一种防冻抗菌冰冻轮虫配方及其制备方法与流程

本发明涉及水产养殖领域，具体涉及一种防冻抗菌冰冻轮虫产品配方及其制备方法。
背景技术：
：我国是世界水产养殖第一大国，每年对鱼虾蟹等动物的苗种需求量巨大。在诸多水产动物的苗种培育阶段，决定苗种存活率的一个重要的限制因素是适口性的生物开口饵料。轮虫(rotatoria)个体小、运动速度慢，营养丰富，是一些水生动物(目前已报道有60种海水鱼类和18种甲壳类)最佳的天然基础生物开口饵料，具有庞大的市场需求。目前，有些水产动物，如石斑鱼的苗种培育大部分采用活体轮虫作为其开口饵料。活体轮虫作为苗种的生物开口饵料具有一定的优势，能在一定程度上提高苗种的成活率；但是活体轮虫的应用有以下局限性：1.室外土塘生产的活体轮虫很容易受天气和季节影响，经常出现育苗高峰阶段没有足够的轮虫供应、轮虫高产季节却供大于求的矛盾现象。室内高密度培养的活体轮虫虽然能做到连续稳定供应，但是生产成本高，技术门槛高，难以大规模推广应用。因此活体轮虫难以做到固定化供给。2.活体轮虫的运输效率低、运输成本大、辐射范围小。鉴于活体轮虫运输的限制性，一般来说一个轮虫养殖基地只能供应周边的苗种繁育场，很难供应更大范围的苗种养殖场，这严重限制了轮虫养殖产业标准化和规模化发展。因此，冰冻轮虫作为活体轮虫的替代方案在很多水产动物的苗种繁育种得到了广泛应用。由于目前市面上的冰冻轮虫产品多只经过简单清洗后直接冰冻，冰冻轮虫产品的处理和加工方法的不足导致目前市面上的许多冰冻轮虫产品存在以下不足：1.轮虫清洗过程中没有采用低温清洗，导致轮虫营养流失，不新鲜。2.冰冻之前没有进行消毒防腐处理，导致冰冻轮虫产品细菌大量滋生甚至发霉变质。3.没有进行防冻处理，导致融化解冻之后轮虫个体大量破碎，不仅营养流失殆尽，而且极易污染养殖水体，滋生细菌，对苗种生长造成危害。4.没有抗氧化处理，冰冻时间过长造成不饱和脂肪酸等营养成分发生氧化降解。由于轮虫收集后处理和加工方法的滞后，导致目前市面上的冰冻轮虫产品存在上述各种缺点，严重影响水产苗种养殖产业的发展。技术实现要素：本发明针对上述现有技术存在的问题，提供一种防冻抗菌冰冻轮虫产品的配方和此配方的制备方法。生产一种长期保鲜、消毒、抑菌、抗冻、抗氧化的冰冻轮虫产品的。为实现本发明的目的，通过以下技术方案予以实现：一种防冻抗菌冰冻轮虫配方，按质量份计算包括以下组分：上述防冻抗菌冰冻轮虫配方的制作方法，包括以下步骤：(1)将轮虫过筛并清洗；(2)将轮虫消毒；(3)将轮虫与抗冻蛋白、乳糖醇、蔗糖和山梨糖醇混合并搅拌；(4)向步骤(3)的混合物中加入羧甲基壳聚糖、乳酸链球菌素、海藻糖、小球藻粉、红球藻粉、螺旋藻粉和茶多酚混合并搅拌，得成品；(5)将成品冰冻保存。优选地，所述步骤(1)中，将轮虫过150目筛后用水清洗。优选地，所述步骤(2)中，将轮虫在臭氧中消毒至少30分钟；臭氧的浓度为0.1-0.5mg/l。优选地，所述步骤(3)中，搅拌的速率为≥30r/min。优选地，所述步骤(4)中，搅拌的速率为≥30r/min。优选地，所述步骤(5)中，冰冻保存的条件为≤-20℃。优选地，在所述步骤(1)至步骤(4)中，需要保持环境温度≤4℃。本发明处理过程中全程保持低温，轮虫更新鲜；且臭氧处理和添加食品级抗菌剂，可以杀灭大部分自身携带的致病菌，减少保存和运输过程中细菌滋生和腐败变质。