用于降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法和组合物与流程

用于降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法和组合物
1.本技术包含计算机可读形式的序列表，其通过引用并入本文。
技术领域
2.本发明涉及用于降解don和/或don衍生物的手段和方法，所述手段和方法包含与seq id no：1所示氨基酸序列具有至少70％序列同一性的多肽。


背景技术：

3.霉菌毒素是丝状真菌产生的次级代谢产物。这些真菌尤其生长在各种类型的谷粒和谷物上。通常，作物在收获之前被真菌侵染，并且在收获之前和之后以及储存期间会产生霉菌毒素。根据粮食和农业组织称，约25％的农产品被霉菌毒素污染(例如eskola等人(2020)，crit.rev.food sci.nutr.60(16)，2773-2789)，这造成了相当大的经济损失。在自2004年1月至2011年12月分析的19,757个样品中，72％的样品测试为至少一种霉菌毒素阳性，39％是共污染的(schatzmayr和streit.2013.world mycotoxin journal 6(3)：213-222)。已知霉菌毒素会对人和动物造成严重的不利健康影响，包括致突变、致癌、神经毒性、免疫抑制或致畸作用。一类特别大的霉菌毒素是单端孢霉烯霉菌毒素或单端孢霉烯。单端孢霉烯是一类倍半萜烯，其尤其由镰孢菌属(fusarium)、漆斑菌属(myrothecium)、肉座壳属(podostroma)、木霉属(trichoderma)或单端孢属(trichothecium)种产生并可包含12，13-环氧环(在本文中可将其可互换地称为“12，13-环氧单端孢霉-9-烯”或“单端孢霉烯-环”)作为共同的结构特征。
4.单端孢霉烯霉菌毒素家族尤其包含脱氧雪腐镰刀菌烯醇(don，cas no.51481-10-8)、t-2毒素(cas no.21259-20-1)、ht-2毒素(cas no.26934-87-2)、雪腐镰刀菌烯醇(nivalenol)(cas no.23282-20-4)、fuseranon-x(cas no.23255-69-8)、蔗镰刀菌烯三醇(scripentriol)、15-乙酰氧基蔗镰刀菌烯醇(15-acetoxyscirpenol)(cas no.2623-22-5)、4，15-二乙酰氧基蔗镰刀菌烯醇(4，15-diacetoxyscirpenol)(cas no.2270-40-8)、木霉醇(trichodermol)(cas no.2198-93-8)、疣疱菌素a(verrucarin a)(cas no.3148-09-2)、疣疱菌素j(verrucarin j)(cas no.4643-58-7)、异木霉菌素(isotrichodermin)(cas no.91423-90-4)、羟基异木霉菌素(hydroxyisotrichodermin)(cas no.344781-02-8)、calonectrin(cas no.38818-51-8)、t-2四醇(cas no.34114-99-3)、脱乙酰新茄醇(deacetylneosolaniol)(cas no.74833-39-9)、新茄醇(neosolaniol)(cas no.36519-25-2)、乙酰新茄醇(acetylneosolaniol)(cas no.65041-92-1)、sporotrichiol(cas no.101401-89-2)和trichotriol(cas no.109890-37-1)。
5.如本文提及的b型单端孢霉烯可指在碳链的位置8处(根据yoshizawa和morooka(1973，agric.biol.chem.37，2933-2934)的原子编号)具有羰基(例如c＝o)(例如参见下文)(或换言之，具有双键键合到碳链的c8原子上的氧原子(例如＝o))的单端孢霉烯化合物并且可包括don-衍生物。如本文提及的don-衍生物可指在碳链的位置8处具有羰基(例如c＝o)(或换言之，具有双键键合到碳链的c8原子上的氧原子(＝o))并在碳链的c7原子处具
有羟基(-oh)且具有未取代的c10(例如具有与其结合的氢(-h)，例如参见下文的don化学结构)的单端孢霉烯化合物。如本文提及的示例性don-衍生物可包括：
[0006][0007][0008]
如本文提及的don-衍生物不包括3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢霉-9-烯-8-酮。
[0009]
在动物中，单端孢霉烯霉菌毒素的食用导致饲料摄入减少、营养吸收受损和生长减慢、呕吐、腹泻、免疫功能障碍和奶产量减少。在人中，不利健康影响包括恶心、呕吐、腹泻、腹痛、头痛和发烧。特别是在世界各地都能发现don(化学名称例如(3α，7α)-3，7，15-三
羟基-12，13-环氧单端孢霉-9-烯-8-酮)作物污染并且已经描述了若干另外的毒性don衍生物，例如乙酰化的don(比如15-乙酰基-don，15-adon)、糖基化的don、don磺酸盐(比如dons-1或dons-2)或don硫酸盐(比如don-15-硫酸盐)。因此，国家和地区当局已经制定了食品(ec no.1881/2006，ec no.1126/2007)或饲料(2006/576/ec)中don的最高水平，以避免人和动物摄入don后发生霉菌毒素中毒，导致比如抑制蛋白质生物合成、与血清素和多巴胺受体相互作用或促炎细胞因子上调等不良影响(efsa journal 2004，73，1-41)。
[0010]
可以通过实施“良好的农业规范”来降低一些霉菌毒素污染的风险。尽管采取了这些预防措施，但仍无法避免don污染，因此需要采取另外的策略来避免don霉菌毒素中毒。一种防止霉菌毒素中毒的可行策略是向饲料和/或食物中添加比如粘土、酵母或酵母产品等粘合剂。然而，由于don的亲水性特性，其不与常规采用的粘合剂相互作用并因此不能通过这种策略去除。类似地，不能通过化学或物理处理从食品或饲料中去除don。作为避免霉菌毒素中毒的替代策略，可以通过转化为毒性较小的分子来使don解毒。
[0011]
ep1042449a1或us2012/0263827a1涉及能够分别通过剪切在c12和c13原子上的环氧环或通过生物转化为3-epi-don和3-酮-don来使单端孢霉烯解毒的微生物。本领域已知采用微生物基于c3原子的don解毒策略。一般而言，此类微生物的使用经常受到这些微生物的特定培养要求的挑战，使它们的生产在经济上不利。此外，在许多食品或饲料加工过程中，将微生物混合到饲料或食品中是不可行的。因此，需要通过不含微生物的酶制剂的don生物转化，作为don解毒的快速且安全的手段。在此方面，wo2016/154640a1描述了一种含有金属离子和醌辅助因子的醇脱氢酶，用于转化在c3原子处具有羟基的单端孢霉烯。cn107916266a描述了一种用于don生物转化为3-epi-don的多酶工艺。2012年，描述了一种包含衍生自鞘胺醇单胞菌属(sphingomonas sp.)ksm1的细胞色素p450酶ddna的三酶系统，以将don羟基化为16-羟基-don(ito等人，2012.appl environ microbiol 79(5)：1619-1628)。
[0012]
