包含麦芽化小麦的可消耗产品的制作方法

本公开涉及包含麦芽化(malted)小麦的可消耗产品，其中，所述可消耗产品在消耗后在对象中诱导抗分泌因子(af)蛋白和/或其片段的内源性产生。可消耗产品的麦芽化小麦包含(i)2-甲氧基苯酚和(ii)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮衍生物(本文中称为dimboa衍生物，选自由如本文所述的dimboa_hex和dimboa_hex_hex组成的组)，其中，(a)与相应的非麦芽化小麦相比，(i)的浓度更高和/或基本相同，并且(b)与相应的非麦芽化小麦相比，(ii)的浓度更高。在一个实施方式中，本公开涉及一种包含麦芽化小麦的浸出液的可消耗产品，其中，所述麦芽化小麦的浸出液包含浓度为至少20.000ng/ml的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex和浓度为至少700ng/ml的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex。在另一个实施方式中，本公开涉及一种包含麦芽化小麦的可消耗产品，其中，所述麦芽化小麦包含浓度为至少60ng/mg的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex和浓度为至少2ng/mg的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex。本公开进一步涉及根据本文所述的方法生产的可消耗产品，以及该可消耗产品作为人和/或动物的食品或饲料的用途。
背景技术：
：抗分泌因子(af)蛋白抗分泌因子(af)是体内天然存在的一类蛋白质。抗分泌因子(af)蛋白是41kda的蛋白质，最初被描述为提供针对腹泻疾病和肠道炎症的保护(综述参见lange和2001)。抗分泌因子(af)蛋白早已被测序并克隆了其cdna(参见seqidno：1)。抗分泌活性似乎主要是由位于抗分泌因子(af)蛋白序列上的氨基酸位置35和50之间的肽发挥的，该肽至少包含4个至16个(例如4个、6个、7个、8个或16个)共有序列的氨基酸。af的生物效应由包含所述共有序列的至少6个氨基酸的任何肽或多肽(如seqidno:2(af-6)所示)或不改变多肽和/或肽的功能的其修饰(例如通过如seqidno：3(af-16)或seqidno：4(af-8)所示的肽)来发挥。已经表明抗分泌因子(af)蛋白在一定程度上与蛋白质s5a和rpn10是同系的，其构成所有细胞、更具体地在19s/pa700帽中的主要成分26s蛋白酶体的亚基。在本公开中，抗分泌因子(af)蛋白被定义为具有相同功能特性的一类同系物蛋白。抗分泌因子(af)蛋白也与血管抑制素(angiocidin)高度相似，血管抑制素(angiocidin)是另一种已知与血小板反应蛋白-1结合并与癌症进展相关的蛋白异构体。免疫化学和免疫组织化学研究表明，存在抗分泌因子(af)蛋白，并且体内大多数组织和器官也可合成该蛋白。先前已表征了包含止泻序列的合成肽(参见wo97/08202；wo05/030246；wo2007/126364；wo2018/015379)。先前已经公开了抗分泌因子(af)蛋白和肽(asp)例如在肠和中枢神经系统中在霍乱毒素攻击后使病理性流体输送和/或炎症反应正常化(wo97/08202)。wo97/08202公开了某些抗分泌蛋白的结构，并表征了它们的活性部分。通过重组基因工程或通过固相技术制备的并具有确定结构的合成asp已显示出对活细胞膜上的体液流动具有总体控制作用。因此，在wo97/08202中，已经提出具有诱导af内源性合成或摄取添加的af的能力的食品和饲料可用于治疗水肿、腹泻、脱水和炎症。wo98/21978公开了具有酶活性的产品在生产食品中的用途，所述食品在消耗后诱导抗分泌因子(af)蛋白的形成。wo00/038535进一步公开了像这样的被富含有和/或天然富含天然抗分泌因子(af)蛋白的食品。抗分泌因子(af)蛋白及其片段还显示出在与细胞损失和/或增加相关的疾患的治疗中改善神经组织的修复及干细胞和祖细胞及其衍生的细胞的增殖、凋亡、分化和/或迁移(wo05/030246)，并且还显示出在治疗和/或防止高眼压(wo07/126364)与治疗和/或防止筋膜室综合征(wo07/126363)中同样有效。从瑞典专利se9000028-2(公开号466,331)已知，抗分泌因子(af)或抗分泌因子(af)蛋白(在se9000028-2中称为asp：也称为fil)的形成可以通过在动物饲料中添加某些糖、氨基酸和酰胺来刺激。用于形成有效量asp的这些物质的种类和量通过专利中公开的方法来确定。简单地说，该方法涉及大鼠小肠中标准化分泌响应的测量。从该专利可以明显看出，所形成的诱导asp引导体液分泌到肠中。在所述专利中，天然抗分泌蛋白的含量或量由其对液体分泌到已被霍乱毒素攻击的实验室大鼠的小肠中的作用来限定(rtt-检测)。与没有asp的对照相比，一个asp单位(fil单位)相当于大鼠肠中的液体流量减少50％。抗分泌蛋白在极少的量时具有活性，因此，通过其作用来确定它们往往比通过其质量来确定它们更容易。从wo98/21978已知，可以通过消耗某种具有酶活性的食品在体内诱导asp的形成。诱导的作用以及由此导致的asp的形成根据个体及其症状而变化，并且发生的强度和诱导期目前无法预测。然而，它们可以随后被测量，并且可以在所述测量的指导下进行必要的校正。提到了产品可以是麦芽化的谷物。苯并噁嗪类(benzoxazinoids)wo2009/115093公开了含有苯并噁嗪类的谷物的谷粒或碎解谷粒用于制造具有改善健康作用的食品的用途。公开了谷粒的水热预处理导致增加的苯并噁嗪类含量。本公开的目的是提供一种可消耗产品(例如食品、饲料和/或食品补充剂或饲料补充剂)，其包含麦芽化小麦和/或所述麦芽化小麦的浸出液，所述小麦在麦芽化之后包含足够高的量的在消耗后在对象(例如人或动物)中刺激和/或诱导抗分泌因子(af)蛋白、肽和/或其片段的内源性产生的化合物。此外，本公开的目的是克服或至少减轻用于生产包含麦芽化小麦和/或所述麦芽化小麦的浸出液的食品的已知方法的一些缺点，所述小麦在麦芽化之后包含具有改善健康作用的化合物(例如酚酸和/或苯并噁嗪类)。定义和缩写蛋白质是由通过肽键连接在一起的氨基酸残基构成的生物大分子。作为氨基酸的线性聚合物的蛋白质也称为多肽。典型地，蛋白质具有50个至800个氨基酸残基，因此分子量为约6000至约几十万道尔顿或更大。小蛋白质称为肽、多肽或寡肽。在本文中，术语“蛋白质”、“多肽”、“寡肽”和“肽”可互换使用。肽可以具有很少的氨基酸残基，例如2个至50个氨基酸残基(aa)。在本文中，术语“抗分泌的”是指抑制或减少分泌和/或流体输送。因此，术语“抗分泌因子(af)蛋白”是指一类能够抑制或减少或以其他方式调控体内流体输送以及分泌的蛋白质。在本文的上下文中，术语“抗分泌因子蛋白”、“抗分泌因子(af)蛋白”、“af-蛋白”、af、或其同系物、其衍生物或其片段可与wo97/08202中所定义的术语“抗分泌因子”或“抗分泌因子蛋白”互换使用，并且是指抗分泌因子(af)蛋白或肽、或具有抗分泌功能和/或等效功能的和/或类似活性的其同系物、其衍生物和/或其片段、或者是指不改变多肽功能的其修饰。因此，应该理解“抗分泌因子”、“抗分泌因子蛋白”、“抗分泌肽”、“抗分泌片段”或“抗分泌因子(af)蛋白”在本文的上下文中也可以指其衍生物、其同系物或其片段。这些术语都可在本公开的上下文中互换使用。此外，在本文的上下文中，术语“抗分泌因子”可缩写为“af”。在本文的上下文中，抗分泌因子(af)蛋白还指如之前在wo97/08202和wo00/38535中定义的具有抗分泌性的蛋白质。抗分泌因子还在例如wo05/030246中公开。术语“asp”在本文的上下文中用于“抗分泌蛋白”，即天然抗分泌因子(af)蛋白。在本文的上下文中，“af活性”被测量为在消耗本发明的可消耗产品后通过在人或动物中诱导超过0.5(例如至少0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.5或2)个af单位/ml血液，血液中af单位的升高。af活性的增加由其对液体分泌到已被霍乱毒素攻击的实验室大鼠的小肠中的作用来限定(rtt-检测/结扎环测定)。与没有asp的对照相比，一个asp/af单位(fil单位)相当于大鼠肠中的液体流量减少50％，即相当于每升血浆中约有1.5nmaf蛋白(1.5nm/l)。af活性也可以通过使用如wo2015/181324(抗分泌因子复合物测定)中所述的试剂盒、测定和/或方法来测量，以验证根据本发明的可消耗产品的有效性，作为人和/或动物对相同的可消耗产品在消耗后的依从性。在本文的上下文中，“功能性食品”是指具有有益健康的功能、即对人或动物的健康具有有益作用的食品。在本文的上下文中，表述“病理性高水平的体液排出”是指偏离人和/或动物中被认为是正常和/或健康的水平的例如来自细胞内液和/或细胞外液的体液排出的水平，细胞外液选自由血管内液、间质液、淋巴液和跨细胞液组成的组。具体地，体液排出的水平可以使得其可以由适合治疗患者的健康护理专业人员(例如护士或医师)来考虑。在本文的上下文中，术语“病理性的”通常用于描述异常的解剖或生理状况。术语“疾病病理学”通常包括与人疾病一起出现的人体器官和组织的原因、过程和变化。许多最常见的病理疾病是造成死亡和残疾的原因。