含(1,2,5,6-O-硒)-D-灵芝酸葡萄糖的过瘤胃包膜产品及其制备方法

含(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖的过瘤胃包膜产品及其制备方法
技术领域
1.本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种过瘤胃包膜产品，其可调节高产奶牛葡萄糖利用效率以及优化乳腺健康。


背景技术：

2.乳腺代谢氧化自由基清除和乳糖高效合成是保障奶牛健康高产的保障。目前，可同时高效清除乳腺氧化自由基和调节乳糖高效合成的物质鲜有研究，我们前期研究发现，在奶山羊细胞中添加灵芝酸a可提高细胞葡萄糖用于乳糖合成的比例，同时降低胞内应激参数(cai,2020,faseb journal)，提示灵芝酸具有作为添加剂维持乳腺稳态的潜在效果。然而，我们另一研究发现，仅仅通过过瘤胃包被灵芝酸或者添加未包被的灵芝酸，无法改善奶牛乳腺代谢稳态、葡萄糖利用效率和细胞应激(未发表)。因此，我们综合灵芝酸复合物合成和过瘤胃包被参数的调整，形成一种新型的含灵芝酸过瘤胃包被产量，并作为饲料添加剂应用于奶牛生产。


技术实现要素：

3.本发明提供一种含(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖的过瘤胃包膜产品及其制备方法，该过瘤胃包膜产品可以提高高产奶牛葡萄糖利用效率以及优化乳腺健康。
4.为实现发明目的，本发明采取如下的技术方案：
5.含(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖的过瘤胃包膜产品，其芯材配方包括盐酸氨基葡萄糖，硒和灵芝酸a，其中，盐酸氨基葡萄糖，硒和灵芝酸a的重量比 1:1:2或3:3:4。
6.本发明的另一目的提供所述含(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖的过瘤胃包膜产品的制备方法，采取如下的技术方案：
7.含(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖的过瘤胃包膜产品的制备方法，包括如下步骤：
8.包被膜制备：
9.1.1壳聚糖壁材溶液的制备：
10.配制乙酸溶液；称取壳聚糖加入乙酸溶液中，搅拌溶解，配置成壁材制备液；
11.1.2棕榈油脂壁材悬液的制备：
12.称取棕榈油加入酒精溶液，搅拌溶解，配制成棕榈油脂悬液；
13.1.3丙烯酸树脂壁材溶液的制备：
14.称取丙烯酸树脂加入酒精溶液，搅拌溶解，配制成丙烯酸树脂溶液；
15.1.4混合：
16.将步骤1.1、1.2和1.3得到的三种壁材溶液以体积比为2.3-2.7:3.3-3.7:3.8-4.2；芯材制备：
17.2.1合成1,2,5,6-o-硒-d-氨基葡萄糖
18.将硒加入乙酸酐中，搅拌降温到0℃，加入盐酸氨基葡萄糖，缓慢滴加浓硫酸，搅拌过夜(不能出现左右，这些不确定的字眼)，再缓慢滴加无水乙醇，在保持温度为0℃情况下搅拌待有白色固体析出后进行抽滤，将滤出白色物质用乙酸乙酯洗至无酸味，真空干燥得到白色物质，进一步将其溶解于超纯水中，搅拌下加入乙酸钠并获得析出的白色固体，继续搅拌直至乙酸钠完全溶解，再用乙酸乙酯萃取，减压浓缩除去溶剂，获得白色固体：1,2,5,6-o-硒-d-氨基葡萄糖；
19.2.2(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖的合成
20.室温下将灵芝酸水溶液，在氮气保护下，缓慢滴加溶有1,2,5,6-o-硒-d-氨基葡萄糖和灵芝酸溶液，继续搅拌，反应结束后，减压蒸馏除去有机溶剂，再加入乙酸乙酯稀释，并用nahco3洗，无水mgso4干燥后，减压蒸馏将有机溶剂去除，得浅黄色膏状物质，再通过柱层析分离分离获得白色固体，再用乙醇结晶获得白色晶体；
21.过瘤胃包膜灵芝酸制剂的制备：