本发明是鉴于上述现有技术而做出的。尤其可以将本发明的目的表述为提供使脱氧雪腐镰刀菌烯醇(don)解毒的新的手段和方法。本发明的解决方案在下文描述，在实施例中示例，在附图中说明并在权利要求中反映。
[0013]
该目的已经通过提供能够将don修饰(例如解毒和/或降解)为7-酮-8-羟基-8-烯-don(例如图2，也称为3，8，15-三羟基-12，13-环氧单端孢霉-8-烯-7-酮)的seq id no：1而得到实现。don是一种在碳链的位置8处具有羰基(c＝o)(或换言之，具有双键键合到碳链的c8原子上的氧原子(＝o))并在碳链的c7原子处具有羟基(-oh)的单端孢霉烯霉菌毒素，其具有以下结构式：
[0014]


技术实现要素：

[0015]
本发明涉及用于降解don和/或don衍生物和/或改变don和/或don衍生物的毒性的方法和组合物，所述方法/组合物包含：(i)提供选自以下的以下多肽中的一种或多种(优选与seq id nos：2-3不具有100％同一性)：(a)包含seq id no：1所示氨基酸序列的多肽；(b)包含与seq id no：1所示氨基酸序列具有至少70％(例如至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的氨基酸序列的多肽；(c)seq id no：1所示多肽的变体，其中所述变体包含：在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入；和/或(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，其中所述片段能够降解don和/或don衍生物和/或改变don和/或don衍生物的毒性，优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don和/或don衍生物解毒和/或改变don和/或don衍生物的分子间重排；(ii)任选地，将(a)-(d)中的一种或多种应用于don和/或don衍生物；优选地，所述一种或多种多肽是一种或多种重组和/或分离的多肽；进一步优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don和/或don衍生物解毒和/或分子内重排don和/或don衍生物；最优选地，所述一种或多种多肽能够修饰(例如修饰c7处的键和/或结合配偶体和/或官能团和/或引起化学变化，例如断键和/或形成新的键等)don(例如由don产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的c7原子。
[0016]
本技术通过提供本文下文描述的用于降解don和/或don衍生物的手段和方法满足这种需求，所述手段和方法的特征在于权利要求书并通过所附实施例和附图说明。
[0017]
序列表概述
[0018]
seq id no：1是氨基酸序列，其适用于修饰don的c7原子处的键(例如由don产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)。
[0019]
seq id no：2是氨基酸序列，其不适用于修饰don的c7原子处的键。
[0020]
seq id no：3是氨基酸序列，其不适用于修饰don的c7原子处的键。
附图说明
[0021]
图1：sds-page凝胶(12％mini-protean(bio-rad)tgx无染色预制凝胶)，具有对应于10μl大肠杆菌(e.coli)基因表达培养物的裂解物级分(t：总裂解物；s：可溶性级分；i：不溶性级分)。seq id no：1：20.5kda。包括35.2kda的参比蛋白作为基因表达对照。
[0022]
图2：don和7-酮-8.羟基-8-烯-don的分子结构。
[0023]
图3：在30℃下在具有100μm don的反应缓冲液中温育粗大肠杆菌细胞裂解物3h后，don和7-酮-8-羟基-8-烯-don的浓度。
[0024]
图4：在具有最初标称100μm don的反应缓冲液中与来自基因表达培养物的大肠杆菌bl21(de3)生物质的澄清裂解物温育，don和7-酮-8-羟基-8-烯-don的浓度随时间变化。
具体实施方式
[0025]
定义
[0026]
如本文所述，根据2020年2月26日公布的酶命名数据库(例如可在https：//enzyme.expasy.org/获得)，“ec编号”(酶学委员会编号)可用于指酶活性。ec编号是指来自nc-iubmb，academic press，san diego，calif.的酶命名法1992，包括分别在eur.j.biochem.1994，223，1-5；eur.j.biochem.1995，232，1-6；eur.j.biochem.1996，237，1-5；eur.j.biochem.1997，250，1-6；和eur.j.biochem.1999，264，610-650中发表的增刊1-5。
[0027]
术语“多肽”在本文中与术语“蛋白质”等同地使用。蛋白质(包括其片段、优选生物活性片段，和肽，其通常具有小于30个氨基酸)包含一个或多个彼此通过共价肽键偶联的氨基酸(产生氨基酸链)。如本文所用，术语“多肽”描述一类分子，其例如由大于30个氨基酸组成。多肽还可以形成多聚体，例如二聚体、三聚体和更高的低聚体，即，由大于1个多肽分子组成。形成此类二聚体、三聚体等的多肽分子可以是相同的或不同的。相应的这些多聚体更高级的结构因此称作同-或异二聚体、同-或异三聚体等。一种异多聚体的实例是以其天然存在形式由两个相同的轻多肽链和两个相同的重多肽链组成的抗体分子。术语“多肽”和“蛋白质”也指天然修饰的多肽/蛋白质，其中所述修饰受例如翻译后修饰(如糖基化、酰基化、磷酸化等)的影响。此类修饰是本领域熟知的。
[0028]
序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性由参数“序列同一性”描述。出于本发明的目的，使用在emboss软件包(emboss：the european molecular biology open software suite，rice等人，2000，trends genet.16：276-277)的needle程序、优选5.0.0版或更新版本中执行的needleman-wunsch算法(needleman和wunsch，1970，j.mol.biol.48：443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。所使用的参数可以是空位开放罚分10，空位延伸罚分0.5，以及eblosum62(blosum62的emboss版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的needle输出(使用非简化(no-brief)选项获得)用作同一性百分比并且是如下计算的：
[0029]
(相同的残基
×
100)/(比对长度-比对中的空位总数)。
[0030]
替代地，所使用的参数可以是空位开放罚分10，空位延伸罚分0.5，以及ednafull(ncbi nuc4.4的emboss版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的needle输出(使用非简化(no-brief)选项获得)用作同一性百分比并且是如下计算的：
[0031]
(相同的脱氧核糖核苷酸
×
100)/(比对长度-比对中的空位总数)。
[0032]
