纯化五层龙属植物萃取物的制造方法与流程

1.本发明涉及一种纯化五层龙属植物萃取物的制造方法。


背景技术：

2.五层龙属植物的根及茎在印度及斯里兰卡的传统医学印度韦达养生学中作为天然药物而被利用。在斯里兰卡，网状五层龙(salacia reticulata)的根皮对风湿、淋病及皮肤病的治疗有效，并且将上述根皮用于初期糖尿病的治疗已被代代相传。
3.近年来，有报道称，五层龙属植物萃取物含有各种多酚(及作为呫吨酮配糖体的芒果苷(mangiferin))。多酚被认为是苦味、涩味、收敛味、辛味、杂味，在作为食品摄取时，会给摄取者带来不适感。
4.对五层龙属植物萃取物进行纯化的情况下，要求改善风味、特别是降低五层龙属植物特有的气味及苦味。作为其改善，有报道称，对五层龙属植物萃取物使用活性炭来减少苦味物质(专利文献1)。
5.现有技术文献
6.专利文献
7.专利文献1：国际公开第2019/065396号小册子


技术实现要素：

8.发明要解决的技术课题
9.然而，为了制成不需要加工成制剂或食品等而适于经口摄取用途的五层龙属植物萃取物，在对五层龙属植物萃取物进行纯化的情况下，除了作为五层龙属植物萃取物的有效成分的莎拉西诺(salacinol)的回收率之外，还需要留意不使其浓度降低。
10.从制造成本的观点考虑，不优选因纯化而使有效成分莎拉西诺的回收率降低。并且，莎拉西诺浓度的降低会导致五层龙属植物萃取物的活性降低，因此摄取量增加，从而有可能增加摄取者的负担。并且，为了制成不加工成制剂或食品等而能够直接经口摄取的经纯化的五层龙属植物萃取物，重要的是降低苦味，并制成容易摄取的萃取物。
11.本发明鉴于上述观点，其课题在于提供一种不用大幅降低伴随纯化的莎拉西诺的回收率，且改善色泽与风味(气味及苦味)的纯化五层龙属植物萃取物的制造方法。
12.用于解决技术课题的手段
13.通常，用于得到纯化五层龙属植物萃取物的原料的回收率容易因纯化而降低，因此对含有五层龙属植物的原料萃取物(以下，也称为含有五层龙属植物的原料萃取物)不进行纯化处理。然而，通过本发明人等的深入研究，明确了如下内容：将相对于包含五层龙属植物、五层龙属植物萃取物及五层龙属植物粉碎物中的至少一种的含有五层龙属植物的原料萃取物的100质量％为40～90质量％的蛋白质或蛋白质分解物添加至萃取工序中，是有效解决上述课题的方法。
14.关于这一点，本发明人等推测如下。
ppocrateaceae)植物。作为五层龙属植物的具体例，可以举出选自网状五层龙(salacia reticulata)、长圆果五层龙(salacia oblonga)、五层龙(s alacia prinoides)、中国五层龙(salacia chinensis)、阔叶五层龙(sal acia latifolia)、河口五层龙(salacia burunoniana)、粉叶五层龙(sal acia grandiflora)及多籽五层龙(salacia macrosperma)中的一种以上的植物。作为五层龙属植物，优选为选自网状五层龙(salacia reticulata)、长圆果五层龙(salacia oblonga)及中国五层龙(salacia chinensis)中的至少一种植物。
32.在本发明中，“含有五层龙属植物的原料萃取物”是指，在萃取工序中用于得到纯化五层龙属植物萃取物的原料中源自五层龙属植物的成分，萃取物中所包含的其他成分(例如，用于制备原料的萃取溶剂等)则除外。
33.在本发明中，作为含有五层龙属植物的原料萃取物中所使用的五层龙属植物，使用五层龙属植物、五层龙属植物萃取物及五层龙属植物粉碎物中的至少一种即可。作为五层龙属植物，能够直接使用五层龙属植物的根、茎、叶、花、果实等可食用部分。
