用于抑制流感的重症化的抗流感病毒剂的制作方法

[0001]
本发明涉及用于抑制流感的重症化的抗流感病毒剂。


背景技术：

[0002]
流感是由于感染流感病毒而引起的传染病。流感病毒的感染力非常强，且在日本每年约有1000万人感染。另外，流感具有流行性，因此一旦开始流行，则在短时间内传播给很多人。高龄者、慢性疾病患者若患有流感，则重症化的概率高、且引发肺炎等并发症而导致死亡的危险性也高。
[0003]
流感的治疗例如通常使用奥司他韦(oseltamivir；商品名tamiflu(注册商标))等抗流感药。奥司他韦需要在发病后48小时以内进行早期给药，但另一方面如果检测时期过早，则也有时未能检测出病毒以至诊断不出流感，难以在适合的时期进行给药。因此，期望开发出如食品那样能够轻松摄取、且能够用于通过事先摄取来抑制感染流感病毒时的重症化的制品。
[0004]
专利文献1公开了乳双歧杆菌bl-04株对于鼻炎、支气管炎等呼吸器官疾病的治疗或预防是有效的。
[0005]
专利文献2公开了包含长双歧杆菌ncc2705的、与传染病和包括传染病在内的免疫系统相关的病变的治疗或预防用组合物。
[0006]
已确认作为双歧杆菌的两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)olb6378株具有提高肠粘膜免疫的作用、变态反应预防、治疗效果(非专利文献1和专利文献3)。
[0007]
然而，尚未显示出这些微生物是否抑制流感的重症化。
[0008]
现有技术文献
[0009]
专利文献
[0010]
专利文献1：日本特表2014-517003号公报
[0011]
专利文献2：日本特表2012-526752号公报
[0012]
专利文献3：日本特开2006-273852号公报
[0013]
非专利文献
[0014]
非专利文献1：tanaka k.et al.,nutrients,(2017)9,195；doi:10.3390/nu9030195


技术实现要素：

[0015]
发明要解决的问题
[0016]
本发明的课题在于提供用于抑制流感的重症化的抗流感病毒剂。
[0017]
用于解决问题的方案
[0018]
本发明人等为了解决上述课题而进行了深入研究，结果发现能够抑制流感的重症化的两歧双歧杆菌菌株，以至完成了本发明。
[0019]
即，本发明包括以下的内容。
[0020]
[1]一种抗流感病毒剂，其含有两歧双歧杆菌作为有效成分。
[0021]
[2]根据上述[1]所述的抗流感病毒剂，其中，两歧双歧杆菌具有呼吸器官中的流感病毒增殖抑制作用。
[0022]
[3]根据上述[1]或[2]所述的抗流感病毒剂，其中，两歧双歧杆菌为两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)olb6378株(保藏编号nite bp-31)。
[0023]
[4]根据上述[1]～[3]中任一项所述的抗流感病毒剂，其用于抑制流感的重症化。
[0024]
[5]根据上述[1]～[4]中任一项所述的抗流感病毒剂，其中，两歧双歧杆菌选自由两歧双歧杆菌菌体的培养物、加热处理物、干燥物和浓缩物、以及这些当中2种以上的组合组成的组。
[0025]
[6]一种用于抑制流感的重症化的食品，其包含上述[1]～[5]中任一项所述的抗流感病毒剂。
[0026]
[7]一种用于抑制流感的重症化的药物，其包含上述[1]～[5]中任一项所述的抗流感病毒剂。
[0027]
发明的效果
[0028]
根据本发明，能够抑制感染了流感病毒时的重症化。
[0029]
本说明书包括成为本申请的优先权的基础的日本专利申请号2018-127101号的公开内容。
附图说明
[0030]
图1是示出olb6378菌株对流感病毒下呼吸道感染小鼠的存活率的效果的图。*p＝0.05(与水给药组的比较)。n＝9。图中，方块表示奥司他韦给药组(阳性对照组)，黑色圆圈表示olb6378给药组，白色圆圈表示水给药组的存活率。