表达：术语“表达”包括涉及于变体(多肽)产生的任何步骤，其包括、但不限于转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰和分泌。
[0033]
表达载体：术语“表达载体”可以指线性或环状dna分子，其包含编码变体(多肽)的多核苷酸并可操作地连接至控制序列以提供其表达，特别是提供其转录。
[0034]
片段：术语“片段”可以指一种自成熟多肽的氨基和/或羧基端缺失一个或多个(例如若干个，例如5、10、20、30、40等)氨基酸的多肽；其中所述片段具有如本文其它地方所述的活性。
[0035]
宿主细胞：术语“宿主细胞”可以指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不相同的亲本细胞的任何子代。
[0036]
核酸构建体：术语“核酸构建体”可以指单链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或者以一种本来不存在于自然界中的方式被修饰成含有核酸区段，或者是合成的，该核酸分子包含一个或多个控制序列。
[0037]
可操作地连接：术语“可操作地连接”可以指这样一种构造，在该构造中，将控制序列相对于多核苷酸的编码序列安置在适当位置处，使得该控制序列指导该编码序列的表达。
[0038]
控制序列：如本文所用的术语“控制序列”可以指对于表达编码本发明的变体(多核苷酸)的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该变体的多核苷酸来说可以是同源(native)的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是同源(native)的或外源的。此类控制序列包括、但不限于前导子、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列以及转录终止子。至少，控制序列包括启动子，以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将这些控制序列与本发明的多核苷酸的编码区连接的特异性限制位点的目的，可以提供具有接头的控制序列。
[0039]
如本文所用，术语“对应于”可以是指确定序列中的特定氨基酸(其中参考了特定氨基酸序列(如us2020071638))的方式。例如出于本发明的目的，当参考特定氨基酸位置时，技术人员将能够将另一氨基酸序列与所述已经被参考的氨基酸序列进行比对，从而确定哪一个特定氨基酸可能是在所述其它氨基酸序列中所关注的。已经在本文其它地方描述了另一氨基酸序列与例如如在seq id nos：1、2、3所示的序列或本文列出的任何其它序列的比对。可使用替代性比对方法，并且这些比对方法是本领域技术人员熟知的。
[0040]
当根据本发明使用时，术语“位置”可以是指本文所描绘的氨基酸序列中氨基酸的位置。在本上下文中术语“对应于”可包括位置不仅由前面的核苷酸/氨基酸的数量决定的情况。
[0041]
如本文所用，“沉默”突变意指核酸序列中的碱基置换，该置换不会改变由该核酸序列编码的氨基酸序列。“保守性或等价”置换(或突变)意指如下表1中作为“示例性置换”列出的置换。如本文所用的“高度保守性”置换意指如下文表i中标题“优选置换”下示出的置换。
[0042]
表i氨基酸置换
[0043]
原始示例性置换优选置换ala(a)val；leu；ilevalarg(r)lys；gln；asnlysasn(n)gln；his；asp，lys；argglnasp(d)glu；asnglucys(c)ser；alaser
gln(q)asn；gluasnglu(e)asp；glnaspgly(g)alaalahis(h)asn；gln；lys；argargile(i)leu；val；met；ala；phe；leuleu(l)norleucine；ile；val；met；ala；ilelys(k)arg；gin；asnargmet(m)leu；phe；ileleuphe(f)leu；val；ile；ala；tyrtyrpro(p)alaalaser(s)thrthrthr(t)sersertrp(w)tyr；phetyrtyr(y)trp；phe；thr；serpheval(v)ile；leu；met；phe；ala；leu
[0044]
变体：术语“变体”可以指在一个或多个(例如若干个)位置处包含改变(即，置换、插入和/或缺失)的如本文所述的具有特异性活性的多肽。置换意指用一个不同氨基酸替换占据一个位置的氨基酸；缺失意指移除占据一个位置的氨基酸；插入意指在邻接和紧随占据一个位置的氨基酸之后添加一个氨基酸。
[0045]
如本文所用，术语“转基因(的)”可以指一种例如通过转化或重组引入异源基因材料或同源基因材料的另外拷贝而使其基因组得到改变的生物体(例如us7410800b2)。转基因生物体可以是植物、哺乳动物、真菌、细菌或病毒。如本文所用，“转基因植物、种子或花粉粒”可以指植物、种子或花粉粒或衍生自它们的任何后代的子代植物、种子或花粉粒，其中所述植物、种子或花粉粒或其子代的dna包含相同植株的非转基因植物、种子或花粉粒中初始不存在的引入的外源dna。转基因植物、种子或花粉粒可另外地包含对被转化的植物而言为天然的序列，但是其中为了改变编码序列的表达水平或模式已改变了外源dna。
[0046]
术语“修饰c7原子”可指在例如don和/或don衍生物的碳链的c7原子(例如碳链的位置7)处的分子内重排和/或键和/或结合配偶体和/或官能团改变的过程，(例如包括将c7原子(例如碳链的位置7)处的羟基部分(例如-oh)改变(例如氧化)为羰基部分(例如＝o)和/或引起化学变化，例如断键和/或形成新键。
[0047]
术语“食物”可以指具有食用价值的物质。
[0048]
术语“草料”可以指喂养家畜的物质。
[0049]
术语“饲料”可以指用作牲畜食物的物质。
[0050]
术语“添加剂”可以指例如以少量添加至另一产品或物质中的化合物或物质，例如用于食物、草料或饲料产品的制造、加工、制备、处理、包装、运输或储存中的技术目的，以实现期望的性质和/或特性。本发明的示例性添加剂可包括：加工助剂(即用于食品生产但不作为食品消耗的物质)、反应物(即在化学反应过程中消耗的物质)和催化剂(提高反应速率而不改变反应中总体标准吉布斯能量变化的物质)，例如用于食品或饲料工业、淀粉生产、例如柠檬酸、生物乙醇等。
烯-don(定量示于图3)，而相关的seq id no：2和seq id no：3没有显示出任何don转化或任何don浓度降低。本领域众所周知，7-酮-8-羟基-8-烯-don比don毒性低(例如stadler等人(2019)，food chem.279，303-311；stadler等人(2019)，toxins(basel)11，317)。因此，令人惊奇地发现seq id no：1能够使don解毒。因此，本发明的目的已经通过提供如本文下文所述基于seq id no：1的手段、方法和产品而得到实现。
[0066]
