宠物食品、透明质酸或其盐在促进皮毛健康、肠道健康、泌尿系统健康中的应用的制作方法

1.本技术涉及宠物健康领域，尤其涉及宠物食品、透明质酸或其盐在促进皮毛健康、肠道健康、泌尿系统健康中的应用。


背景技术：

2.《2021年中国宠物医疗白皮书》数据显示，宠物健康问题主要是胃肠道和皮肤的问题。除此之外，宠物泌尿系统问题占比也日益增高，其中宠物猫增势更为明显，2020年宠物猫泌尿系统问题占比约19％，较2019年增长约 10％。
3.消费者偏好变化推动宠物食品推新向高品质方向发展。近些年，宠物主人在宠物基本健康的基础上更加注重营养均衡、毛发光滑、肠胃健康等高层次因素，这种偏好趋势促使宠物食品推新发生变化。报告显示美国有75％的猫狗主人认为“具有特定健康问题的宠物可以通过有针对性的宠物食品配方解决”。透明质酸就是功能性宠物食品重要的附加成分之一，这类产品在国外已流行了十多年。
4.专利文献1公开了一种透明质酸保健品的制备工艺，通过对宠物狗的毛发亮度、健壮程度及掉毛量进行评分的方法证明添加透明质酸可以有效维持宠物肠道健康、顺滑毛发、减少掉毛等。
5.专利文献2公开了一种宠物食品及及其制备方法，该发明的宠物食品含有透明质酸，通过测量宠物狗体重、观察皮毛顺滑程度等方法说明透明质酸能够调节肠胃、增强食欲及顺滑宠物皮毛等。
6.上述专利文献虽公开了透明质酸应用于宠物食品具有调理肠胃和顺滑皮毛的功效，但其皮毛评价方法多为肉眼观察、触摸等简单手段，肠胃评价仅以体重变化或强壮程度为指标，评价指标单一且具有很强的主观性。
7.近些年，宠物泌尿系统问题日益多见，其中尿石症最为常见，而其预防或治疗的原则之一则是增加饮水量，即增加尿量，以稀释尿液中的溶质。
8.专利文献
9.专利文献1cn 113598267 a
10.专利文献2cn 109965124 a


技术实现要素：

11.针对上述现有技术的缺点和不足之处，本技术提供一种特定分子量的透明质酸或其盐，本技术通过检测宠物的生长性能、血液指标、皮毛指标、肠道健康及微生物组学等指标科学而全面的分析了透明质酸的功效，阐明了透明质酸或其盐在宠物皮毛健康、肠道健康及泌尿系统健康方面的应用。
12.本技术提供了以下技术方案：
13.1.一种宠物食品，其中，包括透明质酸或其盐；
14.优选地，所述透明质酸或其盐的分子量范围为80kda-1000kda，优选的分子量范围为100kda-800kda，进一步优选为200kda-600kda；
15.进一步优选地，所述透明质酸的盐是透明质酸的钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐、铋盐或者它们中两种以上的组合。
16.2.根据项1所述的宠物食品，其中，
17.所述宠物食品还包括鸡肝粉。
18.3.透明质酸或其盐在制备促进皮毛健康的宠物食品中的应用。
19.4.根据项3所述的应用，其中，所述透明质酸或其盐的分子量范围为 80kda-1000kda，优选的分子量范围为100kda-800kda，进一步优选为 200kda-600kda；
20.优选地，所述透明质酸的盐是透明质酸的钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐、铋盐或者它们中两种以上的组合。
21.5.根据项3所述的应用，其中，在用于促进皮毛健康时，透明质酸或其盐的口服用量大于等于20mg/天/只宠物，优选为大于等于40mg/天/只宠物。
22.6.透明质酸或其盐在制备促进肠道健康的宠物食品中的应用。
23.7.根据项6所述的应用，其中，所述透明质酸或其盐的分子量范围为 80kda-1000kda，优选的分子量范围为100kda-800kda，进一步优选为 200kda-600kda；
24.优选地，所述透明质酸的盐是透明质酸的钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐、铋盐或者它们中两种以上的组合。
25.8.根据项6所述的应用，其中，在用于促进肠道健康时，透明质酸或其盐的口服用量大于等于20mg/天/只宠物，优选为大于等于40mg/天/只宠物。
26.9.透明质酸或其盐在制备促进泌尿系统健康的宠物食品中的应用。
27.10.根据项9所述的应用，其中，所述制备促进泌尿系统健康的宠物食品是指用于制造预防或治疗宠物尿石症的宠物食品。
28.11.根据项9或10所述的应用，其中，所述透明质酸或其盐的分子量范围为80kda-1000kda，优选的分子量范围为100kda-800kda，进一步优选为200kda-600kda；
