使用产生过氧化氢的组合物缓和隐孢子虫病的制作方法

本公开涉及用于缓和隐孢子虫病或减少隐孢子虫卵囊的数量和/或感染性的组合物和方法。

背景技术：

1、隐孢子虫病是一种由人畜共患原生动物寄生物隐孢子虫属种(cryptosporidiumspp.)引起的腹泻病，其在美国甚至世界范围内流行。幼龄动物通常比成年动物更易感。隐孢子虫卵囊随受感染动物的粪便脱落，并通过摄入受污染的水、食物或其他材料进行传播。卵囊很耐久，包括对氯消毒剂有抗性，因此可以在有限或共享空间中的动物，诸如奶牛或肉牛牛犊之间轻松转移。目前，美国尚未批准用于对抗食用动物的隐孢子虫感染的治疗剂。减少从受感染动物脱落的卵囊的数量和/或降低脱落卵囊的传染性可能有助于减少隐孢子虫病的传播或严重程度。

技术实现思路

1、本公开包括用于缓和隐孢子虫病或减少隐孢子虫卵囊的数量和/或感染性的组合物和方法。该组合物包含过氧化氢产生源，其可以是过碳酸钠或葡萄糖氧化酶与右旋糖。可以将组合物添加到动物饲料中，如果将饲料提供给犊牛，则饲料可以是代乳品。如本文所例示，组合物和方法可以减少从受感染动物脱落的卵囊的数量和/或降低脱落卵囊的感染性。提供所公开的组合物的动物即使感染有隐孢子虫也可能体重增加。

2、根据一些实施方案，减少液体动物饲料中的隐孢子虫属种的方法涉及提供混合有产生过氧化氢的组合物的液体动物饲料。该组合物包括作为过氧化氢源的过碳酸钠或葡萄糖氧化酶与右旋糖。该源以按干基计液体动物饲料的约0.07wt％至约3.00wt％提供。在一些实施方案中，过氧化氢源是过碳酸钠，并且其以按干基计约0.07wt％至约0.88wt％提供。在一些实施方案中，过氧化氢源是葡萄糖氧化酶与右旋糖，葡萄糖氧化酶(10,000u/g)以按干基计约0.01wt％至约0.07wt％提供，并且右旋糖以按干基计约0.31wt％至约2.94wt％提供。在一些实施方案中，液体动物饲料包括全脂乳、代乳品、废乳或电解质溶液。

3、在一些实施方案中，将液体动物饲料饲喂给家养家畜动物，如果动物暴露于隐孢子虫属种，则其预防或减少动物的隐孢子虫病。该动物可以是犊牛、羔羊、小山羊、仔猪或马驹。如果动物是犊牛，则隐孢子虫物种可能是小隐孢子虫(c.parvum)。在实施方案中，首先在出生后12至24小时内将组合物饲喂给动物，然后每天饲喂两次，持续10天。在实施方案中，与暴露于隐孢子虫属种但未提供组合物的动物相比，摄取组合物且暴露于隐孢子虫属种的动物改善表现。改善的表现可以包括改善的体重增加。

4、根据一些实施方案，降低由动物排出的隐孢子虫卵囊的感染性的方法包括在感染隐孢子虫属种之前或之后向动物提供过氧化氢源。与由未提供过氧化氢源的动物排出的隐孢子虫卵囊相比，由该动物排出的至少一部分隐孢子虫卵囊感染第二动物的能力降低。

5、在实施方案中，动物是犊牛、羔羊、小山羊、仔猪和马驹。在实施方案中，过氧化氢源是过碳酸钠或葡萄糖氧化酶与右旋糖。在实施方案中，过氧化氢源是过碳酸钠，并且其以750mg/头/天至3000mg/头/天提供。在实施方案中，过氧化氢源是葡萄糖氧化酶与右旋糖，葡萄糖氧化酶(10,000u/g)以140mg/头/天至250mg/头/天提供，并且右旋糖以3.5g/头/天至10.0g/头/天提供。

6、在实施方案中，过氧化氢源以水、全脂乳、代乳品、废乳或电解质溶液的形式提供。在实施方案中，过氧化氢源经封装。在实施方案中，动物是犊牛并且隐孢子虫物种是小隐孢子虫。响应于摄入过氧化氢源，该动物与未提供过氧化氢源的动物相比可能脱落更少的卵囊。

