用于促进骨形成或预防骨流失组合物的制作方法

1.本发明涉及一种用于促进骨形成或预防骨流失组合物。具体来讲，本发明涉及一种可以通过增加骨钙素的生成并活化成骨细胞而促进骨形成，并通过抑制破骨细胞的分化而预防骨流失以及增加骨形成，从而即使是在骨生长被限制的情况下也可以提供优秀的促进骨形成效果的组合物。


背景技术：

2.最近，因为人类社会饮食习惯的西方化以及营养状态的改善等原因，少儿以及青少年的生长发育程度呈现出了大幅增加的趋势并形成了喜爱高挑身材的社会风气，因此大部分人群开始对身体生长表示出了极大的兴趣。
3.为了促进生长，可以使用如生长激素制剂给药法、伊里扎诺夫手术法以及健康辅助食品服用法等，但是所述生长激素制剂给药法具有可能引发多种副作用的问题，伊利扎诺夫手术法具有需要承受手术的危险性以及手术带来的痛苦并承担巨额费用的问题，而健康辅助食品服用法具有大部分健康辅助食品没有经过科学验证或其效果微乎其微的问题。
4.为了解决如上所述的问题，在韩国注册专利第10-0509681号中记载了包含哺乳动物的初乳或源自乳汁的乳清分离馏分，从而具有可以无副作用且有效地促进生长的活性的食品组合物。
5.本发明拟利用如上所述的技术提供更加有效的用于促进骨形成的组合物，并根据相关的中间研究结果认识到对预防骨流失也可能有一定的效果，因此还拟提供一种可以为如骨疏松等骨流失相关问题提供帮助的组合物。
6.先行技术文献
7.专利文献
8.(专利文献0001)韩国注册专利第10-0509681号


技术实现要素：

9.本发明的目的在于提供一种对促进骨形成以及预防骨流失具有优秀效果的组合物，尤其提供一种可以在成骨细胞的增殖以及生长因子的活化方面为骨活化、促进骨形成以及预防骨流失提供帮助的组合物。
10.在本发明的一形态中，本发明提供一种包含有机全脂奶粉以及初乳碱性蛋白，所述初乳碱性蛋白是从初乳分离出来的分子量为1至30kd的蛋白的用于促进骨形成或预防骨流失的组合物。
11.本发明的组合物可以通过增加骨钙素的生成并活化成骨细胞而促进骨形成，并通过抑制破骨细胞的分化而预防骨流失。尤其是，本发明的组合物即使是在骨生长被限制的情况下也可以提供优秀的促进骨形成效果。
附图说明
12.图1是对用于确认本发明之组合物的促进骨形成以及预防骨流失效果的动物试验的日程进行图示的示意图。
13.图2至图8是对利用根据本发明之一实施形态的组合物的动物试验结果进行图示的示意图。
14.图2是对试验动物的体重变化进行图示的示意图。
15.图3是对试验动物的饲料摄入量进行图示的示意图。
16.图4是对试验动物(卵巢切除术(ovx)分组)的股骨重量进行图示的示意图。
17.图5是对试验动物(卵巢切除术(ovx)分组)的血中骨钙素含量进行图示的示意图。
18.图6是对试验动物(卵巢切除术(ovx)分组)的血清骨碱性磷酸酶(bap)浓度进行图示的示意图。
19.图7(卵巢切除术(ovx)分组)以及图8(假手术(sham)分组)是对试验动物的血中抗酒石酸酸性磷酸酶(trap)活性进行图示的示意图。【control(或con)，基本饲料喂养组；cbp，含初乳碱性蛋白(cbp)饲料喂食组；cbp+omp，初乳碱性蛋白(cbp)以及有机全脂奶粉(omp)组合饲料喂食组；ovx，卵巢切除手术组；sham，执行与卵巢切除术(ovx)组相同的手术但没有切除卵巢的组。】
具体实施方式
20.本发明的组合物的特征在于包含有机全脂奶粉(organic whole milk powder：omp)以及初乳碱性蛋白(colostrum basic protein：cbp)。
21.本发明的组合物可以借助于有机全脂奶粉以及初乳碱性蛋白的组合，通过增加骨钙素的生成并活化成骨细胞而促进骨形成，并通过抑制破骨细胞的分化而抑制骨流失。尤其是，即使是在骨生长被限制的情况下也可以提供优秀的促进骨形成效果。
22.本发明的组合物可以呈现出有机全脂奶粉以及初乳碱性蛋白的组合的协同效果。
23.在本发明中，初乳碱性蛋白是指从初乳分离出来的分子量为1至30kd的蛋白即初乳碱性蛋白，例如可以利用超滤膜获得。作为具体的实例，初乳碱性蛋白可以通过在使初乳通过30kd超滤膜而获得过滤液之后，使所述过滤液通过1kd超滤膜而获得残留物的方式制成。