29.优选地，所述透明质酸的盐是透明质酸的钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐、铋盐或者它们中两种以上的组合。
30.12.根据项9或10所述的应用，其中，在用于促进泌尿系统健康时，透明质酸或其盐的口服用量大于等于20mg/天/只宠物。
31.本技术具有以下有益技术效果：
32.1、本技术提供了透明质酸或其盐在宠物健康方面的应用，主要涉及在宠物皮毛健康、肠道健康及泌尿系统健康等方面的应用。
33.2、本技术的宠物食品含有低分子量的透明质酸或其盐，易于宠物吸收，且能够快速溶解。
34.3、本技术通过检测血氧指标包括超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽过氧化物酶酶(gsh-px)、丙二醛(mda)、总抗氧化能力(t-aoc)等证明食用透明质酸或其盐能提高血液的抗氧化能力，有助于皮毛健康。
35.4、关于透明质酸或其盐在宠物皮毛健康方面的应用，本技术除感官评价外，还利用多种仪器设备检测了宠物皮肤质量评价指标和毛发质量评价指标，多角度的对宠物皮毛
进行评价。
36.5、关于透明质酸或其盐在宠物肠道健康方面的应用，本技术通过肠道微生物组学分析的方法，从生物多样性、物种丰度、预测功能基因等方面对比了食用透明质酸或其盐后引起的变化，证明食用透明质酸或其盐可改善肠道菌群结构及丰度，促进有利于肠道菌群平衡的细菌生长，减少有害菌生长。
37.6、关于透明质酸或其盐在宠物泌尿系统健康方面的应用，本技术首次发现食用透明质酸或其盐能够显著增加宠物的饮水量，有助于预防及治疗尿石症。
附图说明
38.图1为不同组临清狮猫被毛质量感官对比图；
39.图2为肠道微生物venn图；
40.图3为饲喂不同剂量透明质酸钠的猫在肠道微生物门水平上的物种组成；
41.图4为饲喂不同剂量透明质酸钠的猫在肠道微生物门水平上组间差异分析；
42.图5a和图5b为肠道微生物lefse多级物种判别差异分析；
43.图6为不同透明质酸钠添加水平功能注释聚类热图。
具体实施方式
44.需要说明的是，在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可以理解，技术人员可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名词的差异来作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异来作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本技术的较佳实施方式，然所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本技术的范围。本技术的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
45.本技术在第一方面提供了透明质酸或其盐在制备促进皮毛健康的宠物食品中的应用。
46.在本说明书的上下文中，“透明质酸或其盐”符合医药领域的一般定义。透明质酸(ha)又名玻尿酸，是一种酸性粘多糖，其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要功能。研究广泛报道的是ha在化妆品方面的功效，然近年来，其在临床医学方面的应用也越来越多被报道，如加速伤口愈合，缓解关节炎等。值得注意的是，ha因分子量大小不同作用功效也不尽相同。在本技术的技术方案中，80kda-1000kda的特定分子量的透明质酸钠具有促进皮毛健康的技术效果。
47.本技术提供了一种宠物食品，其中，包括透明质酸或其盐。
48.在一些具体实施方式中，所述透明质酸或其盐的分子量范围为80kda
ꢀ‑
1000kda，优选的分子量范围为100kda-800kda，进一步优选为200kda
ꢀ‑
600kda；
49.例如，所述透明质酸或其盐的分子量可以为80kda、100kda、200kda、 300kda、400kda、500kda、600kda、700kda、800kda、900kda、1000 kda或其之间的任意范围。
50.在一些具体实施方式中，所述透明质酸的盐是透明质酸的钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐、铋盐或者它们中的两种以上的组合。具体而言，“所述透明质酸的盐”可以包含一种透