本发明在配方中添加食品级抗冻剂，可以反复冻融，能有效阻止解冻时轮虫个体破碎，减少营养流失，降低污染养殖水体的风险；额外添加茶多酚等抗氧化物质和藻粉等营养物质，能有效阻止不饱和脂肪酸等营养物质的氧化降解，增加dha(二十二碳六烯酸)等必须的营养物质，提高育苗成功率。最终使得本发明保鲜期更长，易于运输和保存，营养丰富，健康安全，适合作为鱼虾蟹等水生生物的开口饵料。附图说明图1为本发明实施例和普通冰冻轮虫产品在第1次和第2次解冻后轮虫个体破碎率；图2为投喂本发明实施例和普通冰冻轮虫产品以及蛋黄对泥鳅仔鱼成活率的影响；图3为投喂本发明实施例和普通冰冻轮虫产品以及蛋黄对泥鳅仔鱼生长的影响。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。其中，附图仅用于示例性说明，表示的仅是示意图，而非实物图，不能理解为对本专利的限制。对于本发明所属
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。实施例1(1)将收集的10公斤轮虫放置在150目网布中，用4℃干净冰水清洗5遍；(2)清洗后往轮虫中通臭氧消毒30mim，消毒过程将轮虫置于4℃冰水中水浴，期间搅拌3次；(3)沥出多余水分后将轮虫转入桶中，将装轮虫的桶置于4℃冰水中水浴，称量100g抗冻蛋白，150g乳糖醇，250g蔗糖，200g山梨糖醇，用约1kg的水将上述称量好的组分溶解后加入到轮虫中，期间不间断30r/min的转速搅拌15min；(4)向步骤(3)处理后的轮虫中加入称量好的羧甲基壳聚糖10g，乳酸链球菌素5g，海藻糖25g，螺旋藻粉30g，小球藻粉30g，红球藻粉30g，螺旋藻粉30g，茶多酚30g，充分搅拌均匀；(5)将按照上述步骤处理好的轮虫以每一份1公斤的规格封口包装好后立即放入-20℃冰冻保存，即可得防冻抗菌冰冻轮虫产品。该方法制备的冰冻轮虫产品保鲜期超过1年。实施例2(1)将收集的10公斤轮虫放置在150目网布中，用4℃干净冰水清洗5遍；(2)清洗后往轮虫中通臭氧消毒30mim，消毒过程将轮虫置于4℃冰水中水浴，期间搅拌3次；(3)沥出多余水分后将轮虫转入桶中，将装轮虫的桶置于4℃冰水中水浴，称量50g抗冻蛋白，50g乳糖醇，100g蔗糖，100g山梨糖醇，用1kg水将上述称量好的组分溶解后加入到轮虫中，期间以30r/min的转速搅拌15min；(4)向步骤(3)处理后的轮虫中加入称量好的羧甲基壳聚糖5g，乳酸链球菌素1g，海藻糖10g，螺旋藻粉10g，小球藻粉10g，红球藻粉10g，螺旋藻粉10g，茶多酚10g，充分搅拌均匀；(5)将按照上述步骤处理好的轮虫以每一份1公斤的规格封口包装好后立即放入-20℃冰冻保存，即可得防冻抗菌冰冻轮虫产品，该方法制备的冰冻轮虫产品保鲜期超过1年。实施例3(1)将收集的10公斤轮虫放置在150目网布中，用4℃干净冰水清洗5遍；(2)清洗后往轮虫中通臭氧消毒30mim，消毒过程将轮虫置于4℃冰水中水浴，期间搅拌3次；(3)沥出多余水分后将轮虫转入桶中，将装轮虫的桶置于4℃冰水中水浴，称量200g抗冻蛋白，300g乳糖醇，500g蔗糖，400g山梨糖醇，用1kg水将上述称量好的组分溶解后加入到轮虫中，期间以30r/min的转速搅拌15min；(4)向步骤(3)处理后的轮虫中加入称量好的羧甲基壳聚糖20g，乳酸链球菌素10g，海藻糖50g，螺旋藻粉50g，小球藻粉50g，红球藻粉50g，螺旋藻粉50g，茶多酚50g，充分搅拌均匀；(5)将按照上述步骤处理好的轮虫以每一份1公斤的规格封口包装好后立即放入-20℃冰冻保存，即可得防冻抗菌冰冻轮虫产品，该方法制备的冰冻轮虫产品保鲜期超过1年。