24.初乳通常是指分娩之后的第5天为止的乳汁，在本发明中，初乳较佳地为分娩之后的第4天为止的乳汁，更较佳地为分娩之后的第3天为止的乳汁，更较佳地为分娩之后的第2天为止的乳汁。在具体的一实施形态中，初乳为牛(例如奶牛)的初乳。
25.在具体的一实施形态中，初乳碱性蛋白(cbp)是去除α-乳清蛋白以及β-乳球蛋白之后的结果物。α-乳清蛋白以及β-乳球蛋白的去除可以通过本领域所公知的蛋白分离方法，例如利用等电点的分离方法等达成。较佳地，通过ph调整以及沉淀去除α-乳清蛋白以及β-乳球蛋白。
26.在较佳的实施形态中，初乳碱性蛋白是在韩国注册专利第10-0509681号(其全部内容通过引用并入本说明书)中公开的乳清分离馏分。
27.在本发明中，有机全脂奶粉可以是源自利用如在1年之内、较佳地为2年以上、更较佳地为3年以上没有使用化肥或农药并以有机方式生产的饲料进行喂食、没有使用抗生素
且在可放牧的环境下健康生长的动物(例如奶牛)。
28.本发明的组合物可以包含不同程度的有机全脂奶粉以及初乳碱性蛋白。在一实施形态中，本发明组合物为了通过活化成骨细胞以及抑制破骨细胞分化而达成促进骨形成或预防骨流失的效果，可以以100重量份的有机全脂奶粉为基准包含0.1至10重量份的初乳碱性蛋白。更较佳地，可以以100重量份的有机全脂奶粉为基准包含0.2至5重量份的初乳碱性蛋白，更较佳地，可以以100重量份的有机全脂奶粉为基准包含0.5至2重量份的初乳碱性蛋白。
29.在一实施形态中，本发明组合物为了通过活化成骨细胞以及抑制破骨细胞分化而达成促进骨形成或预防骨流失的效果，可以包含1重量％以上的有机全脂奶粉，并包含0.01重量％以上的初乳碱性蛋白。更较佳地，可以包含5重量％以上的有机全脂奶粉，并包含0.05重量％以上的初乳碱性蛋白。更较佳地，可以包含7重量％以上的有机全脂奶粉，并包含0.07重量％以上的初乳碱性蛋白。更较佳地，可以包含8重量％以上的有机全脂奶粉，并包含0.08重量％以上的初乳碱性蛋白。更较佳地，可以包含9重量％以上的有机全脂奶粉，并包含0.09重量％以上的初乳碱性蛋白。
30.在一实施形态中，本发明的组合物为食品组合物。除此之外，也可以作为除人类之外的其他哺乳动物的用于促进骨形成或预防骨流失的饲料使用。
31.本发明的组合物除了有机全脂奶粉以及初乳基础蛋白之外，还可以包含食品学上可容许的物质。例如，还可以包含碳水化合物、蛋白、矿物质以及维生素等，但是并不限定于此。本发明的组合物可以是多种不同的形态。例如，可以是粉末、颗粒、片剂或胶囊的形态，除此之外也可以是加工肉制品、鱼肉制品、豆腐、凉粉、粥、如拉面或面条等面类、如酱油或大酱或辣椒酱或混合酱等调味食品、调味汁、饼干、如发酵牛奶或奶酪等乳制品、如辛奇或酱菜等腌制食品、水果、蔬菜、豆奶、如发酵饮料等饮料类的食品形态，但是并不限定于此。
32.在一实施形态中，本发明的组合物还包含以100重量份的所述有机全脂奶粉为基准的1至10重量份的低聚果糖。
33.在一实施形态中，本发明的组合物(例如食品组合物)包含90重量％以上的有机全脂奶粉以及0.1重量％以上至不足1重量％的初乳碱性蛋白，还包含微生物、矿物质以及乳酸菌。
34.在一实施形态中，本发明的组合物(例如食品组合物)是生长期儿童的用于促进骨形成或预防骨流失的组合物。
35.在将本发明的组合物作为饲料使用的情况下，除了有机全脂奶粉以及初乳基础蛋白之外，还可以包含可作为饲料使用的物质。例如，还可以包含谷物、植物蛋白饲料、动物蛋白饲料以及糖等。本发明的组合物可以是用于如狗、猫、牛、马、猪或山羊的资料组合物，但是并不限定于此。
36.接下来，将参阅实施例对本发明进行更为详细的说明。下述实施例只是用于对本发明进行例示，并不应该解释为本发明的范围因此而受到限定。
37.实施例1
38.(1)初乳碱性蛋白(cbp)
39.使用了通过在韩国注册专利第10-0509681号中公开的方法制造的乳清分离馏分。
40.具体来讲，所述乳清分离馏分的制造方法如下所述。
