一种种虾养殖用生物制剂及其制备方法与流程

1.本发明涉种虾养殖技术领域，特别涉及一种种虾养殖用生物制剂及其制备方法。


背景技术：

2.现有的亲本种虾的繁育留种时，缺乏科学规范手段饲养，造成亲本种虾的成活率不高，或者营养摄入不足导致种虾免疫力低。例如cn202010035455.2一种对虾种虾促熟配合饲料及其制备方法，该发明制备的饲料针对的是对虾种虾，cn201710392377.x一种虾苗使用的复合微生物制剂及其制备方法，该发明制备出一种促进虾苗生长的复合微生物制剂，本发明制备一种提高种虾成活率和免疫力的生物制剂。


技术实现要素：

3.鉴以此，本发明提出一种种虾养殖用生物制剂及其制备方法。
4.本发明的技术方案是这样实现的：
5.(1)藻类提取液：将小球藻、巨藻、紫菜、衣藻按照质量比为1～3:2～5:10～13:6～8进行混合，得到藻类混合物，藻类混合物加入水和质量浓度为2～6％的柠檬酸钠溶液中使用搅拌机绞碎成浆，使用纱布过滤，将杂质去除，得到藻类提取液。
6.(2)多糖：将香菇、山楂、银耳、黑木耳按照质量比1～3:7～9:10～13:6～8粉碎，过14～16目筛，将粉末加入50～60℃热水静置30～60min，按质量比计，粉末和热水质量比为1:2～3，过滤，将滤渣再次加入50～60℃热水静置30～60min，按质量比计，滤渣和热水质量比为1:1～2，过滤，合并两次浸提滤液，浓缩干燥，得到多糖。
7.(3)发酵剂：按质量百分比计，发酵剂由1～5％粪肠球菌、1～5％根霉菌液、5～7％热带假丝酵母和10～20％毕赤酵母菌和余量的水制得。
8.(4)复合曲饼的制作：
9.s1曲粉：按照重量份称取原料：10～20份虾米、5～10份植物枯枝、10～20份藻类提取液、15～25份多糖、1～5份发酵剂和10～20份花生粕粉，备用；虾米和植物枯枝粉碎之后与多糖和花生粕粉混合均匀，制得曲粉；
10.s2曲坯：将曲粉、发酵剂、藻类提取液混合均匀，分割成曲坯；
11.s3培菌：将曲坯放入发酵室发酵48～72h，发酵温度为40～45℃；
12.s4复合曲饼：将培菌结束的曲坯干燥5～6h，干燥温度为50～60℃；
13.(5)营养基：按质量百分比计，营养基由5～10％鸡蛋、5～10％磷酸二氢钙、10～20％红薯干粉、15～20％发芽小麦、2～4％鱼油、5～10％果胶和余量质量浓度为1～5％的盐水溶液混合均匀制得，干燥3～4h，干燥温度为70～80℃；
14.(6)生物制剂：将复合曲饼和营养基粉碎成粉末，混合均匀。
15.进一步的，步骤(1)中，藻类混合物、水和柠檬酸钠溶液质量比为1：1～1.5:0.002～0.005。
16.进一步的，步骤(2)中，浓缩干燥温度为50～60℃，干燥时间为1～2h。
17.进一步的，步骤(4)中，曲坯规格为2*2cm。
18.进一步的，步骤(6)中，复合曲饼和营养基的质量比为1：5～10。
19.进一步的，步骤(6)中，生物制剂与市售的种虾饲料混合使用，生物制剂和种虾饲料质量比为1:100～500。
20.与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用复合曲饼和营养基制得生物制剂，不但提高了种虾的免疫力和成活率，而且还降低了种虾的畸形率，进一步提高种虾交配率，同时孵化得到的虾苗幼体免疫力强、抗逆性好、生长迅速。本发明生物制剂未采用抗生素和激素来促进种虾生长，避免在食用时抗生素和激素的摄入。本发明中曲饼可以增加种虾肠道有益菌群，改善消化，促进摄食，显著提高种虾机体的免疫力，还能够改良种虾的畸形率和存活率。