对比例1(1)将收集的10公斤轮虫放置在150目网布中，干净水清洗5遍后沥干多余水分；(2)将按照上述步骤处理好的轮虫以1公斤的规格封口包装好后立即放入-20℃冰冻保存，即可得普通冰冻轮虫产品。抗冻测试实施例1、实施例2、实施例3和对比例1中的冰冻轮虫产品进行抗冻测试比较。分别取1g实施例1、实施例2、实施例3和对比例1中的冰冻轮虫，一份用1ml水在室温下混匀，10分钟后取20ul混合液涂片，然后置于光学显微镜下统计每个涂片上轮虫个体总数、破碎个体总数和完整个体总数，每份样品重复统计观察3次。另一份混匀的样品放入-20度，6h后重新取出放置在室温下解冻混匀10min后按照上述方法统计第2次解冻后轮虫个体总数、破碎个体总数和完整个体总数。如图1和表1所示，实施例1中的冰冻轮虫在第1次解冻和第2次解冻后的个体破碎率分别是1％，2％。实施例2中的冰冻轮虫在第1次解冻和第2次解冻后的个体破碎率分别是3％，8％。实施例3中的冰冻轮虫在第1次解冻和第2次解冻后的个体破碎率分别是1％，1.5％。而对比例1中的冰冻轮虫产品在第1次解冻和第2次解冻后的个体破碎率分别是75％，98％。对比例1中的冰冻轮虫在解冻后个体破碎率远远大于实施例1、实施例2和实施例3。这说明按照本发明制备的冰冻轮虫具有良好的抗冻性能，能有效的阻止轮虫个体在解冻后发生破碎，极大地减少了营养流失，降低污染养殖水质和细菌滋生的风险。表1第1次解冻后轮虫个体破碎百分比第2次解冻后轮虫个体破碎百分比实施例1(抗菌防冻冰冻轮虫)1％2％实施例2(抗菌防冻冰冻轮虫)3％8％实施例3(抗菌防冻冰冻轮虫)1％1.5％对比例1(普通冰冻轮虫)75％98％外观保鲜度比较实施例1、实施例2、实施例3和对比例1中的冰冻轮虫产品进行外观保鲜度比较。将实施例1、实施例2、实施例3和对比例1中的冰冻轮虫放在-20℃保存半年，半年后取出实施例1、实施例2、实施例3和对比例1中的冰冻轮虫进行外观观察。实施例1和实施例3的冰冻轮虫产品色泽鲜艳，外表感官和刚刚冰冻的时候相差不大；实施例2的冰冻轮虫产品色泽和外表感官也相对比较好，外表稍微有一点冻干和氧化发白。而对比例1中的冰冻轮虫产品外表大部分冻干失水，氧化发白，色泽变暗，新鲜度明显差于实施例1、实施例2和实施例3的冰冻轮虫产品。微生物含量检测实施例1、实施例2、实施例3和对比例1中的冰冻轮虫产品中的微生物含量进行检测比较。将实施例1、实施例2、实施例3和对比例1中的冰冻轮虫-20℃保存三个月，然后将实施例1和对比例1中的冰冻轮虫4℃冰箱放置3天模拟冰冻轮虫运输时间和环境，分别检测实施例1、实施例2、实施例3和对比例1中的冰冻轮虫的菌落总数和霉菌总数。采取平板计数法，菌落总数检测使用lb基础培养基(细菌基础培养基，内含胰蛋白胨10g/l，酵母提取物5g/l，氯化钠10g/l)，37℃培养48h，霉菌数检测使用葡萄糖琼脂培养基，28℃培养5d。表2菌落数(cfu/g)霉菌数(cfu/g)实施例14×10450实施例22×10585实施例35.5×10448对比例18×1077×103如表2所示，实施例1冰冻轮虫产品中的细菌总数为4×104cfu/g，霉菌数为50cfu/g。