41.收集牛分娩之后48小时内分泌的初乳，接下来通过进行离心分离而去除奶油层，从而获得去除脂肪的脱脂初乳。通过向所述脱脂初乳添加1n的盐酸而将ph调整为4.6并借此使酪蛋白发生凝固，接下来通过进行离心分离而获得上清液即初乳乳清。通过向所分离出来的乳清添加1,5m的柠檬酸三钠(trisodium citrate)而将ph调整为5.5，接下来通过添加1.5m的柠檬酸(citric acid)而将ph调整至3.9，然后通过在35℃下加热150分钟而对α-乳清蛋白进行沉淀。通过对其进行离心分离而去除α-乳清蛋白并对上清液进行回收。通过向上清液添加1n的naoh而将ph调整为4.5并借此对β-乳球蛋白进行沉淀，接下来通过进行离心分离而获得上清液。使所获得的上清液通过30kd(千道尔顿)的超滤膜而获得过滤液之后，使所述过滤液再次通过1kd的超滤膜而获得残留物。通过对所述残留物进行冻结干燥而获得粉末状态的分子量为1至30kd的乳清分离馏分。
42.(2)有机全脂奶粉(omp)
43.将从牛身上挤出的有机原料奶在72℃下进行约15秒的杀菌之后再进行急冻处理，接下来在确认是否有异物之后利用细网进行均质化。对均质化的原料奶进行干燥并确认是否检测出金属，从而获得有机全脂奶粉。
44.(3)饲料配制
45.配制出包含所述(1)初乳碱性蛋白(cbp)以及所述(2)的有机全脂奶粉(omp)的饲料。
46.具体的饲料配制方式如表1所示。
47.【表1】
48.49.*organic whole milk powder：有机全脂奶粉(omp)
50.比较例1以及比较例2
51.通过与所述实施例1相同的方法配制饲料，其中按照排除初乳碱性蛋白(cbp)以及有机全脂奶粉(omp)的基本饲料配比即表2(比较例1)或排出有机全脂奶粉(omp)的饲料配比即表3(比较例2)配制饲料。
52.【表2】
[0053][0054]
*organic whole milk powder：有机全脂奶粉(omp)
[0055]
【表3】
[0056]
[0057][0058]
*organic whole milk powder：有机全脂奶粉(omp)
[0059]
试验例1
[0060]
使用了24周龄的斯泼累格-多雷(sprague-dawley，sd)大鼠(rat)模型。设定通过卵巢切除术诱导骨疏松症并对骨生长进行限制的卵巢切除术(ovx)分组并根据需要单独设定了假手术(sham)分组。
[0061]
具体来讲，分为利用不包含初乳碱性蛋白(cbp)以及有机全脂奶粉(omp)的比较例1的饲料(基本饲料)进行喂食的对照组(control，con)以及利用包含0.1％的初乳碱性蛋白(cbp)以及10％的有机全脂奶粉(omp)的实施例1的饲料进行喂食的有机全脂奶粉(omp)+初乳碱性蛋白(cbp)组，并根据需要追加了利用包含0.1％的初乳碱性蛋白(cbp)的比较例2的饲料进行喂食的初乳碱性蛋白(cbp)组。
[0062]
在手术之后经过3周的恢复期以及1周的适应期，在接下来的4周内按照为不同的分组喂食对应饲料的试验日程进行试验(图1)。每周喂食一次足量的饲料。
[0063]
每周测定一次体重依次饲料摄入量。
[0064]
在完成试验日程之后，摘出左侧股骨并对其重量进行了确认。
[0065]
利用酶联免疫吸附剂测定(elisa，enzyme-linked immunosorbent assay)分析法对血清成骨相关因子即血清骨钙素(osteocalcin)以及血清骨碱性磷酸酶(bap，bone alkaline phosphatase)以及血清破骨相关因子即血中抗酒石酸酸性磷酸酶(trap，tartrate-resistant acid phosphatase)进行了分析。
[0066]
通过利用微计算机断层扫描(μct，micro-computed tomography)的三维分析在所摘出的左侧股骨中对骨密度、松质骨(trabeculae)厚度、松质骨数量、骨髓区域以及平均皮质骨厚度等骨微结构指标(图4)。【表4】
[0067][0068][0069]
(2)试验结果
[0070]
○