21.另外，菌种间并非根据功效可以随意组合就能产生协同作用，多数菌种之间具有相互拮抗，随意组合不能达到菌种间的协同增效效果，反而会导致微生物的生防功能降低甚至菌种失效，菌种的配比影响菌种之间的协同效果，本发明使用1～5％粪肠球菌、1～5％根霉菌液、5～7％热带假丝酵母和10～20％毕赤酵母菌制得发酵剂，能够充分提高生物制剂的养殖效果。
具体实施方式
22.为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
23.本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
24.本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
25.实施例1种虾养殖用生物制剂的制备方法
26.(1)藻类提取液：将小球藻、巨藻、紫菜、衣藻按照质量比为2:3:12:7进行混合，得到藻类混合物，藻类混合物加入水和质量浓度为4％的柠檬酸钠溶液中使用搅拌机绞碎成浆，藻类混合物、水和柠檬酸钠溶液质量比为1:1.3:0.004，使用纱布过滤，将杂质去除，制得藻类提取液。
27.(2)多糖：将香菇、山楂、银耳、黑木耳按照质量比2:8:12:7粉碎，过14目筛，将粉末加入55℃热水静置50min，按质量比计，粉末和热水质量比为1:2.5，过滤，将滤渣再次加入55℃热水静置50min，按质量比计，滤渣和热水质量比为1:1.5，过滤，合并两次浸提滤液，浓缩干燥1.5h，干燥温度为55℃。
28.(3)发酵剂：按质量百分比计，发酵剂由2.5％粪肠球菌、2.5％根霉菌液、6％热带假丝酵母和15％毕赤酵母菌和余量的水制得。
29.(4)复合曲饼的制作：
30.s1曲粉：按照重量份称取15份虾米、7份植物枯枝、15份藻类提取液、20份多糖、2.5份发酵剂和15份花生粕粉，备用；虾米和植物枯枝粉碎之后与多糖和花生粕粉混合均匀，制得曲粉；
31.s2曲坯：将曲粉、发酵剂、藻类提取液混合均匀，分割成2*2cm曲坯；
32.s3培菌：将曲坯放入发酵室发酵60h，发酵温度为45℃；
33.s4复合曲饼：将培菌结束的曲坯干燥5.5h，干燥温度为55℃；
34.(5)营养基：将按质量百分比计，营养基由7.5％鸡蛋、7.5％磷酸二氢钙、15％红薯
干粉、17％发芽小麦、3％鱼油、8％果胶和余量质量浓度为2.5％的盐水溶液混合均匀，干燥时间为3.5h，干燥温度为75℃；
35.(6)生物制剂：将复合曲饼和营养基粉碎成粉末，混合均匀，按质量比计，曲饼和营养基质量比为1：8。
36.实施例2种虾养殖用生物制剂的制备方法
37.(1)藻类提取液：将小球藻、巨藻、紫菜、衣藻按照质量比为1:2:10:6进行混合，得到藻类混合物，藻类混合物加入水和质量浓度为2％的柠檬酸钠溶液中使用搅拌机绞碎成浆，藻类混合物、水和柠檬酸钠溶液质量比为1:1:0.002，使用纱布过滤，将杂质去除，制得藻类提取液。
38.(2)多糖：将香菇、山楂、银耳、黑木耳按照质量比1:7:10:6粉碎，过14目筛，将粉末加入55℃热水静置50min，按质量比计，粉末和热水质量比为1:2，过滤，将滤渣再次加入55℃热水静置50min，按质量比计，滤渣和热水的质量比为1:1，过滤，合并两次浸提滤液，浓缩干燥1.5h，干燥温度为55℃。