在一些实施方案中，本发明提供了一种用于生产食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(例如食物、草料或饲料添加剂、加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)、中间添加剂(例如食物、草料或饲料中间添加剂、中间加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)；解毒剂，中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或它们的混合物，所述方法包括：(i)提供以下多肽中的一种或多种：(a)包含seq id no：1所示氨基酸序列的多肽；(b)包含与seq id no：1所示氨基酸序列具有至少70％(例如至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的氨基酸序列的多肽；优选地，所述多肽与seq id no：2或3所示氨基酸序列不具有100％同一性；(c)seq id no：1所示多肽的变体，其中所述变体包含：在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入；优选地，所述变体与seq id no：2或3所示氨基酸序列不具有100％同一性；和/或(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，其中所述片段能够降解don(例如降解为7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(例如don衍生物可在碳链的c7原子处包含羟基部分(-oh)、位置8处包含羰基部分(c＝o)；c10原子未取代)和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(例如don衍生物可在c7原子处包含羟基部分(-oh)、c8处包含羰基部分(＝o)；c10未取代)的毒性，优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物解毒和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的分子间重排；(ii)将(a)-(d)中的一种或多种应用于营养源(例如包含碳水化合物和/或蛋白质源)或材料(例如原材料、作物、谷物、柠檬酸、生物乙醇等)，所述营养源或材料适用于生产食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(例如食物、草料或饲料添加剂、加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)、中间添加剂(例如食物、草料或饲料中间添加剂、中间加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或它们的混合物；优选地，所述一种或多种多肽是一种或多种重组和/或分离的多肽；进一步优选地，所述一种或多种多肽能够修饰don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的c7原子；最优选地，所述修饰包括在c7原子(例如位置7)处将羟基部分(例如可称为-oh或c-oh)改变为羰基部分(例如可称为＝o或c＝o)；进一步最优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)。
[0067]
在其它实施方案中，本发明的方法进一步包括：在适用于降解don和/或don衍生物和/或改变don和/或don衍生物的毒性的条件下，将营养源或物质与(a)-(d)中的一种或多种一起温育；优选地，所述方法进一步包括热处理和/或分级分离和/或干燥所述温育的产物；进一步优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don和/或don衍生物解毒(例
如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或分子内重排don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二-羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)。
[0068]
在其它实施方案中，本发明涉及通过本发明的方法生产的食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(例如食物、草料或饲料添加剂、加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)、中间添加剂(例如食物、草料或饲料中间添加剂、中间加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或它们的混合物。
[0069]
在一些实施方案中，本发明提供了一种用于降解don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(例如don衍生物可在碳链的c7原子处包含羟基部分(-oh)、位置8处包含羰基部分(c＝o)；c10原子未取代)的毒性的方法；所述降解和/或改变毒性包括：修饰don和/或don衍生物的c7原子；优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)，所述方法包括：(i)提供以下多肽中的一种或多种：(a)包含seq id no：1所示氨基酸序列的多肽；(b)包含与seq id no：1所示氨基酸序列具有至少70％(例如至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的氨基酸序列的多肽，优选地，所述多肽与seq id no：2-3不具有100％同一性；(c)seq id no：1所示多肽的变体，其中所述变体包含：在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入；优选地，所述变体与seq id no：2-3不具有100％同一性；和/或(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，其中所述片段能够降解don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的毒性，优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物解毒和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的分子间重排；(ii)将(a)-(d)中的一种或多种应用于don和/或don衍生物；优选地，所述一种或多种多肽是一种或多种重组和/或分离的多肽；进一步优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)解毒和/或分子内重排don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)；最优选地，所述一种或多种多肽能够修饰don和/或don衍生物的c7原子(例如所述修饰包括例如在位置7处将c-oh改变为c＝o部分；优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)。
[0070]