实施例2冰冻轮虫产品中的细菌总数为2×105cfu/g，霉菌数为85cfu/g。实施例3冰冻轮虫产品中的细菌总数为5.5×105cfu/g，霉菌数为48cfu/g，而对比例1中直接冰冻的轮虫产品中的细菌总数为8×107cfu/g，霉菌数为7×103cfu/g，是实施例冰冻轮虫产品的2000倍和100多倍。结果表明本发明中的冰冻轮虫产品能有效地抑制自身细菌和霉菌地滋生，能减少携带致病菌和霉菌的风险。泥鳅育苗开口效果对比实施例1、实施例2、实施例3和对比例1中的冰冻轮虫产品对泥鳅育苗开口效果比较。取同一批孵化的、经过平游期、口张开、消化道基本贯通后的泥鳅仔鱼作为实验对象。实验所用仔鱼随机分为15组，每组10000尾，饲养在养殖桶中。其中三组投喂实施例1中的冰冻轮虫，投喂量为1g/万尾×天，定义为实施例1组。三组投喂实施例2中的冰冻轮虫，投喂量为1g/万尾×天，定义为实施例2组。三组投喂实施例3中的冰冻轮虫，投喂量为1g/万尾×天，定义为实施例3组。三组投喂对比例1中的冰冻轮虫，投喂量为1g/万尾×天，定义为对比例1组。另外三组投喂熟蛋黄，投喂量为1g/万尾×天，定义为熟蛋黄组。实验期间水温控制在23±1℃，水体溶氧保持在5mg/l以上。光照强度控制在5000lux以内，氨氮小于0.4mg/l，亚硝酸盐小于0.05mg/l，水体ph7.5±0.5。实验期间，每天投喂3次，每次投喂2小时后采用虹吸法清除水体中的残饵及粪便，之后补充水体至原来的高度。每天捞除各组中的死亡仔鱼，每7天从各组取10尾测量体长并统计各组存活率。表3如表3和图2所示，泥鳅育苗开口投喂第7天时，实施例1组、对比例1组和蛋黄组的泥鳅仔鱼成活率分别为88.7％，73.4％和68.3％，第14天时，实施例1组、对比例1组和蛋黄组的泥鳅仔鱼成活率分别为77.6％，54.6％和49.4％。第21天时，实施例1组、实施例2组、实施例3组、对比例1组和蛋黄组的泥鳅仔鱼成活率分别为64.5％，51.5％，63.8％，34.6％和25.4％.。结果说明当使用本发明制备的冰冻轮虫作为泥鳅育苗的开口饵料时，泥鳅仔鱼成活率远远高于使用普通冰冻轮虫和熟蛋黄。表4第7天仔鱼体长(mm)第14天仔鱼体长(mm)第21天仔鱼体长(mm)实施例19.616.628.9实施例29.615.625.3实施例39.517.129.1对比例19.214.622.5蛋黄组9.114.321.4如表4和图3所示，泥鳅育苗开口投喂第7天时，实施例1组、实施例2组、实施例3组、对比例1组和蛋黄组的泥鳅仔鱼体长分别为9.6mm，9.6mm，9.5mm，9.2mm和9.1mm，第14天时，实施例1组、实施例2组、实施例3组、对比例1组和蛋黄组的泥鳅仔鱼成活率分别为16.6mm，15.6mm，17.1mm，14.6mm和14.3mm。第21天时，实施例1组、实施例2组、实施例3组对比例1组和蛋黄组的泥鳅仔鱼成活率分别为28.9mm，25.3mm，29.1mm，22.5mm和21.4mm。在泥鳅苗开口后的21天时间里，投喂实施例1组中的泥鳅仔鱼体长远远大于对比例1组和蛋黄组。以上结果说明本发明制备的冰冻轮虫更适合作为泥鳅苗的开口饵料，能显著提高泥鳅育苗成功率，促进泥鳅仔鱼生长。当前第1页12