明质酸盐、两种透明质酸盐、三种透明质酸盐、四种透明质酸盐、五种透明质酸盐、六种透明质酸盐；所述盐的种类选自钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐和铋盐。
51.在一些具体实施方式中，所述宠物食品还包括鸡肝粉。
52.本技术提供了一种透明质酸或其盐在制备促进皮毛健康的宠物食品中的应用。
53.本发明中的透明质酸选自低分子量透明质酸，透明质酸分子量大小对透明质酸的生物活性影响较大，不同分子量范围的透明质酸表现出截然不同的生理学功能。低分子量的透明质酸(分子量范围80kda-1000kda)，表现出非常强的生物活性，具有抗炎、抑制病菌产生、促进创伤愈合、促进骨和血管生成、免疫调节等作用，且低分子量透明质酸易溶于水且粘度较低，能快速透入皮肤，合成皮肤内源性高分子透明质酸达到保水作用。可用于宠物关节的保健和皮毛的护理。宠物通过口服透明质酸来增加体内透明质酸的含量，可补充宠物体内透明质酸的不足。透明质酸通过消化、吸收，可使皮肤毛发滋润光滑、柔软而富有弹性；可防止关节炎等骨病的发生。
54.在一些具体实施方式中，所述透明质酸的盐是透明质酸的钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐、铋盐或者它们中的两种以上的组合。具体而言，“所述透明质酸的盐”可以包含一种透明质酸盐、两种透明质酸盐、三种透明质酸盐、四种透明质酸盐、五种透明质酸盐、六种透明质酸盐；所述盐的种类选自钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐和铋盐。
55.在一些具体实施方式中，所述透明质酸或其盐的分子量范围为80kda
ꢀ‑
1000kda，优选的分子量范围为100kda-800kda，进一步优选为200kda
ꢀ‑
600kda；
56.例如，所述透明质酸或其盐的分子量可以为80kda、100kda、200kda、 300kda、400kda、500kda、600kda、700kda、800kda、900kda、1000 kda或其之间的任意范围。
57.在一些具体实施方式中，在用于促进皮毛健康时，透明质酸或其盐的口服用量大于等于20mg/天/只宠物，优选为大于等于40mg/天/只宠物，口服天数大于等于30天。
58.在一些具体实施方式中，在用于促进皮毛健康时，食用透明质酸或其盐能够显著提高机体抗氧化能力，显著提高宠物被毛光泽度和被毛质量，显著提高皮肤水分，对皮毛健康有益。
59.本技术提供了一种透明质酸或其盐在制备促进肠道健康的宠物食品中的应用。
60.在一些具体实施方式中，所述透明质酸的盐是透明质酸的钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐、铋盐或者它们中的两种以上的组合。具体而言，“所述透明质酸的盐”可以包含一种透明质酸盐、两种透明质酸盐、三种透明质酸盐、四种透明质酸盐、五种透明质酸盐、六种透明质酸盐；所述盐的种类选自钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐和铋盐。
61.在一些具体实施方式中，所述透明质酸或其盐的分子量范围为80kda
ꢀ‑
1000kda，优选的分子量范围为100kda-800kda，进一步优选为200kda
ꢀ‑
600kda；
62.例如，所述透明质酸或其盐的分子量可以为80kda、100kda、200kda、 300kda、400kda、500kda、600kda、700kda、800kda、900kda、1000 kda或其之间的任意范围。
63.在一些具体实施方式中，在用于促进肠道健康时，透明质酸或其盐的口服用量大于等于20mg/天/只宠物，优选为大于等于40mg/天/只宠物，口服天数大于等于30天。
64.在一些具体实施方式中，在用于促进肠道菌群健康时，食用透明质酸或其盐可改善肠道菌群结构及丰度，促进有利于肠道菌群平衡的细菌生长，减少有害菌生长。
65.具体的，低剂量的透明质酸会促进氨基酸、维生素的代谢；中剂量的透明质酸会促
进碳水化合物代谢和能量代谢；高剂量的透明质酸会促进膜转运以及rna转录。
66.本技术提供了一种透明质酸或其盐在制备促进泌尿系统健康的宠物食品中的应用。
67.在一些具体实施方式中，所述制备促进泌尿系统健康的宠物食品是指用于增加宠物日饮水量，制造预防或治疗宠物尿石症的宠物食品。