34.在本说明书中，所谓五层龙属植物的萃取物及五层龙属植物的粉碎物，以包含五层龙属植物的根、茎、叶、花、果实等可食用部分的萃取物和/或粉碎物、以及上述萃取物和/或粉碎物的干燥物的含义而使用。在本说明书中，所谓干燥物，可以为干燥粉末(提取物粉末)。在制备上述的五层龙属植物的萃取物和/或粉碎物时，也可以混合使用五层龙属植物的一种类以上的部位。从有效地制备纯化五层龙属植物萃取物的观点考虑，作为含有五层龙属植物的原料萃取物，优选使用干燥从选自根及茎的部位中萃取的五层龙属植物萃取物(提取物)或提取物而得到的提取物粉末。
35.干燥粉末(提取物粉末)能够优选通过溶剂萃取五层龙属植物的可食用部位等，并通过使在上述中得到的萃取物干燥而得到。
36.作为萃取中所使用的溶剂，可以举出水、醇或酮等，也可以使用混合二种以上的混合溶剂。
37.作为醇，可以举出甲醇或乙醇等，优选为乙醇。
38.作为酮，优选为丙酮、甲基乙基酮或环己烷等。
39.上述中，优选为水、醇、水与醇的混合溶剂或水与酮的混合溶剂，更优选为水、醇、或水与醇的混合溶剂，进一步优选为50℃～98℃的水、乙醇或水与乙醇的混合溶剂。
40.水与醇的混合溶剂中的醇含量优选为30质量％～90质量％，更优选为40质量％～70质量％。
41.关于干燥萃取物而得到干燥粉末(提取物粉末)时的干燥方法，并没有特别的限定，可以举出公知的干燥方法、例如，喷雾干燥、冷冻干燥等方法。
42.[萃取工序]
[0043]
本发明的纯化五层龙属植物萃取物的制造方法为包括如下工艺的制造方法：将包含五层龙属植物、五层龙属植物萃取物及五层龙属植物粉碎物中的至少一种的含有五层龙属植物的原料萃取物，在萃取溶剂的存在下，用相对于上述含有五层龙属植物的原料萃取物的100质量％为40～90质量％的蛋白质或蛋白质分解物进行处理。通过用40～90质量％的蛋白质或蛋白质分解物进行的处理，能够从含有五层龙属植物的原料萃取物中去除苦味、辛辣味、涩味等成分和/或着色成分。
[0044]
(蛋白质或蛋白质分解物)
[0045]
关于在本发明中所使用的蛋白质或蛋白质分解物，其种类及特性等能够没有特别限定地进行使用。作为蛋白质或蛋白质分解物，优选包含明胶、胶原肽、大豆蛋白、酪蛋白、白蛋白中的至少一种，更优选为胶原肽和/或大豆蛋白，进一步优选为平均分子量2万以下的胶原肽和/或大豆蛋白。尤其优选为平均分子量1万以下的胶原肽和/或大豆蛋白。
[0046]
从凝聚特定成分的观点考虑，蛋白质或蛋白质分解物的平均分子量的下限值优选为500，更优选为1000，进一步优选为2000，作为上限值优选为100000，更优选为70000，进一步优选为50000，尤其优选为20000。关于蛋白质或蛋白质分解物的平均分子量的范围，能够任意组合上述的下限值及上限值。
[0047]
蛋白质或蛋白质分解物的平均分子量是指利用凝胶渗透色谱法(gpc：聚乙二醇(peg)标准)测定而得的值，但为市售品的情况下，遵循由供应商提供的产品信息即可。为了以gpc求出平均分子量，以预先在相同条件下测定几种分子量已知且不同的聚乙二醇(peg)而得到的保留时间与分子量的关系的校准曲线为基础进行计算。本发明中的平均分子量是指，根据该方法并通过pe g换算而计算出的重均分子量。
[0048]
明胶可以为天然明胶或重组明胶中的任一种。所谓天然明胶，是由源自天然的胶原蛋白制作而成的明胶。明胶的来源可以举出牛、猪、鱼等，但并没有特别限定。重组明胶是指，通过基因重组技术制作而成的具有类似明胶的氨基酸序列的多钛或者蛋白样物质。重组明胶优选在胶原蛋白中具有特征性的gly-x-y所表示的重复序列(x及y分别独立地表示氨基酸的任一种)。
[0049]