39.(3)发酵剂：按质量百分比计，发酵剂由1％粪肠球菌、1％根霉菌液、5％热带假丝酵母和10％毕赤酵母菌和余量的水制得。
40.(4)复合曲饼的制作：
41.s1曲粉：按照重量份称取10份虾米、5份植物枯枝、10份藻类提取液、15份多糖、1份发酵剂和10份花生粕粉，备用；将虾米和植物枯枝粉碎之后与多糖和花生粕粉混合均匀，得到曲粉；
42.s2曲坯：将曲粉、发酵剂、藻类提取液混合均匀，分割成2*2cm曲坯；
43.s3培菌：将曲坯放入发酵室发酵48h，发酵温度为40℃；
44.s4复合曲饼：将培菌结束的曲坯干燥5h，干燥温度为50℃；
45.(5)营养基：将按质量百分比计，营养基由5％鸡蛋、5％磷酸二氢钙、10％红薯干粉、15％发芽小麦、2％鱼油、5％果胶和余量质量浓度为1％的盐水溶液混合均匀，干燥3h，干燥温度为70℃；
46.(6)生物制剂：将复合曲饼和营养基粉碎成粉末，混合均匀，按质量比计，曲饼和营养基质量比为1：5。
47.实施例3种虾养殖用生物制剂的制备方法
48.(1)藻类提取液：将小球藻、巨藻、紫菜、衣藻按照质量比为3:5:13:8进行混合，得到藻类混合物，藻类混合物加入水和质量浓度为6％的柠檬酸钠溶液中使用搅拌机绞碎成浆，藻类混合物、水和柠檬酸钠溶液质量比为1:1.5:0.005使用纱布过滤，将杂质去除，制得藻类提取液。
49.(2)多糖：将香菇、山楂、银耳、黑木耳按照质量比3：9:13:8粉碎，过14目筛，将粉末加入55℃热水静置50min，按质量比计，粉末和热水质量比为1:3，过滤，将滤渣再次加入55℃热水静置50min，按质量比计，滤渣和热水质量比为1：2，过滤，合并两次浸提滤液，浓缩干燥1.5h，干燥温度为55℃。
50.(3)发酵剂：按质量百分比计，发酵剂由5％粪肠球菌、5％根霉菌液、7％热带假丝酵母和20％毕赤酵母菌和余量的水制得。
51.(4)复合曲饼的制作：
52.s1曲粉：按照重量份称取20份虾米、10份植物枯枝、20份藻类提取液、25份多糖、5份发酵剂和20份花生粕粉，备用；虾米和植物枯枝粉碎之后与多糖和花生粕粉混合均匀，得到曲粉；
53.s2曲坯：将曲粉、发酵剂、藻类提取液混合均匀，分割成2*2cm曲坯；
54.s3培菌：将曲坯放入发酵室发酵72h，发酵温度为45℃；
55.s4复合曲饼：将培菌结束的曲坯干燥6h，干燥温度为60℃。
56.(5)营养基：将按质量百分比计，营养基由10％鸡蛋、10％磷酸二氢钙、20％红薯干粉、20％发芽小麦、4％鱼油、10％果胶和余量质量浓度为5％的盐水溶液混合均匀，干燥3h，干燥温度为80℃。
57.(6)生物制剂：将复合曲饼和营养基粉碎成粉末，按质量比计，曲饼和营养基质量比为1：10。
58.对比例1
59.在实施例1的基础上，主要区别在于，步骤(4)中复合曲饼未经培菌处理，具体为：
60.s1曲粉：按照重量份称取15份虾米、7份植物枯枝、15份藻类提取液、20份多糖、2.5份发酵剂和15份花生粕粉，备用；虾米和植物枯枝粉碎之后与多糖和花生粕粉混合均匀，得到曲粉；
61.s2曲坯：将曲粉、发酵剂、藻类提取液混合均匀，分割成2*2cm曲坯；
62.s3复合曲饼：将曲坯干燥5.5h，干燥温度为55℃；
63.对比例2
64.在实施例1的基础上，主要区别在于，步骤(3)中发酵剂的制备中将粪肠球菌、根霉菌液、热带假丝酵母和毕赤酵母菌等量使用，具体为，按质量百分比计，发酵剂由5％粪肠球菌、5％根霉菌液、5％热带假丝酵母、5％毕赤酵母菌和余量的水制得。