22.先将步骤2.2得到的芯材(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖装入涂装室内，然后调节雾化压力和进风温度使固化后的混合物呈流化态并达到50℃，然后由蠕动泵将混合壁材溶液通过涂装室喷枪喷涂在芯材料上而制成过瘤胃灵芝酸产品，其中芯材和壁材混合液的体积比43-47:53-57。
23.作为优选，步骤2.2中柱层析中硅胶为400-500目，流动相为乙酸乙酯:甲醇的体积比为10:1。
24.本发明提供的含(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖的过瘤胃包膜产品能够提高奶牛奶产量和乳糖合成量，提高奶牛葡萄糖利用效率，而且奶牛乳腺健康可以得到较好的维持。
具体实施方式
25.下面结合具体的实施例对本发明做进一步说明。
26.实施例1
27.含(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖(盐酸氨基葡萄糖，硒和灵芝酸a的重量比为1:1:2)的过瘤胃包膜产品的制备方法，包括如下步骤：
28.1、包被膜制备：
29.1.1壳聚糖壁材溶液的制备：
30.配制3.5％乙酸溶液900ml；称取35g壳聚糖加入乙酸溶液中，并在35℃水中搅拌并使其溶解，配置成壁材制备液；
31.1.2棕榈油脂壁材悬液的制备：
32.称取35g棕榈油加入900m l 90％的酒精溶液，搅拌使其溶解，配制成3％的棕榈油脂悬液；
33.1.3丙烯酸树脂壁材溶液的制备：
34.称取35g丙烯酸树脂加入85％酒精溶液，搅拌使其溶解，配制成丙烯酸树脂溶液；
35.1.4混合：
36.将步骤1、2和3得到的三种壁材溶液以体积比2.5:3.5:4.0的比例混合制成壁材混合液；
37.2、芯材制备：
38.2.1合成1,2,5,6-o-硒-d-氨基葡萄糖
39.圆底烧瓶中，将5g硒加入30ml乙酸酐中，搅拌降温到0℃，加入5.5g盐酸氨基葡萄糖，缓慢滴加2.5ml浓硫酸，在5℃左右搅拌10分钟，待溶液温度升至25℃，用磁力搅拌器搅拌过夜，直至其降温至0℃，继续向烧杯中缓慢滴加 20ml无水乙醇，在保持温度为0℃情况下搅拌3小时，待有白色固体析出后进行抽滤，将滤出白色物质用乙酸乙酯洗至无酸味，在25℃下真空干燥10小时，约可获得5g白色物质，进一步将其溶解于25ml超纯水中，在磁力搅拌器作用下加入乙酸钠3.5g，并获得析出的白色固体，继续搅拌直至乙酸钠完全溶解，再用乙酸乙酯萃取，减压浓缩除去溶剂，获得白色固体：1,2,5,6-o-硒-d-氨基葡萄糖。
40.2.2(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖的合成
41.室温下将15ml灵芝酸水溶液(浓度1mol/l)，在氮气保护下，缓慢滴加溶有1.0g 1,2,5,6-o-硒-d-氨基葡萄糖和灵芝酸溶液5ml，继续搅拌反应3h后，停止搅拌，减压蒸馏除去有机溶剂，再加入50ml乙酸乙酯稀释，并用 20ml10％nahco3洗涤3次，并加入无水mgso4干燥过夜，次日减压蒸馏将有机溶剂去除，得浅黄色膏状物质，在通过柱层析分离(硅胶400-500目，流动相体积比为乙酸乙酯:甲醇＝10:1)，分离获得白色固体，再用乙醇结晶获得白色晶体——(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖。
42.该(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖结构表征：
43.m/z348[m
+
h]
+
,354[m
+
na]
+
,258[m-ch3coo]
+
,229[m-2
ch3coo]
+
, 152[m-3
ch3coo]
+
；1hnmr(400mhz,dmso-d8)
δ
