一种可用于自由基清除的苦瓜籽提取物及制备方法和应用与流程

1.本发明涉及苦瓜籽提取物技术领域，具体涉及一种可用于自由基清除的苦瓜籽提取物，富含糖类、肽类、酚类、黄酮类等对人体有益的化学成分。本发明还涉及到苦瓜籽提取物的制备方法，通过酶提取、过滤、浓缩干燥而成，该提取物可用作食品、保健食品、药品或者化妆品。


背景技术：

2.苦瓜是一种有益的药用植物和蔬菜，果实味苦，通常用于烹饪。我国古代就已将苦瓜列入中药范畴，苦瓜气味苦、无毒、性寒，具有清热祛暑、明目解毒、利尿凉血、解劳清心、益气壮阳之功效。苦瓜拥有良好的营养及药用价值，在糖尿病、炎症反应和癌症的临床治疗上有显著功效，在中国、日本等国家已长期被用作药食同源的功能性食品。苦瓜籽在营养及药用价值方面与苦瓜有极大的相似之处。苦瓜籽含纤维19.5％，糖类16.4％，油脂31.0％，蛋白质36.5％。此外，苦瓜籽中还含有2.71％的黄酮以及多种人体必需的微量元素，其中k、mg和p的含量最高，cr和zn的含量分别高达5.165μg/g和45.45μg/g。
3.目前获得苦瓜籽提取物最普通的方法是水提取法和有机溶剂提取法，包括水提、或者醇提、或者水提后再醇提、或者醇提后再水提、或者还可使用超临界二氧化碳提取等方法，缺点在于：1.无论水提、醇提或者醇水混合提取，或者超临界二氧化碳提取，或者其它有机溶剂提取，无法将苦瓜籽药材中的蛋白成分提取彻底；2.单单水提、醇提或者醇水混合提取，要想得率提高，必须高温多次数提取，但得率还是不理想，而且资源利用率很低，无法满足绿色环保的生产要求；3.使用超临界二氧化碳提取，或者其它有机溶剂提取，成本高，其它有机溶剂的使用也不能满足绿色环保，对人体安全无毒的要求。
4.总的来看，目前的水和有机溶剂提取方法将苦瓜籽中的多糖类和黄酮类成分提取出来，但蛋白类成分很难提取彻底，而且两种方法需要高温多次提取，得率也不高，资源利用率低，从而造成成本高，并且所得苦瓜籽提取物的生物活性不高。