af：抗分泌因子，抗分泌因子(af)蛋白全长af蛋白质(如seqidno：1所示)af-6：六肽chsktr(如seqidno：2所示)af-16：由氨基酸vchsktrsnpennvgl构成的肽(如seqidno：3所示)af-8：七肽vchsktr(如seqidno：4所示)八肽ivchsktr(如seqidno：5所示)rtt：用于测量大鼠小肠中标准化分泌响应的方法，如se9000028-2(公开号466331)中公布的用于测量血液中的af(asp)含量的方法glc：葡萄糖hex：己糖g：克ml：毫升μl：微升min.：分钟vol：体积uplc：超高效液相色谱v：伏特ghz：千兆赫lc：液相色谱q-tof：四极飞行时间质谱(高分辨质谱)rp：反相ms：质谱rpm：每分钟转数ppm：百万分比obiwarp：有序双射插值翘曲(orderedbijectiveinterpolatedwarping)mzml：mz(质荷比)技术实现要素：本公开涉及包含麦芽化小麦和/或麦芽化小麦的浸出液的可消耗产品，其中，所述可消耗产品的麦芽化小麦包含(i)2-甲氧基苯酚和(ii)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮衍生物(本文中称为dimboa衍生物，选自由如本文中描述的dimboa_hex和dimboa_hex_hex组成的组)，其中，(a)与相应的非麦芽化小麦相比，(i)的浓度更高和/或基本相同，并且(b)与相应的非麦芽化小麦相比，(ii)的浓度更高。特别地，在一方面，本公开涉及一种包含麦芽化小麦的浸出液的可消耗产品，其中，所述麦芽化小麦的浸出液包含(i)2-甲氧基苯酚和(ii)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮衍生物(选自由如本文中描述的dimboa_hex和dimboa_hex_hex组成的组)，其中，(a)与相应的非麦芽化小麦相比，(i)的浓度更高和/或基本相同，并且(b)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex的浓度为至少20.000ng/ml，2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex的浓度为至少700ng/ml。在另一方面，本公开涉及一种包含麦芽化小麦的可消耗产品，其中，所述麦芽化小麦包含(i)2-甲氧基苯酚和(ii)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮衍生物(选自由如本文中描述的dimboa_hex和dimboa_hex_hex组成的组)，其中，(a)与相应的非麦芽化小麦相比，(i)的浓度更高和/或基本相同，并且(b)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex的浓度为至少60ng/mg，2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex的浓度为至少2ng/mg。本文公开的可消耗产品在消耗后在对象中诱导抗分泌因子(af)蛋白和/或其片段的内源性产生。抗分泌因子(af)蛋白和/或其片段的所述内源性产生的诱导程度可通过向有需要的对象提供适当量的可消耗产品来调节。因此，本发明的可消耗产品可用于治疗、防止和/或预防性治疗以升高水平的和/或病理性高水平的体液排出为特征和/或与升高水平的和/或病理性高水平的体液排出相关的异常生理病症。此外，本发明的可消耗产品可用于治疗和/或防止对患者血液中抗分泌因子蛋白和/或抗分泌蛋白片段的水平升高有响应的病症。例如，可消耗产品可用于治疗对象(诸如人和/或动物)的腹泻、水肿和/或涉及炎症的病症。在另一示例中，用本文所述的可消耗产品治疗的病症可选自由以下组成的组：腹泻、炎性疾病、水肿、自身免疫疾病、癌症、肿瘤、白血病、多尿症、糖尿病、胶质母细胞瘤、创伤性脑损伤、高眼压、青光眼、脂筏功能异常、筋膜室综合征、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、脑炎和美尼尔氏病。在一个示例中，化合物(i)可包含至少一种2-甲氧基苯酚衍生物，其选自由阿魏酸、芥子酸和香草酸组成的组。在一个示例中，化合物(ii)是2,4-二羟基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮的己糖衍生物。该可消耗产品中包含的麦芽化小麦和/或其浸出液可包含另一化合物(iii)，例如2,4-二羟基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮、2,4-二羟基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮的己糖衍生物和/或苯并噁唑啉-2-酮，其中，与相应的非麦芽化小麦相比，(iii)的浓度更高。此外，该可消耗产品可包含麦芽化小麦和/或其浸出液，其中，化合物(ii)中的任一者的浓度都高于化合物(iii)中的任一者的浓度。可消耗产品的麦芽化小麦可从包括以下步骤的方法获得：a.在约5℃至约20℃的温度下将小麦麦芽化，然后b.在不超过80℃下干燥所述小麦。更具体地，可消耗产品的麦芽化小麦可从包括以下步骤的方法获得：a.在约5℃至约20℃的温度下对小麦进行湿浸渍，b.任选地干燥所述小麦，c.在约5℃至约20℃的温度下使所述小麦生长，d.任选地重复所述步骤a至c中的任一者，然后e.在不超过80℃下干燥所述小麦。在上述方法中，步骤a和/或步骤b和/或步骤c可独立地在约8℃或约13℃至约15℃的温度下进行。可消耗产品的麦芽化小麦和/或其浸出液可以由选自由kosack、festival、stava及其任意组合组成的组的小麦品种提供。例如，小麦品种可以是festival和/或stava。可消耗产品的麦芽化小麦和/或其浸出液可以由选择为与由kosack、festival、stava组成的组中的小麦品种的任一者在遗传上密切相关的小麦品种提供。特别地，可消耗产品的麦芽化小麦和/或其浸出液可以由这样的小麦品种提供：该小麦品种被选择为在利用根据本公开中的一者的麦芽化方法进行麦芽化后包含(i)2-甲氧基苯酚和(ii)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮衍生物(本文称为dimboa衍生物，选自由如本文所述的dimboa_hex和dimboa_hex_hex组成的组)，其中，(a)与相应的非麦芽化小麦相比，(i)的浓度更高和/或基本相同，并且(b)与相应的非麦芽化小麦相比，(ii)的浓度更高，尤其是其中，(b)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex的浓度为至少20.000ng/ml，2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex的浓度为至少700ng/ml，或其中，(b)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex的浓度为至少60ng/mg，2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex的浓度为至少2ng/mg。可消耗产品可以作为食品、饲料、食品补充剂、饲料补充剂和/或营养品提供。食品可以是供人消耗的食品，例如但不限于功能性食品。饲料可以是供动物消耗的饲料，例如用于家禽动物和/或家畜动物的饲料。可消耗产品可以以干的或半干的食品物质和/或饲料物质、或以液体提供。在一个实施方式中，食品和/或饲料作为注入物提供。此外，可消耗产品可以是药物产品，例如药剂。附图说明图1a显示diboa、diboa_hex、diboa_二己糖、dimboa、dimboa_glc、dimboa_hex_和dimboa_hex_hex的化学结构。图1b显示dimboa_hex的化学结构。图1c显示dimboa_hex_hex的化学结构。图2a显示2-甲氧基苯酚(愈创木酚)的化学结构。图2b显示阿魏酸的化学结构。图2c显示香草酸的化学结构。图2d显示芥子酸的化学结构。图3a显示dimboa的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图3b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，甲基dimboa的浓度增加。图4a显示dimboa_hex_hex的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图4b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，甲基dimboa_hex_hex的浓度增加。图5a显示dimboa_glc的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图5b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，甲基dimboa_glc的浓度增加。图6a显示boa的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图6b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，boa的浓度增加。