[0031]
图2是示出olb6378菌株对流感病毒下呼吸道感染小鼠的支气管肺胞清洗液中的感染性病毒价的效果的图。**p<0.01、***p<0.001(与水给药组的比较)。
具体实施方式
[0032]
以下对本发明进行详细地说明。
[0033]
本发明涉及两歧双歧杆菌、优选为具有呼吸器官中的流感病毒增殖抑制作用的两歧双歧杆菌作为抗流感病毒剂的用途。
[0034]
本发明中使用的“两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)”是双歧杆菌属的1个菌种。本发明中两歧双歧杆菌的细菌的分类可以依据通常的分类学上的基准来进行。本发明中使用的两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)的菌株没有特别限定，优选具有呼吸器官中的流感病毒增殖抑制作用。
[0035]
本发明中，两歧双歧杆菌“具有呼吸器官中的流感病毒增殖抑制作用”是指：具有能够抑制呼吸器官、即上呼吸道和/或下呼吸道中流感病毒的增殖的能力。“上呼吸道”典型地指鼻腔、咽和喉咙。“下呼吸道”典型地指气管、支气管和肺。本发明中使用的两歧双歧杆菌能够抑制呼吸器官、例如鼻腔、咽、喉咙、气管、支气管和肺中的至少1者(例如，2者以上)中流感病毒的增殖。
[0036]
本发明中，呼吸器官中的流感病毒的增殖的“抑制”是指：在给予被检物质(此处，
两歧双歧杆菌)的情况，与代替被检物质而给予了水的情况相比，从呼吸器官回收的流感病毒的感染性病毒价降低。这样的感染性病毒价的降低优选为统计学的显著降低，可以是例如根据dunnett-t检验而在统计学上显示出显著差异的降低。与代替被检物质而给予了水的情况相比，给予了被检物质时的这样的感染性病毒价的降低可以是平均值的30％以上或40％以上、例如50％以上的降低。
[0037]
作为本发明中可以使用的两歧双歧杆菌的例子，可列举出两歧双歧杆菌olb6378(bifidobacterium bifidum olb6378)株。两歧双歧杆菌olb6378株于2004年10月26日(原保藏日)在国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(npmd)(日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室邮政编码292-0818)以保藏编号nite p-31进行保藏后，于2006年1月18日从原保藏转移至基于布达佩斯条约的保藏，保藏编号变更为nite bp-31。两歧双歧杆菌olb6378株具有呼吸器官中的流感病毒增殖抑制作用。需要说明的是，两歧双歧杆菌olb6378株的目前的保藏人是株式会社明治。
[0038]
本发明涉及以两歧双歧杆菌、优选以含有具有呼吸器官中的流感病毒增殖抑制作用的两歧双歧杆菌作为有效成分的、抗流感病毒剂。本发明的抗流感病毒剂可以以有效量包含这样的两歧双歧杆菌。
[0039]
本发明的抗流感病毒剂能够用于抑制流感病毒的增殖、典型的是抑制呼吸器官中的流感病毒的增殖。成为适用对象的流感病毒不限定于以下情况，可以是a型(苏联型、pdm09型、香港型等)、b型、c型或新型。a型流感病毒可以是h1n1、h1n2、h2n2、h2n3、h3n2、h5n1、h5n6、h7n7、h7n9或h10n8等亚型，但不限定于这些。
[0040]