68.在一些具体实施方式中，所述透明质酸的盐是透明质酸的钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐、铋盐或者它们中的两种以上的组合。具体而言，“所述透明质酸的盐”可以包含一种透明质酸盐、两种透明质酸盐、三种透明质酸盐、四种透明质酸盐、五种透明质酸盐、六种透明质酸盐；所述盐的种类选自钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐和铋盐。
69.在一些具体实施方式中，所述透明质酸或其盐的分子量范围为80kda
ꢀ‑
1000kda，优选的分子量范围为100kda-800kda，进一步优选为200kda
ꢀ‑
600kda；
70.例如，所述透明质酸或其盐的分子量可以为80kda、100kda、200kda、 300kda、400kda、500kda、600kda、700kda、800kda、900kda、1000 kda或其之间的任意范围。
71.在一些具体实施方式中，在用于促进泌尿系统健康时，透明质酸或其盐的口服用量大于等于20mg/天/只宠物，口服天数大于等于30天。
72.在一些具体实施方式中，在用于预防或治疗宠物尿石症时，透明质酸或其盐的口服用量大于等于20mg/天/只宠物，口服天数大于等于30天。
73.实施例
74.下面将参照附图更详细地描述本技术的具体实施例。虽然附图中显示了本技术的具体实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本技术而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本技术，并且能够将本技术的范围完整的传达给本领域的技术人员。
75.透明质酸可以添加至任何一种宠物食品中，应用于宠物健康方面，下面通过具体实施例来阐明其功效。
76.实验对象为一种观赏猫
‑‑‑
临清狮猫。透明质酸来自华熙生物科技股份有限公司的饲料添加剂透明质酸钠其分子量为200kda-600kda。
77.成年宠物猫临清狮猫选择年龄在一岁以上，体重在7.5kg-9.0kg左右、健康的临清狮猫40只，性别随机，分成4组，其中3组分别按照如下的实施例1、实施例2和实施例3所示的方式饲喂，另外一组为对照组，只饲喂基础猫粮，见表1。每组宠物10只猫，每只猫在临清狮猫笼(3m
×
1m
×
2m) 内单栏饲养。实验前进行必要的免疫、驱虫处理。每天更换猫砂，清理圈舍，打扫卫生，保持宠物圈舍内的清洁。实验期60天。
78.实施例1
79.称量20mg透明质酸钠其中透明质酸钠的分子量为400 kda，与5g鸡肝粉充分混匀，然后加入到30g基础猫粮中，得到宠物食品。每天早上8：00开始进行饲喂该宠物食品，并给与250ml 25℃温水，在保证添加透明质酸钠猫粮采食完毕后，每只猫补饲固定量的基础猫粮。在实验期内观察所有宠物采食状况，宠物精神状态，是否存在厌恶、拉稀、呕吐等不良反应。采样前，提前12h断食断水。标记为实施例1组。
80.实施例2
81.称量40mg透明质酸钠其中透明质酸钠的分子量为400 kda，与5g鸡肝粉充分混匀，然后加入到30g基础猫粮中，得到宠物食品。每天早上8：00开始进行饲喂该宠物食品，并给与250ml 25℃温水，在保证添加透明质酸钠猫粮采食完毕后，每只猫补饲固定量的基础猫粮。在实验期内观察所有宠物采食状况，宠物精神状态，是否存在厌恶、拉稀、呕吐等不良反应。采样前，提前12h断食断水。标记为实施例2组。
82.实施例3
83.称量80mg透明质酸钠其中透明质酸钠的分子量为400 kda，与5g鸡肝粉充分混匀，然后加入到30g基础猫粮中，得到宠物食品。每天早上8：00开始进行饲喂该宠物食品，并给与250ml 25℃温水，在保证添加透明质酸钠猫粮采食完毕后，每只猫补饲固定量的基础猫粮。在实验期内观察所有宠物采食状况，宠物精神状态，是否存在厌恶、拉稀、呕吐等不良反应。采样前，提前12h断食断水。标记为实施例3组。
84.对比例1
85.不喂食透明质酸钠仅喂食和实施例1等量的5g鸡肝粉和基础猫粮，每天早上8：00开始进行饲喂，并给与250ml 25℃温水，在保证添加透明质酸钠猫粮采食完毕后，每只猫补饲固定量的基础猫粮。在实验期内观察所有宠物采食状况，宠物精神状态，是否存在厌恶、拉稀、呕吐等不良反应。采样前，提前12h断食断水。标记为对比例组。
86.表1
[0087][0088][0089]
实验例
[0090]
1、生长性能测定
[0091]