图7a显示diboa的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图7b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，diboa的浓度增加。图8a显示diboa_hex的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图8b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，diboa_hex的浓度增加。图9a显示diboa_二己糖的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图9b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，diboa_hex_hex的浓度增加。图10a显示，在接受愈创木酚和阿魏酸的动物中，血液中的af活性显著增加，并且来自kosack小麦麦芽的浸出液也显示出活性。将sprague-dawley大鼠给予饮用水中5μm阿魏酸(n＝10)、5μm愈创木酚(n＝10)或小麦麦芽的浸出液(n＝5)持续14天，或仅给予水作为对照(n＝9)。使用抗af的单克隆抗体作为捕获抗体以及抗补体c3的多克隆抗体作为检测抗体，通过elisa测量血浆中af的含量。af值以反向滴定度给出。与对照相比，在阿魏酸、愈创木酚和麦芽处理的大鼠中，蛋白酶体/c3复合物明显更高(分别为p<0.05、p<0.01和p<0.01)。图10b显示，在接受儿茶素(catechin)和芥子酸的动物中，血液中的af活性显著增加，并且来自kosack小麦麦芽的浸出液也显示出活性(阳性对照)。诱导大鼠血液中的af活性。将大鼠(每组5只动物)给予饮用水中10μm儿茶素、阿魏酸或spc持续14天。该图显示通过elisa测量的血液中的af活性。儿茶素(p<0.001)、芥子酸(p<0.01)或spc(p<0.01)均给予compleasome(蛋白酶体/补体复合物)浓度的显著增加。图11为序列表。图12显示，饮用不同来源的麦芽浸出液的大鼠的血浆中af的活性；festival浸出液和stava浸出液显示出最高的活性。将sprague-dawley大鼠给予饮用水中小麦麦芽浸出液持续14天，或仅给予水作为对照。使用抗af的单克隆抗体(图12a)和抗补体c3的多克隆抗体(图12b)，通过elisa测定血浆中af的含量(johansson等，2009)。af值和c3值以405nm的吸光度给出。与给予自来水的对照大鼠相比，在stava小麦麦芽和festival小麦麦芽的浸出液中，aqf值显著更高(分别地，p<0.01，每组5只动物)。在festival小麦麦芽和hallfreda小麦麦芽中，c3值显著更高。图13a显示水杨酸的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图13b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，水杨酸的浓度增加。图14a和图14b显示，通过靶向分析测量的dimboa_hex和通过非靶向代谢组学测量(来自先前测定)的dimboa_hex之间的相关性(a)、和通过靶向分析测量的dimboa_hex_hex和通过非靶向代谢组学测量(来自先前测定)的dimboa_hex_hex之间的相关性(b)。具体实施方式本公开基于意料不到的发现，即，当麦芽化小麦包含(i)2-甲氧基苯酚和/或其衍生物和(ii)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮衍生物的组合(其中(a)与相应的非麦芽化小麦相比，(i)的浓度更高和/或基本相同，并且(b)与相应的非麦芽化小麦相比，(ii)的浓度更高)时，包含所述麦芽化小麦和/或其浸出液的可消耗产品在消耗后在对象中诱导抗分泌因子(af)蛋白和/或其片段的内源性产生。令人惊讶地发现，在消耗该可消耗产品后，以本文所述的浓度的(i)2-甲氧基苯酚和/或其衍生物和(ii)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮衍生物的组合增加了对象中的抗分泌因子(af)活性。另外，化合物(ii)可以与抗分泌因子(af)活性正相关或负相关。如本文所用，与af活性呈正相关是指化合物浓度的增加伴随af活性的增加。相反，与af活性呈负相关是指化合物浓度的降低伴随af活性的降低。因此，提供了一种可消耗产品，其包含麦芽化小麦和/或麦芽化小麦的浸出液，所述麦芽化小麦和/或麦芽化小麦的浸出液包含(i)2-甲氧基苯酚(在一个实施方式中选自阿魏酸、芥子酸和香草酸)，和(ii)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮衍生物(选自由dimboa_hex、dimboa_hex_hex以及前述化合物的任意组合组成的组)，其中，(a)与相应的非麦芽化小麦相比，(i)的浓度更高和/或基本相同，并且(b)与相应的非麦芽化小麦相比，(ii)的浓度更高，并且其中，所述可消耗产品在消耗后在对象中诱导抗分泌因子(af)蛋白和/或其片段的内源性产生。特别地，本公开涉及一种包含麦芽化小麦的浸出液的可消耗产品，其中，所述麦芽化小麦的浸出液包含(i)2-甲氧基苯酚和(ii)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮衍生物(选自由dimboa_hex和dimboa_hex_hex组成的组)，其中，(a)与相应的非麦芽化小麦相比，(i)的浓度更高和/或基本相同，并且(b)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex的浓度为至少20000ng/ml，2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex的浓度为至少700ng/ml。如实施例5所述，通过uhplc-ms/ms分析测量麦芽化小麦的浸出液中dimboa衍生物的浓度，其中，用900μl的80％甲醇提取100μl的每个样品，剧烈摇动5分钟，并在+4℃下温育2小时。此后，将样品在12.000g下于4℃离心10分钟，并回收上清液。参照dimboa标准品和dimboa_hex标准品测量dimboa衍生物的量，这些标准品在80％甲醇中制备并稀释，校准曲线的范围为10ng/ml至10000ng/ml。通过使用dimboa_hex校准曲线来校准dimboa_hex_hex。如在实施例5中可见，消耗后在对象中有效诱导af的麦芽化小麦变体(本文中由变体k、s和f表示)的浸出液中的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex的浓度为至少20000ng/ml，例如至少28388ng/ml、23370ng/ml、28174ng/ml、25213ng/ml、23520ng/ml、31161ng/ml、40115ng/ml、44.291ng/ml、或43860ng/ml。因此，消耗后在对象中有效诱导af的麦芽化小麦变体的浸出液中的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex的浓度为约20000ng/ml至45000ng/ml，例如23370ng/ml至44291ng/ml，例如23520ng/ml至44291ng/ml。如在实施例5中进一步可见，消耗后在对象中有效诱导af的麦芽化小麦变体(本文中由变体k、s和f表示)的浸出液中的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex的浓度为至少700ng/ml，例如至少1118ng/ml、1169ng/ml、1102ng/ml、731ng/ml、837ng/ml、787ng/ml、1313ng/ml、1373ng/ml、或1326ng/ml。因此，消耗后在对象中有效诱导af的麦芽化小麦变体的浸出液中的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex的浓度为约700ng/ml至1400ng/ml，例如731ng/ml至1373ng/ml，例如1102ng/ml至1373ng/ml。如本公开的实施例1中所描述的，100ml浸出液对应于约33g粗粒麦芽化小麦。因此，本发明进一步特别涉及包含麦芽化小麦的可消耗产品，其中，所述可消耗产品的麦芽化小麦包含(i)2-甲氧基苯酚和(ii)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮衍生物(选自由dimboa_hex和dimboa_hex_hex组成的组)，其中，(a)与相应的非麦芽化小麦相比，(i)的浓度更高和/或基本相同，以及(b)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex的浓度为至少60ng/mg粗粒麦芽化小麦，例如至少60ng/mg粗粒麦芽化小麦、70ng/mg粗粒麦芽化小麦、80ng/mg粗粒麦芽化小麦、90ng/mg粗粒麦芽化小麦或100ng/mg粗粒麦芽化小麦，并且2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex的浓度为至少2ng/mg粗粒麦芽化小麦，例如至少2ng/mg粗粒麦芽化小麦、3ng/mg粗粒麦芽化小麦、4ng/mg粗粒麦芽化小麦、5ng/mg粗粒麦芽化小麦、6ng/mg粗粒麦芽化小麦、7ng/mg粗粒麦芽化小麦、8ng/mg粗粒麦芽化小麦、9ng/mg粗粒麦芽化小麦或10ng/mg粗粒麦芽化小麦。