h,9.50(s,2h,nh2),6.82(d, j＝3.89hz,1h,h-1),5.28(dd,j1＝8.64hz,j2＝10.84hz,1h,h-3),6.46(t,j＝9.74hz, 1h,h-4),4.13-4.19(m,2h,h-6a,6b),3.27(dd,j1＝1.32hz,j2＝11.00hz,1h,h-5), 3.87(dd,j1＝3.40hz,j2＝10.54hz,1h,h-2),2.13,2.16,2.19,2.21(4s,12h,4ac)； 13cnmr(100mhz,dmso-d6)δc:165.5,164.9,169.2,170.5(4coac),90.3(c-1), 92.9(c-5),91.3(c-3),89.9(c-4),69.7(c-6),59.6(c-2),21.3,21.1,20.9, 21.8(4ch3coo)。
[0044]
3过瘤胃包膜灵芝酸制剂的制备：
[0045]
先将芯材((1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖)装入涂装室内，然后调节雾化压力和进风温度使固化后的混合物呈流化态并达到50℃，然后由蠕动泵将混合壁材溶液通过涂装室喷枪喷涂在芯材料上而制成过瘤胃灵芝酸产品，芯材和壁材混合液的体积比为46:54。
[0046]
实施例2
[0047]
含(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖(盐酸氨基葡萄糖，硒和灵芝酸a的重量比为3:3:4)的过瘤胃包膜产品的制备方法，包括如下步骤：
[0048]
1、包被膜制备：
[0049]
1.1壳聚糖壁材溶液的制备：
[0050]
配制3.5％乙酸溶液900ml；称取35g壳聚糖加入乙酸溶液中，并在35℃水中搅拌并使其溶解，配置成壁材制备液；
[0051]
1.2棕榈油脂壁材悬液的制备：
[0052]
称取35g棕榈油加入900m l 90％的酒精溶液，搅拌使其溶解，配制成3％的棕榈油脂悬液；
[0053]
1.3丙烯酸树脂壁材溶液的制备：
[0054]
称取35g丙烯酸树脂加入85％酒精溶液，搅拌使其溶解，配制成丙烯酸树脂溶液；
[0055]
1.4混合：
[0056]
将步骤1、2和3得到的三种壁材溶液以体积比2.5:3.5:4.0的比例混合制成壁材混合液；
[0057]
2、芯材制备：
[0058]
2.1合成1,2,5,6-o-硒-d-氨基葡萄糖
[0059]
圆底烧瓶中，将6g硒加入30ml乙酸酐中，搅拌降温到0℃，加入6.6g盐酸氨基葡萄糖，缓慢滴加2.5ml浓硫酸，在5℃左右搅拌10分钟，待溶液温度升至25℃，用磁力搅拌器搅拌过夜，直至其降温至0℃，继续向烧杯中缓慢滴加 20ml无水乙醇，在保持温度为0℃情况下搅拌3小时，待有白色固体析出后进行抽滤，将滤出白色物质用乙酸乙酯洗至无酸味，在25℃下真空干燥10小时，约可获得5g白色物质，进一步将其溶解于25ml超纯水中，在磁力搅拌器作用下加入乙酸钠3.5g，并获得析出的白色固体，继续搅拌直至乙酸钠完全溶解，再用乙酸乙酯萃取，减压浓缩除去溶剂，获得白色固体：1,2,5,6-o-硒-d-氨基葡萄糖。
[0060]
2.2(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖的合成
[0061]
室温下将12ml灵芝酸水溶液(浓度1mol/l)，在氮气保护下，缓慢滴加溶有1.0g 1,2,5,6-o-硒-d-氨基葡萄糖和灵芝酸溶液5ml，继续搅拌反应3h后，停止搅拌，减压蒸馏除去有机溶剂，再加入50ml乙酸乙酯稀释，并用 20ml10％nahco3洗涤3次，并加入无水mgso4干燥过夜，次日减压蒸馏将有机溶剂去除，得浅黄色膏状物质，在通过柱层析分离(硅胶400-500目，流动相体积比为乙酸乙酯:甲醇＝10:1)，分离获得白色固体，再用乙醇结晶获得白色晶体——(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖。
[0062]
该(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖结构表征：
[0063]
m/z348[m
+
h]
+
,354[m
+
na]
+
,268[m-ch3coo]