在一些实施方案中，本发明提供了一种组合物或试剂盒，其包含：(i)能够降解don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(例如don衍生物可在碳链的c7原子处包含羟基部分(-oh)、位置8处包含羰基部分(c＝o)；c10未取代；优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的毒性的多肽，其中所述多
8-烯-don)和/或don衍生物的c7原子的方法(优选地，所述修饰包括在碳链的位置7处将羟基部分(例如-oh或c-oh)改变为羰基部分(例如可指＝o或c＝o)；进一步优选地，所述don衍生物不是3-ac-don)，所述方法包括：(i)提供以下多肽中的一种或多种：(a)包含seq id no：1所示氨基酸序列的多肽；(b)包含与seq id no：1所示氨基酸序列具有至少70％(例如至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的氨基酸序列的多肽；优选地，所述多肽与seq id no：2-3不具有100％同一性；(c)seq id no：1所示多肽的变体，其中所述变体包含：在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入；优选地，所述变体与seq id no：2-3不具有100％同一性；和/或(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，其中所述片段能够降解don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的毒性，优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物解毒和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的分子间重排(优选地，所述don衍生物不是3-ac-don)；(ii)将(a)-(d)中的一种或多种应用于don和/或don衍生物；优选地，所述一种或多种多肽是一种或多种重组和/或分离的多肽；
[0078]
在一些实施方案中，本发明的方法是体外、离体或体内方法。
[0079]
在一些实施方案中，本发明涉及本发明的以下中的一种或多种：(a)包含seq id no：1所示氨基酸序列的多肽；(b)包含与seq id no：1所示氨基酸序列具有至少70％(例如至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的氨基酸序列的多肽；优选地，所述多肽与seq id no：2-3不具有100％同一性；(c)seq id no：1所示多肽的变体，其中所述变体包含：在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入；和/或(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段；(e)组合物、试剂盒、食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(例如食物、草料或饲料添加剂、加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)、中间添加剂(例如食物、草料或饲料中间添加剂、中间加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或它们的混合物，用于以下中的一种或多种/在以下中的一种或多种中的用途：(i)修饰don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的c7原子(优选地，所述修饰包括在c7处将羟基部分(-oh)改变为羰基部分(＝o)；进一步优选地，所述don衍生物不是3-ac-don)；(ii)生产食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(例如食物、草料或饲料添加剂、加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)、中间添加剂(例如食物、草料或饲料中间添加剂、中间加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或它们的混合物；(iii)降解don和/或don衍生物和/或改变don和/或don衍生物的毒性，优选地，所述一种或多种多肽是重组和/或分离的多肽；进一步优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物解毒和/或分子内重排don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(优选地，所述修饰包括在c7处将羟基部分(-oh)改变为羰基部分(＝o)；进一步优选地，所述don衍生
物不是3-ac-don)；最优选地，所述一种或多种多肽能够修饰don和/或don衍生物的c7原子(优选地，所述修饰包括在c7处将羟基部分(-oh)改变为羰基部分(＝o)；进一步优选地，所述don衍生物不是3-ac-don)；(iv)(i)-(iii)中的任意组合；(v)根据(i)-(iv)中任一项所述的用途，其中所述用途为体外、离体或体内用途。
[0080]
应当理解，本发明不限于本文所述的特定方法、方案和试剂等，因此可以变化。本文所用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，而非旨在限制本发明的范围，本发明的范围仅由权利要求书限定。
[0081]
本说明书全文中引用的所有出版物和专利(包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商的说明书、指导书等)，无论在上文还是下文，均以其全文通过引用并入本文。本文中没有任何内容被解释为承认本发明无权凭借在先发明而早于这种公开。在通过引用并入的材料与本说明书矛盾或不一致的程度上，本说明书将取代任何这样的材料。
[0082]
本发明的特征还在于以下项目：
[0083]
1.一种用于生产食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(例如食物、草料或饲料添加剂、加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)、中间添加剂(例如食物、草料或饲料中间添加剂、中间加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)；解毒剂，中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或它们的混合物，所述方法包括：
[0084]
i)提供以下多肽中的一种或多种：
[0085]
(a)包含seq id no：1所示氨基酸序列的多肽；
[0086]
(b)包含与seq id no：1所示氨基酸序列具有至少70％(例如至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的氨基酸序列的多肽；优选地，所述多肽与seq id no：2或3所示氨基酸序列不具有100％同一性；
[0087]