胶原肽能够通过酶或酸等加水分解明胶而得到。胶原肽是大量包含甘氨酸或羟基脯氨酸的蛋白质，能够通过市售品获取。胶原蛋白无论是从哺乳类的胶原蛋白组织中萃取的胶原蛋白，还是从鱼类的胶原蛋白组织中萃取的胶原蛋白，对此没有特别限定。作为源自鱼类的胶原蛋白的原料，可以举出金枪鱼(黄鳍)、鲨鱼、鳕鱼、比目鱼、鳒鱼、鲷鱼、罗非鱼、鲑鱼、鲶鱼等的皮。作为源自哺乳类的胶原蛋白的原料，可以举出猪、牛等。胶原肽的平均分子量只要能够凝聚特定成分，则没有限定，优选为1000～30000，更优选为1500～20000，进一步优选为2000～8000，尤其优选为2000～5000。从凝聚特定成分的观点及经济上的观点考虑，胶原肽的平均分子量优选为10000以下。
[0050]
大豆蛋白可通过在含有大豆蛋白的原料中加入无机盐溶液并萃取大豆蛋白而得到。关于含有大豆蛋白的原料，并没有特别限定，能够使用脱脂大豆粉、浓缩大豆蛋白、分离大豆蛋白、豆浆等。这些原料可以使用各种市售品，也可以从作为原料的大豆制备。大豆蛋白能够包含大豆水解物等加水分解物。大豆蛋白的平均分子量只要能够凝聚特定成分，则并没有限定，优选为500～100000，更优选为5000～35000。
[0051]
酪蛋白为乳蛋白质，例如，存在于牛奶中。酪蛋白的分子种类根据基于电泳的迁移率(mobility)主要分类为4种类的酪蛋白。酪蛋白在分子内具有亲水性部分与疏水性部分，并具有两亲性。酪蛋白为白色的沉淀，平均分子量为20000～25000。
[0052]
白蛋白作为具有与构成蛋清的主要成分的蛋白质相似的生物化学性质的蛋白质而为人所知。例如，根据来源，可以举出构成蛋清的卵白蛋白、血液的血浆中所包含的血清白蛋白、乳汁中所包含的乳白蛋白。例如，白蛋白的平均分子量约为66000(血清白蛋白)。
[0053]
虽然详细机理尚不明确，但通过蛋白质或蛋白质分解物选择性地去除五层龙属植
物萃取物中所包含的特定成分，能够降低气味及苦味。
[0054]
用于将由五层龙属植物、五层龙属植物萃取物及五层龙属植物粉碎物中的至少一种构成的含有五层龙属植物的原料萃取物，在萃取溶剂的存在下进行处理而使用的蛋白质或蛋白质分解物的量，相对于含有五层龙属植物的原料萃取物100质量％优选为40质量％以上，更优选为50质量％以上，进一步优选为60质量％以上，尤其优选为70质量％以上。并且，从提高回收率的观点考虑，蛋白质或蛋白质分解物的量相对于含有五层龙属植物的原料萃取物100质量％优选为90质量％以下，更优选为85质量％以下。
[0055]
关于含有五层龙属植物的原料萃取物与蛋白质或蛋白质分解物的接触时间，从有效地得到纯化五层龙属植物萃取物的观点考虑，优选为5分钟以上，更优选为30分钟以上。并且，从得到进一步提高了α-葡糖苷酶活性抑制的纯化五层龙属植物萃取物的观点考虑，优选为24小时以下，更优选为12小时以下，进一步优选为6小时以下，尤其优选为3小时以下，最优选为1小时以下。
[0056]
(萃取温度)
[0057]
从提高所得到的纯化五层龙植物属萃取物的莎拉西诺浓度的观点考虑，萃取工序的温度优选为0℃～100℃，更优选为0℃～70℃。并且，在0℃～25℃的低温下，能够进一步抑制苦味成分或色泽成分的溶出。关于萃取时间，在萃取温度为25℃以上的情况下，优选为1小时～8小时，在萃取温度为25℃以下的情况下，优选为2小时～18小时。
[0058]
(萃取溶剂)
[0059]
作为萃取溶剂，能够对其种类及特性等没有特别限定地进行使用，虽然能够使用水和/或有机溶剂，但从制造成本的观点考虑，优选为水。关于水的种类，并没有特别的限定，能够从自来水、蒸馏水、离子交换水、天然水等中适当选择并使用。
[0060]
并且，在使用有机溶剂的情况下，例如，例示出乙醇、甲醇等醇、丙酮等酮、乙酸乙酯等酯。优选为醇、酮等亲水性有机溶剂，若考虑到制剂或食品中的使用，则更优选为醇，更进一步优选乙醇。
[0061]
另外，萃取溶剂可以为上述的五层龙属含有原料所包含的萃取溶剂。即，可以将用于调整作为原料的五层龙属植物萃取物(提取物)而使用的溶剂直接用作萃取溶剂。