本发明中，两歧双歧杆菌只要保持抗流感病毒作用、优选为呼吸器官中的流感病毒增殖抑制作用、抑制后述的流感的重症化的作用，就可以以任意的形态用于抗流感病毒剂、以及后述的食品和药物。一个实施方式中，抗流感病毒剂、食品和药物中使用的两歧双歧杆菌可以是以任意的方法制得的菌体和/或可以是任意的菌体处理物、例如选自由两歧双歧杆菌菌体的培养物、加热处理物、干燥物(例如，冷冻干燥粉末等冷冻干燥物)和浓缩物、以及这些当中2种以上的组合组成的组。两歧双歧杆菌可以是死菌体或活菌体。一个实施方式中，两歧双歧杆菌可以是经加热处理的浓缩菌液或其冷冻干燥物。一个实施方式中，两歧双歧杆菌的加热处理可以以70～90℃(例如，75～85℃)进行，例如，可以进行5～30分钟加热，但不限定于这些条件。
[0041]
本发明的上述的两歧双歧杆菌和包含其的抗流感病毒剂具有抑制流感的重症化的作用。本发明中“流感的重症化”是指在感染流感病毒时有可能引起存活率降低的较重的病状，作为这种较重的病状，例如可列举出：支气管炎、肺炎、流感脑病、脑炎、中耳炎、热性痉挛等并发症、高热、强烈的全身倦怠感等。本发明中“流感重症化的抑制”包括：在感染流感病毒时使成为这种较重病状的概率降低；阻止成为较重病状或减轻其严重程度和促进早日从较重病状中恢复。因此本发明的抗流感病毒剂可以用于抑制流感的重症化。流感重症化的抑制例如还可以以改善感染流感病毒后的存活率作为指标进行。与代替被检物质而给予了水的情况相比，给予了被检物质(此处，两歧双歧杆菌)时的感染流感病毒后的存活率增加时，可以判断该被检物质能够抑制流感的重症化。这样的存活率的增加优选为统计学上的显著增加，例如可以是通过基于kaplan-meier法的log-rank检验在统计学上显示出显著差异的增加。本发明的抗流感病毒剂(和上述的两歧双歧杆菌)能够抑制流感的重症化，
由此能够降低流感重症化的风险。
[0042]
本发明还提供包含本发明的抗流感病毒剂(或上述的两歧双歧杆菌)的食品或药物。包含本发明的抗流感病毒剂(或上述的两歧双歧杆菌)的食品和药物在将其摄取或给药的对象中，能够抑制流感的重症化。本发明的食品和药物能够抑制呼吸器官中的流感病毒的增殖。本发明的食品和药物可以用于抑制流感的重症化。本发明的食品和药物还能够降低流感的重症化的风险。
[0043]
本发明的抗流感剂、食品和药物可以包含可经口摄取用或药学上允许的添加剂。作为可接受经口摄取用或药学上允许的添加剂，例如可以列举出：载体(固体、液体载体等)、赋形剂、表面活性剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、溶解辅助剂、悬浮化剂、涂覆剂、着色剂、矫味矫臭剂、保存剂、缓冲剂、ph调节剂、稀释剂、稳定化剂、喷射剂、抗氧化剂、增稠剂、甜味剂等，但不限定于这些。这些添加剂可以单独使用或组合使用两种以上，可以根据制剂的剂型、食品的种类或形状进行适宜使用。作为载体，例如可列举出：水、经口给药中可接受的有机溶剂、胶原、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧乙烯基聚合物、藻酸钠、水溶性葡聚糖、水溶性糊精、羧甲基淀粉钠、果胶、黄原胶、阿拉伯胶、酪蛋白、明胶蛋白、琼指、甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、石蜡、硬脂醇、硬脂酸、人血清白蛋白、甘露糖醇、山梨醇、乳糖、经口给药中可接受的表面活性剂等。
[0044]
本发明中的“食品”没有特别限定，包括饮料、除饮料以外的食品和功能性食品。本发明中的“食品”可以是食品组合物。本发明的食品的种类没有特别限定，作为饮料，例如可列举出：发酵乳(酸奶饮料等)、乳酸菌饮料、乳饮料(咖啡牛奶、水果牛奶等)、茶系饮料(绿茶、红茶、乌龙茶等)、水果/蔬菜系饮料(包含橙子、苹果、葡萄等的果汁、西红柿、大蒜等的蔬菜汁的饮料)、酒精性饮料(啤酒、发泡酒、葡萄酒等)、经口补水液、碳酸饮料、清凉饮料、水等。对于各种饮料的制造法等，可以参考现有的参考书、例如“最新
·
软饮料”(日文原文《最新
·
ソフトドリンクス
