1.本发明涉及猪的功能饲料领域，提供了一种提高猪免疫力的饲料及其制备方法。
背景技术：
2.养猪业作为中国畜牧养殖业的重要部分，也是发展较早和规模较大的一项。随着经济的发展和人们生活质量的提高，猪肉的市场需求量会不断增加，但消费者对猪肉品质的要求会越来越高；而传统的喂养方式容易引起猪的免疫机能下降、肠道疾病频发、抵抗力下降等问题。在近几年国内出现多次大规模的猪流感、猪瘟等传染病，导致国内存栏量迅速下降，猪肉价格节节攀升；抗生素药物的滥用导致致病菌抗药性提高，同时又影响猪肉品质。
3.灰树花是一种优质的食药两用菌菇，其营养丰富且含有增强免疫的真菌多糖，具有免疫增强活性。灰树花及其提取物已广泛应用于食品、保健食品领域，鲜见将灰树花用于提升猪免疫力的报道。专利cn 106071218 a公开了一种提高饲料转化率猪饲料增效剂的制备方法，将灰树花菌丝作为增效成分之一，但未涉及提升猪免疫力内容。
4.申请号为cn03805536.8的发明专利公开了一种家畜用饲料添加剂，该添加剂含有舞茸由来物质，上述舞茸由来物质从干燥的舞茸、干燥的舞茸粉末及舞茸提取物的一种或一种以上选择，上述方案中虽然用到了灰树花的子实体及其提取物，但是其培养时间过长，其活性物质含量较低，且需要进行粉碎才能进行使用，不适宜大范围推广和应用，因此如何更好的将灰树花培养与猪饲料生产结合起来，成为本发明亟待解决的问题之一。
技术实现要素：
5.本发明针对上述技术存在的空白，提供了一种提高猪免疫力的饲料及其制备方法，通过结合灰树花培养、益生菌发酵饲料制作和两者复配比例，获得一种能够提高猪免疫力的液体发酵饲料。首次将灰树花培养物用于猪饲料；所获得的发酵饲料中含有机酸、活性多糖、维生素等多种活性物质，可抑制肠道有害菌，提高动物免疫力和饲料的适口性，具有饲喂简单，成本低、效果明显等优点，猪发病率低，具有很好的技术效果和推广前景。
6.本发明在本领域首次将灰树花的全发酵流程与功能性饲料结合在一起，打破了现有技术仅仅使用灰树花菌体作为功能性添加剂的限制，将灰树花发酵过程中含有菌体的灰树花发酵液作为主要成分，配合优选的功能益生菌，起到了意想不到的技术效果，填补了本领域的技术空白。相比于使用灰树华子实体和子实体粉末及其提取物，灰树花液体培养仅需7-10天，而子实体的培养和生长需几个月，节约了大量时间，同时相比于子实体，灰树花的液体培养物中有机酸、活性多糖、维生素等活性物质含量更高，同时省去了子实体需粉碎加工或者提取的过程，可直接使用。
7.本发明的具体技术方案如下：一种提高猪免疫力的饲料，其由灰树花发酵液和益生菌发酵饲料组成，两者的重量比为1～5:100；
其中所述的灰树花发酵液制备方法如下：（1）灰树花发酵培养基制作所需原料以重量百分比计：土豆2.0～5.0%、麸皮2.0～5.0%、葡萄糖0.8～2.0%、玉米粉1.0～3.0%、磷酸二氢钾0.05～0.10%、硫酸镁0.05～0.10%、硫酸铵0.05～0.15%，余量为水；土豆切成小块同麸皮一起煮熟后过滤后使用汁液同其他原料混合均匀，制成液体培养基，然后经过121℃、30min灭菌，冷却即成液体发酵培养基；（2）灰树花种子悬液的制备取灰树花试管种，在无菌操作台中进行无菌操作，使用挑针从灰树花试管种中挑取黄豆粒大小的灰树花种子，放入事先配置好pda培养基中，放入37℃，转速200rpm的摇床中培养48h，制得灰树花种子悬液；（3）灰树花培养将上述制备好的灰树花种子悬液接种于步骤1）中制作的灰树花发酵培养基中，接种量为液体发酵培养基体积的0.5～1.0%v/v，通入无菌空气，在30℃-37℃条件下，发酵培养24～50h；发酵过程中，每隔6个小时进行取样观察，检测发酵液中菌丝体含量，待菌丝体含量在0.8-1.2g/l时，终止发酵，获得到灰树花发酵液。
