄糖分子构成的多糖类化合物，是酵母、真菌及某些细菌细胞壁的重要组成部分。动物试验研究表明酵母β-葡聚糖能够提高小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能和自然杀伤细胞(naturalkillercell，nk)的细胞活性，而人群试食调研结果也表明，β-葡聚糖可有效预防儿童反复性呼吸道感染。不同来源的β-葡聚糖其主链链接方式均以β-(1，3)-糖苷键为主，而支链的连接方式则会有较大的区别不同。来源于真菌、酵母的β-葡聚糖均含有β-(1，6)-糖苷键分支(且以酵母β-葡聚糖的分支较长)。baox等研究证明侧链长度和在主链上的取代度是决定β-(1，3)-葡聚糖构象和生物活性的重要因素，带有(1，6)键分支的β-(1，3)-葡聚糖的免疫保护效果好于没有分支结构的β-(1，3)-葡聚糖。

接骨木属植物(sambucusl.)是忍冬科植物，全世界约有20多种，只有西洋接骨木(sambucusnigral.，blackelderberry，亦称黑接骨木、接骨木莓)等两种接骨木属植物被列入美国食药局公认安全(gras)名单。接骨木属植物具有悠久的用药历史，国内始载于《唐本草》，而在古埃及、欧洲等国家，接骨木是用于流行性感冒的常用药。该属植物所含化学成分种类繁多，但是以多酚类成分为主，主要包括花青素类和黄酮类。多个研究表明接骨木属植物对于流行性感染具有一定的治疗作用：黑接骨木莓果实提取物在体外其能够抑制10种流感病毒；而对流感患者的干预性口服实验研究表明，黑接骨木果实提取物可使流感患者流感症状持续时间明显缩短，且体内抗体、il-1β、tnf-α等多种免疫因子的含量提高。

仍需要提高β-葡聚糖的增强机体免疫力的作用。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种用于增强哺乳动物的免疫力的组合物，特别是食用或药用组合物。

在一个方面，本发明提供了一种食用或药用组合物，包含葡聚糖，和接骨木莓的全果、果肉或果汁经物理方式(例如粉碎、筛分、切割、浓缩、干燥、压榨、匀浆化或其组合，所述干燥优选喷雾干燥或冷冻干燥)处理得到的产物。

在一个方面，所述葡聚糖是β-葡聚糖，优选地，所述β-葡聚糖含有β-(1，6)-糖苷键分支。

在一个方面，所述β-葡聚糖来源于真菌(例如酵母、香菇、灵芝)或谷物(例如燕麦、大麦、)，优选来源于酵母。

在一个方面，所述接骨木莓的所述产物是接骨木莓的果粉、浓缩粉(例如全果、果肉或果汁的浓缩粉)、果肉、果汁(或果浆)或浓缩汁(或浓缩浆)，优选浓缩粉。

在一个方面，所述葡聚糖和接骨木莓的所述产物的重量比为1∶1至30∶1，优选6∶5至10∶1，更优选5∶2至10∶1。

在一个方面，该组合物还包含锌元素源，优选地，所述锌元素源选自柠檬酸锌、葡聚糖酸锌、乳酸锌、甘氨酸锌、氧化锌、氯化锌、硫酸锌和碳酸锌中的一种或其组合。

在一个方面，本发明提供了制备所述的食用或药用组合物的方法，包括将葡聚糖和接骨木莓的所述产物混合，优选均匀混合。

在一个方面，本发明提供了所述的食用或药用组合物在制备食物或药物中的用途，所述食物或药物用于增强哺乳动物的免疫力，特别是提高淋巴细胞增殖能力，提高自然杀伤细胞的细胞活性，或提高杯状细胞数量。

本发明提高了葡聚糖，特别是酵母β葡聚糖的三螺旋结构含量。本发明提高了β-葡聚糖的增强机体免疫力的作用，特别是提高淋巴细胞增殖能力，提高自然杀伤细胞的细胞活性，或提高杯状细胞数量的作用。

附图说明

图1为刚果法测定三螺旋结构β-葡聚糖的标准曲线图。

具体实施方式

除非另外定义，本文所用的所有技术和科学术语具有本领域技术人员通常理解的相同含义。在冲突的情况下，以包括定义在内的本文件为准。下面描述优选的方法和材料，但是与本文所述那些类似或等同的方法和材料可用于实施或测试本发明。本文公开的材料、方法和实例仅是说明性的，而非旨在限制。

