基于隐球酵母Y3胞内酶降解赭曲霉毒素A的用途

文档序号:24648735发布日期:2021-04-13 16:35阅读:来源:国知局

技术特征:
1.基于隐球酵母y3胞内酶降解赭曲霉毒素a的用途,其特征在于,具体步骤如下:(1)配制菌悬液:将隐球酵母y3接入nydb培养基中,在28~30℃、180rpm震荡条件下,培养20~24h,进行活化,得到活化后的菌液;然后取活化后的菌液涂布于nyda固体培养基,培养温度28℃~30℃,时间48

60h;然后,挑选nyda固体培养基生长的隐球酵母y3单菌落接种到pm培养基中进行培养,培养后经离心得到菌体,并用无菌蒸馏水清洗数次,清洗后再次离心,收集菌体用无菌水稀释成菌悬液;(2)取步骤(1)制备的菌悬液,接种于pm培养基中,在28~30℃、180rpm震荡条件下,培养20~24h,离心收集酵母菌体,无菌蒸馏水清洗后再次离心收集酵母菌体,然后加入液氮速冻菌体,进行研磨,得到粉末状的菌体;然后将粉末状的菌体加入tris

hcl缓冲液重悬,震荡后进行冰浴处理,处理后离心,收集上清液,即为胞内粗酶液;(3)再将步骤(2)中得到的胞内粗酶液通过针孔滤膜过滤除菌,得到胞内酶溶液;在胞内酶溶液中加入赭曲霉毒素a,在避光环境下,震荡培养,即可实现降解赭曲霉毒素a的用途。2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(1)中所述离心的转速为7000r/min,时间为10min。3.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(1)中所述的nyda培养基成分如下:以1000ml计,牛肉膏8g,酵母浸出物5g,葡萄糖10g,琼脂20g,余量为蒸馏水,115℃湿热灭菌15min。4.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述的nydb培养基成分如下:以1000ml计,酵母膏5g,葡萄糖10g,牛肉浸膏8g,余量为蒸馏水,ph自然,115℃湿热灭菌15min。5.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(1)中所述pm培养基成分如下:麦芽糖2g,蔗糖10g,酵母浸膏5g,蛋白胨5g,一级蒸馏水1000ml,115℃湿热灭菌15min。6.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(1)中所述单菌落接种到pm培养基中进行培养的温度为28℃~30℃,时间为48h。7.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(1)中所述用无菌蒸馏水洗涤数次具体为2~3次;所述菌悬液的浓度为1
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108cells/ml。8.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(2)中所述菌悬液接种于pm培养基中的接种量为1%~2%。9.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(2)中所述震荡的时间为1~2min;所述冰浴处理的时间为30~35min;所述离心的条件为:4℃,15~20min、11000
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g。10.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤(3)中所述针孔滤膜的孔径为0.22μm,有机相;所述震荡培养的条件为:28℃,180rpm,时间0~3h。
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