本文所述的2-甲氧基苯酚(愈创木酚)的衍生物可以是阿魏酸和/或芥子酸和/或香草酸。如图2a至图2d所示，阿魏酸、香草酸和芥子酸在它们的化学结构中包括愈创木酚部分。如本文的附图所示，(ii)的化合物具有非常不同的化学结构。例如，(ii)的化合物可以是如图1所示的异羟肟酸。然而，从它们随着化合物(ii)的浓度增加或降低而增加af活性的意义上说，它们都对af活性具有有益的影响。另外地或替选地，化合物(ii)可选自由以下组成的组：(ii)2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮衍生物。如本文所用，2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮可以称为dimboa。此外，如本文所用，dimboa的衍生物可以是葡萄糖或己糖衍生物，如图1所示。特别地，化合物(ii)可以选自由以下组成的组：2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex和2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex。此外，本文所述的麦芽化小麦或其浸出液还可包含：(iii)选自由以下组成的组的化合物：2,4-二羟基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮或其己糖衍生物、苯并噁唑啉-2-酮、以及上述化合物的任意组合，其中，与相应的非麦芽化小麦相比，(iii)的浓度更高。本文所述的可消耗产品可包含高于(iii)的化合物中的任一者的浓度的(ii)的化合物中的任一者的浓度。替选地，(ii)的化合物的组合的浓度可高于(iii)的化合物的组合的浓度。应当理解，苯并噁嗪类化合物2,4-二羟基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮是苯并噁嗪异羟肟酸，其可以被称为diboa。此外，如本文所用，苯并噁唑啉-2-酮是苯并噁嗪类，其是可以命名为boa的苯并噁唑啉酮。本文所述的可消耗产品以在消耗后在对象中足以诱导抗分泌因子(af)蛋白和/或其片段的内源性产生的量包含麦芽化小麦和/或其浸出液。可消耗产品的具体量可以根据要治疗的病症来调整。本领域技术人员可以使用本领域已知的方法来确定该量，例如通过单抗体elisa(johansson等，2009)或通过双抗体elisa(等，2015)进行的本文所述的免疫测定(酶联免疫吸附测定(elisa))中的抗分泌因子复合物的测定。在一个方法中，如实施例1至实施例3中所用的，血浆样品通过琼脂糖亲和层析纯化，然后通过抗af的单克隆抗体或抗c3c的多克隆抗体在elisa中测定。在双重elisa方法中，如实施例4中公开的，使用抗af的单克隆抗体作为捕获抗体并且使用抗c3c的多克隆抗体作为检测抗体，在elisa中不经纯化检测血浆。已经发现，用于将小麦麦芽化的方法影响包含有该小麦的可消耗产品的性能。重要的是，麦芽化应在低温(例如约5℃至约20℃)下进行，随后的干燥应在80℃或更低的温度下进行。将理解的是，在本文中，表述“80℃或更低的温度”是指等于或小于80℃的温度。此外，麦芽化可以包括湿浸渍，其中，将小麦部分地或全部地用水浸泡，例如用水浸泡一小时或更长时间。另外地或替选地，湿浸渍可涉及用水喷洒。这样，麦芽化小麦将包含本文所述的化合物(i)和化合物(ii)，并且有利地影响抗分泌因子活性的诱导。因此，提供了本文所述的可消耗产品，其中，麦芽化小麦从包括以下步骤的方法获得：a)在约5℃至约20℃的温度下对小麦进行湿浸渍，b)干燥所述小麦，c)在约5℃至约20℃的温度下生长，d)任选地重复步骤a至c中的任一者，然后e)在不超过80℃下干燥所述小麦。本文所述的步骤a和/或步骤b可以独立地在约8℃或约13℃至约15℃的温度下进行。此外，湿浸渍可以是如本文所述的。基于小麦的总重量，在方法步骤的任一步骤之后的水分含量可以为约35重量％至约50重量％。例如，水分含量可以为约42重量％或约47重量％。本文所述的方法的特征还可以在于，提供麦芽化小麦，其涉及非常小的无根损失(rootlessloss)，即在经受该方法的谷粒上的小根损失。无根损失可为约3％至约5％，例如约4％。因此，提供了本文所述的可消耗产品，其中，麦芽化小麦的无根损失为约3％至约5％，例如约4％。干燥步骤e中的温度测量为空气温度。本文所述的可消耗产品的小麦可以是麦芽化小麦，其中所述小麦选自由kosack、festival、stava及其任意组合组成的小麦品种的组。替选地，小麦品种可以是festival和/或stava。通常，本文所述的可消耗产品中包含的小麦可以是任何小麦品种，只要它在本文所述的麦芽化过程之前、期间和/或之后表现出与在本文包含的实施例1至实施例5中测试的品种kosack、festival和stava相似的特性。特别地，在本文所述的可消耗产品中包含的小麦可以是在根据本文所述的麦芽化方法进行麦芽化后包含如例如通过实施例5中所述的方法测量的浓度为至少60ng/mg的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex和浓度为至少2ng/mg粗粒麦芽化小麦的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex的任何小麦。上述小麦可以是麦芽化的，并作为小麦和/或作为所述小麦的浸出液包含到本文所述的可消耗产品中。已经发现上述麦芽化小麦和/或其浸出液提供了具有引人注目的抗分泌因子活性的可消耗产品。在一个实施方式中，本文公开的可消耗产品以在消耗后在对象中足以诱导抗分泌因子(af)蛋白和/或其片段的内源性产生的量包含麦芽化小麦的浸出液，其中，所述麦芽化小麦的浸出液包含浓度为至少20.000ng/ml的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex和浓度为至少700ng/ml的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex。在另一个实施方式中，本文公开的可消耗产品由麦芽化小麦的浸出液组成，其中，所述麦芽化小麦的浸出液包含浓度为至少20.000ng/ml的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex和浓度为至少700ng/ml的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex。在另一个实施方式中，本文公开的可消耗产品以在消耗后在对象中足以诱导抗分泌因子(af)蛋白和/或其片段的内源性产生的量包含麦芽化小麦，其中，所述麦芽化小麦包含浓度为至少60ng/mg的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex和浓度为至少2ng/mg粗粒麦芽化小麦的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex。在另一个实施方式中，本文公开的可消耗产品由麦芽化小麦组成，其中，所述麦芽化小麦包含浓度为至少60ng/mg的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex和浓度为至少2ng/mg的2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-hex-hex。本文所述的可消耗产品可以是食品、饲料、食品补充剂和/或营养品。食品或饲料可以供人和/或动物消耗。通常，食品旨在供人消耗，而饲料旨在供动物消耗。本文所述的可消耗产品可以是液体、固体和/或其组合。例如，液体可以是饮品。在另一示例中，可消耗产品可以是注入物。当食品或饲料是固体时，它可以是干的或半干的。本文所述的食品可以是医疗食品。另外地或替选地，本文所述的食品可以是fsmp，即用于特殊医用目的的食品。将理解的是，fsmp可以是用于患有某些疾病、病症和/或医学病况的个体的食品，和/或用于其营养需求不能通过正常食品满足的人的食品。在另一示例中，本文所述的食品可以是营养品。如本文所用，营养品是除了食品或饲料中的基本营养价值之外还提供额外的健康益处的食品或饲料。供人消耗的食品和/或食品补充剂可以是液体、固体或其组合的形式。在一示例中，供人消耗的食品可以是液体的形式，即用于人的液体食品。本文所述的饲料可给予动物，例如家禽动物或家畜动物。用于动物的饲料可以是液体、固体或其组合的形式。在一示例中，用于动物的饲料可以是液体的形式，即用于动物的液体饲料。家禽的实例包括小鸡、母鸡、鸭、鹅、鸽子、鹌鹑、火鸡、野鸡和鸵鸟。家畜动物的实例包括牲畜，例如牛、马、驴、山羊、猪和绵羊。在另一示例中，可以用本文所述的可消耗产品处理的动物包括骆驼、鹿、麋鹿、耗牛、美洲驼、羊驼和水牛。可以用本文所述的可消耗产品处理的动物的又一实例包括宠物，例如狗、猫、兔、豚鼠和仓鼠。在特定的示例中，本文所述的饲料是马饲料。在另一示例中，本文所述的饲料是猪饲料。在又一示例中，本文所述的饲料是狗饲料和/或猫饲料。在又一示例中，本文所述的饲料是鱼饲料。此外，将理解的是，本文所述的可消耗产品可以是反刍动物(例如牛、绵羊和/或骆驼)的饲料。反刍动物的饲料可以是液体、固体或其组合的形式。