(c)seq id no：1所示多肽的变体，其中所述变体包含：在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入；优选地，所述变体与seq id no：2或3所示氨基酸序列不具有100％同一性；和/或
[0088]
(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，其中所述片段能够降解don(例如降解为7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(例如如本文所用的don衍生物可c7原子处包含羟基部分(-oh)、c8处包含羰基部分(c＝o)；c10未取代)和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(例如don衍生物可在c7原子处包含羟基部分(-oh)、c8处包含羰基部分(例如＝o)；c10未取代)的毒性，优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物解毒和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的分子间重排；
[0089]
ii)将(a)-(d)中的一种或多种应用于营养源(例如包含碳水化合物和/或蛋白质源)或材料(例如原材料、作物、谷物、柠檬酸、生物乙醇等)，所述营养源或材料适用于生产食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(例如食物、草料或饲料添加剂、加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)、中间添加剂(例如食物、草料或饲料中间添加剂、中间加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养
补充剂；益生元、中间益生元和/或它们的混合物；
[0090]
优选地，所述一种或多种多肽是一种或多种重组和/或分离的多肽；进一步优选地，所述一种或多种多肽能够修饰don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的c7原子；最优选地，所述修饰包括在c7原子处将羟基部分(例如c-oh)改变为羰基部分(例如c＝o)；进一步最优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)。
[0091]
2.根据前述项目中任一项所述的方法，所述方法进一步包括：在适用于降解don和/或don衍生物和/或改变don和/或don衍生物的毒性的条件下，将所述营养源或物质与(a)-(d)中的一种或多种一起温育；优选地，所述方法进一步包括热处理和/或分级分离和/或干燥所述温育的产物；进一步优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物解毒和/或分子内重排don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)。
[0092]
3.一种通过根据前述项目中任一项所述的方法生产的食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(例如食物、草料或饲料添加剂、加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)、中间添加剂(例如食物、草料或饲料中间添加剂、中间加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或它们的混合物。
[0093]
4.一种用于降解don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(例如，don衍生物可在c7原子处包含羟基部分(-oh)、c8处包含羰基部分(c＝o)；c10未取代)的毒性的方法；所述降解和/或改变毒性包括：修饰don和/或don衍生物的c7原子：优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)，所述方法包括：
[0094]
i)提供以下多肽中的一种或多种：
[0095]
(a)包含seq id no：1所示氨基酸序列的多肽；
[0096]
(b)包含与seq id no：1所示氨基酸序列具有至少70％(例如至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的氨基酸序列的多肽；优选地，所述多肽与seq id no：2-3不具有100％同一性；
[0097]
(c)seq id no：1所示多肽的变体，其中所述变体包含：在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入；优选地，所述变体与seq id no：2-3不具有100％同一性；和/或
[0098]
(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，其中所述片段能够降解don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的毒性，优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物解毒和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的分子间重排；
[0099]
ii)将(a)-(d)中的一种或多种应用于don和/或don衍生物；
[0100]
优选地，所述一种或多种多肽是一种或多种重组和/或分离的多肽；进一步优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)解毒和/或分子内重排don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)；最优选地，所述一种或多种多肽能够修饰don和/或don衍生物的c7原子处的键(例如所述修饰包括例如在位置7处将c-oh改变为c＝o部分；优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)。
[0101]
5.一种组合物或试剂盒，其包含：
[0102]
(i)能够降解don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(例如don衍生物可在c7原子处包含羟基部分(-oh)、在c8处包含羰基部分(c＝o)；c10未取代；优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的毒性的多肽，其中所述多肽是以下中的一种或多种：
[0103]
(a)包含seq id no：1所示氨基酸序列的多肽；
[0104]
(b)包含与seq id no：1所示氨基酸序列具有至少70％(例如至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的氨基酸序列的多肽；优选地，所述多肽与seq id no：2-3不具有100％同一性；
[0105]
(c)seq id no：1所示多肽的变体，其中所述变体包含：在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入；优选地，所述变体与seq id no：2-3不具有100％同一性；和/或