在实验开始时、实验第30天(记为30d)、实验第60天(记为60d) 用电子秤称量每只临清狮猫重量。在实验期记录每天的投喂量、剩料量和饮水量。随后计算每天的采食量和饮水量，并根据每天的采食量与饮水量计算日平均采食量(adfi)和日平均饮水量(adwi)，统计分析数据。
[0092]
2、血液指标测定
[0093]
饲喂期结束后，由动物医院对每只动物进行腿部静脉采血，注入2ml 抗凝管内，每只猫采4管，编号，将其中2管交给动物医院进行红细胞、白细胞、淋巴细胞、血红蛋白、血小板数目等血常规指标和血糖(glu)、肌酐(crea)、血尿素氮(bun)、血尿素氮与肌酐比(bun/
crea)总蛋白(tp)、白蛋白(alb)、球蛋白(glob)、白蛋白与球蛋白比(alb/glob)、丙氨酸转氨酶(alt)、碱性磷酸酶(alkp)等血液生化指标的测定。剩余两管放于-20℃冰箱冷冻保存，后续进行对总抗氧化能力(t-aoc)、超氧化物歧化酶(sod)、丙二醛(mda)、谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px) 抗氧化指标测定，抗氧化指标通过试剂盒测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
[0094]
3、毛皮指标测定
[0095]
3.1被毛感官评价
[0096]
饲喂期结束后，由5名实验人员组成的感官评价小组对动物被毛进行双盲感官评价，评分标准参照下表2。
[0097]
表2被毛状况评判标准
[0098][0099]
注：皮肤弹性指将背部皮肤上提到一定高度，皮肤恢复速度的快慢。
[0100]
3.2被毛采样
[0101]
在临清狮猫的背中部左右两侧用宠物专用电推剪紧贴皮肤将被毛剔下来，每只临清狮猫各采取一个毛样分别放入密封袋中编号保存。随后测量采样部位的长(cm)、宽(cm)，并计算其面积。
[0102]
3.3毛皮指标测定
[0103]
皮肤水分、油分用rbx-916皮肤水分测定仪分别测定临清狮猫背中部皮肤的水分和油分。测定水分、油分之前，先将皮肤上的毛剃干净，测定时皮肤水分测定仪探头接触背中部皮肤表面测定，重复测定两次。
[0104]
被毛长度可通过手排法进行测定。可随机抽取1段毛样，每份试样的质量约0.4～0.6g。先用手扯法将试样初步整理成一端较整齐的毛束，然后在黑绒板上按纤维长短依次叠成一端整齐的毛束。随后用直尺测量出被毛的长度，取平均值。
[0105]
被毛的细度通过投影直径法测定，即将毛发排列整齐，将排列整齐的毛发剪切成1cm的小段，取一小部分置于载玻片上，加香柏油使其固定，用镊子将毛摊开使其互不重叠，随后缓慢盖上盖玻片显微镜观察，通过纤维细度识别系统计算毛细度，每只临清狮猫重复20次。
[0106]
被毛弹性回复率和伸长率可通过单纤维强力仪测定，每只猫分别测量6 组，进行定长弹性和定荷拉伸的测定，得出结果取平均值。被毛密度通过比重法进行计算，以背中部的毛密度代表全身被毛密度，先用电子天平准确称量采集毛样重量，记录数据m，单位mg。随
机选取毛样约0.001～0.003g作为分析样本称重,记录数据m1，单位mg；用眼科镊子和放大镜逐根数出分析样本中毛纤维数量，记录数据w1；根据2份毛样的重量关系得到被毛密度。
[0107][0108]
公式中：w—每平方厘米的毛纤维根数，单位为根/cm2[0109]
w1—分析样本毛纤维数量，单位为根；
[0110]
m—毛样重量，单位为g；
[0111]
m1—分析样本重量，单位为g；
[0112]
s—取样面积，单位为cm2。
[0113]
毛发的色差值用nr20xe色差仪测定临清狮猫背中部、左右前腿部以及腰部的色差值，取四个测定部分的平均值。背中部指定义为动物两肩胛骨最高点与背中线相交的部位；动物腿部定义为动物肱骨部分的被毛；腰部定义为髋骨与背中线相交的部分。色差值使用亮度l*红度a*及黄度值b*表示。
[0114]
4、肠道健康及微生物组学
[0115]
4.1粪便评分和氨气浓度的评价方法
[0116]
根据粪便的外观和形态特征，对粪便进行感官评分，粪便评分标准见表 3。氨气浓度测定可用h-emc120a手持式氨气浓度测定仪进行测定，每天对每只临清狮猫笼舍内猫砂盆进行氨气浓度测定。
[0117]
表3粪便评分标准
[0118][0119]
4.2肠道微生物组学分析
[0120]