在示例中，反刍动物的饲料可以是液体的形式，即反刍动物的液体饲料。在本文的上下文中，术语“饲料”用于描述喂养给动物的具有营养价值的材料。每个物种都有由饲料或饲料原料组成的正常饮食，这些饲料或饲料原料适合于其消化道的种类，并且在经济上合理、营养丰富且可口。牧场上的动物(例如农业动物)的饮食通常变化很大，并遭受自然存在的营养不足。本文公开的饲料可以帮助补救或至少减轻这种不足以及由于应激情况和/或环境引起的疾病、病症和/或症状。本公开的饲料可以还包括草料饲料，例如干草、青贮饲料、切碎青草(即，相对于其他营养物，纤维素含量高的任何饲料)。本公开的饲料可以还包含饲料粮，例如谷物和用作动物饲料的其他谷类和豆类。上述饲料粮可以包括小麦、大麦、燕麦、黑麦、玉米、豌豆、油菜、油菜籽、油菜籽粉、大豆粉和高粱。在另一示例中，本文所述的饲料可以丸粒形式提供。本公开的饲料可以还包含饲料补充剂，即本身就是饲料原料、并被添加到基本饮食(诸如牧草)中以补充其不足的营养材料，诸如矿物质和芳族化合物。饲料补充剂通常包括微量元素和常量馈给，例如蛋白质补充剂。可消耗产品本身可以是饲料补充剂。尽管本公开主要针对食品或饲料形式的可消耗产品，但是也可以设想可以通过口服摄入以外的其他方式将可消耗产品给予对象。例如，可消耗产品可以以使其适合于局部、眼睛、皮下和/或全身施用的形式提供。本文所述的食品可以形成功能性食品的一部分。例如，功能食品可以是麦片、面包、饼干、稀饭、燕麦片、谷类、麦片、面食、煎蛋卷和/或煎饼。在示例中，功能性食品是饮品或旨在饮用的食品。替选地，功能性食品不是饮品，也不是旨在饮用的食品，而是固体或半固体的食料。由于本文所述的麦芽化小麦和/或麦芽化小麦的浸出液的存在，可消耗产品(诸如食品和/或饲料)具有与诱导抗分泌因子(af)蛋白和/或其片段有关的特性(例如抗腹泻特性和/或抗炎特性)。因此，可消耗产品可用于治疗、防止和/或预防性治疗由病理性高水平的体液排出引起的异常生理病症。另外地或替选地，可消耗产品可用于治疗、防止和/或预防性治疗对患者血液中抗分泌因子蛋白和/或抗分泌蛋白片段的升高有响应的病症。本文所述的一种或多种病症可以选自由以下组成的组：腹泻、炎性疾病、水肿、自身免疫疾病、癌症、肿瘤、白血病、多尿症、糖尿病、胶质母细胞瘤、创伤性脑损伤、高眼压、青光眼、脂筏功能异常、筋膜室综合征、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、脑炎和美尼尔氏病。本文所述的可消耗产品可以以药剂的形式提供。因此，提供了本文所述的可消耗产品，例如功能性食物产品和/或用作药剂的药物产品。本公开还提供了治疗、防止和/或预防性治疗有此需要的患者中的由病理性高水平的体液排出引起的异常生理病症的方法，该方法通过向所述患者供给足够量的根据本发明的可消耗产品。因此，本文提供了治疗、防止和/或预防性治疗对患者血液中抗分泌因子蛋白和/或抗分泌蛋白片段的水平升高有响应的病症的方法，该方法通过向所述患者供给足够量的根据本发明的可消耗产品。在一个实施方式中，本公开提供了治疗、防止和/或预防性治疗病症的方法，其中，所述病症选自由以下组成的组：腹泻、炎性疾病、水肿、自身免疫疾病、癌症、肿瘤、白血病、多尿症、糖尿病、胶质母细胞瘤、创伤性脑损伤、高眼压、青光眼、脂筏功能异常、筋膜室综合征、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、脑炎和美尼尔氏病。此外，根据本发明的可消耗产品可以用于制造药物组合物，所述药物组合物用于治疗、防止和/或预防性治疗由病理性高水平的体液排出引起的异常生理病症，和/或用于治疗对患者血液中抗分泌因子蛋白和/或抗分泌蛋白片段的水平升高有响应的病症。因此，本公开还公开了根据本发明的可消耗产品在制造用于治疗和/或防止病症的药物组合物中的用途，其中，所述病症选自由以下组成的组：腹泻、炎性疾病、水肿、自身免疫疾病、癌症、肿瘤、白血病、多尿症、糖尿病、胶质母细胞瘤、创伤性脑损伤、高眼压、青光眼、脂筏功能异常、筋膜室综合征、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、脑炎和美尼尔氏病。在下文中将通过非限制性示例并参考附图进一步解释本公开。实施例本文实施例中使用的小麦购自瑞典兰特门内()。kosack小麦是kosackww27084。stava小麦是stavaww40253。festival小麦是festival小麦sw95594。实施例1如下所述制备来自hallfreda小麦、stava小麦、festival小麦、brons小麦和ceylon小麦的小麦浸出液并给予大鼠。小麦浸出液的制备将麦芽小麦和对照小麦的小麦谷粒在实验室研磨机中粗粒化。将40ml沸水加到100ml瓶子中的10g的被磨碎的小麦中。摇动瓶子，静置1小时。此后，加入10ml沸水，并将瓶子在含有沸水的水浴中放置1小时。此后，使瓶子冷却，并将瓶子的内容物通过小网孔的尼龙过滤器过滤，得到30ml浸出液。将滤液在10℃温度下运行的离心机中以15000rpm离心20分钟以提供浸出水。用水将浸出水稀释六倍，并将该稀释的浸出水给予大鼠。使用在受控环境中饲养的体重为250±20g的雄性sprague-dawley大鼠(荷兰博克斯梅尔harlan实验室)。给予对照大鼠自来水，给予试验大鼠小麦或小麦麦芽的浸出液。另外，所有大鼠均接受普通大鼠丸粒。在升级的制备方案中，将400ml沸水加到1000ml瓶子中的100g的被磨碎的小麦中。摇动瓶子，静置1小时。此后，加入100ml沸水，并将瓶子在含有沸水的水浴中放置1小时。此后，使瓶子冷却，并将瓶子的内容物通过小网孔的尼龙过滤器过滤，得到300ml浸出液。如果要通过hplc/质谱分析浸出水，则将其除去淀粉和颗粒。然后将上清液冷冻过夜，然后解冻，并再次以15000rpm离心20分钟，冷冻，解冻并以15000rpm离心20分钟，然后无菌过滤。喂养大鼠在实验期间，每天将上述小麦麦芽浸出液冷冻成50ml部分，并用水以1:6稀释。对照组接受自来水。在测试抗分泌活性之前，在1至14天内过量给予饮品或水对照。在14天后，通过心脏穿刺在装有肝素的试管中抽取血样以防止凝血。如前所述，在小琼脂糖色谱柱上从血浆中亲和纯化af1，并通过免疫测定法确定浓度(johansson等，2009)。简单地说，将6ml的1:1稀释的血浆样品(如上所述)通过3mlsepharose6b色谱柱，用磷酸盐缓冲盐水(pbs，0.05m磷酸盐，0.15mnacl，ph7.2)洗涤两次，然后用1m的α-甲基糖苷洗脱。纯化的样品在96孔板上滴定，包被过夜，用抗af1的3h8单克隆小鼠igm抗体或pbs作为对照来检测，最后用结合碱性磷酸酶(ap)的二抗显影。在405nm处读取吸光度后，结果以反向滴定度给出。3h8抗体识别负责抗分泌活性的af序列(johansson等，2009)。下面的表1和表2示出了饮用与图12相对应的不同来源的麦芽浸出液的大鼠的血浆中af的量；使用单一的抗af单克隆抗体(图12a)和抗补体c3的多克隆抗体(图12b)，通过elisa测定来自各种麦芽浸出液的血浆中af的含量(johansson等，2009)。af值和c3值以405nm处的吸光度给出。与给予自来水的对照大鼠相比，stava小麦麦芽和festival小麦麦芽的浸出液中的af值显著更高(分别地，p<0.01，每组5只动物)。c3值在festival小麦麦芽和hallfreda小麦麦芽中显著更高。表1血浆中af的量表2c3值实施例2提取混合液的制备提取液混合物的制备已在其他地方详细描述(savolainen等，2016)。简单地说，可以在milli-qh2o或液相色谱质谱(lc-ms)级甲醇中以500ng/μl的原液制备稳定同位素标记的化学品。化学品包括13c5-脯氨酸(h2o)、2h4-琥珀酸(h2o)、13c5,15n-谷氨酸(h2o)、13c4-α-酮戊二酸(h2o)、13c12-蔗糖(h2o)、13c6-葡萄糖、2h4-腐胺、13c4-十六烷酸(h2o)、2h6-水杨酸(甲醇)、1,2,3-13c3-肉豆蔻酸(甲醇)、2h7-胆固醇(甲醇)。在meoh:h2o(90:10v/v)中，提取液中这些内标物的最终浓度为0.0625ng/μl。所有化学品均来自剑桥同位素实验室(马萨诸塞州图克斯伯里)。样品制备总共分析了6个有或没有事先麦芽化的小麦样品。小麦在微型麦芽化设备(芬兰拉赫蒂)中处理，如表3所述。表3.谷物的麦芽化生长在恒温下用流动的湿空气进行。在低于17℃(62.6°f)的长时间凉爽发芽期后，完全修饰的麦芽在凉爽、快速的气流中充分干燥至约8％，然后通过缓慢地升温到至多70℃至85℃(158°f至185°f)来固化。非常发白的产品，没有焦糖染色或类黑精(malanoidin)染色的痕迹，香气非常微弱。实施例3样品表示以下品种：kosack(k)、festival(f)、stava(s)、hallfreda(h)、brons(b)和ceylon(c)。将小麦样品提取物在室温下解冻30分钟，然后将每个样品的100μl等分试样转移到1.5ml微量离心管中。使用多管式混匀仪(vwrinternational，inc)将冷提取液(900μl)与样品混合10分钟，然后在4℃下孵育2小时。将混合物在4℃下以13000rpm离心12分钟。将每个样品的上清液保存在4℃的冰箱中，直到将它们注射到lc-ms仪器上。每个小麦样品一式三份制备。质量控制样品(qc)是通过合并所有研究小麦样品的等分试样(即经过处理和未经处理的6个品种)而获得的，并用于在整个仪器分析过程中监控系统的稳定性和功能性。