》)(2003)(株式会社光琳)等。另外，作为食品，例如可列举出：发酵乳(凝固型酸乳、软酸奶、奶酪等)、乳制品、配方奶粉、糖果(巧克力、果汁橡皮糖、口香糖、饼干(biscuits)、曲奇(cookie)、果冻、压片糖、冷点等)、速冻食品等。对于各种食品的制造法等，可以参考现有的参考书。
[0045]
本发明的食品可以是功能性食品。作为本发明的“功能性食品”，是指对生物体具有一定功能性的食品，例如包括：日本的特定保健用食品(包括附加条件的特保[特定保健用食品])和包含营养功能食品的保健功能食品、功能性标示食品和特殊用途食品、以及营养辅助食品、健康辅助食品、营养增强剂(例如，片剂、包衣片剂、糖衣片剂、胶囊和液剂等各种剂型)和美容食品(例如，减肥食品)等所谓健康食品全部。另外，本发明的功能性食品包括适用基于法典(粮农组织/世卫组织联合食品标准委员会)的食品法规的健康声明(health claim)的健康食品。
[0046]
本发明的功能性食品可以是片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、胶囊剂等固体制剂、液剂、悬浮剂、糖浆剂等液体制剂或凝胶剂、膏剂等，也可以是通常的饮食品的形状(例如，饮料、酸奶、点心等)。
[0047]
本发明的食品可以用于容易患流感或患病时流感容易重症化的对象。本发明的食品可以用于通过新生儿(尤其包括出生后不久的新生儿、健康的新生儿、未成熟婴儿、早产儿、低体重儿等)、婴儿、幼儿、小孩、病人、虚弱体质的健康人、身体状况不佳的健康人、孕产
妇、高龄者(典型的是60岁以上)、慢性疾病患者(例如具有心脏病、呼吸器官疾病、肾功能病变、免疫功能病变或糖尿病等代谢性疾病的患者)等、以及其家族和其他密切接触者(医护人员、育儿/教育工作者、生活援助工作者等)的摄取。本发明的食品例如可以是病人用食品、孕产妇/哺乳期妇女用奶粉、婴儿用配方奶粉、婴儿用配方奶、高龄者用食品、护理用食品等特殊用途食品。本发明的食品可以是奶粉、流体食物、半流体食物、粉末流体食物、护理食品、幼儿食品、增稠食品、能量糊剂、营养粉、营养增强食品、液体奶等。
[0048]
本发明的两歧双歧杆菌或抗流感病毒剂只要利用作为本领域技术人员能利用的任意适宜的方法含有在食品中即可。例如，可以将本发明的两歧双歧杆菌制成液体状、凝胶状、固体状、粉末状或颗粒状后，将其配混于食品中。或者也可以将本发明的两歧双歧杆菌或抗流感病毒剂直接混合或溶解于饮食品的原料中。本发明的两歧双歧杆菌或抗流感病毒剂还可以涂布、覆盖、浸透或吹送于饮食品上。本发明的两歧双歧杆菌或抗流感病毒剂可以均匀地分散于饮食品中，还可以不均匀地存在。还可以制成含有本发明的两歧双歧杆菌或抗流感病毒剂的胶囊等。可以用可食用薄膜、食用涂覆剂等包裹本发明的两歧双歧杆菌或抗流感病毒剂。另外，在本发明的两歧双歧杆菌或抗流感病毒剂中加入适合的赋形剂等后，可以成型为片剂等形状。可以进一步加工成含有本发明的两歧双歧杆菌或抗流感病毒剂的饮食品，这样的加工品也包括在本发明的范围内。一个实施方式中，可以将对本发明的两歧双歧杆菌菌体浓缩物进行加热处理而成者添加至食品原料(例如，奶粉调合液、流体食物原料等)中，进行加热杀菌并浓缩干燥。
[0049]
本发明的两歧双歧杆菌或抗流感病毒剂在食品中的配混量没有特别限定，可以根据情况而定。对于本发明的两歧双歧杆菌或抗流感病毒剂的具体的配混量，本领域技术人员可以考虑食品的种类、所需口味、口感进行适宜确定。通常相对于食品的总重量，以所配混的两歧双歧杆菌的菌体干燥重量相当量(菌体固体成分)的比率计，两歧双歧杆菌的配混量可以为0.0001～100重量(质量)％、例如可以为0.0005～100重量(质量)％或0.001～99重量(质量)％。一个实施方式中，相对于食品的总重量，以所配混的两歧双歧杆菌的菌体干燥重量相当量(菌体固体成分)的比率计，可以将0.0001～100重量(质量)％、例如0.001～99重量(质量)％、0.01～10重量(质量)％或0.01～0.1重量(质量)％的两歧双歧杆菌配混于固体食品、例如粉末状食品(配方奶粉、粉末调味品等)、颗粒状食品、片状食品、易崩解性固体食品等中。