一种富含麦角硫因的硫因灵芝茶及其制备方法

本发明涉及一种功能食品研发领域，特别涉及一种富含麦角硫因的硫因灵芝茶及其制备方法。

背景技术：

1、食用菌在功能食品中的应用非常广泛，其中，灵芝(ganoderma)富含多糖、三萜、免疫调节蛋白和酚类等生物活性物质，具有抗癌、消炎、免疫调节、以及保护肝脏、神经和心血管等强大的药用和保健功能。灵芝对神经保护的功效已有研究证实，灵芝水提物具有调节神经传递、神经可塑性和维持氧化还原稳态作用(sharma and tulsawani,2020)，通过提高小鼠5-羟色胺(5-ht)水平(叶辉宇et al.,2021)，从而改善睡眠。当前，许多安神助眠组合配方中都含有灵芝，如“一种食品、保健品或药物组合物及其制备方法和用途(cn201811050230.3)”、“一种舒缓情绪、放松减压、安神助眠、消除疲惫的中草药组合物(cn201510718313.5)”和“一种γ-氨基丁酸灵芝多糖保健食品组合物及其制备方法(cn202011501344.2)”，可见灵芝在安神助眠保健品领域的广泛应用。然而，这些组合配方中的灵芝组分均为子实体材料，灵芝子实体的栽培管理耗时较长，周期约3～5个月，而且产量和质量不稳定，再者，灵芝子实体坚硬，尤其是当中的灵芝孢子具有两层细胞壁，如何提高人体对灵芝活性成分的有效利用率，仍然是一种挑战。虽然近期公开的一种灵芝蓝莓复合发酵饮料及其制备方法(202110109543.7)是利用发酵菌剂对灵芝子实体进行发酵，以促使活性物质转化到胞外，但是需要对灵芝子实体进行70℃～80℃变温干燥和短波红外杀菌至少12小时，对原材料的处理耗时耗能。相比于子实体，灵芝菌丝体多糖含量和抗氧化活性更高(hsu and cheng,2018)(li et al.,2016)，而且菌丝的麦角硫因含量显著更高(leeet al,.2009)(cohen et al.,2014)。灵芝子实体的三萜类药效成分含量比菌丝体高(hsuand cheng,2018)，而灵芝三萜类成分普遍具有苦味，降低了子实体的食用性风味。因此，利用灵芝菌丝体发酵物质代替子实体，具有周期短、更易获取有效成分并且降低苦味等优势，在功能食品领域有广泛的应用价值。

2、硫因灵芝(保藏编号：cgmcc no.19152)属于无柄灵芝(g.resinaceum)，为“高产麦角硫因的灵芝菌株及其应用(cn202010120380.8)”所涉及的灵芝菌株fq23，与杏鲍菇、金针菇、蛹虫草、榆黄蘑、灰树花等9个菌株相比，硫因灵芝综合了菌丝生长活力强和高产麦角硫因的特性，其麦角硫因产量最高达8.7626mg/l，适合作为高产麦角硫因的菌丝体发酵出发菌株。但目前尚未有利用无柄灵芝菌丝体发酵高产麦角硫因的特性而开发功能食品。

3、麦角硫因(ergothioneine，egt)是2-硫基-l-组氨酸三甲基内盐，一种稳定性很强的水溶性天然产物，具有较强的抗氧化活性(潘虹余et al.,2019)。麦角硫因具有保护大脑免受氧化损伤、抑制神经炎症、促进神经发生等神经调节功能。较低的血液麦角硫因水平与多种疾病的发病率相关，如帕金森病、轻度认知障碍、克罗恩病和神经衰弱等；麦角硫因水平高，有利于降低心脏代谢疾病风险和相关死亡率，降低周围神经病变患病率(cheah andhalliwell,2021)。麦角硫因通过减少氧化应激损伤、促进神经元分化而增强物体识别记忆和预防神经退行性疾病。如今，社会竞争和压力愈加强烈，导致人们日常生活中常常出现焦虑不安甚至抑郁的心理状态，严重影响睡眠质量。慢性睡眠不足和抑郁症状都是神经退行性疾病的危险因素，有研究表明，麦角硫因对睡眠障碍和抑郁的改善作用可归因于减少脑干和周围神经系统炎症、调节脑内氧化应激，以及麦角硫因可能参与的神经分化(matsudaet al.,2020)。因此，麦角硫因在神经调节功能产品中具有潜在的应用价值。