非靶向lc-ms代谢组学的分析方案通过lc-q-tof质谱-ms(agilenttechnologies6550ifunnelq-toflc/ms，美国)分析小麦提取物样品。使用正电喷雾电离模式和负电喷雾电离模式，注入样品溶液(5μl)用于反相(rp)色谱分析。使用acquityuplc高强度硅胶t3色谱柱(2.1x100mm，1.8um；waters)在45℃进行分离。流动相以400μl/min递送，且由洗脱液a(milli-q纯化水；millipore)和洗脱液b(甲醇，sigma-aldrich)组成，两者均含有0.04％(v/v)的甲酸(sigma-aldrich)，以以下配置递送：0至10.5min：100％的b，10.51min至15min：5％的b。双电喷雾电离源(esi)在以下条件下运行：干燥气体(氮气)温度为175℃，流量为10l/min，雾化器压力为45psi，毛细管电压为3500v，碎裂电压为175v，分离器(skimmer)为65v。对于数据采集，采用2-ghz扩展动态范围模式，并且将仪器设置为在m/z50-1700的质量范围内采集。以质心模式收集数据，采集速率为1.67光谱/秒，丰度阈值为200个计数。通过在整个运行过程中监测来自输注溶液的两个参考离子(正离子模式的m/z121.050873和m/z922.009798，以及负离子模式的m/z112.98558700和966.000725)，进行连续质量轴校准。所有的小麦样品在一批中随机分析。在分析序列之前，注入chalmers质谱设施提供的两个空白样品和一个启动质量控制样品。在开始和结束时以及整个序列中每第10次注入时，将上述两个合并的qc注入。数据预处理使用proteowizardmsconvert将来自rp(esi+)和rp(esi-)的原始数据文件转换为mzml格式(chambers等，2012)。数据反卷积使用xcms执行，xcms是在r中实现的源代码开放许可下的免费软件(smith等，2006)。具体地，使用xcmsset函数中实现的centwave算法执行每个色谱图中的特征检测，并将obiwarp应用于保留时间校正。术语“特征”是指质谱峰，即通过lc-ms仪器测量的具有独特质荷比和保留时间的分子实体。参数是xcms在线(https://xcmsonline.scripps.edu/)和最近相关出版物(stanstrup等，2013；zhu等，2013；ganna等，2016；shi等，2018)中建议的值。参数为：峰宽＝c(10，60)，ppm＝15，预滤器强度(3，1000)，带宽(2)，mzdiff(0.01)。通过可视化每个样品的总离子色谱图和基峰色谱图、多个特征的提取离子色谱图并评估每个样品的调整保留时间与原始保留时间之差，检查数据采集和处理的质量。使用r软件包“batchcorr”执行批内信号强度归一化(brunius等，2016)。通过qc测试(cv<0.3)的特征被确定为合格特征，并进一步进行统计分析。经过严格的rp(esi+)和rp(esi-)归一化程序后，总共分别保留了3511个和3809个特征。缺失值是通过使用r软件包“missforest”中实现的随机森林算法来估算的(stekhoven和bühlmann，2012)。统计分析为了鉴定预测小麦样品中抗分泌因子活性的特征，对获自rp(esi+)和rp(esi-)的数据独立处理。回归建模是使用随机森林算法进行的，该算法被纳入具有无偏变量选择的重复双重交叉验证框架中(shi等，2018)。通过分成四个对应于其af诱导活性的组，测量各种小麦品种的抗分泌活性等级，第1组为最低活性，第5组为最高活性。第1组，brons和ceylon，第2组，hallfreda，第4组，stava和festival，第5组，kosack，并在模型中用作因变量。选定特征之间的相关性通过pearson相关系数检验。对于通过多元建模选择的每个特征，使用线性回归评估特征强度与抗分泌因子活性等级之间的相关性。此外，使用wilcoxon符号秩检验，检测每个小麦样品的处理过的样品和相应的未处理的样品之间的抗分泌因子活性相关代谢物的差异。使用软件包muvr，lme4，corrplot在r软件版本3.4中进行数据分析和结果可视化。代谢物鉴定代谢物鉴定是基于准确的质量和与在线数据库(即metlin、foodb和massbank)或文献(debruijn等，2016；hanhineva等，2011；koistinen等，2018)匹配的ms/ms碎片化而完成的。注释的置信水平是根据代谢组学标准倡议(msi)分类的(sumner等，2007)。结果发现以下化合物具有良好的抗分泌因子活性预测，并且与抗分泌因子活性呈正相关：2,4-二羟基-7-甲氧基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮(即dimboa)或其己糖衍生物或其葡萄糖衍生物。此外，当将本文所述的小麦(即，kosack小麦(k)、festival小麦(f)、stava小麦(s)、hallfreda小麦(h)、ceylon小麦(c)、brons小麦(b))经受本文所述的麦芽化过程时，与相应的非麦芽化小麦相比，这导致化合物浓度的增加。此外，发现水杨酸具有良好的抗分泌因子活性预测，并且与抗分泌因子活性呈正相关。已经发现，与相应的非麦芽化小麦相比，使小麦festival、stava和kosack经受本文所述的麦芽化过程基本上不影响水杨酸的浓度、或增加水杨酸的浓度。此外，已经发现，与相应的非麦芽化小麦相比，使小麦brons、ceylon和hallfreda经受本文所述的麦芽化过程导致水杨酸浓度的降低(参见图13a和图13b)。图3a显示dimboa的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图3b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受本文所述的麦芽化过程时，甲基dimboa的浓度增加。图4a显示dimboa_hex_hex的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图4b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，甲基dimboa_hex_hex的浓度增加。图5a显示dimboa_glc的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图5b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，甲基dimboa_glc的浓度增加。图13a显示水杨酸的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图13b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，在stava小麦和kosack小麦中的水杨酸的浓度增加。发现以下化合物具有良好的抗分泌因子活性预测，并且与抗分泌因子活性呈负相关：苯并噁唑啉酮(即boa)、2,4-二羟基-(2h)-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮(即diboa)或其己糖衍生物。此外，当将本文所述的小麦(即，kosack小麦(k)、festival小麦(f)、stava小麦(s)、hallfreda小麦(h)、ceylon小麦(c)、brons小麦(b))经受本文所述的麦芽化过程时，与相应的非麦芽化小麦相比，这导致化合物浓度的增加。图6a显示boa的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图6b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，boa的浓度增加。图7a显示diboa的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图7b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，diboa的浓度增加。图8a显示diboa_hex的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图8b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，diboa_hex的浓度增加。图9a显示diboa_二己糖的浓度与抗分泌因子活性之间的相关性。图9b显示，与相应的非麦芽化小麦相比，当小麦经受如本文所述的麦芽化过程时，diboa_hex_hex的浓度增加。应当理解，在图3a、图4a、图5a、图6a、图7a、图8a、图9a和图13a中，y轴指示检测到的代谢物的检测器响应，x轴指示抗分泌因子活性，使得水平1低于水平4。此外，将认识到，diboa_二己糖和diboa_hex_hex可以互换使用。在本文中，与用于小麦的字母(kosack(k)、festival(f)、stava(s)、hallfreda(h)、brons(b)和ceylon(c))结合使用的字母“k”被理解为“对照”，即，小麦是非麦芽化的。因此，kk表示非麦芽化的kosack小麦，fk表示非麦芽化的festival小麦，sk表示非麦芽化的stava小麦，hk表示非麦芽化的hallfreda小麦，bk表示非麦芽化的brons小麦，ck表示非麦芽化的ceylon小麦。