7、根据一些实施方案，饲喂对小隐孢子虫感染易感的犊牛的方法包括向犊牛提供液体饲料——其包含全脂乳、代乳品或废乳，以及产生过氧化氢的组合物，并且该犊牛与未提供组合物的犊牛相比体重增加。在实施方案中，对小隐孢子虫感染易感的犊牛和未提供组合物的犊牛均感染有小隐孢子虫。

8、在实施方案中，产生过氧化氢的组合物是过碳酸钠或葡萄糖氧化酶与右旋糖。在实施方案中，产生过氧化氢的组合物是过碳酸钠，并且其以750mg/头/天至3000mg/头/天提供。在实施方案中，产生过氧化氢的组合物是葡萄糖氧化酶与右旋糖，葡萄糖氧化酶(10,000u/g)以140mg/头/天至250mg/头/天提供，并且右旋糖以3.5g/头/天至10.0g/头/天提供。在实施方案中，该组合物首先在出生后12至24小时内提供，然后每天提供两次，持续10天。在实施方案中，代乳品包含按干重计约18wt％至约30wt％的蛋白质和约15wt％至约30wt％的脂肪。

9、附图简述

10、图1是柱状图，其显示与未处理的对照相比，用过碳酸钠处理的hct-8细胞的小隐孢子虫子孢子感染的减少百分比。

11、图2是柱状图，其显示与未处理的对照相比，用过碳酸钠处理的小鼠的小隐孢子虫子孢子感染的减少百分比。

12、图3是以对数标度表示的线形图，其显示从用1000mg过碳酸钠(“npc”)、500mg npc或90mg葡萄糖氧化酶(“go”)加2.3g右旋糖(“d”)bid处理或未处理(“对照”)的受感染犊牛脱落的小隐孢子虫卵囊的平均数量。

13、图4是条形图，其显示从受感染对照犊牛或用1000mg npc、500mg npc或90mg go加2.3g d bid处理或未处理的受感染犊牛脱落的小隐孢子虫卵囊的总数。

14、图5是条形图，其显示用1000mg npc(“h-npc”)、500mg npc(“l-npc”)或90mg go加2.3g d(“god”)bid处理或未处理的感染小隐孢子虫的犊牛的体重百分比变化。

15、图6是线形图，其显示用1000mg npc(“npc高”)、500mg npc(“npc低”)或god bid处理或未处理的感染小隐孢子虫的犊牛的平均每日粪便体积。

16、图7是线形图，其显示用npc高、npc低或god bid处理或未处理的感染小隐孢子虫的犊牛的平均每日粪便稠度得分。

17、图8是条形图，其显示与从受感染、未经处理的犊牛脱落的卵囊中脱囊的子孢子相比，从已用低npc、高npc或god处理的受感染犊牛脱落的卵囊中脱囊的小隐孢子虫子孢子的感染的减少百分比。

18、详细描述

19、本公开提供了作为缓和剂的产生过氧化氢的组合物以及将其饲喂家畜动物以预防或减少隐孢子虫病，或减少脱落的隐孢子虫卵囊的数量或感染性的方法。在实施方案中，产生过氧化氢的组合物包含过氧化氢源。过氧化氢源可以是过碳酸钠或葡萄糖氧化酶加右旋糖。在实施方案中，饲喂家畜动物(其可以是犊牛)的方法包括直接向动物提供缓和剂组合物，或首先将缓和剂组合物添加至液体饲料(诸如代乳品)或干饲料(诸如犊牛开食饲料(starter feed))中。缓和剂组合物可以在出生后立即或不久，诸如出生后12至24小时内开始提供，并且可以每天提供一次或两次，持续约10天。根据本文所述的方法向家畜动物提供缓和剂组合物可以预防隐孢子虫属种(其可以是小隐孢子虫)的感染。在感染小隐孢子虫的动物中，缓和剂组合物可以减少或消除隐孢子虫病。在一些实例中，与受感染但未经处理的动物相比，该组合物和方法可以减少由受感染动物脱落的小隐孢子虫卵囊的数量(实施例3)。由受感染、经处理的动物脱落的卵囊的感染性可能低于由受感染、未经处理的动物脱落的卵囊(实施例4)。与受感染、未经处理的动物相比，受感染、经处理的动物可能体重增加(实施例3)。