[0062]
上述中，优选为水、醇、水与醇的混合溶剂或水与酮的混合溶剂，更优选为水、醇、或水与醇的混合溶剂，进一步优选为50℃～98℃的水、乙醇或水与乙醇的混合溶剂。
[0063]
水与醇的混合溶剂中的醇含量优选为30质量％～90质量％，更优选为40质量％～70质量％。
[0064]
[分离工序]
[0065]
在本发明的纯化五层龙属植物萃取物的制造方法中，优选去除通过用蛋白质或蛋白质分解物进行的处理而产生的不溶解物。关于去除不溶解物的方法，并没有限定，能够使用离心分离、过滤、沉淀残留等分离方法。根据需要，能够在上述萃取工序的前或后使其接触活性炭或苯乙烯系合成树脂。
[0066]
通过组合选自过滤、离心分离、沉淀处理、膜处理等中的固液分离处理中的一种或二种以上来对经由萃取工序而得到的萃取物进行处理，能够去除五层龙属植物的固体成分、不溶解物等，从而得到纯化五层龙属植物萃取物。
[0067]
关于过滤的方法，并没有特别限定，例如，能够采用通过滤纸、金属制过滤器、气体
过滤器等过滤器分离。关于过滤器的网格尺寸，只要能够可靠地去除五层龙属植物的固体成分及不溶解物，则没有特别限定。
[0068]
关于离心分离，并没有特别限定，例如，能够使用分离板型、圆筒型、酒瓶(decanter)型等公知的机器来进行。关于离心分离的使用条件(转速及时间)，只要能够可靠地去除五层龙属植物的固体成分及不溶解物，则并没有特别限定。
[0069]
关于膜处理，例如，是通过由细孔径为10μm以下的高分子材料构成的膜的处理，作为膜的形态，能够举出平膜、中空纤维膜等。
[0070]
在分离工序中，从提高纯化效率的观点考虑，可以添加通过浓缩或干燥在萃取工序中得到的萃取物而高浓度化的浓缩工序，也可以在分离工序的中途利用浓缩工序。关于干燥在萃取工序中得到的萃取物而得到干燥粉末(提取物粉末)的方法，并没有限定，可以举出公知的干燥方法，例如喷雾干燥、冷冻干燥等方法。
[0071]
通过如上所述的本发明的制造方法，在维持莎拉西诺回收率的同时，降低了五层龙属植物特有的气味及苦味，提高了萃取物中的五层龙属植物的含量。其结果，能够制成不加工成制剂或食品等而能够经口摄取的纯化五层龙属植物萃取物。
[0072]
另外，可以在经过上述萃取工序而得到纯化五层龙属植物萃取物(纯化提取物)之后，将提取物进行浓缩(浓缩纯化提取物)或干燥(纯化提取物粉末)。关于浓缩或干燥方法，并没有特别限定，可以举出公知的方法。
[0073]
另外，在本说明书中，“五层龙属植物萃取物的回收率”或“回收率”是指，以百分率表示纯化五层龙属植物萃取物的固体成分量相对于不进行上述萃取处理而得到的五层龙属植物萃取物的固体成分量的值。另外，关于回收率的上限，并没有特别限定，也可为100质量％。
[0074]
通过本发明的制造方法而得到的纯化五层龙属植物萃取物的经时保存稳定性也优异。具体而言，能够降低因室温保存引起的着色及气味的发生。关于这一点，虽然详细的机理尚不明确，但认为如下：通过选择性地去除上述特定成分，能够抑制随着时间推移而因空气中的水分的影响导致的特定成分的变质、或特定成分与五层龙属植物萃取物中的有效成分的反应，因此纯化五层龙属植物萃取物的保存稳定性变得良好。
[0075]
[纯化五层龙属植物萃取物]
[0076]
由于本发明的纯化五层龙属植物萃取物的风味得到了改善，因此是可以不加工成制剂或食品等而能够经口摄取的萃取物。具体而言，降低了五层龙特有的气味及苦味，并具有下述所示的特性。
[0077]
关于纯化五层龙属植物萃取物，多酚类及脂质类的含量相对于纯化五层龙属萃取物总量总计成为小于10质量％。
[0078]
另外，在本说明书中，多酚类是指，能够遵照iso14502-1(2005)并通过folin-ciocalteu法测定的化合物，例如可以举出儿茶素等。并且，脂质类是指，在食品中的脂质类的分析中所使用的能够通过酸分解法测定的化合物，例如可以举出胆固醇、甘油等。
