一种硒黄酮通过抑制氧化应激炎症反应的方法与流程

本发明涉及氧化应激炎症领域，具体是一种硒黄酮通过抑制氧化应激炎症反应的方法。

背景技术：

1、间质性膀胱炎，又称膀胱疼痛综合征，是一种膀胱慢性炎症性疾病。它的临床特征表现为膀胱或下腹部疼痛不适，伴有尿频，尿急，夜尿增多和无菌尿等症状，并且可以排除典型的尿路感染。长期的慢性疼痛和下尿路症状均严重影响患者的生活质量，并导致焦虑、抑郁等精神心理性疾病，甚至出现自杀的倾向。ic好发于女性，我国女性患病率约100/10万人。目前关于ic的病因、发病机制涉及多种假说，包括膀胱尿路上皮黏多糖层的缺损、肥大细胞的活化、自身免疫反应以及中枢敏化等，而膀胱组织氧化应激和炎症反应是ic发病的重要基础。膀胱上皮细胞可以分泌硫酸软骨素参与形成氨基葡聚糖保护层，同时膀胱上皮伞细胞顶膜结构和细胞间紧密连接复合体一起形成了对尿液中有害物质的阻力屏障。氧化应激反应失衡导致活性氧增加，刺激膀胱中肥大细胞激活和促炎细胞因子和趋化因子的释放引起的炎症反应，从而导致膀胱上皮细胞组织病理学损伤和紧密连接的丧失。这种保护屏障削弱，尿液中的溶质与毒素沿细胞间隙渗入膀胱组织，加重炎症反应并导致尿频、尿急和盆腔疼痛的症状。硒是人体必需的微量元素之一，无法自行合成。它在抗氧化系统中具有重要功能，在许多内源性抗氧化酶是必需组分。此外，它在改善健康和预防疾病方面具有多种作用，包括增强免疫力、帮助防御癌症、解毒、调节甲状腺功能、抗炎和抗衰老等。人体主要通过食物摄入硒，而众多富硒植物如富硒西兰花、堇叶碎米荠等含有丰富的硒元素及其他膳食营养素，具有抗氧化、抗炎等作用。

2、ic病因和机制的复杂性导致其治疗很难达到完全缓解和根治，关于ic的治疗报道有很多，包括口服药物、膀胱内药物灌注和手术等在内的各种治疗方法效果均不十分满意，且易复发，探索一种ic的有效新疗法成为亟待解决的临床问题，目前有研究报告了抗炎和抗氧化作用的化合物针对ic具有治疗作用，但是整体的治疗药物原料来源不够充足，不易于制备，且产品质量不能够符合标准。

3、因此，本领域技术人员提供了一种硒黄酮通过抑制氧化应激炎症反应的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种硒黄酮通过抑制氧化应激炎症反应的方法，以解决上述背景技术中提出的ic病因和机制的复杂性导致其治疗很难达到完全缓解和根治，关于ic的治疗报道有很多，包括口服药物、膀胱内药物灌注和手术等在内的各种治疗方法效果均不十分满意，且易复发，探索一种ic的有效新疗法成为亟待解决的临床问题，目前有研究报告了抗炎和抗氧化作用的化合物针对ic具有治疗作用，但是整体的治疗药物原料来源不够充足，不易于制备，且产品质量不能够符合标准的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种硒黄酮通过抑制氧化应激炎症反应的方法，所述一种硒黄酮通过抑制氧化应激炎症反应的方法包括以下步骤：

4、s1:间质性膀胱炎大鼠模型的构建步骤，首先构建间质性膀胱炎大鼠模型，简称ic，环磷酰胺，简称cyp，环磷酰胺的活性代谢物丙烯醛可破坏动物的膀胱上皮，从而诱导动物出现与ic类似的疼痛样行为，尿频等膀胱过度兴奋症状以及许多炎症的病理表现，可以通过cyp广泛用于构建ic动物模型；

5、s2:饮用复合植物硒固体饮料治疗ic大鼠步骤，将所有大鼠随机分配到各组中，并在spf级屏障环境中分笼饲养，温度24±2℃，湿度50-70％，并予以12h的昼夜光照循环控制，确保自由饮水、进食，动物随机分成5组：分别是对照组正常大鼠，简称control组,ic模型组，如前所述给予cyp建模，cyp组，以及植物硒固体饮料的低中高三个剂量治疗组，完成ic模型构建后，即在第一次注射cyp后的第8天开始，将植物硒固体饮料粉剂溶于大鼠的日常饮用水中通过口服方式给药，直至实验结束；