20、如本文所用，除非上下文另有暗示，否则术语“减少”包括改善隐孢子虫病的至少一种症状、减少隐孢子虫病的持续时间或严重程度、减少由受感染动物脱落的隐孢子虫卵囊的数量和/或降低由动物脱落的隐孢子虫卵囊传染性。术语“预防”包括完全预防隐孢子虫病或降低隐孢子虫感染的风险。可以在食用从经处理的动物脱落的卵囊的未经处理的动物中“预防”隐孢子虫病。

21、组合物

22、本文公开的组合物包含过氧化氢源。在一些实施方案中，该源是产生过氧化氢的化合物。在一些实施方案中，该源是产生过氧化氢的酶系统。产生过氧化氢的化合物的实例包括过碳酸钠、过硼酸钠和过氧化氢脲。在一个实施方案中，产生过氧化氢的化合物是过碳酸钠。产生过氧化氢的酶系统的实例包括氧化酶及其各自的底物。氧化酶的实例包括葡萄糖氧化酶、山梨醇氧化酶、己糖氧化酶、胆碱氧化酶、醇氧化酶、甘油氧化酶、胆固醇氧化酶、吡喃糖氧化酶、羧基醇氧化酶、l-氨基酸氧化酶、甘氨酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、谷氨酸氧化酶、肌氨酸氧化酶、赖氨酸氧化酶、乳酸氧化酶、香草基氧化酶、乙醇酸氧化酶、半乳糖氧化酶、尿酸酶、草酸氧化酶和黄嘌呤氧化酶。在一个实施方案中，产生过氧化氢的酶系统包括葡萄糖氧化酶及其底物β-d-葡萄糖(右旋糖)。葡萄糖氧化酶将右旋糖氧化成葡萄糖酸内酯和过氧化氢。在一些实施方式中，葡萄糖氧化酶和右旋糖可以有效产生过氧化氢，并且组合物可不含添加的可氧化剂，诸如添加的卤化物(例如，碘化物)或硫氰酸盐。

23、在一些实施方案中，产生过氧化氢的组合物与适合饲喂家畜动物的液体或固体组合。可以向其中添加组合物的液体的实例包括水、全脂乳、代乳品、废乳和电解质溶液。开食饲料是可以向其中添加组合物的固体或干饲料的实例。该组合物可以在与干饲料混合之前与液体混合。过氧化氢产生可以发生在与饲料组合之前、之后或之前和之后两者。

24、可以向其中添加本公开的产生过氧化氢的组合物的代乳品可以根据传统方法来产生，其中将代乳品的脂肪和蛋白质组分喷雾干燥并组合成包括可溶性或至少可悬浮成分的代乳品粉末。喷雾干燥过程通常涉及将喷雾干燥器的温度维持在100℃至200℃之间，以便喷雾干燥的组分迅速加热并失去水分。

25、代乳品可以是乳基和/或植物基的，并且营养素度量法(nutrient profile)通常包括脂肪和蛋白质。脂肪含量可以为水合代乳品的约2.25wt％至约4.7wt％或代乳粉的约8wt％至约31wt％。脂肪水平可以针对目标动物(例如犊牛)以及所饲喂的动物的年龄进行定制。在一些实例中，犊牛代乳品可以包括范围为粉末的约10wt％至约20wt％或水合代乳品的约3wt％至约3.75wt％的粗脂肪含量，并且全潜能犊牛代乳品可以包含粉末的约25wt％至约31wt％或水合代乳品的约3.75wt％至约4.7wt％的脂肪含量。在一些实施方案中，粉状代乳品可以具有约8wt％至约12wt％、约9wt％至约11wt％、约10wt％、约14wt％至约20wt％、约16wt％至约18wt％或约17wt％的粗脂肪含量。

26、主要的脂肪来源可以是猪油、动物油脂(tallow)、棕榈仁、芥花籽油或椰子油，单独或组合，它们可以含有不同量的中链甘油三酯。此外，来自卵磷脂的一些脂肪和残留脂肪(例如奶油、乳脂或两者)可能会增加代乳品中的脂肪含量。

27、代乳品中的蛋白质典型地范围为水合代乳品的约2.2wt％至约5.1wt％或粉末的约18wt％至约30wt％。对于传统的犊牛代乳品，蛋白质含量可以是粉末的约22wt％或再水合代乳品的约3.3wt％，并且配制用于增强性能的代乳品，诸如全潜能代乳品，可以包含为粉末的约25wt％至约28wt％或再水合代乳品的约3.9wt％至约4.8wt％的蛋白质。