8.所述的益生菌发酵饲料制备方法如下：（1）液体饲料制作所述发酵饲料各组分添加的重量份数为：地瓜20～50份、麸皮3～15份、豆粕3～10份、玉米粉3～15份、碳酸钙0.5～1.0份、水20～60份；制作方法是将地瓜粉碎，再将麸皮、豆粕、玉米粉、碳酸钙和水加入到混料机中,混合0.5～1h，获得液体饲料；（2）益生菌发酵饲料生产发酵饲料所用菌种是由植物乳杆菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的冻干菌粉组成；将冻干菌粉在红糖培养基中活化，然后接种到步骤3）中制作的发酵饲料中，在25～30℃条件下密闭发酵5～7天，即可得到益生菌发酵饲料。
9.上述的植物乳杆菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的冻干菌粉均采用市场上可以购买的产品，具体可以采购自北纳生物、中国普通微生物菌种保藏管理中心等公司或机构，按照对应的产品说明书进行活化操作即可。
10.优选的，需选用的冻干菌粉中植物乳杆菌含量为5.7～8.0
×
109cfu/g，酿酒酵母含量为2.2～3.6
×
108cfu/g，地衣芽孢杆菌含量为3.5～6.2
×
10
10
cfu/g，保证发酵前的菌含量达到上述标准才能获得更好的发酵效果。
11.冻干菌粉的活化方法如下：（1）按重量百分比红糖10%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸铵0.1%放到水中，开始加热升温，并不断搅拌，待红糖全部溶解即可；（2）将步骤1）中的红糖培养基自然冷却到38℃；（3）按照菌粉：红糖培养基比例1：1000，将冻干菌粉放到步骤2）中的红糖培养基中，搅拌5min，待冻干菌粉全部分散红糖培养基中即可；（4）将步骤3）中活化液，每隔1h搅拌1次每次1min，37℃活化5h，即可获得冻干菌粉活化液；在获得上述的灰树花发酵液和益生菌发酵饲料后，发明人将两者按照上述的比例
混合均匀，即可获得提高猪免疫力的饲料。
12.经检测，该饲料通过混合菌种液体发酵后同灰树花发酵液按比例混合，得到液态饲料ph 3.8-4.5，多糖含量可达35mg/kg-150mg/kg,相比于加入灰树花子实体作为添加的猪饲料，具有成本低添加量高的优势，在严格控制饲料成本的前提下达到更好的提高猪群免疫力的效果，有更好的实用性。
13.同时发明人将上述获得的饲料用于猪的日常饲喂过程，结果发现，利用本发明的饲料饲喂的猪体内三种免疫球蛋白iga、igg、igm均高于采用传统饲料的对照组，最高较对照组分别提高37.80%、14.39%、25.00%，且利用本发明的饲料饲喂的猪腹泻率、便秘发病率、死亡率明显低于对照组，说明本发明制备的提高免疫力饲料可以明显育肥猪便秘、腹泻、消化不良等问题，可以提高猪的免疫力，降低育肥猪发病率和死亡率。
14.综上所述，本发明所获得的发酵饲料中含有机酸、活性多糖、维生素等多种活性物质，可抑制肠道有害菌，提高动物免疫力和饲料的适口性，具有饲喂简单，成本低、效果明显等优点，猪发病率低，具有很好的技术效果和推广前景。
具体实施方式
15.以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容做进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围，除特殊说明外，下述实施例中均采用常规现有技术完成。
16.实施例1一种提高猪免疫力的饲料，其由灰树花发酵液和益生菌发酵饲料组成，两者的重量比为1:100；上述提高猪免疫力的饲料的具体制备方法如下：所需原料以重量百分比计：土豆2.0%、麸皮3.0%、葡萄糖1.0%、玉米粉2.0%、磷酸二氢钾0.10%、硫酸镁0.10%、硫酸铵0.15%，余量为水，制成液体培养基，然后经过121℃、30min灭菌，冷却即成液体发酵培养基。