4、然而，人体不能自主合成麦角硫因，麦角硫因一般是通过膳食补充的，其中食用菌的麦角硫因含量最高。但是通过人工化学合成或从生物组织中提取的麦角硫因产量低，成本高，因此采用生物发酵技术生产麦角硫因正当流行。在功能食品领域，当前有“富含麦角硫因的功能性口服制剂的制备方法(cn201110459864.6)”和“一种含麦角硫因的猴头菌保健品制剂及其制备方法(cn201910157075.3)”，均采用食用菌菌丝体的液体深层发酵技术，经过对发酵液浓缩和干燥，保留了发酵过程中的全部活性营养成分，并加入了辅料制备成富含麦角硫因的口服制剂。然而，液体深层发酵需水量大，对于食用菌菌丝生长的好氧特性，还需要通过搅拌或振荡等措施增加溶氧量，对容器设备和无菌条件的要求较高，另外，液体培养基的营养物质为可溶性的浸提物和化学合成试剂，原材料成本比较高。相对而言，固体发酵具有节约成本的优势，更适合好气性强的灵芝菌丝的生长，其发酵产物也因培养基质成分的多样性而更加丰富，但目前尚未出现以固体发酵形式生产的可食用富含麦角硫因的产品。

5、玉米芯含有丰富的纤维素和半纤维素，是生产低聚木糖的最适原料。然而长久以来，玉米芯被视为农业副产物，人们很少考虑到玉米芯对人体的保健价值。在韩国，玉米芯成为一种可泡水饮用的商品，有治疗咳嗽、降血压和抗衰老的作用。有研究表明，玉米芯多糖具有调节血糖的功能(马永强et al.,2020)(马永强et al.,2019)。然而玉米芯需要经过酶的降解，才能更高效地产生具有生物活性的低聚木糖。灵芝作为一种白腐真菌，具有丰富的木质纤维素酶系统，包括β-葡聚糖酶，有助于玉米芯低聚木糖的生产。因此，玉米芯作为灵芝固体发酵基质不仅有利于菌丝生长，而且可发挥其保健功能，提升玉米芯的食品应用价值。目前，国内尚未有直接利用发酵的玉米芯作为功能食品。

技术实现思路

1、为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种富含麦角硫因的硫因灵芝茶的制备方法。

2、本发明的另一目的在于提供通过上述制备方法制备的富含麦角硫因的硫因灵芝茶。该发酵茶具有缓解焦虑、安神助眠的功效。

3、本发明可解决的关键问题有：1、以硫因灵芝作为出发菌株，利用其菌丝体发酵高产麦角硫因的优势，解决了灵芝活性成分的稳定性和人体吸收利用效率问题；2、以玉米芯为主要固体发酵基质，不仅有效解决了灵芝好气性菌丝体在液体发酵过程中较高的成本问题，而且解决了玉米芯的保健价值问题；3、以发酵菌质袋泡茶为应用方式，解决了灵芝子实体泡茶的苦味问题，免除了繁琐的提取、纯化或浓缩等加工步骤，有效提高了灵芝固体发酵菌质活性成分的综合利用价值。