在30天时，每组临清狮猫取6只进行粪便样品采集，采集样品交由北京诺禾致源科技股份有限公司通过高通量测序技术进行16s rdna宏基因组测定。为研究各样本的物种组成，对所有样本的effective tags，以97％的一致性(identity)进行otus(operational taxonomic units)聚类，然后对otus 的序列进行物种注释。根据聚类得到otus结果和研究需求，分析不同样本(组)之间共有、特有的otus，绘制成韦恩图(venn graph)。
[0121]
通过进行α多样性分析，包括chao1指数、ace指数、shannon指数和 simpson指数等指数进行计算。其中chao1指数和ace指数计算菌群丰度， shannon指数和simpson指数计算菌群多样性。
[0122]
为了观察各组之间的物种丰富度差异，绘制门水平肠道微生物相对丰度热图。做组间差异物种分析，有针对性行的找出粉组件丰度变化差异显著的物种，并得到差物种异
在不同分组间的富集情况，判断不同分组间群落结构差异是否显著。
[0123]
picrust(phylogenetic investigation of communities by reconstruction ofunobserved states)是基于以测细菌16srrna的测序数据，对粪便微生物的基因进行功能预测。
[0124]
实验结果
[0125]
1、生长性能测定结果
[0126]
表4添加不同水平透明质酸钠猫生长性能结果
[0127][0128]
注：不同处理组之间，如果具有相同的标记字母表示组间差异不显著(p＞0.05)，如果不具备相同的标记字母表示组间差异显著(p＜0.05)，以下同此注释。
[0129]
注：初体重是指实验开始时的临清狮猫的平均重量，30d体重是指实验第30天时的临清狮猫的平均重量，末体重是指实验第60天时的临清狮猫的平均重量。此处末体重低于初体重，是因为实验过程为冬季，天气较冷，动物会更多的消耗体脂，因此体重降低。
[0130]
日平均采食量(adfi)是指从实验开始时到实验第60天总的采食量除以60天，所得数据。(采食量＝投喂量-剩料量)
[0131]
和日平均饮水量(adwi)是指从实验开始时到实验第60天总的饮水量除以60天，所得数据。
[0132]
由表4可知，研究表明，试验期内，在临清狮猫初体重无显著差异的情况下，日粮中添加透明质酸钠对宠物的30天(30d)的体重、末体重以及平均日采食量(adfi)无显著差异(p＞0.05)。但对日平均饮水量(adwi) 有显著差异(p＜0.05)，对照组(对比例)猫的日平均饮水量显著低于透明质酸钠组(实施例1，实施例2，实施例3)，其中实施例1组饮水量最大。
[0133]
由此可以得出透明质酸钠在宠物泌尿系统健康方面的应用，具体指食用含有透明质酸钠的宠物食品可明显增加宠物的日饮水量，有助于预防及治疗宠物泌尿系统常见疾病，比如尿石症；进一步的，食用透明质酸钠或含透明质酸钠的宠物食品可明显增加宠物的日饮水量的同时，对体重和采食量无显著影响，此时透明质酸钠口服用量为20mg/天/只，在促进宠物泌尿系统健康方面，更为显著；进一步的，其推荐口服用量大于等于20mg/天/只即可。
[0134]
2、血液性能指标结果
[0135]
表5日粮中不同剂量透明质酸钠对猫的血常规影响
[0136][0137][0138]
表6日粮中不同剂量透明质酸钠对猫血液生化指标的影响
[0139][0140]
注：不同处理组之间，如果具有相同的标记字母表示组间差异不显著(p＞0.05)，如果不具备相同的标记字母表示组间差异显著(p＜0.05)。
[0141]
表7日粮中不同剂量透明质酸钠对猫血液抗氧化指标的影响
[0142][0143]
注：总抗氧化能力(t-aoc)中单位表示在37℃时，每分钟每毫升血清(浆)使反应体系的吸光度(od)值每增加0.01时，为一个总抗氧化能力单位。
[0144]
注：不同处理组之间，如果具有相同的标记字母表示组间差异不显著(p＞0.05)，如果不具备相同的标记字母表示组间差异显著(p＜0.05)。
[0145]
研究表明，根据表5、表6，含有透明质酸钠的宠物食品对临清狮猫血常规各项指标均无显著影响(p＞0.05)，部分血液生化指标发生明显变化(p＜0.05)，如实施例1-3组的白蛋白、球蛋白、白蛋白/球蛋白明显提高，但均在临床正常范围内。
[0146]
由表7可知，食用含透明质酸钠的宠物食品对临清狮猫血液抗氧化指标
ꢀ‑
超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽过氧化物酶酶(gsh-px)、丙二醛(mda) 无显著影响(p＞0.05)，但对总抗氧化能力(t-aoc)有显著提高(p＜0.05)，以实施例1组总抗氧化能力最大；进一步的，提高血液抗氧化能力有助于皮毛健康；透明质酸钠口服用量为20mg/天/只时，在提高血液抗氧化能力方面，更为显著；透明质酸钠口服用量大于等于20mg/天/只时，在提高血液抗氧化能力方面均高于对比例。进一步的，其推荐口服用量大于等于20mg/ 天/只即可。