体重以及饲料摄入量：在执行卵巢切除术(ovx)手术时体重有所增加，但是在卵巢切除术(ovx)分组以及假手术(sham)分组中均没有基于初乳碱性蛋白(cbp)以及有机全脂奶粉(omp)水准(0.1％、10％)的体重差异(图2)。饲料摄入量没有明显的统计学差异(图3)。
[0071]
○
骨重量：在卵巢切除术(ovx)分组中，与初乳碱性蛋白(cbp)组不同，初乳碱性蛋白(cbp)+有机全脂奶粉(omp)组与对照组相比其股骨重量有所增加(图4)。这表明对初乳碱性蛋白(cbp)以及有机全脂奶粉(omp)进行组合的组合物与初乳碱性蛋白(cbp)的单独组合物不同，具有增加骨重量的效果。
[0072]
○
成骨以及破骨相关因子
[0073]-骨钙素：骨钙素可以起到使钙与骨基质结合的作用，是一种对骨以及象牙质具有
特异性的蛋白，在成骨细胞中生成，因此是用于了解成骨细胞的活性的因子。试验结果，在卵巢切除术(ovx)分组中，与初乳碱性蛋白(cbp)组相比，初乳碱性蛋白(cbp)+有机全脂奶粉(omp)组中的血清骨钙素浓度大幅增加(图5)。这表明对初乳碱性蛋白(cbp)以及有机全脂奶粉(omp)进行组合物的组合物与初乳碱性蛋白(cbp)不同，具有进一步增加骨钙素的生成并进一步活化成骨细胞的效果。
[0074]-骨碱性磷酸酶(bap，bone alkaline phosphatase)：骨碱性磷酸酶(bap)是一种其表达以及活性在成骨细胞分化的过程中增加的代表性的酶，是用于对成骨细胞的分化进行测定的因子。试验结果，在卵巢切除术(ovx)分组中，与对照组相比，初乳碱性蛋白(cbp)组以及初乳碱性蛋白(cbp)+有机全脂奶粉(omp)组中的血清骨碱性磷酸酶(bap)浓度均有所增加(图6)。这表明初乳碱性蛋白(cbp)的单独组合物和对初乳碱性蛋白(cbp)以及有机全脂奶粉(omp)进行组合的组合物均具有增加骨碱性磷酸酶(bap)的合成并活化成骨细胞的效果。
[0075]-抗酒石酸酸性磷酸酶(trap，tartrate-resistant acid phosphatase)：抗酒石酸酸性磷酸酶(trap)的活性随着破骨细胞的分化程度减小，是在破骨细胞中高度表达的因子。试验结果，在卵巢切除术(ovx)分组中，对照组、初乳碱性蛋白(cbp)组以及初乳碱性蛋白(cbp)+有机全脂奶粉(omp)组之间并没有明显的差异(图7)，但是在假手术(sham)分组中，与对照组以及初乳碱性蛋白(cbp)组相比，初乳碱性蛋白(cbp)+有机全脂奶粉(omp)组中的血清抗酒石酸酸性磷酸酶(trap)的浓度大幅减小(图8)。这表明对初乳碱性蛋白(cbp)以及有机全脂奶粉(omp)进行组合的组合物与初乳碱性蛋白(cbp)的单独组合物相比，具有大幅抑制破骨细胞的分化的效果。
[0076]
○
骨微结构指标
[0077]
对卵巢切除术(ovx)分组的骨微结构指标进行分析的结果，与对照组相比，利用初乳碱性蛋白(cbp)+有机全脂奶粉(omp)进行喂食的组中的皮质骨面积以及内膜周长都有所增加，这表明骨形成程度有所增加(表5)。
[0078]
【表5】
[0079]
[0080][0081]
(初乳碱性蛋白(cbp)以及有机全脂奶粉(omp)的补充对卵巢切除术(ovx)分组中的股骨参数造成的影响)
[0082]
通过对如上所述的试验结果进行综合，可以确认初乳碱性蛋白(cbp)以及有机全脂奶粉(omp)的组合可以通过活化成骨细胞而促进骨形成，而且可以通过抑制破骨细胞的分化而预防骨流失。尤其是初乳碱性蛋白(cbp)以及有机全脂奶粉(omp)的组合与对照组相比可以进一步活化成骨细胞并进一步抑制破骨细胞的分化，从而在促进骨形成或预防骨流失方面提供更加优秀的效果。
[0083]
制造例
[0084]
按照如下述表6所示的组成制造出食品组合物。
[0085]
【表6】
[0086]
成分含量有机全脂奶粉(omp)90％以上低聚果糖(fos，fructooligosaccharide)1％以上奶矿物质1％以上初乳碱性蛋白(cbp)不足1％微生物矿物质混合物1％以上bg-blend-30益生菌(probiotics)不足1％合计100.00％