17.其液体培养基具体制备过程如下：（1-1）将土豆清洗削皮后，切成丝状；（1-2）将步骤1）中的土豆丝与麸皮混合加入所需培养基总量的1/2水量，搅拌均匀后，开始在在搅拌条件下煮沸处理40min；（1-3）待步骤2）中的混合液冷却到45℃，使用60目纱布，将混合液过滤，获得土豆麸皮浸出液；（1-4）将玉米粉与所需培养基总量的1/2水量的冷水搅拌均匀后，在80℃条件下糊化60min，获得玉米粉糊化液；（1-5）将步骤3）中的土豆麸皮浸出液、步骤4）中的玉米粉糊化液和原料中剩余物料混合，搅拌溶解，即获得灰树花发酵培养基。
18.（2）灰树花种子悬液的制备取灰树花试管种，在无菌操作台中进行无菌操作，使用挑针从灰树花试管种中挑取黄豆粒大小的灰树花种子，放入事先配置好pda培养基中，放入37℃，转速200rpm的摇床
中培养48h，制得灰树花种子悬液。
19.（3）灰树花培养将上述制备灰树花种子悬液接种于步骤1）中制作的灰树花发酵培养基中，接种量为液体发酵培养基体积的0.5%v/v，通入无菌空气，在通气量1:1，温度28
±
2℃、搅拌速度150r/min，ph值5.5的条件下发酵；发酵过程中，每隔6个小时进行取样观察，检测发酵液中菌丝体含量，待菌丝体含量在1.2g/l时，终止发酵，获得到灰树花发酵液，发酵时间为30h。
20.（4）液体饲料制作所述发酵饲料各组分添加的重量份数为：地瓜30份、麸皮5份、豆粕3份、玉米粉3份、碳酸钙0.5份、水53.5份；制作方法是将地瓜粉碎，再将麸皮、豆粕、玉米粉、碳酸钙和水加入到混料机中,混合0.5～1h，获得液体饲料。
21.（5）益生菌发酵饲料生产发酵饲料所用菌种是由植物乳杆菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的冻干菌粉组成；将冻干菌粉在红糖培养基中活化，然后接种到步骤3）中制作的发酵饲料中，在25℃条件下密闭发酵5天，即可得到益生菌发酵饲料；上述的植物乳杆菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的冻干菌粉均采用市场上可以购买的产品，具体可以采购自北纳生物，植物乳杆菌bncc194165，酿酒酵母bncc336499，地衣芽孢杆菌bncc221464，按照对应的产品说明书进行活化操作即可。
22.其中冻干菌粉中保证植物乳杆菌含量为5.7～8.0
×
109cfu/g，酿酒酵母含量为2.2～3.6
×
108cfu/g，地衣芽孢杆菌含量为3.5～6.2
×
10
10
cfu/g。
23.冻干菌粉的活化方法如下：（1）按重量百分比红糖10%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸铵0.1%放到水中，开始加热升温，并不断搅拌，待红糖全部溶解即可；（2）将步骤1）中的红糖培养基自然冷却到38℃；（3）按照菌粉：红糖培养基比例1：1000，将冻干菌粉放到步骤2）中的红糖培养基中，搅拌5min，待冻干菌粉全部分散红糖培养基中即可；（4）将步骤3）中活化液，每隔1h搅拌1次每次1min，37℃活化5h，即可获得冻干菌粉活化液。
24.在获得上述的灰树花发酵液和益生菌发酵饲料后，发明人将两者按照上述的比例混合均匀，即可获得提高猪免疫力的饲料，经检测其ph4.0，多糖含量在35-50mg/kg。
25.实施例2一种提高猪免疫力的饲料，其由灰树花发酵液和益生菌发酵饲料组成，两者的重量比为3.5:100；上述提高猪免疫力的饲料的具体制备方法如下：所需原料以重量百分比计：土豆3.0%、麸皮3.0%、葡萄糖2.0%、玉米粉3.0%、磷酸二氢钾0.10%、硫酸镁0.10%、硫酸铵0.15%，余量为水，制成液体培养基，然后经过121℃、30min灭菌，冷却即成液体发酵培养基。
26.其液体培养基具体制备过程如下：（1-1）将土豆清洗削皮后，切成丝状；