28、蛋白质可以来源于动物(例如，乳、血浆、蛋和红细胞)和植物来源及其组合。乳源性蛋白质源通常被称为乳蛋白并且可以包括乳清、乳清浓缩蛋白、酪蛋白、脱脂乳、酪蛋白酸钠和酪蛋白酸钙。单独或组合的非乳蛋白(nmp)，诸如植物蛋白(例如，大豆蛋白、水解大豆蛋白、改性水解大豆蛋白、大豆分离蛋白、小麦浓缩物、小麦分离物、豌豆浓缩物、豌豆分离物和/或马铃薯蛋白)、动物蛋白(例如，血浆诸如牛或猪血浆、蛋和红细胞)和单个细胞蛋白，可以作为蛋白质源包含在代乳品中。非乳蛋白可能含有不同含量的磷。例如，磷可以以豆粕的约0.65wt％、大豆分离蛋白的约0.78wt％、改性的水解大豆蛋白的约0.68wt％、脱壳油菜子粕(canola meal)的约1.0wt％的量存在，并且这些组分中的每一种可以存在于含有nmp的代乳品中。nmp可以占总蛋白质含量的高达1％至约65％、约50至约65％、约55％至65％、约55％至60％，或高达或为约60％或约65％，具有衍生自乳蛋白的蛋白质的余额；而在一些实例中，乳蛋白可以占代乳品的总蛋白含量的约35％至99％、约35％至约50％、约35％至45％、约40％至45％、高达约40％或高达约35％。

29、可以向其中添加本公开的产生过氧化氢的组合物的废乳可以是不可销售的过渡乳、乳腺乳或不可销售的抗生素处理乳(即来自抗生素处理的动物的乳)、生产商选择不出售的高体细胞计数乳，或出于任何原因留出用于饲喂动物而不是出售给人类消费的乳。废乳可以经过巴氏灭菌或可以不经过巴氏灭菌。

30、可以向其中添加本公开的产生过氧化氢的组合物的电解质可以包括钠的一种或多种，其可以以约70mmol/l至约145mmol/l存在；葡萄糖，其可以以高达约200mmol/l存在；氨基酸，诸如甘氨酸，其可以以高达约145mmol/l存在；和碱化剂，其可以是乙酸盐、丙酸盐、碳酸氢盐、柠檬酸盐、乳酸盐或其组合，其以约50mmol/l至约80mmol/l存在。

31、在一些实施方式中，产生过氧化氢的组合物与干饲料诸如开食饲料组合。开食饲料通常包含占饲料总重量约18wt％至约22wt％的蛋白质源。在一些实施方式中，开食饲料可以包括玉米、豆粕、小麦中粉、燕麦、糖蜜、脂肪、磨碎的棉籽壳、酒糟、碳酸钙、盐以及大量营养素和微量营养素中的一种或多种的混合物。开食饲料可以包含约45％至50％的粗成分(例如玉米、大豆和燕麦)；约20％的蛋白质；约2％至3％的脂肪；约5％至6％的纤维(基于nir测定)；约7％的酸性洗涤纤维；约6％糖蜜；以及包括其他营养素的混合物的余额。

32、过碳酸钠可以是稳定粉末的形式，其在干燥形式下保持非反应性，这可以使其易于根据本文描述的方法与干代乳品组合物混合。相比之下，粉末形式的纯过氧化氢可能不太稳定。在一些实施方式中，过碳酸钠在再水合时产生约27.5％的过氧化氢。

33、在一些实施方案中，可以保护产生过氧化氢的组合物，使得过氧化氢的产生不开始，或者产生减少，直到期望的时间或地点。例如，可以将产生过氧化氢的组合物封装或涂覆以防止、延迟或控制过氧化氢的产生。封装可以保护产生过氧化氢的组合物免于在饲喂该组合物的动物的瘤胃中早期降解。封装剂可以是ph活化的，使得封装剂配制为在具有特定ph的环境(例如动物的小肠或盲肠)中分解并释放过氧化氢或过氧化氢源。可以通过包括但不限于喷涂的各种技术来实现的封装可以导致过氧化氢经由小肠到血流中的吸收增加，这可以增加过氧化氢在预防或减少隐孢子虫病的有效性。在一些实施方案中，封装剂包含至少一种基于微生物细胞壁的组分。另外或替代地，封装剂可以含有一种或多种基于脂肪或蜡的组分，例如脂肪酸甘油酯，其配制为保护产生过氧化氢的组合物免于在瘤胃中降解，从而保存过氧化氢用于肠吸收。boucher等人的美国专利号9,986,749中描述了基于脂肪的封装剂的可接受的示例，该专利的全部内容通过引用并入本文。在一些实例中，封装剂可以包含配制为绕过瘤胃并在下游(例如，在肠中)释放过氧化氢的基于脂质的纳米颗粒(直径约200-500nm)。