这样的固体食品还可以在溶解于水或饮料等能饮用的液态介质中制成饮料(液体奶(液态乳)、经口补水液等)、液体食品(汤、咖喱等)、液体调味品、流体食物、半流体食物、增稠食品等后来摄取。在另一个实施方式中，相对于食品的总重量，以所配混的两歧双歧杆菌的菌体干燥重量相当量(菌体固体成分)的比率计，可以将0.0001～100重量(质量)％、例如0.0005～10重量(质量)％或0.001～5重量(质量)％的两歧双歧杆菌配混于液态或半液态食品、例如汤、咖喱、发酵乳、饮料(液体奶(液态乳)、经口补水液等)、液体调味品、流体食物、半流体食物、增稠食品等中。需要说明的是，用菌体干燥重量相当量表示的两歧双歧杆菌的上述配混量并不限定地解释为将两歧双歧杆菌以干燥菌体的形态配混于食品等中，本发明的两歧双歧杆菌只要保持抗流感病毒作用、特别是呼吸器官中的流感病毒增殖抑制作用和/或抑制流感的重症化的作用就可以以任意的形态配混于食品等中。
[0050]
本发明的食品可以进一步包含任意的食品成分。本发明的食品可以包括水、蛋白质、糖质、脂质、维生素类、矿物类、氨基酸、有机酸、有机碱、果汁、香料类等。作为蛋白质，例
如可列举出：全脂奶粉、脱脂奶粉、部分脱脂奶粉、酪蛋白、乳清粉、乳清蛋白、乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物、α-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳清蛋白、乳铁蛋白、大豆蛋白、鸡蛋蛋白、肉蛋白等动植物性蛋白、这些水解物、黄油、乳清矿物、奶油、乳清、非蛋白氮、唾液酸、磷脂、乳糖等源自各种乳的成分等。作为糖质，可列举出通常的糖类、加工淀粉(糊精、可溶性淀粉、英国淀粉、氧化淀粉、淀粉酯、淀粉醚等)、食物纤维等。作为脂质，例如可列举出：猪油、鱼油等、它们的分提油、氢化油、酯交换油等动物性油脂；棕榈油、红花油、玉米油、菜籽油、椰子油、它们的分提油、氢化油、酯交换油等植物性油脂等。作为维生素类，例如可列举出：维生素a、胡萝卜素类、维生素b族、维生素c、维生素d族、维生素e、维生素k族、维生素p、维生素q、维生素b3、烟酸、泛酸、生物素、肌醇、胆碱、叶酸等，作为矿物类，例如可列举出：钙、钾、镁、钠、铜、铁、锰、锌、硒、乳清矿物等。作为有机酸，例如可列举出：苹果酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸等。这些成分可以单独使用或组合使用两种以上。
[0051]
本发明的药物可以是片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、胶囊剂等固体制剂、凝胶剂或液剂、悬浮剂、糖浆剂等液体制剂等任意的剂型。本发明中的“药物”可以是药物组合物。
[0052]
本发明的抗流感剂、食品和药物可以进一步包含具有抗流感作用的其它物质。
[0053]
本发明的抗流感剂、食品和药物可以是经口给药用或非经口给药用，但优选为经口给药用。
[0054]
本发明还提供治疗或预防流感的方法，其包括向对象给药本发明的抗流感剂、食品或药物。本发明另外还提供抑制流感的重症化的方法，其包括向对象给药本发明的抗流感剂、食品或药物。本发明中“给药”包括：针对食品使用的“摄取”、针对药物所使用的“给药”、细胞、组织的体内的“处理”中的任意者。本发明中“经口给药”(也称为经口/经肠给药)除了包括从口进行的给药或摄取之外，还包括基于借助鼻管、胃瘘或肠瘘管等的经管营养法的给药。本发明另外还提供降低流感的重症化的风险的方法，其包括向对象给予本发明的抗流感剂、食品或药物。本发明进而还提供本发明的上述的两歧双歧杆菌、例如两歧双歧杆菌olb6378株在制造本发明的抗流感剂、食品或药物中的应用。