实施例4材料和方法化学品如先前所述生产艰难梭菌(clostridiumdifficile)毒素a(cda毒素)(torres等，1991)。霍乱毒素获自list生物实验室。如前所述，生产针对af/rpn10的单克隆igm抗体。从dakodk(www.dako.com项目a0062)获得针对补体因子c3的多克隆抗体。二抗(碱性磷酸酶缀合的山羊抗兔igg和山羊抗小鼠igm)从jacksonimmunoresearch获得。folin&ciocalteu的酚试剂和纯酚获自sigma-aldrich，hplc色谱用溶剂获自merck。谷物如表4所述，kosack小麦在微型麦芽化设备(danbrewltd)中处理。表4.谷物的麦芽化生长在恒温下用流动的湿空气进行。在通过利德雪平eurofinssweden麦芽化之前和之后，分析糖和游离氨基酸的含量。烘烤麦片和面包干，分别含有30％和36％的麦芽化谷粒。动物实验的设置该研究设计得到哥德堡大学伦理委员会的批准(122-2002，ec指令86/609/eec)。动物实验使用饲养在受控环境中的体重为250±20g的雄性sprague-dawley大鼠(荷兰博克斯梅尔harlan实验室)。在一组实验中，给大鼠提供不同的丸粒形式的谷物饲料。将kosack小麦的谷粒、面包干或麦片与普通大鼠丸粒一起悬浮在水中，比例按干重计算为1:5。将饲料在圆筒中烘烤，并在烤箱中干燥，然后切成10x20mm的丸粒。在测试af活性之前，给大鼠喂食7天。在另一组实验中，在大鼠的饮用水中给予大鼠谷物水提取物或纯酚。将麦芽化kosack小麦磨成面粉，将200g放入玻璃烧瓶中，然后相继地将800ml沸水与面粉混合。在缓慢冷却至室温3小时后，将浸泡水通过尼龙过滤器过滤，并在12000×g下离心30分钟。在实验期间，每天将上清液以50ml部分冷冻，并用水以1:6稀释。将冷冻干燥的小麦提取物的纯化部分溶解在饮用水中。纯酚以5μm的浓度溶解在饮用水中。在检测抗分泌活性之前，在1天至14天内给予过量的饮品或水对照。抗分泌活性的肠袢试验使用霍乱毒素或cda毒素作为促分泌剂，通过结扎环测定在大鼠(n＝4至6)中测定抗分泌活性(lange，1982)。在异氟烷麻醉下，在空肠中结扎一个长约10cm的环。用生理磷酸盐缓冲液(0.15mnacl、0.05mna2hpo4、ph7.5)中的1.0ml霍乱毒素或cda毒素攻击该环，毒素浓度滴定为最大分泌的90％(通常为1μg至3μg毒素)。通过从实验动物环的重量中减去对照环的重量来估算净液体分泌(mg/cm)。为了量化纯化过程中活性的增加，引入了抗分泌单位，一个单位是引起液体分泌的50％抑制的量(bjorck等，2000)。血液中的compleasome测定如上所述，在饮用水中给予大鼠麦芽化小麦的浸出液或纯酚。在14天后，按照其他地方的描述(bjorck等，2000和等，2016)抽取血样，并通过进行夹心酶联免疫吸附测定(elisa)检测血浆中的compleasome(蛋白酶体/补体复合物)来评估血液中的抗分泌活性，如其他地方所述(lonnroth等，2016)。针对抗分泌因子的单克隆抗体(mab)用作捕获抗体，针对补体因子3c的多克隆抗体用作检测抗体。显影后，通过与碱性磷酸酯偶联的二抗确定滴定度。从小麦中纯化酚进一步纯化由麦芽化小麦制成的浸出液，并测试在大鼠中的抗分泌活性。活性与各部分的干重有关。通过dia-flopm10过滤器(milliporecorporation，截留分子量10000)超滤澄清的浸出液，并使其通过具有疏水性树脂(amberlitexad-2)的色谱柱，谷物酚附接至该疏水性树脂。用升高到至多100℃的温度的水洗脱该色谱柱。将60℃至100℃的洗脱液冷却至室温，并通过无菌过滤器。使用制备型c18色谱柱(sp250/21nucleosil100-7)使滤液通过反相hplc。所吸附的材料用线性0-100％的水-乙腈洗脱。以20％至27％乙腈洗脱的馏分具有最高的活性，并在较小的高分辨hplc(c18，5μm)色谱柱中进一步纯化，该色谱柱用50％甲醇/水加0.5％乙酸以150μl/min的线性流速洗脱，并且耦合到电喷雾质谱仪上。质谱分析在正电喷雾(zabspecfpd，vganalyticalmicromass)中分析纯化的hplc馏分，以获得活性酚的分子量。小麦浸出液中阿魏酸和香草酸的定量测定在瑞典农业大学的瑞典代谢组学中心(于默奥)进行。将无菌过滤的浸出液施加到hplchsst3(2.1x100mm，waters)上，使用c13标记的阿魏酸、芥子酸、儿茶素和香草酸作为内标物，以0-100％的水/乙腈与0.1％的甲酸的线性梯度洗脱，并在agilent6490三重四极杆质谱仪(hugin)中分析。总酚使用阿魏酸为标准品，采用folin&ciocalteu的酚试剂估算麦芽和对照小麦浸出液中的总酚的浓度。简单地说，将20μl提取物等分试样或阿魏酸标准溶液移液到96微孔板的孔中，然后加入100μl的0.4nfolin&ciocalteu的酚试剂和80μl的0.94mna2co3。将该板用塑料板覆盖物覆盖，并在50℃下显影5分钟。使用微孔板分光光度计(softmaxpro)读取765nm处的吸光度。统计数据图表是使用excel2010构建的。使用单向学生t检验比较平均值，以计算显著性的p值。因此，除非另有说明，否则使用平均值±平均值的标准误差来表示统计数据。结果谷物饲料中的抗分泌活性将含有麦芽化小麦或对照小麦或普通大鼠饲料的丸粒给予大鼠7天，然后在肠袢试验中测试抗分泌活性。处理过的小麦显示出抗分泌活性，而普通小麦和对照饲料未产生可检测到的抗分泌活性(表5)。用相同方法测试了各种小麦粉产品的抗分泌活性，并且由处理过的小麦烘焙的面包干和麦片都显示出良好的活性。表5.将谷物产品与标准大鼠饲料按1:5的比例混合。7天后，在结扎肠袢试验中测试抗分泌活性。一个af单位定义为引起霍乱毒素诱导的分泌的50％抑制的能力。产品抗霍乱毒素分泌，％抗cda毒素*分泌，％小麦谷粒，对照00小麦谷粒，100％麦芽8274小麦面包干，30％麦芽49-小麦麦片，36％麦芽63-*来自艰难梭菌的毒素a抗分泌因子诱导成分的纯化将麦芽化kosack小麦或对照小麦磨碎并浸泡在沸水中，离心分离后，将上清液用于活性成分的进一步纯化。浸出液的超滤(截留分子量10kda)显示该活性不存在于大分子保留部分中。处理过的小麦和对照小麦的滤液中含有2.0mm的酚和0.4mm的酚，处理后游离氨基糖和糖的含量显著增加。活性成分显示与疏水性amberlitexad-2树脂结合，该树脂主要吸附小麦中的酚物质。该活性在60℃至100℃的温度下用热水洗脱。如表6所示，在xad洗脱液中，处理过的小麦的活性从0.0044单位/克干重纯化至4.5单位/克。表6.抗分泌活性，单位/克干重浸泡水0.017xad洗脱液60℃至100℃4.5hplc馏分1(15％至20％乙腈)67hplc馏分2(20％至23％乙腈)333在大型制备型c18hplc色谱柱上实现进一步纯化(表2和补充)。用线性0-100％的水-乙腈洗脱c18树脂上所吸附的物质，得到两个含有主要活性的馏分。第一馏分包含每克干重67af单位，第二馏分包含每克干重333af单位。以20％至23％的乙腈洗脱的馏分具有最高活性(每克干重333单位)。在分析型c18色谱柱上进一步纯化后一馏分，并通过质谱分析，发现由愈创木酚构成的峰(补充)。使用同位素标记的酚作为质谱分析的参考，分别测定了儿茶素、阿魏酸、芥子酸和香草酸(两种主要的小麦酚，具有与愈创木酚相似的结构)的原始浸出液中的浓度。发现这些浓度分别为927±67μg/l和240±25μg/l。小麦和小麦麦芽的浸出液中酚的浓度借助其同位素标记的示踪物质，对四种酚(儿茶素、阿魏酸、芥子酸和香草酸)的浓度进行定量。如表7所示，与对照小麦相比，麦芽中的儿茶素、阿魏酸和芥子酸增加多于一倍，而香草酸的加倍有所降低。表7小麦和小麦麦芽的浸出液中的酚的浓度儿茶素阿魏酸芥子酸香草酸总酚pg/μlpg/μlpg/μlpg/μlmm小麦8562404420.4小麦麦芽30617921955152.0活性酚的鉴定将具有与2-甲氧基苯酚(愈创木酚)最相似结构的植物酚以纯净形式在饮用水中给予大鼠，并测试抗分泌活性。如表8所示，愈创木酚早在第1天就诱导了抗分泌活性，并且该活性在第3天和第5天相继增加。水杨苷和间苯二酚的作用要小得多，而完全甲基化的愈创木酚衍生物藜芦醚具有相反的作用，因为它诱导了分泌。小麦中的主要酚(阿魏酸、香草酸和槲皮苷(quercetin))引起显著的抗分泌活性。含有两个完全甲基化的邻苯二酚环的桉脂素(eudesmine)以与藜芦醚相同的方式增加了分泌。辣椒素受体(vanilloidreceptor)(trpv1)拮抗剂辣椒平(capsazepine)的活性与愈创木酚一样，在第1天具有明显的af活性。表8.植物酚和模型酚的抗分泌活性将这些物质以0.01mg/ml在饮用水中给予大鼠1天至5天，然后霍乱毒素在结扎的肠袢中诱导液体分泌。*具有在饮用水中的物质的天数**一个af单位定义为相当于霍乱毒素诱导的分泌的50％抑制血液中的抗分泌因子的诱导使用elisa检测愈创木酚、阿魏酸、芥子酸、儿茶素和香草酸在血液中诱导af的能力。酚以在饮用水中5μm的浓度给予大鼠，而对照组在同一时期接受水。在接受四种酚的动物中，血液中的af活性显著增加至超过两倍的浓度。与小麦对照相比，来自小麦麦芽的浸出液也显示出活性。结论小麦的大量麦芽化诱导对肠道分泌和腹泻的保护。麦芽中的三种物质(即愈创木酚、阿魏酸、芥子酸和香草酸)被鉴定为产生>50％的抑制。这些物质(所有这些物质均具有2-甲基邻苯二酚结构)能够诱导血液中的afcompleasome，从而免受肠道分泌。