[0079]
关于本发明的纯化五层龙属植物萃取物，如上所述，由于降低了多酚类及脂质类，因此除了降低五层龙属植物特有的气味及苦味之外，还能够降低随着时间推移而着色及气味的发生。
[0080]
关于纯化五层龙属植物萃取物，可以对其进行干燥(纯化提取物粉末)，也可以添
加赋形剂等而制成粉末，也可以进一步实施造粒处理而制成加大了粒径的造粒物。作为赋形剂，能够对其种类及特性等没有特别限定地进行使用。
[0081]
纯化五层龙属植物萃取物的苦味在多酚类中也能够以表儿茶素的含量作为指标来进行判断。从进一步降低苦味的观点考虑，相对于纯化五层龙属萃取物总量，表儿茶素的含量优选小于0.004质量％，更优选小于0.003质量％。
[0082]
(莎拉西诺的含量)
[0083]
纯化五层龙属植物萃取物中的莎拉西诺的含量能够使用莎拉西诺的标准物质进行测定而求出。例如，在使用高速液相色谱的情况下，能够通过以以下的条件进行检测来确认。
[0084]
管柱：shodex asahipak nh2p-504e
[0085]
流速：1ml/min
[0086]
洗脱液：80％乙腈+20％水
[0087]
烤箱温度：30℃
[0088]
注入量：25μl
[0089]
检测器：电荷化粒子检测器(charged aerosol detector：cad)
[0090]
[用途]
[0091]
关于本发明的纯化五层龙属植物萃取物的用途，只要能够发挥本发明的效果，则并没有特别限定，例如，可以举出食品(包括饮料及保健品)、食品材料、医药部外品(quasi drug)、医药品、医药品材料及医药部外品材料等，具体而言，可以举出日本特开2017-132763号公报的0031～0060段中所记载的内容，若适用于作为食品、食品材料、经口摄取用途的医药部外品、医药品、医药品材料及医药部外品材料，则本发明的效果更有效地发挥作用。
[0092]
实施例
[0093]
以下，通过实施例对本发明更具体地进行了说明，但本发明只要不超出其主旨，则不限定于以下实施例。
[0094]
比较例1：含有五层龙属植物的原料萃取物的制备
[0095]
将网状五层龙(salacia reticulata)的根部分粉碎之后，对在70℃的热水中萃取而得到的溶液进行离心分离(转速：1000rpm，时间：10分钟)，回收混合溶液的上清液，进行过滤并冷却至室温，从而得到了含有五层龙属植物的原料萃取物(萃取液)(比较例1)。
[0096]
比较例2：含有五层龙属植物的原料萃取物的制备
[0097]
在通过比较例1的步骤制备的含有五层龙属植物的原料萃取物中，一边搅拌并一边添加活性炭1.0质量％，从而得到了混合溶液。将所得到的混合溶液经60分钟一边搅拌一边使其与活性炭进行反应，进行离心分离(转速：1000r pm，时间：10分)，回收混合溶液的上清液，进行过滤并冷却至室温，从而得到了含有五层龙属植物的原料萃取物(萃取液)(比较例2)。
[0098]
实施例1～实施例6：含有纯化五层龙属植物的萃取物的制备
[0099]
相对于通过比较例1的步骤制备的含有五层龙属植物的原料萃取物(萃取液)的100质量％，添加表1中所记载的蛋白质或蛋白质分解物，由此通过蛋白质或蛋白质分解物对含有五层龙属植物的原料萃取物进行了处理。在表1中，示出处理温度及处理时间。将所
得到的溶液进行离心分离(转速：1000rp m，时间：10分钟)，回收混合溶液的上清液，进行过滤并冷却至室温，从而得到了含有纯化五层龙属植物的萃取物(萃取液)。
[0100]
在实施例1中使用的胶原肽(weishardt公司制naticol1000)的平均分子量为3000(表中标记为mw3000)。
[0101]