65.对比例3
66.在实施例1的基础上，主要区别在于，步骤(1)中未提取藻类提取液，具体为，将小球藻、巨藻、紫菜、衣藻按照质量比为2:3:12:7进行混合，得到藻类混合物。
67.对比例4
68.在实施例1的基础上，主要区别在于，步骤(2)中未提取多糖，具体为，将香菇、山楂、银耳、黑木耳按照质量比2:8:12:7粉碎，混合均匀。
69.对比例5
70.在实施例1的基础上，主要区别在于，步骤(2)中将盐水溶液替换成水，具体为，将按质量百分比计，所述营养基由7.5％鸡蛋、7.5％磷酸二氢钙、15％红薯干粉、17％发芽小麦、3％鱼油、8％果胶和余量的水混合均匀，干燥3.5h，干燥温度为55℃。
71.试验例1
72.2020年6月至2020年12月，在海南省文昌市翁田镇，池塘规模约100
㎡
/个，投放密度90尾/
㎡
，南美白对虾初始体重均为0.5g。将实施例1～3和对比例1～5制得的生物制剂分别和市售种虾饲料(正大海南公司生产的对虾饲料)按照质量比1:100进行混合，设置空白对照组，只给南美白对虾投喂正大海南饲料公司生产的对虾饲料。投喂饲料时间为上午8点和下午16点。6个月后统计种虾存活率、畸形率、体重增长、种虾血清中酚氧化酶和血清碱性磷酸酶活性。
73.血清中酚氧化酶活性测定方法：以l
‑
多巴为底物，在96孔酶标板中进行。在酶标仪(200m，tecan)中振荡4次，每隔4min读取490nm处的吸光值。在实验条件下，每分钟每毫克血清蛋白od492增加0.001为一个酶活力单位(u/mg)。酚氧化酶活力＝103(a终
‑
a初)/c，其中a吸光度值，c为血清蛋白浓度。
74.血清碱性磷酸酶活性测定方法：使用碱性磷酸酶试剂盒进行测定，使用方法参照说明书。
75.实验结果
[0076][0077]
结果表明，实施例结果本发明生物制剂不仅有助于提高种虾的存活率、体重增长，而且还减少种虾的畸形率，通过测定南美白对虾种虾血清中血清碱性磷酸酶和酚氧化酶活性，实验结果表明本发明生物制剂与市售饲料配合养殖南美白对虾种虾，种虾血清碱性磷酸酶和酚氧化酶活性高于单一使用市售饲料进行喂养的种虾，说明本发明生物制剂能够提高种虾的免疫力，进一步提高种虾交配率，同时孵化得到的虾苗幼体免疫力强、抗逆性好。对比例1曲饼未进行发酵，原料未能充分转化成种虾发育过程所需养分，不仅导致种虾存活率、明显下降和畸形率上升，而且降低血清碱性磷酸酶和酚氧化酶活性，使种虾免疫力降低；对比例2将菌种等量使用，菌种的配比影响导致发酵剂未能起到较好的发酵作用，进一步导致使用该饲料投喂种虾不但造成免疫力、体重增长和存活率明显下降，而且种虾畸形率上升；对比例3未提取藻类提取液，藻类营养成分未能与生物制剂充分结合，进一步导致使用该饲料投喂种虾种虾不但造成免疫力、体重增长和存活率明显下降，而且种虾畸形率上升；对比例4未提取多糖，直接将香菇、山楂、银耳、黑木耳粉碎，其中含有多糖未能充分和种虾体内受体相结合，多糖功效未能完全发挥，进一步导致使用该饲料投喂种虾不但造成免疫力、体重增长和存活率明显下降，而且种虾畸形率上升；对比例5未使用盐水溶液，适量添加盐水溶液能起到抑菌作用和调节生物制剂口感，导致使用该饲料投喂种虾不但造成免疫力、体重增长和存活率明显下降，而且种虾畸形率上升。
[0078]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。