6、s3:治疗效果的检测与评估步骤，进行膀胱区机械痛阈检测步骤、尿流动力学检测步骤、膀胱大体检测步骤、膀胱湿重称量步骤、膀胱组织切片苏木精-伊红染色步骤，膀胱上皮细胞凋亡检测步骤、膀胱肥大细胞检测步骤、膀胱组织炎症因子检测步骤和膀胱组织氧化应激检测步骤，其中膀胱区机械痛阈检测步骤中，使用vonfrey纤维丝通过up-down方法检测大鼠膀胱区机械痛阈，以机械痛敏阈值的数值为纵坐标，以时间为横坐标构建疼痛-时间曲线，机械疼痛阈值越低，疼痛越严重；尿流动力学检测步骤中，腹腔注射20％乌拉坦，5ml/kg麻醉后，经尿道将pe-50管插入大鼠膀胱，使用微量灌注泵以6ml/h灌注恒温生理盐水，连接生物信号采集与处理系统，使用bl-420n，观察在软件系统描绘的由压力变化而形成的压力-时间曲线，在排尿压力波峰稳定后，再记录30分钟用于排尿频率统计；膀胱大体检测步骤中，解剖摘取膀胱后观察各组大鼠膀胱内壁，对比各组大鼠数据；膀胱湿重称量步骤中，称量各组大鼠体重并取材称量膀胱湿重，对比各组大鼠数据；膀胱组织切片苏木精-伊红染色步骤中，解剖摘取膀胱后，石蜡包埋，切片后进行he染色，用光学显微镜进行图像采集，使用200x图像进行采集；膀胱上皮细胞凋亡检测步骤中，解剖摘取膀胱后，石蜡包埋，切片后进行tunel染色，用光学显微镜进行图像采集，使用200x图像进行采集；膀胱肥大细胞检测步骤中，解剖摘取膀胱后，石蜡包埋，切片后进行甲苯胺蓝染色，用光学显微镜进行图像采集，使用400x图像进行采集，并统计每组中肥大细胞数目，再算平均每mm2的肥大细胞数目进行统计学差异分析；膀胱组织炎症因子检测步骤中，解剖摘取膀胱后，使用westernblot检测ic模型组大鼠膀胱组织中促炎因子白介素-1β、白介素-6和肿瘤坏死因子-α，得出具体数据；膀胱组织氧化应激检测步骤中，解剖摘取膀胱后，检测试剂盒为碧云天，使用检测试剂盒检测膀胱组织中超氧化物歧化酶和丙二醛含量，超氧化物歧化酶简称sod，丙二醛简称mda，sod是一种生物体内清除超氧阴离子自由基的重要的抗氧化酶，可以保护细胞免受氧自由基的损害，而mda是脂质与氧自由基反应形成的产物之一，其含量代表脂质过氧化的程度。

7、作为本发明的一种优选实施方式：所述间质性膀胱炎大鼠模型的构建步骤中，取180g-220g雌性大鼠，简称sd，通过膀胱区机械痛阈检测筛选基础痛阈处于正常范围的大鼠，在实验的第1天、第4天和第7天分别给予大鼠腹腔注射cyp，cyp由50mg/kg，溶于生理盐水中配制，将其配制成2％的浓度，共注射3次，每次注射cyp的同时向溶剂对照组的大鼠腹腔注射相同剂量生理盐水，从第一次腹腔注射开始，每3天进行膀胱区机械痛阈检测以评价建模效果。

8、作为本发明的一种优选实施方式：所述饮用复合植物硒固体饮料治疗ic大鼠步骤中，根据组别，保证大鼠对植物硒固体饮料摄入量分别为300mg/kg/d，低剂量治疗组，简称cyp+sf(l)、600mg/kg/d中等剂量治疗组，简称cyp+sf(m)和1200mg/kg/d高剂量治疗组，简称cyp+sf(h)。

9、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

10、本发明一种硒黄酮通过抑制氧化应激炎症反应的方法,提供一种复合植物硒固体饮料治疗间质性膀胱炎的应用方法，且上述方法可以有效修复膀胱上皮损伤、减轻膀胱局部炎症和提高抗氧化能力、改善间质性膀胱炎症状，该复合植物硒固体饮料原料来源于天然富硒植物，总硒含量为500-9900μg/100g，有机硒含量≥90％，总黄酮含量≥100mg/100g，符合富有机硒食品的标准，是一种国民健康科学补硒的营养保健型普通食品或保健品，该复合植物硒固体饮料，能够改善间质性膀胱炎症状，相较于临床用药及膀胱灌治疗，毒副作用较小，避免侵入性操作，使用过程方便，更易推广及临床转化。