技术实现要素：

5.为获得高生物活性的苦瓜提取物，本发明的目的在于提供一种可用于自由基清除的苦瓜籽提取物。
6.为获得上述苦瓜籽提取物的低成本、适合工业化大规模方法，本发明的另一目的在于提供一种可用于自由基清除的苦瓜籽提取物及制备方法。
7.本发明的另一目的在于提供上述苦瓜籽提取物的应用。
8.本发明提供如下的技术方案：一种可用于自由基清除的苦瓜籽提取物，所述苦瓜籽提取物的总糖含量不低于10wt％，肽含量为55～65wt％，多酚含量在5wt％以上，黄酮含量在5wt％以上。
9.上述总糖含量的测定方法是苯酚
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硫酸法，肽含量的检测方法是参照gb/t 22492
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2008附录b和gb/t 22729
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2008所述的肽含量测定方法，多酚含量的测定方法是福林酚测定法，黄酮含量的测定方法是硝酸铝显色法。
10.作为本发明的优选，制备过程如下：将苦瓜籽粕与水或醇混合，进行酶提取，浓缩，干燥，得到苦瓜籽提取物。
11.作为本发明的优选，浓缩为将提取液浓缩至30℃时的相对密度1.0～1.2g/ml，干燥得到苦瓜籽提取物。
12.作为本发明的优选，所述相对密度为1.0～1.1g/ml或1.1～1.15g/ml或1.15～1.2g/ml。
13.作为本发明的优选，苦瓜籽粕来源于经热榨或者冷榨或者经超临界流体萃取法脱脂后的苦瓜籽粕。
14.上述苦瓜籽提取物的制备方法，包括下述步骤：苦瓜籽粕，加水或醇搅拌，酶解提取，浓缩，干燥得到苦瓜籽提取物，步骤如下：(1)将苦瓜籽粕粉碎，过40目以上筛网从而获得苦瓜籽粉；(2)将一定量的苦瓜籽粉与水或醇按质量比为1:10～1:20混合，加入苦瓜籽粉质量的0.1％～0.5％的生物酶，调节ph值至2～10，恒温35～60℃搅拌至少2h；(3)提取完成后，将步骤(2)中的提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，过滤，滤液待用；(4)将步骤(3)中滤液浓缩至30～80℃时相对密度1.0～1.2g/ml，干燥，得苦瓜籽提取物。
15.发明人经过多次试验，成功研究出生物酶提取法。此方法在提取液中添加了少量的生物酶以提高提取效率，苦瓜籽提取物的收率不低于25wt％。同时可将苦瓜籽粕中的蛋白质转化成较好被人体吸收利用的肽类物质，提取温度温和，提取次数仅为一次，这样大大提高了资源利用率，降低了生产成本，绿色环保，适合大规模生产。
16.上述所述的过滤可以为膜过滤、离心过滤和普通过滤法(如板框过滤法、筛网过滤法)，优选地使用膜过滤法和离心过滤法。所述的浓缩方法可以为真空浓缩、常压浓缩、膜浓缩法，优选地使用真空浓缩法。所述的干燥方法可以为真空干燥、加热干燥、晾干、风干、冷冻干燥和喷雾干燥法。
17.作为本发明方法的优选，所述的生物酶酶解所用的生物酶可以为酶活力≥30万u/g的中性蛋白酶、酶活力≥40万u/g的木瓜蛋白酶、酶活力≥30万u/g的菠萝蛋白酶、酶活力≥20万u/g的碱性蛋白酶、酶活力≥20万u/g的酸性蛋白酶、酶活力≥50万u/g胃蛋白酶、酶活力≥3000u/g的胰酶、酶活力≥5万u/g的无花果蛋白酶、酶活力≥5万u/g的罗汉果蛋白酶中的一种或者它们的混合物。
18.包含苦瓜籽提取物的组合物，所述组合物为药物或食品上可接受的助剂；所述助剂的剂型选自素片、薄膜包衣片、糖衣片、肠衣片、分散片、胶囊、颗粒剂、口服溶液或口服混悬液，以及化妆品剂型液体、乳液、膏霜、粉或块。
19.上述苦瓜籽提取物应用于用于制备预防或治疗自由基过多引起的症状的食品、保健食品、药品或者化妆品。
20.上述组合物应用于用于制备预防或治疗自由基过多引起的症状的食品、保健食
品、药品或者化妆品。
21.本发明的有益效果如下：本发明与现有水提法、有机溶剂法或者二氧化碳超临界提取法相比，具有如下优点：1.本发明使用生物酶进行提取，提取温度温和，提取次数仅为一次，且比现有技术的产率高，因而提高了资源利用率，降低了生产成本；2.本发明的制备工序中没有使用任何有机溶剂或者有毒有害的化学物质、安全、无有毒物质残留、对人体无害、绿色环保；3.本发明将提取液通过膜过滤，减少了药渣的残留，提高了水溶液的澄清度。
具体实施方式
22.下面就本发明的具体实施方式作进一步说明。
23.如无特别说明，本发明中所采用的原料均可从市场上购得或是本领域常用的，如无特别说明，下述实施例中的方法均为本领域的常规方法。
24.制备实施例1将苦瓜籽经超临界二氧化碳萃取后得到的苦瓜籽粕粉碎，过2号筛。称取100kg，加入1000l水，加入100g酶活力为30万u/g的食品级中性蛋白酶，调整ph为7.0～8.0，升温至50℃，搅拌2h后煮沸5min，冷却后，过孔径为0.5μm的微滤膜，浓缩至50℃时相对密度为1.2g/ml时，喷雾干燥后得到26.4kg苦瓜籽提取物(z
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1)，总糖含量为12.8wt％，肽含量为60.1wt％，多酚含量为6.2wt％，黄酮含量为5.5wt％。
25.制备实施例2将苦瓜籽经冷压榨脱脂后得到的苦瓜籽粕粉碎，过1号筛。称取100kg，加入2000l水，加入100g酶活力为20万u/g食品级碱性酶，调整ph为8.5～9.5，升温至50℃，搅拌1h后煮沸2min，冷却后，上清液过孔径为0.1μm的微滤膜，浓缩至80℃时相对密度为1.1g/ml时，冷冻干燥，得到25.9kg苦瓜籽提取物(z
‑
2)，总糖含量为13.9wt％，肽含量为62.3wt％，多酚含量为6.8wt％，黄酮含量为5.9wt％。
26.对比实施例常规水提方法：将苦瓜籽经冷压榨脱脂后得到的苦瓜籽粕粉碎，过1号筛。称取100kg，加入2000l水，回流提取2次，每次3h，合并提取液，浓缩至50℃时相对密度为1.2g/ml时，冷冻干燥后得到11.2kg苦瓜籽提取物(z
‑
3)，总糖含量为15.5wt％，蛋白含量为8.8wt％，多酚含量为5.5wt％，黄酮含量为4.1wt％。
27.可见常规水提法仅能提取少量的蛋白成分，总糖含量虽然有一定的提高，但提高不多，收率更是低于本发明，充分体现了本发明的工艺优势。
28.生物活性实施例：1、dpph自由基清除实验1.1dpph乙醇溶液的配制：精密称取dpph 4mg，置于100ml棕色容量瓶中，加入50ml乙醇，超声30s，用乙醇定容至刻度，摇匀，待用。本品须现配现用；1.2供试品溶液的配制：精密称取适量苦瓜籽提取物，置于50ml棕色容量瓶中，加入30ml乙醇，超声5min，用乙醇定容至刻度，摇匀，即得；
pbs缓冲液，超声5min，用pbs缓冲液定容至刻度，摇匀，即得；3.5操作步骤：准确吸取0.5ml供试品溶液和5ml abts工作溶液混合均匀；准确吸取0.5ml供试品溶液和5ml pbs缓冲液混合均匀；准确吸取5ml abts工作溶液和0.5ml pbs缓冲液混合均匀，立即在734nm处测定吸光度，并根据以下公式计算自由基清除率：ir％＝[1
‑
(ai
‑
aj)/a0]*100％；其中，ai表示待测溶液和abts混合后溶液的吸光度；aj表示待测溶液和溶剂混合后溶液的吸光度；a0表示abts和溶剂混合后溶液的吸光度。
[0031]
分别配制不同浓度的制备实施例的苦瓜籽提取物进行dpph、srsa以及abts
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自由基清除实验，结果如表1所示。
[0032]
表1苦瓜籽提取物自由基清除实验结果由表1可知，使用本专利发明的方法所制备的苦瓜籽提取物(z
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1和z
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2)具有较强的抗氧化活性，远远高于传统的水提工艺所制备的苦瓜籽提取物(z
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3)。可见，本发明所制备的苦瓜籽提取物有可能防止人体中细胞老化、改善记忆力、延缓衰老、保护心血管、防止老年痴呆等作用，更深层的生物活性正在研究之中。