af的诱导似乎涉及肠中的辣椒素受体trpv1。实施例5目的要开发针对dimboa、dimboa_hex和dimboa_hex_hex分子特征的靶向定量方法，这些特征根据它们对先前实验中观察到的作用的重要性进行选择。样品和标准品用900μl的80％甲醇提取100μl的每个样品(即，如上述实施例1所述制备的麦芽化小麦的浸出液)，剧烈摇动5分钟，并在+4℃下温育2小时。之后，将样品在4℃下以12000g离心10分钟，并回收上清液。在80％甲醇中制备dimboa标准品和dimboa_hex标准品，并用80％甲醇稀释，校准曲线的范围为10ng/ml至10000ng/ml。由于没有可用于dimboa_hex_hex的可信标准品，因此使用dimboa_hex校准曲线进行校准。一式三份地分析样品和标准品，并将平均值用于计算分析物浓度。uhplc-ms/ms分析如下所述，通过使用uhplc-ms/ms系统(具有absciexqtrap6500+的exionlc)测量样品。使用保持在45℃的watershsst3色谱柱(100x2.1mm，1.8um)分离分析物。流动相a是具有0.04％甲酸的水，流动相b是具有0.04％甲酸的甲醇。梯度如下：在6分钟内5％b->100％b，保持2分钟，然后再恢复到初始状态。进样量为10μl，总流速为0.4ml/min，自动进样器保持在8℃。质谱参数设置如下：电喷雾电离(-4500v)，gs140，gs255，cur40，cid低和tem600。表9列出了用于监测分析物的参数。表9.多反应监测参数分析物q1(da)q3(da)cert(min)dimboa209.9149.0-123.55dimboa_hex372.0149.0-303.40dimboa_hex_hex534.0192.0-183.10结果我们之前曾报道过一种代谢物特征(m/z＝201.04，保留时间(rt)＝186秒)，在非靶向代谢组学分析中被推定为dimboa。但是，通过将其与dimboa的标准光谱相匹配，我们发现该离子不是来自dimboa，而是来自dimboa_hex的碎片化产物。使用当前的靶向分析方法无法检测到dimboa。我们的发现对文献中的dimboa的鉴定和报告提出了很大的疑问。确定了dimboa_hex和dimboa_hex_hex的浓度(表10)，并与先前进行的半定量非靶向分析比较(表10和图14)。表10.通过靶向分析和先前进行的非靶向代谢组学测量的dimboa_hex和dimboa_hex_hex的浓度图14.通过靶向分析测量的dimboa_hex和通过非靶向代谢组学测量(来自先前测定)的dimboa_hex之间的相关性(上)、和通过靶向分析测量的dimboa_hex_hex和通过非靶向代谢组学测量(来自先前测定)的dimboa_hex_hex之间的相关性(下)。结论在任何样品中均未检测到dimboa。dimboa_hex的浓度在4ng/ml至44291ng/ml的范围内，dimboa_hex_hex的浓度在1ng/ml至1373ng/ml的范围内。通过靶向方法的绝对浓度与先前的非靶向数据高度相关。所开发的方法可以用于所提及化合物的未来靶向分析。参考文献1.wo98/219782.2.se9000028-23.pct/se96/010494.wo98/219785.wo2009/1150936.wo97/082027.wo00/385358.wo05/0302469.debruijn,w.j.c.等,(2016)massspectrometriccharacterizationofbenzoxazinoidglycosidesfromrhizopus-elicitedwheat(triticumaestivum)seedlings.j.agric.foodchem.,64,6267-6276.10.brunius,c.等,(2016)large-scaleuntargetedlc-msmetabolomicsdatacorrectionusingbetween-batchfeaturealignmentandcluster-basedwithin-batchsignalintensitydriftcorrection.metabolomics,12,173.11.chambers,m.等,(2012)across-platformtoolkitformassspectrometryandproteomics.nat.biotechnol.,30,918-920.12.ganna,a.等,(2016)large-scalenon-targetedmetabolomicprofilinginthreehumanpopulation-basedstudies.metabolomics,12,4.13.hanhineva,k.等,(2011)qualitativecharacterizationofbenzoxazinoidderivativesinwholegrainryeandwheatbylc-msmetaboliteprofiling.j.agric.foodchem.,59,921-927.14.elisajohansson等,200915.等,201516.johanssone,lonnrothi,jonsoni,langes,jennischee.developmentofmonoclonalantibodiesfordetectionofantisecretoryfactoractivityinhumanplasma.journalofimmunologicalmethods.2009；342(1-2):64-70.17.koistinen,v.m.等,(2018)metabolicprofilingofsourdoughfermentedwheatandryebread.sci.rep.,8,1-11.18.linshi,johanawesterhuis,johanrosén,rikardlandberg,c.和brunius(2018)variableselectionandvalidationinmultivariatemodelling.bioinformatics.19.savolainen,o.i.等,(2016)asimultaneousmetabolicprofilingandquantitativemultimetabolitemetabolomicmethodforhumanplasmausinggas-chromatographytandemmassspectrometry.j.proteomeres.,15,259-265.20.shi,l.等,(2018)plasmametabolitesassociatedwithtype2diabetesinaswedishpopulation:acase–controlstudynestedinaprospectivecohort.849-861.21.smith,c.a.等,(2006)xcms:processingmassspectrometrydataformetaboliteprofilingusingnonlinearpeakalignment,matching,andidentification.anal.chem.,78,779-787.22.stanstrup,j.等,(2013)metaboliteprofilingandbeyond:approachesfortherapidprocessingandannotationofhumanbloodserummassspectrometrydata.anal.bioanal.chem.,405,5037-5048.23.stekhoven,d.j.和bühlmann,p.(2012)missforest-non-parametricmissingvalueimputationformixed-typedata.bioinformatics,28,112-118.24.sumner,l.w.等,(2007)proposedminimumreportingstandardsforchemicalanalysis.metabolomics,3,211-221.25.zhu,z.-j.等,(2013)liquidchromatographyquadrupoletime-of-flightmassspectrometrycharacterizationofmetabolitesguidedbythemetlindatabase.nat.protoc.,8,451-460.26.torresj,jennischee,langes,lonnrothi.clostridiumdifficiletoxinainducesaspecificantisecretoryfactorwhichprotectsagainstintestinalmucosaldamage.gut.1991；32(7):791-5.).27.langes.aratmodelforaninvivoassayofenterotoxicdiarrhea.femsmicrobiologyletters.1982；15(3):239-42.)28.bjorcks,bosaeusi,eke,jennischee,lonnrothi,johanssone,等,foodinducedstimula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