[0147]
3、透明质酸钠对临清狮猫皮毛健康的影响
[0148]
图1示出了不同组临清狮猫被毛质量感官对比图。
[0149]
表8日粮中添加透明质酸钠对临清狮猫皮毛感官评价结果影响
[0150][0151]
注：不同处理组之间，如果具有相同的标记字母表示组间差异不显著(p＞0.05)，如果不具备相同的标记字母表示组间差异显著(p＜0.05)。
[0152]
表9日粮中添加透明质酸钠对临清狮猫毛皮指标影响
[0153][0154][0155]
注：不同处理组之间，如果具有相同的标记字母表示组间差异不显著(p＞0.05)，如果不具备相同的标记字母表示组间差异显著(p＜0.05)。
[0156]
由图1和表8得出，食用含透明质酸钠的宠物食品对毛发光泽度、柔顺度以及皮肤弹性产生显著影响(p＜0.05)。各项指标中实施例3的皮毛感官评价指标最高。
[0157]
由表9得出，食用含不同剂量透明质酸钠的猫粮对皮肤油分没有显著影响(p＞0.05)，但是对皮肤水分具有显著提高差异(p＜0.05)，其中以实施例3最高。对宠物被毛拉伸率、被毛长度和毛密度无显著影响(p＞0.05)，但对被毛亮度值(l*)、红度值(a*)、黄度值(b*)、弹性和细度有显著改善(p＜0.05)。实施例2亮度值、红度值、黄度值最高。实施例3被毛弹性最好。
[0158]
综合各项指标，为促进皮毛健康时，口服透明质酸钠或含透明质酸钠的宠物食品
有助于皮毛健康，为了更好的促进宠物皮毛健康，透明质酸钠口服用量优选为大于等于40mg/天/只。
[0159]
4、透明质酸钠对临清狮猫肠道健康的影响
[0160]
4.1猫粪便评分和氨气浓度
[0161]
表10添加透明质酸钠猫粪便评分及氨气浓度
[0162][0163]
注：30d粪便评分表示实验第30天时的粪便评分；60d粪便评分表示实验第60天时的粪便评分；
[0164]
30d氨气浓度/ppm表示实验第30天时的氨气浓度；60d氨气浓度/ppm表示实验第60天时的氨气浓度。
[0165]
根据上表10可得，日粮中添加透明质酸钠对30天和60天的粪便评分和氨气浓度无显著影响(p＞0.05)。
[0166]
4.2venn图
[0167]
如图2所示，在97％的相似度水平上，4组共得到了4288个otu，4 个组共有1188个otu，其中对比例、实施例1、实施例2、实施例3组的 otu数目分别为3053、2565、2714、2003。
[0168]
4.3肠道微生物菌群的α多样性分析
[0169]
表11饲喂不同水平透明质酸钠对猫肠道微生物α多样性指数的影响
[0170][0171]
注：不同处理组之间，如果具有相同的标记字母表示组间差异不显著(p＞0.05)，如果不具备相同的标记字母表示组间差异显著(p＜0.05)，以下同此注释。
[0172]
观测物种数目是指直观观测到的物种数目(也即是otus数目：operational taxonomic units，一般情况下，如果序列之间，比如不同的16s rrna序列的相似性高于97％就可以把它定义为一个otu，每个otu对应于一个不同的16s rrna序列，也就是每个otu
对应于一个不同的细菌(微生物)种)
[0173]
香农指数是指shannon多样性指数。香农指数越大，生物多样性越高，香农指数来源于信息熵，香农指数越大，表示不确定性大。不确定性越大，表示这个群落中未知的因素越多，也就是多样性高。
[0174]
辛普森指数，指辛普森多样性指数(simpsonindex)，是指从一个群落种连续两次抽样所得到的个体数属于同一种的概率。
[0175]
chao1指数是指用chao1算法估计群落中含otu数目的指数，在生态学中常用来估计物种总数， chao1值越大，代表物种总数越多，群落的丰富度越高。
[0176]
ace指数用来估计群落中含有otu数目的指数，是生态学中估计物种总数的常用指数之一。 ace指数越大，表明群落的丰富度越高。
[0177]
样本覆盖率/％是指测序深度指数，其数值越高，则样品中序列被测出的概率越高，而没有被测出的概率越低。该指数反映本次测序结果是否代表了样品中微生物的真实情况。
[0178]