所述β-葡聚糖(如酵母β-葡聚糖)、接骨木莓、锌元素源等材料均可购买得到，或由本领域技术人员根据本领域已知的方法得到。

在一个实施方案中，所述食用或药用组合物可通过混合各种成份以及任选的辅料、载体、稀释剂或赋形剂而得到，优选均匀混合。

在一个实施方案中，所述接骨木莓的全果、果肉或果汁经物理方式处理得到所述产物。所述物理处理方式包括但不限于粉碎、筛分、切割、浓缩、干燥、压榨、匀浆化或其组合。所述干燥优选喷雾干燥或冷冻干燥。优选地，所述物理方式处理保留了接骨木莓的全果、果肉或果汁的除水分以外的基本所有成份，例如保留了所有成份的约60％、70％、80％、90％或更多。优选地，所述物理方式处理保留了接骨木莓的全果、果肉或果汁的除水分以外的基本所有成份种类。优选地，所述物理方式不包括萃取、过滤、渗透、色谱分离等获得接骨木莓的全果、果肉或果汁中特定成份的方式。优选地，所述物理方式不会导致接骨木莓的全果、果肉或果汁中除水分以外的任何成份的显著减少，例如减少10％、20％、30％、40％或更多。

在一个实施方案中，本发明提供了一种食用或药用组合物，包含酵母β-葡聚糖和接骨木莓浓缩粉。

所述接骨木莓浓缩粉是使用鲜果(例如全果、果肉或果汁)经喷雾干燥或冷冻干燥等加工工艺浓缩加工为粉的产品。例如，可以进行2-10倍浓缩，如5倍、6倍、7倍浓缩。

所述接骨木莓浓缩粉也可以替换为接骨木莓的果粉、果肉、果汁(或果浆)、浓缩汁(或浓缩浆)。

在一个实施方案中，所述组合物包含60-250重量份的酵母β-葡聚糖和12-50重量份的接骨木莓浓缩粉。在一个实施方案中，所述组合物包含60-200重量份的酵母β-葡聚糖和20-50重量份的接骨木莓浓缩粉。在一个实施方案中，所述组合物包含100-200重量份的酵母β-葡聚糖和20-40重量份的接骨木莓浓缩粉。

在一个实施方案中，所述组合物还包含锌元素源，优选地，所述锌元素源选自柠檬酸锌、葡聚糖酸锌、乳酸锌、甘氨酸锌、氧化锌、氯化锌、硫酸锌和碳酸锌中的一种或其组合。优选地，所述锌元素源的量以锌元素计为4-8重量份。

在一个实施方案中，所述葡聚糖和接骨木莓的所述产物的重量比为1∶1至30∶1，优选6∶5至10∶1，更优选5∶2至10∶1。

在一个实施方案中，本发明所述的接骨木莓的全果、果肉或果汁经物理方式(例如粉碎、筛分、切割、浓缩、干燥、压榨、匀浆化或其组合，所述干燥优选喷雾干燥或冷冻干燥)处理得到的产物可提高葡聚糖，特别是酵母β葡聚糖的三螺旋结构含量。

在一个实施方案中，本发明所述的接骨木莓的全果、果肉或果汁经物理方式(例如粉碎、筛分、切割、浓缩、干燥、压榨、匀浆化或其组合，所述干燥优选喷雾干燥或冷冻干燥)处理得到的产物可提高β-葡聚糖的增强机体免疫力的作用，特别是提高淋巴细胞增殖能力，提高自然杀伤细胞的细胞活性，或提高杯状细胞数量的作用。

在一个实施方案中，所述组合物可以制成片剂、丸剂、软胶囊剂、硬胶囊剂、颗粒剂、散剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、注射剂以及任何其他合适的剂型。在一个实施方案中，本发明的药物可口服施用。在一个实施方案中，本发明的药物可肠胃外施用。

在一个实施方案中，所述组合物制成口服制剂，优选地，该口服制剂含10％以上本发明组合物。

在一个实施方案中，可通过本领域已知的方法将所述组合物与辅料、载体、稀释剂或赋形剂等组合，制成合适的剂型。所述辅料例如淀粉等。

实施例

实施例1

表1一种具有增强免疫力作用的组合物的胶囊的主成分含量

按照表1所示配方，在gmp洁净车间内，分别称取各主成份并过60目筛；将已过筛的上述各物料置于混合机中，并加入其他辅料，例如淀粉等，混合均匀后填充于胶囊壳内，制成0.5g/粒的胶囊，得每粒胶囊含酵母β-葡聚糖60mg、接骨木莓浓缩粉12mg。