34、在一些实施方式中，所公开的组合物可以不含添加剂，诸如本文所公开的添加的氧化剂。相比之下，美国申请公开号2011/0229598(“’598公开”)公开了乳过氧化物酶(“lp”)系统，其通过向乳中添加过氧化氢源和额外的可氧化剂诸如卤化物(例如碘化物)或异硫氰酸盐来活化，以灭活乳中的细菌病原体。在’598公开中，过氧化氢源可以是葡萄糖氧化酶，其以最大0.1g/l存在。在本公开的组合物和方法中，葡萄糖氧化酶可以以0.09g/品脱或0.189g/l提供(参见例如实施例3)，其大于’598公开中公开的最大量。

35、在一些实施方式中，所公开的组合物可以不含过水解酶和酯底物。本公开的组合物和方法可以不含过酸溶液。相比之下，美国申请公开号2010/0189707(“’707公开”)公开了生成过酸水溶液的包含过水解酶、过氧化氢源和酯底物的组合物，其可以用作消毒剂。

36、在一些实施方式中，所公开的组合物被添加到代乳品中，并且代乳品不含添加的酸。相比之下，美国申请公开号2019/0336522(“’522公开”)公开了给家畜动物饲喂包含过碳酸盐(其可以是过碳酸钠)和酸的代乳品的方法。经处理的代乳品可能会减少沙门氏菌污染，但没有提及隐孢子虫或隐孢子虫病。

37、鉴于本领域，出乎意料的是，本公开的组合物和方法可以预防或减少隐孢子虫病，和/或可以减少从受感染动物脱落的隐孢子虫卵囊的数量和/或感染性。同样出乎意料的是，饲喂所公开的组合物的隐孢子虫感染的动物体重增加。

38、本文公开的组合物可以预防或减少施用该组合物的家畜动物中的隐孢子虫病。本文公开的组合物可以预防未直接施用该组合物的动物中的隐孢子虫病或减轻其严重性。例如，组合物可以减少由已施用组合物的受感染动物脱落的隐孢子虫属种(诸如小隐孢子虫)的卵囊的数量。脱落卵囊的减少可以降低动物(包括那些未施用组合物的动物)摄入卵囊并使其自身变为感染的可能性。所公开的组合物可以降低由已施用该组合物的受感染动物脱落的卵囊的感染性。感染性的降低可以降低摄入卵囊的动物(包括那些未施用组合物的动物)将自身感染的可能性。以这种方式，组合物可以帮助减缓或阻止隐孢子虫属种在动物群体中(包括当仅动物亚群摄入组合物时)的传播。

39、向动物提供组合物的方法

40、本文公开的组合物可以提供给对隐孢子虫属种感染易感的任何动物。易感动物可能包括家养家畜，诸如牛、绵羊、山羊、猪和马。幼龄动物可能比年老或成年的动物对感染更易感。易感的幼龄动物可能包括犊牛、羔羊、小山羊、仔猪和马驹。在一些实施方式中，防治性地，诸如在暴露于隐孢子虫属种之前，或与可能的隐孢子虫暴露并行地提供组合物。在一些实施方式中，在已知或怀疑的隐孢子虫暴露后，以治疗性地提供组合物。

41、在一些实施方式中，在出生后立即或不久，诸如在出生后12至24小时内开始提供产生过氧化氢的组合物。在一些实施方式中，提供组合物约6至约12天，或约8至约10天，或约10天。组合物可以每天一次或一次以上，诸如每天两次提供。该组合物可以在提供给动物之前、之后或之前和之后两者产生过氧化氢。

42、在一些实施方式中，动物可以是幼龄家畜哺乳动物并且可以在乳饲喂阶段(milkfeeding phase)、干饲料阶段(dry feed phase)和断奶阶段(weaning phase)中的一个或多个期间接受产生过氧化氢的组合物。乳饲喂阶段(“mfp”)是给幼龄动物饲喂代乳品、全脂乳、废乳或其组合的时期。可以在mfp期间饲喂干饲料，然而，干饲料阶段是mfp之后仅饲喂干饲料(例如，开食饲料)的时间段。典型地，mfp的最后一周是断奶阶段，在此期间鼓励幼龄动物仅食用干饲料。mfp可对应于出生后的前42至49天，断奶阶段包括该时期的一部分，如下所述。包括开食饲料饲喂的干饲料阶段可以从出生后约第42天持续至约第84天。