[0055]
本发明的抗流感剂、食品和药物的给药量可以考虑要给予的对象的年龄和体重、给药路径、给药次数等并根据本领域技术人员的斟酌决定变更为宽广范围。作为本发明的两歧双歧杆菌的给药量，没有特别限定，例如，每一次用量可以为1
×
105～1
×
10
11
细胞、1
×
106～1
×
10
10
细胞或1
×
107～1
×
10
10
细胞的量。
[0056]
一个实施方式中，本发明的抗流感剂、食品和药物可以以1天1次以上、例如1天2次或1天2次以上向对象给予。本发明的抗流感剂、食品和药物可以持续向对象给药，例如可以每天给药。本发明的抗流感剂、食品和药物还可以在1周、2周、3周或4周或4周以上(例如1年以上)向对象给药。
[0057]
本发明的抗流感剂、食品和药物可以在感染流感病毒之前或之后向对象给药，但优选在感染流感病毒之前进行给药。
[0058]
给予本发明的抗流感剂、食品和药物的对象可以是任意的动物、优选为以人、大猩猩、黑猩猩等灵长类、狗、猫、小鼠、大鼠、兔子、马、牛、绵羊、山羊等为首的哺乳动物或其细胞等。给予本发明的抗流感剂、食品和药物的对象可以是容易患流感或患病时流感容易重症化的对象。优选的实施方式中，人对象可以是如上述那样的新生儿、婴儿、幼儿、小孩、病人、虚弱体质的健康的人、身体状况不佳的健康的人、孕产妇、高龄者、慢性疾病患者等、以
及其家族和其它密切接触者，但对象不限定于这些，本发明的抗流感剂、食品和药物可以面向具有感染流感的风险的广泛的对象来使用。
[0059]
实施例
[0060]
以下，使用实施例对本发明进行进一步具体地说明。但是，本发明的保护范围不限定于这些实施例。
[0061]
[实施例1]olb6378浓缩粉末的制备
[0062]
将两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)olb6378株(保藏编号nitebp-31)在乳清蛋白分解培养基(以酶分解的乳清蛋白作为主要氮源的培养基)中进行厌氧中和培养，得到浓缩菌液。将浓缩菌液以80℃培育10分钟以上，然后进行冷冻干燥。得到的冷冻干燥物显示出超过2.5
×
10
11
细胞/g的菌体浓度。将由此制备的、加热处理olb6378菌株的冷冻干燥物称为olb6378浓缩粉末，如后所述，对抗流感病毒作用进行了试验。
[0063]
[实施例2]olb6378浓缩粉末的抗流感病毒作用的评价
[0064]
通过感染流感病毒后的“存活率”和“呼吸器官中的感染性病毒价(病毒增殖水平)”这方面评价了实施例1中制备的olb6378浓缩粉末的抗流感病毒作用。
[0065]
a)存活率
[0066]
对于balb/c小鼠(雌性、8周龄)(clea japan,inc.)，以0.2ml/个体/天的用量在4周中每天经口给药水(水给药组)或olb6378浓缩粉末的20％悬浮液(olb6378/双歧杆菌给药组)。在经口给药开始3周后的时间点通过麻醉药somnopentyl
(r)
(以有效成分戊巴比妥钠量计为5mg/kg体重)的腹腔内给药使小鼠麻醉，将小鼠驯化流感病毒株a/pr/8/34(h1n1)悬浮液20μl(2
×
ld
50
[相当于半数致死量的2倍量]、0.1％bsa-pbs)经鼻接种于右侧鼻腔中，引发了流感病毒的下呼吸道感染。另外，作为阳性对照，代替水或olb6378浓缩粉末的20％悬浮液的给药，将作为抗流感药的“奥司他韦”(1mg/kg体重/天)与上述同样的流感病毒接种1小时前至6天后为止进行经口给药。自病毒接种开始起至21天记录了小鼠的存活率。存活检验通过kaplan-meier法的log-rank检验进行。
[0067]