+
,221[m-2
ch3coo]
+
, 149[m-3
ch3coo]
+
；1hnmr(400mhz,dmso-d8)
δ
h,9.40(s,2h,nh2),6.79(d, j＝3.89hz,1h,h-1),5.23(dd,j1＝8.64hz,j2＝10.84hz,1h,h-3),6.33(t,j＝9.74hz, 1h,h-4),4.05-4.09(m,2h,h-6a,6b),3.31(dd,j1＝1.32hz,j2＝11.00hz,1h,h-5), 3.74(dd,j1＝3.40hz,j2＝10.54hz,1h,h-2),2.05,2.09,2.16,2.19(4s,12h,4ac)； 13cnmr(100mhz,dmso-d6)δc:164.9,165.4,168.3,169.3(4coac),91.2(c-1), 92.6(c-5),90.4(c-3),89.4(c-4),60.2(c-6),59.2(c-2),21.5,21.6,20.8, 22.2(4ch3coo)。
[0064]
3过瘤胃包膜灵芝酸制剂的制备：
[0065]
先将芯材((1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖)装入涂装室内，然后调节雾化压力和进风温度使固化后的混合物呈流化态并达到50℃，然后由蠕动泵将混合壁材溶液通过涂装室喷枪喷涂在芯材料上而制成过瘤胃灵芝酸产品，芯材和壁材混合液的体积比为46:54。
[0066]
试验1
[0067]
对实例获得的含(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖的过瘤胃包膜产品进行效价评定试验：
[0068]
1.试验设计
[0069]
选取健康荷斯坦泌乳盛期奶牛60头，根据泌乳天数(100
±
10.9天)、体重 (649.7
±
43.5kg)、胎次(2.52
±
0.78胎)、产奶量(29.4
±
6.18kg)相近的原则，随机分配入6组，分别为对照组(基础日粮+0.8g灵芝酸(灵芝酸含量与后五个配方中一致))和五个不同配方的
((1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖)添加组(在基础日粮上添加3.0g/头/天的(1,2,5,6-o-硒)-d-灵芝酸葡萄糖。
[0070]
2.样品的采集分析及试验观察指标
[0071]
奶牛日粮
[0072]
基础日粮按《中华人民共和国农业行业标准奶牛饲养标准(ny/t 34-2004)》配制。苜蓿草、燕麦草和青贮玉米为试验日粮的主要粗饲料来源，饲喂量以10％剩料量为基准。
[0073]
试验期为8周，每周测定奶牛奶产量，饲喂基础日粮，不饲喂氨维乐-硒1000。正试期测定奶牛生产性能(奶产量)、乳腺葡萄糖利用效率(乳糖和乳酸含量)、乳中应激指标(mda和ros)。
[0074]
表1：添加不同配方的过瘤胃灵芝酸制剂对奶牛乳腺乳糖含量的影响
[0075][0076]
配方1:盐酸氨基葡萄糖，硒和灵芝酸a＝1：1：3
[0077]
配方2(实施例1):盐酸氨基葡萄糖，硒和灵芝酸a＝1：1：2
[0078]
配方3(实施例2):盐酸氨基葡萄糖，硒和灵芝酸a＝3：3：4
[0079]
配方4:盐酸氨基葡萄糖，硒和灵芝酸a＝3.5：3.5：3
[0080]
配方5:盐酸氨基葡萄糖，硒和灵芝酸a＝4：4：2
[0081]
结果显示，在例1和例2条件下，奶牛奶产量和乳糖合成量在各个组中最高；相反，例1和例2条件下，奶牛乳酸含量最低，提示此时奶牛乳腺中葡萄糖能较高效地向乳糖定向转化，从而提高奶牛葡萄糖利用效率。同时从mda和ros 两个氧化应激指标来看，例1和例2条件下，乳中mda和ros含量在各组中最低，提示该饲喂条件下，奶牛乳腺健康可以得到较好的维持。
[0082]
综上所述，例1，即盐酸氨基葡萄糖，硒和灵芝酸a比例为1：1：2和例2，即盐酸氨基葡萄糖，硒和灵芝酸a比例为3：3：4，其对乳腺葡萄糖转化效率和乳腺健康的维持效果优于普通灵芝酸。