[0106]
(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，其中所述片段能够降解don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的毒性，优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3，乙酰氧基-3α，7α-二羟基-12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)解毒和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基.8-烯-don)和/或don衍生物(优选地，所述don衍生物不是3-ac-don，即3-乙酰氧基-3α，7α-二羟基.12，13-环氧单端孢菌-9-烯-8-酮)的分子间重排；
[0107]
(ii)用于(a)-(d)多肽中的至少一种的营养源(例如包含以下中的一种或多种：碳水化合物、蛋白质、柠檬酸、乙醇，例如生物乙醇；优选地，所述营养源不是3-ac-don)和/或底物，优选地，所述底物包含：don和/或don衍生物(优选地，所述底物不是3-ac-don；进一步优选地，所述组合物进一步包含所述一种或多种多肽与don(例如7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的反应(例如酶促反应)的产物，即在don和/或don衍生物的c7原子处包含修饰的反应产物)；
[0108]
优选地，所述多肽是重组和/或分离的多肽；进一步优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don和/或don衍生物(优选地，don衍生物不是3-ac-don)解毒和/或分子内重排don和/或don衍生物(优选地，don衍生物不是3-ac-don)；最优选地，所述多肽能够修饰don和/或don衍生物的c7原子(优选地，所述修饰包括将c-oh改变为c＝o部分；进一步
优选地，所述don衍生物不是3-ac-don)。
[0109]
6.根据前述项目中任一项所述的组合物或试剂盒，其中所述一种或多种多肽由一种或多种核苷酸序列编码。
[0110]
7.根据前述项目中任一项所述的组合物或试剂盒，其中所述一种或多种核苷酸序列被宿主细胞所包含的一种或多种核酸包含。
[0111]
8.根据前述项目中任一项所述的组合物或试剂盒，其中所述组合物或试剂盒是以下中的一种或多种：无细胞和/或非天然存在的和/或分级分离的组合物或试剂盒。
[0112]
9.根据前述项目中任一项所述的组合物或试剂盒，其中所述组合物或试剂盒是药物和/或兽医组合物或试剂盒。
[0113]
10.根据前述项目中任一项所述的组合物、试剂盒、食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(例如食物、草料或饲料添加剂)、中间添加剂(例如食物、草料或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或它们的混合物，其用作药物(例如用于兽医用途)和/或用于疗法中。
[0114]
11.根据前述项目中任一项所述的组合物、试剂盒、食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(例如食物、草料或饲料添加剂)、中间添加剂(例如食物、草料或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或它们的混合物，其用于治疗、改善、预防和/或诊断don霉菌毒素中毒。
[0115]
12.一种用于修饰don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的c7原子的方法(优选地，所述修饰包括在c7处将羟基部分(-oh)改变为羰基部分(＝o)；进一步优选地，所述don衍生物不是3-ac-don)，所述方法包括：
[0116]
i)提供以下多肽中的一种或多种：
[0117]
(a)包含seq id no：1所示氨基酸序列的多肽；
[0118]
(b)包含与seq id no：1所示氨基酸序列具有至少70％(例如至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的氨基酸序列的多肽；优选地，所述多肽与seq id no：2-3不具有100％同一性；
[0119]
(c)seq id no：1所示多肽的变体，其中所述变体包含：在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入；优选地，所述变体与seq id no：2-3不具有100％同一性；和/或
[0120]
(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，其中所述片段能够降解don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的毒性，优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物解毒和/或改变don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的分子间重排(优选地，所述don衍生物不是3-ac-don)；
[0121]
ii)将(a)-(d)中的一种或多种应用于don和/或don衍生物；
[0122]
优选地，所述一种或多种多肽是一种或多种重组和/或分离的多肽。
[0123]
13.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述方法是体外、离体或体内方法。
[0124]
14.根据前述项目中任一项所述的以下中的一种或多种：
[0125]
(a)包含seq id no：1所示氨基酸序列的多肽；
[0126]
(b)包含与seq id no：1所示氨基酸序列具有至少70％(例如至少80％、至少85％、
至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的氨基酸序列的多肽；优选地，所述多肽与seq id no：2-3不具有100％同一性；
[0127]
(c)seq id no：1所示多肽的变体，其中所述变体包含：在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入；和/或
[0128]
(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段；
[0129]
(e)组合物、试剂盒、食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(例如食物、草料或饲料添加剂、加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)、中间添加剂(例如食物、草料或饲料中间添加剂、中间加工助剂、反应物或催化剂，例如在食品或饲料工业、柠檬酸、生物乙醇、淀粉生产等中)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元或它们的混合物：