43、如上所述，补充有产生过氧化氢的组合物的乳或代乳品可以在mfp期间或其部分期间(例如，在断奶阶段之前或期间)提供给幼龄动物。在一些实施方式中，与产生过氧化氢的组合物混合的代乳粉可以以按干基计每天1.5磅(例如，每次饲喂0.75磅)的频率饲喂。该量可以在mfp期间饲喂，并且以每天0.75磅的频率(例如，以单次饲喂)，例如在断奶期间饲喂。在另外的或替代的实施方式中，可以在mfp的初始时间段以每天按干基计约1.8磅提供代乳品，持续约7天；此后在mfp的下一个时间段，从第8天延伸到第42天，以基于干重每天约2.5磅提供代乳品；并且在进一步时间段内，从第43天延伸到第49天，诸如在断奶阶段，以每天按干基计约1.25磅提供代乳品。在动物接受代乳品的全部或部分期间，可以向动物提供干饲料。

44、在断奶阶段期间，例如在乳饲喂阶段的最后几天内，可以在提供给幼龄家畜动物的饲料中提供产生过氧化氢的组合物。断奶阶段可以是约7天长、约14天长、约7天至约14天之间或长度在1天至14天之间的任何整数界限时间范围。例如，在断奶阶段期间，与上述mfp的第一部分期间提供的相比，动物可能以降低的频率摄取乳或代乳品中的产生过氧化氢的组合物，并且降低的频率可以对应于断奶期间向动物提供的代乳粉降低的水平。例如，幼龄家畜动物可以从液体饲料饮食(例如，犊牛代乳品)转变为干饲料饮食(例如，犊牛开食饲料)，以及可以接受每天一次饲喂添加了产生过氧化氢的液体饲料，以及例如可以每天饲喂0.75磅补充了的代乳品。在该实例中，动物每次饲喂代乳品可摄取与第一时间段相同量的产生过氧化氢的组合物，但每天仅饲喂一次。在另一个实例中，在断奶阶段期间，动物可以单独或者与代乳品中的产生过氧化氢的组合物组合摄入干饲料中的产生过氧化氢的组合物。

45、在一些实施方式中，在液体动物饲料中提供产生过氧化氢的组合物，其可以是过碳酸钠。过碳酸钠可以以按干基计约0.07wt％至约0.88wt％、约0.07wt％至约0.80wt％、约0.07wt％至约0.70wt％、约0.07wt％至约0.60wt％、约0.07wt％至约0.50wt％、约0.07wt％至约0.40wt％、约0.07wt％至约0.30wt％、约0.07wt％至约0.20wt％、约0.20wt％至约0.88wt％、约0.30wt％至约0.88wt％、约0.40wt％至约0.88wt％、约0.50wt％至约0.88wt％、约0.60wt％至约0.88wt％或约0.70wt％至约0.88wt％提供。

46、在一些实施方式中，产生过氧化氢的组合物包括葡萄糖氧化酶与右旋糖，并且其在液体动物饲料中提供。葡萄糖氧化酶在葡萄糖氧化酶具有10,000u/g的浓度时可以以按干基计约0.01wt％至约0.07wt％提供、在葡萄糖氧化酶具有10,000u/g的浓度时以按干基计约0.01wt％至约0.06wt％、约0.01wt％至约0.05wt％、约0.01wt％至约0.04wt％、约0.01wt％至约0.03wt％、约0.02wt％至约0.07wt％、约0.03wt％至约0.07wt％、约0.04wt％至约0.07wt％或约0.05wt％至约0.07wt％提供。

47、右旋糖可以在液体动物饲料中以按干基计约0.30wt％至约3.0wt％、约0.30wt％至约2.5wt％、约0.30wt％至约2.0wt％、约0.30wt％至约1.5wt％、约0.30wt％至约1.0wt％、约0.50wt％至约3.0wt％、约1.0wt％至约3.0wt％、约1.5wt％至约3.0wt％或约2.0wt％至约3.0wt％提供。