在实施例2中使用的胶原肽(nitta gelatin inc.制860gel)的平均分子量为20000(表中标记为mw20000)。
[0102]
在实施例3～实施例6中使用的明胶(nitta gelatin inc.制)、大豆蛋白(fujifilm wako pure chemical corporation制)、酪蛋白(fujifilm wa ko pure chemical corporation制)、白蛋白(fujifilm wako pure chemica l corporation制)的平均分子量分别为10万、3万、2万、8万。
[0103]
[评价]
[0104]
对于比较例的五层龙属植物萃取物及实施例的纯化五层龙属植物萃取物，进行了以下的各评价。将结果示于表1。
[0105]
＜莎拉西诺浓度＞
[0106]
通过上述的实验法，测定了实施例1～实施例6及比较例1～比较例2的莎拉西诺浓度。接着，将比较例1的莎拉西诺浓度设为100，计算了实施例及比较例的莎拉西诺浓度的相对值。
[0107]
＜莎拉西诺回收率＞
[0108]
根据下述式，计算了实施例及比较例的莎拉西诺回收率。
[0109]
莎拉西诺回收率(％)＝五层龙属植物萃取物的回收率(％)
×
莎拉西诺浓度
[0110]
＜着色的评价＞
[0111]
将试样溶于纯水中，以使其浓度成为0.7％，并通过使用了光路长度1cm的槽的紫外可见分光法，测定了波长550nm处的吸光度。
[0112]
另外，测定装置使用了紫外可见分光光度计(机种名：u-3310，hitachi,ltd.)，空白培养基试验使用了纯水。
[0113]
将比较例1的吸光度设为100，计算出了实施例及比较例的吸光度的相对值。
[0114]
＜气味的评价＞
[0115]
由5名被测试者按照以下步骤进行了评价。
[0116]
(1)将比较例1设为基准5，由各被测试者按照以下基准进行了评价。
[0117]
1：感觉不到五层龙属植物特有的气味，容易经口摄取
[0118]
2：稍微感觉到五层龙属植物特有的气味，但完全不影响经口摄取
[0119]
3：感觉到了五层龙属植物特有的气味，但能够经口摄取
[0120]
4：稍微强烈地感觉到五层龙属植物特有的气味，难以经口摄取
[0121]
5：五层龙属植物特有的气味强烈，经口摄取很困难
[0122]
(2)对于各实施例及比较例，对上述(1)的值进行算术平均，并按照以下基准进行了评价。
[0123]
a：1.0以上且小于2.0
[0124]
b：2.0以上且小于3.0
[0125]
c：3.0以上且小于4.0
[0126]
d：4.0以上且5.0以下
[0127]
另外，a、b或c为作为产品容许的范围。
[0128]
＜苦味的评价＞
[0129]
由5名被测试者按照以下步骤进行了评价。
[0130]
(1)将比较例1设为基准5，由各被测试者按照以下基准进行了评价。
[0131]
1：感觉不到苦味，容易经口摄取
[0132]
2：稍微感觉到苦味，但完全不影响经口摄取
[0133]
3：感觉到苦味，但能够经口摄取
[0134]
4：稍微强烈地感觉到苦味，难以经口摄取
[0135]
5：苦味强烈，经口摄取很困难
[0136]
(2)对上述(1)的值进行算术平均，并按照以下基准进行了评价。
[0137]
a：1.0以上且小于2.0
[0138]
b：2.0以上且小于3.0
[0139]
c：3.0以上且小于4.0
[0140]
d：4.0以上且5.0以下
[0141]
另外，a、b或c为作为产品容许的范围。
[0142]
[表1]
[0143][0144]
根据以上的结果，经过本发明的萃取工序的实施例1～实施例6中，在没有降低作为有效成分的莎拉西诺的回收率的情况下，显著降低了所溶出的色素，并抑制了气味或苦味的发生。尤其是，实施例1的分子量1万以下的胶原肽的着色降低或苦味、气味的降低效果显著。