[0130]
用于以下中的一种或多种/在以下中的一种或多种中的用途：
[0131]
i)修饰don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物的c7原子(优选地，所述修饰包括在c7处将羟基部分(-oh)改变为羰基部分(＝o)；进一步优选地，所述don衍生物不是3-ac-don)；
[0132]
ii)生产食物、中间食物；草料、中间草料；饲料、中间饲料；添加剂(例如食物、草料或饲料添加剂)、中间添加剂(例如食物、草料或饲料中间添加剂)；解毒剂、中间解毒剂；营养补充剂、中间营养补充剂；益生元、中间益生元和/或它们的混合物；
[0133]
iii)降解don和/或don衍生物和/或改变don和/或don衍生物的毒性，优选地，所述一种或多种多肽是重组和/或分离的多肽；进一步优选地，所述改变毒性包括以下中的一种或多种：使don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物解毒和/或分子内重排don(例如通过产生7-酮-8-羟基-8-烯-don)和/或don衍生物(优选地，所述修饰包括在c7处将羟基部分(-oh)改变为羰基部分(＝o)；进一步优选地，所述don衍生物不是3-ac-don)；最优选地，所述一种或多种多肽能够修饰don和/或don衍生物的c7原子(优选地，所述修饰包括在c7处将羟基部分(-oh)改变为羰基部分(＝o)；进一步优选地，所述don衍生物不是3-ac-don)；
[0134]
iv)(i)-(iii)中的任意组合；
[0135]
v)根据(i)-(iv)中任一项所述的用途，其中所述用途为体外、离体或体内用途。
[0136]
通过以下实施例进一步阐述了本发明，然而本发明不限于所述实施例或受所述实施例的任何具体实施方案的限制。
[0137]
本发明的实施例
[0138]
实施例1：多肽的重组生产
[0139]
由商业供应商twist bioscience(https://www.twistbioscience.com/)合成多肽序列(seq id no：1、seq id no：2和seq id no：3)的基因，其密码子经优化以在大肠杆菌中表达。将基因插入质粒载体pe2中，以在t7lac启动子的控制下表达(dubendorf和studier(1991)，j.mol.biol.219，45-59)。通过使用热激程序的改进(cohen等人(1972)，proc.natl.acad.sci.69，2110-2114)并通过选择质粒介导的卡那霉素抗性，将产生的质粒转化到大肠杆菌bl21(de3)中。将携带质粒的大肠杆菌bl21(de3)克隆在过夜表达瞬时tb培养基(merck)中培养，在30℃下振荡过夜，用于通过自诱导进行重组基因表达(studier
(2005)，protein expr.purif.41，207-234)。通过离心收获生物量，重悬于1.1x反应缓冲液(反应缓冲液：25mm hepes ph 7.5；10mm zncl2)中，并在冰上用超声破碎系统(qsonica)裂解。通过离心(18min 21 130 rcf 4℃)澄清粗裂解物，并通过sds-page(laemmli(1970)，nature 227，680-685)用bio-rad 12％mini-protean tgx无染色预制凝胶证实了裂解物的可溶级分中多肽(酶)的存在。
[0140]
实施例2：don和7-酮-8-羟基-8-烯-don的分析定量
[0141]
通过hplc在phenomenex kinetex c18柱(150
×
2.1mm，2.6μm粒度)上在30℃以5.9％至95％乙腈与0.1％乙酸的梯度分离don和seq id no：1的酶活性的反应产物。通过与纯化的参比物质比较鉴定了反应产物，并将其命名为7-酮，8-羟基-8-烯-don，遵循由yosizawa和moroka在don的首次描述中提出的原子编号(yosizama和moroka(1973)，agric.biol.chem.37，2933-2934)。定量基于使用sciex qtrap 5500系统以阴性多反应监测(mrm)模式的ms/ms以及与don和7-酮-8-羟基-8-烯-don的纯参考制备物的比较。将从具有m/z 355.1的前体离子[m+ac]-到产物离子59.1的质量转变用作定量物(quantifier)，并且将从m/z 355.1到265.1的转变用作定性物(qualifier)。
[0142]
实施例3：多肽的don修饰/解毒活性
[0143]
将1mm don水溶液加入到如实施例1所述制备的粗大肠杆菌细胞裂解物中，以在含有25mm hepes ph 7.5、10mm zncl2和100μm don的缓冲液中开始反应。在30℃下温育3h后，通过在-20℃下冷冻来终止反应。为了处理用于hplc分析的反应终点样品，将反应物解冻、涡旋，并将10μl/反应加入到40μl水和200μl乙腈中。将这些样品与80％乙腈和标称4μm don在室温下温育10min，以21 130 rcf离心10min，并将250μl上清液加入到750μl水中。将用20％乙腈和标称1μm don稀释的样品在21 130 rcf再次离心10min，并将500μl转移到hplc小瓶中进行分析。多肽seq id no：1能够将don转化为7-酮-8-羟基-8-烯-don(定量示于图3)，而多肽seq id no：2和seq id no：3没有显示任何don转化或任何don浓度降低。本领域众所周知，7-酮-8-羟基-8-烯-don比don毒性低(stadler等人(2019)，food chem.279，303-311；stadler等人(2019)，toxins(basel)11，317)。因此，令人惊奇地发现seq id no：1能够使don解毒。
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实施例4：don转化的酶促动力学
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如实施例1所述，通过在大肠杆菌bl21(de3)中在过夜表达瞬时tb培养基(merck)中的基因表达制备了多肽seq id no：1和35.2kda参比蛋白(阴性对照)。将来自相同培养体积或10倍培养体积的生物量重悬于1.1x反应缓冲液(反应缓冲液：25mm hepes ph 7.5；10mm zncl2)中，并用超声破碎系统(qsonica)在冰上裂解。通过离心(20min 30 272 rcf 4℃)澄清裂解物，并通过sds-page证实了澄清裂解物中重组蛋白的存在。通过在25mm hepes ph 7.5与10mm zncl2中加入1mm don至终浓度为100μm don开始反应，并在30℃下温育。获得时间点的样品，并通过将10μl样品加入到40μl水和200μl乙腈中灭活。将这些停止的样品离心(20min 30 272 rcf 4℃)，并将250μl上清液转移到750μl水中，以达到在20％乙腈中的1μm的最终标称don浓度。离心(1min 21 130 rcf 4℃)后，将500μl转移到hplc小瓶中进行分析。don和7-酮-8-羟基-8-烯-don浓度的时间过程示于图4。
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