48、在一些实施方式中，产生过氧化氢的组合物包含过碳酸钠。在mfp期间，可以以约750mg/头/天至约3000mg/头/天、约750mg/头/天至约2750mg/头/天、约750mg/头/天至约2500mg/头/天、约750mg/头/天至约2250mg/头/天、约750mg/头/天至约2000mg/头/天、约750mg/头/天至约1750mg/头/天、约750mg/头/天至约1500mg/头/天、约1000mg/头/天至约3000mg/头/天、约1250mg/头/天至约3000mg/头/天、约1500mg/头/天至约3000mg/头/天、约1750mg/头/天至约3000mg/头/天、约2000mg/头/天至约3000mg/头/天或约2250mg/头/天至约3000mg/头/天饲喂过碳酸钠。在一些实施方式中，以约1000mg/头/天至约2000mg/头/天饲喂碳酸钠。在一些实施方式中，以每剂500mg、每天两次，或每剂1000mg、每天两次饲喂碳酸钠。如上所述，在断奶阶段可以降低频率。

49、在一些实施方式中，产生过氧化氢的组合物包括葡萄糖氧化酶与右旋糖。在mfp期间，可以以约1400u/头/天至2400u/头/天、约1400u/头/天至2200u/头/天、约1400u/头/天至2000u/头/天、约1400u/头/天至1800u/头/天、约1600u/头/天至2400u/头/天、约1800u/头/天至2400u/头/天或约2000u/头/天至2400u/头/天饲喂葡萄糖氧化酶。在一些实施方式中，以1800u/头/天饲喂葡萄糖氧化酶。在一些实施方式中，以每剂900u、每天两次饲喂葡萄糖氧化酶。如上所述，在断奶阶段可以降低频率。

50、在mfp期间，可以以约140mg/头/天至250mg/头/天、约140mg/头/天至225mg/头/天、约140mg/头/天至200mg/头/天、约140mg/头/天至175mg/头/天、约160mg/头/天至250mg/头/天、约180mg/头/天至250mg/头/天或约200mg/头/天至250mg/头/天饲喂葡萄糖氧化酶。在一些实施方式中，以180mg/头/天饲喂葡萄糖氧化酶。在一些实施方式中，以每剂90mg、每天两次饲喂葡萄糖氧化酶。如上所述，在断奶阶段可以降低频率。

51、在mfp期间，可以以约3.5g/头/天至约10.0g/头/天、约3.5g/头/天至约9.5g/头/天、约3.5g/头/天至约9.0g/头/天、约3.5g/头/天至约8.5g/头/天、约3.5g/头/天至约8.0g/头/天、约3.5g/头/天至约7.5g/头/天、约3.5g/头/天至约7.0g/头/天、约3.5g/头/天至约6.5g/头/天、约3.5g/头/天至约6.0g/头/天、约4.0g/头/天至约10.0g/头/天、约4.5g/头/天至约10.0g/头/天、约5.0g/头/天至约10.0g/头/天、约5.5g/头/天至约10.0g/头/天、约6.0g/头/天至约10.0g/头/天、约6.5g/头/天至约10.0g/头/天、约7.0g/头/天至约10.0g/头/天、约7.5g/头/天至约10.0g/头/天或约8.0g/头/天至约10.0g/头/天饲喂右旋糖。在一些实施方式中，以4.6g/头/天饲喂葡萄糖。在一些实施方式中，以每剂2.3g、每天两次饲喂葡萄糖氧化酶。如上所述，在断奶阶段可以降低频率。

52、在一些实施方式中，葡萄糖氧化酶以180mg/头/天与4.6g/头/天的右旋糖一起饲喂。在一些实施方式中，葡萄糖氧化酶以每剂90mg与每剂2.3g的右旋糖一起饲喂，每天两次。

53、实施例

54、实施例1-体外隐孢子虫暴露

55、测试了过碳酸钠(0.26、2.08、3.125、6.25、12.5、18.75、25或450mg/l)中和宿主上皮细胞中小隐孢子虫子孢子的能力。

56、hct-8(人回盲部腺癌)细胞在rpmi-1640培养基中单层生长至85-90％汇合度。将新鲜脱落、洗涤的小隐孢子虫子孢子与过碳酸钠处理剂混合，然后以每单层1.25x106个子孢子添加到hct-8细胞中。将细胞与子孢子在10％co2、37℃下温育2小时。然后洗涤细胞并在新鲜培养基中温育22小时。受感染的、未经处理的细胞作为对照。温育后，收获受感染的细胞并分离dna。使用qpcr对隐孢子虫卵囊壁蛋白(cowp)基因定量小隐孢子虫的数量。