（1-2）将步骤1）中的土豆丝与麸皮混合加入所需培养基总量的1/2水量，搅拌均匀后，开始在在搅拌条件下煮沸处理40min；（1-3）待步骤2）中的混合液冷却到45℃，使用60目纱布，将混合液过滤，获得土豆麸皮浸出液；（1-4）将玉米粉与所需培养基总量的1/2水量的冷水搅拌均匀后，在80℃条件下糊化60min，获得玉米粉糊化液；（1-5）将步骤3）中的土豆麸皮浸出液、步骤4）中的玉米粉糊化液和原料中剩余物料混合，搅拌溶解，即获得灰树花发酵培养基。
27.（2）灰树花种子悬液的制备取灰树花试管种，在无菌操作台中进行无菌操作，使用挑针从灰树花试管种中挑取黄豆粒大小的灰树花种子，放入事先配置好pda培养基中，放入37℃，转速200rpm的摇床中培养48h，制得灰树花种子悬液。
28.（3）灰树花培养将上述制备灰树花种子悬液接种于步骤1）中制作的灰树花发酵培养基中，接种量为液体发酵培养基体积的0.5%v/v，通入无菌空气，在通气量1:1，温度28
±
2℃、搅拌速度150r/min，ph值5.5的条件下发酵；发酵过程中，每隔6个小时进行取样观察，检测发酵液中菌丝体含量，待菌丝体含量在1.2g/l时，终止发酵，获得到灰树花发酵液，发酵时间为30h。
29.（4）液体饲料制作所述发酵饲料各组分添加的重量份数为：地瓜40份、麸皮10份、豆粕5份、玉米粉5份、碳酸钙0.5份、余量为水；制作方法是将地瓜粉碎，再将麸皮、豆粕、玉米粉、碳酸钙和水加入到混料机中,混合0.5～1h，获得液体饲料。
30.（5）益生菌发酵饲料生产发酵饲料所用菌种是由植物乳杆菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的冻干菌粉组成；将冻干菌粉在红糖培养基中活化，然后接种到步骤3）中制作的发酵饲料中，在25℃条件下密闭发酵5天，即可得到益生菌发酵饲料；上述的植物乳杆菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的冻干菌粉采用与实施例1相同的菌株来源；其中冻干菌粉中保证植物乳杆菌含量为5.7～8.0
×
109cfu/g，酿酒酵母含量为2.2～3.6
×
108cfu/g，地衣芽孢杆菌含量为3.5～6.2
×
10
10
cfu/g。
31.冻干菌粉的活化方法如下：（1）按重量百分比红糖10%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸铵0.1%放到水中，开始加热升温，并不断搅拌，待红糖全部溶解即可；（2）将步骤1）中的红糖培养基自然冷却到38℃；（3）按照菌粉：红糖培养基比例1：1000，将冻干菌粉放到步骤2）中的红糖培养基中，搅拌5min，待冻干菌粉全部分散红糖培养基中即可；（4）将步骤3）中活化液，每隔1h搅拌1次每次1min，37℃活化5h，即可获得冻干菌粉活化液。
32.在获得上述的灰树花发酵液和益生菌发酵饲料后，发明人将两者按照上述的比例
混合均匀，即可获得提高猪免疫力的饲料，经检测其ph4.2，多糖含量在120mg/kg-150mg/kg。
33.实施例3一种提高猪免疫力的饲料，其由灰树花发酵液和益生菌发酵饲料组成，两者的重量比为5:100；上述提高猪免疫力的饲料的具体制备方法如下：所需原料以重量百分比计：土豆3.0%、麸皮3.0%、葡萄糖2.0%、玉米粉3.0%、磷酸二氢钾0.10%、硫酸镁0.10%、硫酸铵0.15%，余量为水，制成液体培养基，然后经过121℃、30min灭菌，冷却即成液体发酵培养基。
34.其液体培养基具体制备过程如下：（1-1）将土豆清洗削皮后，切成丝状；（1-2）将步骤1）中的土豆丝与麸皮混合加入所需培养基总量的1/2水量，搅拌均匀后，开始在在搅拌条件下煮沸处理40min；（1-3）待步骤2）中的混合液冷却到45℃，使用60目纱布，将混合液过滤，获得土豆麸皮浸出液；（1-4）将玉米粉与所需培养基总量的1/2水量的冷水搅拌均匀后，在80℃条件下糊化60min，获得玉米粉糊化液；（1-5）将步骤3）中的土豆麸皮浸出液、步骤4）中的玉米粉糊化液和原料中剩余物料混合，搅拌溶解，即获得灰树花发酵培养基。