pd_whole_tree：基于系统发育树来计算的一种多样性指数，它用各个样品中otus的代表序列构建出系统发育树的距离，将某一个样品中的所有代表序列的枝长加和，从而得到的数值。数值越大，群落多样性越高。
[0179]
α多样性指数直接反映微生物群落的丰度及多样性。shannon多样性指数(香农指数)和simpson多样性指数(辛普森指数)表示菌群多样性；chao1 和ace指数表示菌群丰度；样本覆盖率表示样本的测序深度。可知，所有样本覆盖率在99％以上，表明测序深度足以检测粪便样本中的微生物群落信息。透明质酸钠组粪便的观测物种数目、ace指数显著降低(p＜0.05)，肠道微生物菌群丰度下降。其他指数没有显著变化(p＞0.05)。
[0180]
4.4肠道微生物菌群的物种分布情况
[0181]
通过物种注释后，在门分类水平上，选择了丰度前10的物种。可知，临清狮猫粪便中占据主导地位的菌群大多为厚壁菌门和拟杆菌门，对比例组、实施例1、实施例2、实施例3厚壁菌门丰度分别为50.08％、67.33％、62.28％、 75.76％，拟杆菌门丰度分别为18.46％、13.42％、17.52％、8.89％，其次为梭杆菌门4.53％、3.11％、3.72、0.28％。不同组别部分肠道微生物菌群差异显著，随着日粮中透明质酸钠添加量增加，脱硫杆菌门、放线菌门丰度显著降低(p＜0.05)。为了寻找门水平下，组间的差异物种，做组间的t-test检验，找出差异显著的物种。由图4可知，对比例组粘杆菌门丰度显著(p＜0.05) 高于实施例1、实施例3组，对比例组变形菌门显著(p＜0.05)高于实施例 3组，但厚壁菌门丰度显著(p＜0.05)低于实施例3组。实施例2组疣微菌门显著高于实施例3组。
[0182]
结合显著性差异标准检验和线性判别分析(linear discriminant analysis， lda)进行lefse(linear discriminant analysis effect size)差异性分析(见图 5)，共鉴定出12种不同分类水平的菌。对比例组和实施例2组各有6个微生物类群，对比例组包括c__fusobacteriia、f__fusobacteriaceae、 c__alphaproteobacteria、g__fusobacterium、o__fusobacteriales和 p__fusobacteriota，实施例2组包括f__veillonellaceae、g__dialister、 f__ruminococcaceae、g__rikenellaceae_rc9、g__faecalibacterium和 f__rikenellaceae。实施例1组和实施例3组无优势物种。
[0183]
4.5功能注释
[0184]
由图6可知，kegg通路二级功能层面上丰度排名前35的预测功能基因及它们在每个组中的丰度信息。实施例1-3组相比于对照组有17个功能基因通路的丰度减小，有18个功能基因通路丰度增加。在各项基因通路中，赖氨酸生物合成代谢，折叠、排序和降级，辅因子和维生素代谢，遗传信息处理，代谢疾病，核苷酸代谢，细胞过程和信号，dna复制和细胞修复， dna翻译丰度在实施例1组中丰度最大。能量代谢，免疫系统，神经系统，酶家族，碳水化合物代谢以及新陈代谢在实施例2组丰度最大。环境适应，膜转运以及rna转录在实施例3组丰度最大。
[0185]
综上所述，食用透明质酸钠或含透明质酸钠的宠物食品对体重、采食量、粪便评分及环境氨气浓度无显著影响。根据肠道微生物组学分析结果显示，透明质酸钠可改善肠道菌群结构及丰度，促进有利于肠道菌群平衡的细菌生长，减少有害菌生长。
[0186]
进一步的，picrust结果显示，实施例1(低剂量的透明质酸钠)(口服用量≥20mg/天/只)可能会促进氨基酸、维生素的代谢；实施例2(中剂量的透明质酸钠)(口服用量≥40mg/天/只)可能会促进碳水化合物代谢和能量代谢；实施例3(高剂量的透明质酸钠)(口服用量≥80mg/天/只)可能会促进膜转运以及rna转录。
[0187]
综合各项指标，为促进肠道健康时，口服透明质酸钠或含透明质酸钠的宠物食品有助于改善肠道菌群结构及丰度，为了更好的促进宠物肠道健康，透明质酸钠口服用量优选为大于等于40mg/天/只。
[0188]
以上所述，仅是本技术的较佳实施例而已，并非是对本技术作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本技术技术方案内容，依据本技术的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本技术技术方案的保护范围。