实施例2

表2一种具有增强免疫力作用的组合物的胶囊的主成分含量

操作步骤同实施例1，得每粒胶囊含酵母β-葡聚糖250mg、接骨木莓浓缩粉50mg。

实施例3

表3一种具有增强免疫力作用的组合物的胶囊的主成分含量

操作步骤同实施例1，得每粒胶囊含酵母β-葡聚糖100mg、接骨木莓浓缩粉30mg。

实施例4

表4一种具有增强免疫力作用的组合物的胶囊的主成分含量

操作步骤同实施例1，得每粒胶囊含酵母β-葡聚糖60mg、接骨木莓浓缩粉12mg、锌元素5mg。

实施例5

表5一种具有增强免疫力作用的组合物的胶囊的主成分含量

操作步骤同实施例1，得每粒胶囊含酵母β-葡聚糖100mg、接骨木莓浓缩粉100mg、锌元素10mg。

实施例6

表6一种具有增强免疫力作用的组合物的胶囊的主成分含量

操作步骤同实施例1，得每粒胶囊含酵母β-葡聚糖300mg、接骨木莓浓缩粉10mg、锌元素5mg。

对比例1

表7一种胶囊主成分

操作步骤同实施例1，得每粒胶囊含酵母β-葡聚糖60mg。

对比例2

表8一种胶囊主成分

操作步骤同实施例1，得每粒胶囊含接骨木莓浓缩粉12mg。

对比例3

参考专利《一种具有免疫增强作用的组合物及其应用(授权公告号：cn102357105b)》所述组合进行对比例3样品制备。

表9一种胶囊主成分

操作步骤同实施例1，得每粒胶囊含螺旋藻180mg、水苏糖100mg、酵母β-葡聚糖30mg。

试验1-本发明配方提高酵母β葡聚糖的三螺旋结构的作用

本试验采用刚果法进行葡聚糖分子内三股螺旋活性结构的快速体外测定。刚果红分子与三股螺旋结构β-葡聚糖结合后，会发生特征性红移，且红移后在523nm处吸光度值在一定条件下与三股螺旋结构β-葡聚糖的质量浓度之间存在线形关系，据此，可用此方法进行β-葡聚糖分子中三股螺旋结构的测定。

标准曲线制备：称取酵母三股螺旋结构β-葡聚糖标准品83.3mg(纯度为60％)，加dmso溶解，磁力加热搅拌至溶解完全，用0.2mol/lnacl定容至500ml，得浓度为100ug/ml的标准品溶液。

表10刚果红组浓度梯度测定体系

表11背景组浓度梯度测定体系

按照表10、表11得刚果红组和背景组的浓度梯度测定体系。参考文献试验方法，利用紫外-可见光分光光度计测各组在523nm处吸光度值，并计算其差值δod值，并制备δod值为纵坐标、三股螺旋结构葡聚糖样品质量(ug)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程y＝0.0012x-0.0039(r²＝0.9964)，表明在三股螺旋结构葡聚糖样品质量为40-160ug之间，与吸光度差值δod之间具有较好的线形关系。

图1为刚果法测定三螺旋结构β-葡聚糖的标准曲线图。

三螺旋结构β-葡聚糖含量测定：分别取实施例1、对比例1、对比例2、对比例3胶囊各约10-15粒，分别倒出胶囊内容物，称取适量(约为1g/份)同上述操作进行各样品内三螺旋结构β-葡聚糖含量测定，每组平行测三份样品，结果以平均值计。由标准曲线可得各组样品三螺旋结构β-葡聚糖的含量，如下表10所示。

表12刚果法测定各组酵母β-葡聚糖内三股螺旋结构重量

由上表可知，自然状态下酵母β-葡聚糖并不是全部以三股螺旋的活性形式存在，仅约有40％左右是以三股螺旋的活性形式存在(对比例1)，由实施例1与对比例1可知，接骨木莓浓缩粉的加入有利于提高酵母β-葡聚糖内三股螺旋结构的比例；由对比例3数据可知，酵母β-葡聚糖与螺旋藻、水苏糖复合，对其三股螺旋构型基本无影响。

试验2-本发明配方增强免疫力的作用

为验证本发明配方具有增强免疫力作用，进行了以下动物试验：

选用spf级balb/c小鼠共90只，6-8周龄，雌雄各半，由广东省医学实验动物中心提供。适应性喂养一周后，将全部小鼠随机分成9组(10只/组，雌雄各半)，各组小鼠所给受试物成分及用量如下表所示：

表13受试样品表

各组小鼠分别按照上述要求进行给药，每日给药1次，实验周期为4周(28天)。在给药的第14天，对除空白组外其他组小鼠腹腔注射环磷酰胺40mg/kg造免疫抑制模型，连续注射两天。试验第29天，采用颈椎脱臼法处死小鼠，取脾脏置于盛有预冷pbs的无菌培养皿中，24h内制备细胞悬液，进行伴刀豆凝集素a(concanavalina，cona)诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验(mtt法)、自然杀伤细胞的细胞活性测定(乳酸脱氢酶(ldh)法)；另取空肠5-10cm片段于中性甲醛中固定后，制取肠切片，观察切片并记录5根完整绒毛记录杯状细胞数量。试验数据以mean±sd进行表示，使用spss10.0进行统计学分析，采用单因素方差分析，显著性设定为p＜0.05。结果如下表所示。

表14各组小鼠免疫指标参数

注：与空白组比较，^#p＜0.05，^##p＜0.01；与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与对比例1组比较，^▲p＜0.05，^▲▲p＜0.01

如表14所示，注射环磷酰胺可使小鼠细胞免疫功能、自然杀伤细胞的细胞活性及肠道免疫功能均显著性下降，即免疫低下模型构建成功。6个实施例组均可使免疫低下小鼠细胞免疫、自然杀伤细胞的细胞活性及肠道免疫功能得到显著性提高，且其作用效果优于单一酵母β-葡聚糖(对比例1)，且优于现有组合物(对比例3)的作用效果。