将结果示于图1。经口给予了水的小鼠(水给药组)中，自病毒接种(感染)8天后开始观察到小鼠的死亡，在感染10天后存活率急剧降低至约11％，在感染20天后全部小鼠死亡(存活率0％)。相对于此，经口给予了olb6378浓缩粉末的20％悬浮液的小鼠(olb6378给药组)中，虽然自病毒接种(感染)9天后起开始观察到小鼠的死亡，但感染10天后的存活率仍约为56％，感染21天后显示出约为22％的存活率。基于olb6378浓缩粉末的给药得到的存活率的改善与水给药组相比，具有统计学显著差异(p＝0.05、图1)。
[0068]
需要说明的是，让经口给予了抗流感药“奥司他韦”的小鼠下呼吸道感染流感病毒的阳性对照组中，未观察到小鼠的死亡(图1)。
[0069]
b)感染性病毒价(病毒增殖水平)
[0070]
对于balb/c小鼠(雌性、8周龄)(clea japan,inc.)，以0.2ml/个体/天的用量在25天(自病毒接种21天之前起至3天后为止)每天经口给药水(水给药组)或olb6378浓缩粉末的20％悬浮液(olb6378给药组；试验组)。自经口给药开始3周后的时间点通过麻醉药somnopentyl
(r)
(以有效成分戊巴比妥钠量计为5mg/kg体重)的腹腔内给药将小鼠麻醉，将小鼠驯化流感病毒株a/pr/8/34(h1n1)悬浮液20μl(2
×
ld
50
[相当于半数致死量的2倍量]、0.1％bsa-pbs)经鼻接种于右侧鼻腔中，引发了流感病毒的感染。另外，作为阳性对照，代替
水或olb6378浓缩粉末的20％悬浮液的给药，将作为抗流感药的“奥司他韦”(1mg/kg体重/天)与上述同样的流感病毒接种1小时前至3天后为止进行经口给药。在病毒接种4天后，制备了小鼠的支气管肺胞清洗液(balf)。利用斑块法测定了支气管肺胞清洗液的感染性病毒价。具体而言，将mdck细胞(源自狗肾脏尿细管上皮细胞的细胞株)暴露于支气管肺胞清洗液中后，计数由于病毒感染所致的细胞变性而形成的斑块数量，将支气管肺胞清洗液每1ml的斑块形成数量评价为感染性病毒价。统计处理通过分散分析法(anova)和dunnett检验来进行。
[0071]
将结果示于图2。感染流感病毒4天后，经口给予了水的小鼠(水给药组)中，观察到支气管肺胞清洗液中较高的感染性病毒价，显示出确立了下呼吸道感染。另一方面，经口给予了olb6378浓缩粉末的20％悬浮液的小鼠(olb6378给药组)中，与水给药组相比，观察到支气管肺胞清洗液中的感染性病毒价统计学的显著降低(与水给药组相比降低超过53％)(p<0.01、图2)。
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需要说明的是，让经口给予了抗流感药“奥司他韦”的小鼠下呼吸道感染流感病毒的阳性对照组中，与水给药组相比，也观察到支气管肺胞清洗液中的感染性病毒价的显著降低(p<0.001、图2)。
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由上述的存活率和感染性病毒价(病毒增殖水平)的试验结果示出：olb6378菌株抑制感染流感病毒后的支气管和肺中的病毒增殖，而且改善存活率。该结果示出：olb6378菌株具有抗流感病毒作用，特别是具有抑制流感的重症化的效果。
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产业上的可利用性
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本发明可以用于提供具有抑制流感的重症化的效果的抗流感制品。通过以食品等的形态日常摄取本发明的抗流感病毒剂，从而能够抑制感染流感病毒时症状的重症化。本发明可以提供尤其对于抑制新生儿(特别出生后不久的新生儿)、婴幼儿、小孩、病人、高龄者、慢性疾病患者等流感容易重症化的对象中的流感症状的重症化有用的抗流感制品。
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