4、本发明的目的通过下述技术方案实现：

5、一种富含麦角硫因的硫因灵芝茶的制备方法，包括如下步骤：

6、(1)将硫因灵芝菌株进行活化，然后接种到液体培养基中振荡培养，制成硫因灵芝种子液；

7、(2)将玉米芯洗净、干燥、粉碎、过筛得玉米芯颗粒，将玉米芯颗粒、麦麸和黄豆粉混合，加入纯水，搅拌均匀，分装，用透气膜封口，灭菌，冷却得固体发酵培养基；

8、(3)取步骤(1)的硫因灵芝种子液接种到步骤(2)的固体发酵培养基中，在恒温、黑暗条件下静置培养；

9、(4)将步骤(3)发酵结束的整个菌质取出，切碎平铺，烘干至恒重；

10、(5)将步骤(4)干燥的灵芝发酵菌质粉碎，分装成袋，制备得硫因灵芝茶，即硫因灵芝袋泡茶。

11、步骤(1)中，

12、优选的，所述的硫因灵芝为灵芝(ganoderma resinaceum)fq23，保藏编号：cgmccno.19152；

13、优选的，所述的液体培养基为含有适量玻璃珠的马铃薯蔗糖液体培养基；进一步的，玻璃珠的用量为50～65粒/l；更进一步为50粒/l。

14、优选的，所述的振荡培养的条件为150～180rpm、24～30℃条件下振荡培养4～6d；进一步为180rpm、27℃条件下振荡培养5d；

15、步骤(2)中，

16、优选的，所述玉米芯为所有类型的玉米芯，包括甜玉米芯、紫玉米芯、糯玉米芯、普通玉米芯(高油玉米芯和优质蛋白玉米芯)等中的至少一种。

17、优选的，所述的过筛为过6目～10目筛；进一步为过10目筛；

18、优选的，玉米芯颗粒20～40质量份，麦麸20～40质量份，黄豆粉20～40质量份。

19、进一步的，玉米芯颗粒25～35质量份，麦麸30～40质量份，黄豆粉25～35质量份。

20、更进一步的，玉米芯颗粒30～35质量份，麦麸33～37质量份，黄豆粉30～35质量份。

21、再进一步的，玉米芯颗粒32.4质量份，麦麸34.9质量份，黄豆粉32.7质量份。

22、优选的，分装所用的容器为玻璃容器或塑料瓶(袋)，其基质密度为0.3～0.8g/cm3；进一步为0.5g/cm3；

23、进一步的，所述的玻璃容器为90ml或250ml组培瓶；

24、再进一步的，对于90ml组培瓶，基质密度为0.5g/cm3，培养基的装料量为13～41g湿重；进一步为13～25g湿重；更进一步为22.5g湿重；

25、对于250ml组培瓶，基质密度为0.5g/cm3，培养基的装料量为37～113g湿重；进一步为37～65g湿重；更进一步为62.5g湿重；

26、优选的，所述的灭菌为高压灭菌，条件为121℃高压蒸汽灭菌30～40min；

27、优选的，所述的固体发酵培养基中的含水量30％～60％；进一步为40～60％；更进一步为44.5～55％；再进一步为44.5％；

28、步骤(3)中，

29、优选的，所述的硫因灵芝种子液的接种量为5～18ml/100g湿重固体发酵培养基；进一步为14ml/100g湿重固体发酵培养基；

30、优选的，所述的培养的条件为：24～30℃培养11～15d；进一步为29～30℃培养14～15d；

31、步骤(4)中，优选的，所述烘干的温度为55～65℃；进一步为60℃。

32、步骤(5)中，

33、优选的，粉碎的方式为碾碎或捶打，粉碎程度为过6目～10目筛(优选过10目筛)，每袋分装灵芝固体发酵菌质干重2～4g(优选3g)。

34、优选的，硫因灵芝茶除了原味无任何添加外，还可以添加枸杞、苦荞麦、山楂和玫瑰花中的至少一种；

35、更进一步的，

36、将灵芝发酵菌质制备得到硫因灵芝茶，作为原味的硫因灵芝茶；

37、将灵芝发酵菌质、枸杞、苦荞麦，分装成袋，制备得到枸杞苦荞麦风味的硫因灵芝茶。

38、将灵芝发酵菌质、枸杞、苦荞麦，分装成袋，制备得到山楂玫瑰花风味的硫因灵芝茶。

39、一种富含麦角硫因的硫因灵芝茶，通过上述制备方法制备得到。

40、本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

41、(1)本发明利用了玉米芯、麦麸和黄豆粉作为灵芝固体发酵基质，通过发酵工艺优化使每克菌质干重的麦角硫因产量达到了1.146±0.066mg/g dw，可给消费者提供优质的麦角硫因来源，促进人体健康。

42、(2)本发明以硫因灵芝为出发菌株，利用其麦角硫因产量高、菌丝体活力强等优势，生产富含麦角硫因的灵芝菌丝体发酵产品，与灵芝子实体产品相比，不仅提高了人们在膳食中麦角硫因的摄入量，而且提高了灵芝菌质活性成分的吸收利用效率。

43、(3)本发明的发酵产物以烘干直接制备成茶包的方式应用，不仅充分保留了麦角硫因成分，而且综合保留了灵芝发酵产物的活性成分和营养成分，与单一的麦角硫因产品相比，具有成本低、生理调节靶点多、功效广泛的优势。

44、(4)经动物实验验证了本发明的菌质袋泡茶具有安全性，对实验鼠的肝脏、肾脏和结肠都没有损伤，对正常小鼠的自主行为没有不利影响；具有缓解焦虑、安神助眠的生理调节功能，恢复失眠小鼠的5-羟色胺(5-ht)水平，降低失眠小鼠的促肾上腺皮质激素释放激素(crh)、促肾上腺皮质激素(acth)和皮质酮(cort)水平，从而缓解下丘脑-垂体-肾上腺(hpa)轴的亢奋。