35.（2）灰树花种子悬液的制备取灰树花试管种，在无菌操作台中进行无菌操作，使用挑针从灰树花试管种中挑取黄豆粒大小的灰树花种子，放入事先配置好pda培养基中，放入37℃，转速200rpm的摇床中培养48h，制得灰树花种子悬液。
36.（3）灰树花培养将上述制备灰树花种子悬液接种于步骤1）中制作的灰树花发酵培养基中，接种量为液体发酵培养基体积的0.5%v/v，通入无菌空气，在通气量1:1，温度28
±
2℃、搅拌速度150r/min，ph值5.5的条件下发酵；发酵过程中，每隔6个小时进行取样观察，检测发酵液中菌丝体含量，待菌丝体含量在1.2g/l时，终止发酵，获得到灰树花发酵液，发酵时间为30h。
37.（4）液体饲料制作所述发酵饲料各组分添加的重量份数为：地瓜50份、麸皮5份、豆粕3份、玉米粉3份、碳酸钙0.5份、余量为水；制作方法是将地瓜粉碎，再将麸皮、豆粕、玉米粉、碳酸钙和水加入到混料机中,混合0.5～1h，获得液体饲料。
38.（5）益生菌发酵饲料生产发酵饲料所用菌种是由植物乳杆菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的冻干菌粉组成；将冻干菌粉在红糖培养基中活化，然后接种到步骤3）中制作的发酵饲料中，在25℃条件下密闭发酵5天，即可得到益生菌发酵饲料；上述的植物乳杆菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌的冻干菌粉采用与实施例1相同的菌株来源；
其中冻干菌粉中保证植物乳杆菌含量为5.7～8.0
×
109cfu/g，酿酒酵母含量为2.2～3.6
×
108cfu/g，地衣芽孢杆菌含量为3.5～6.2
×
10
10
cfu/g。
39.冻干菌粉的活化方法如下：（1）按重量百分比红糖10%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸铵0.1%放到水中，开始加热升温，并不断搅拌，待红糖全部溶解即可；（2）将步骤1）中的红糖培养基自然冷却到38℃；（3）按照菌粉：红糖培养基比例1：1000，将冻干菌粉放到步骤2）中的红糖培养基中，搅拌5min，待冻干菌粉全部分散红糖培养基中即可；（4）将步骤3）中活化液，每隔1h搅拌1次每次1min，37℃活化5h，即可获得冻干菌粉活化液。
40.在获得上述的灰树花发酵液和益生菌发酵饲料后，发明人将两者按照上述的比例混合均匀，即可获得提高猪免疫力的饲料，经检测其ph为4.1，多糖含量在60mg/kg-90mg/kg。
41.实验例选用400头健康育肥猪，每头猪在100
±
20kg，随机分成4组，每组100头，饲养方式为自由采食，围栏圈养，3组为实验组，饲喂根据本发明实施例1-3配制的提高猪免疫力饲料；对照组1，在市售全价饲料中添加1wt%的灰树花子实体粉末；对照组2，饲喂市售全价饲料无任何添加，试验期为90天，进行试验测试，结果如下表所示： iga(g/l)igg(g/l)igm(g/l)腹泻率/%便秘发病率/%死亡率/%实施例11.034.010.562.42.10实施例21.134.450.651.31.80实施例31.064.150.651.62.20对照组10.903.920.519.030.51对照组20.823.890.529.532.52.7从上表数据可以看出，采用本发明实施例制备的提高免疫力饲料，三种免疫球蛋白iga、igg、igm均高于对照组1和对照组2，实施例2较对照组2分别提高37.80%、14.39%、25.00%效果最为明显，且实验组的腹泻率、便秘发病率、死亡率明显低于对照组1和2，说明本发明制备的提高免疫力饲料可以明显育肥猪便秘、腹泻、消化不良等问题，可以提高猪的免疫力，降低育肥猪发病率和死亡率。