57、结果如图1所示。图1表明，与对照相比，所有处理浓度的过碳酸钠均显著减少了感染(p<0.05)。结果表明，过碳酸钠减少hct-8细胞中小隐孢子虫子孢子的感染。

58、实施例2-小鼠隐孢子虫攻击

59、在小鼠隐孢子虫攻击中测试了0.26mg/头、12.5mg/头或450mg/头的过碳酸钠(“npc”)。八日龄的icr或cd-1小鼠被分为处理组(ua)和对照组(水)(n＝10/组)。通过口服接种使小鼠感染1x104小隐孢子虫卵囊。感染时及之后每12小时，用每剂100μl的npc或水处理小鼠。每只小鼠总共施用8剂后，终止攻击并收集肠道。该实验重复两次(“攻击i和攻击ii”)。针对已知的小隐孢子虫生物体的标准曲线，通过qpcr确定感染水平。

60、结果如图2所示。对于每次处理，小隐孢子虫感染的减少百分比随着处理剂量的增加而增加。与对照相比，过碳酸钠(450mg/头)将小隐孢子虫卵囊的感染减少了89.9％。

61、实施例3-犊牛隐孢子虫病临床试验

62、在临床隐孢子虫病犊牛模型中研究了葡萄糖氧化酶和过碳酸钠的作用。imbodenet al.,2012,vet.parasitol.188:41-47。

63、雄性荷斯坦犊牛来自封闭的牛群生产单位。出生时，犊牛受到保护，免于暴露于外源性隐孢子虫属种和其他潜在的腹泻剂，包括手动将犊牛放在干净的塑料布上。在出生后两小时内施用(产气荚膜梭菌c型抗毒素和抗大肠杆菌中和抗体，novartis，larchwood，ia)和(牛轮状病毒和冠状病毒，zoetis，kalamazoo，mi)疫苗。犊牛出生时按照制造商的说明饲喂商业初乳替代品(牛igg初乳替代品，land o’lakes，shoreview，mn)。通过使用折射计测量24-36小时龄时收集的每头犊牛的血清，确定初乳igg被动转移的充分性。在每头犊牛出生12小时内皮下注射维生素e/se补充剂(3ml/45kg)(merck,whitehouse station,nj)。

64、将犊牛装在装有高压灭菌的稻草的消毒板条箱中，用货车运送到亚利桑那大学bsl2隔离设施。抵达后，对犊牛进行称重，并使用microsoft excel随机数生成工具通过盲码随机分配到处理组或对照组(每组总共4-6头犊牛)。犊牛的耳标上贴有识别号码。研究人员对犊牛的分组分配不知情。每头犊牛都饲养在一个单独的高架犊牛栏(wenkemanufacturing，pender，ne)中，预先用氨水消毒，并风干至少96小时，以灭活任何隐孢子虫或其他微生物制剂。

65、从12小时龄开始，犊牛每天使用两次无抗生素代乳品(land o'lakes nursingformula mos milk replacer，land o'lakes animal milk solutions，arden hills，mn)(第1-5天为体重的10％，并且此后试验持续时间中增加50％)，直到感染后第10天实验终止。饮用水(每桶4升)可随意使用。腹泻发作时，通过桶提供口服电解质溶液(pfizer)直至试验结束。

66、从12-24小时龄开始，在试验持续时间，给犊牛饲喂于1品脱代乳品中的1000mg(“高”剂量)或500mg(“低”剂量)的过碳酸钠(“npc”)或葡萄糖氧化酶(90mg，10,000u/g)(winovazyme)+右旋糖(2.3g)(“god”)bid(总共22剂)。对照动物接受不含处理添加剂的代乳品。

67、如前所述，犊牛在36-48小时龄(第0天)时通过口服接种5x107个纯化、消毒的小隐孢子虫卵囊(iowa分离株)进行感染。imboden et al.,2012。

68、从感染后(“pi”)第3天开始收集24小时内排出的粪便总体积，并通过亚利桑那州兽医诊断实验室(亚利桑那大学)中操作的标准方法评估腹泻严重程度以及可能的细菌性肠道病原体(大肠杆菌k99和沙门氏菌)。还通过实时pcr对粪便进行了每日总卵囊计数。粪便收集盘位于畜栏后部下方，并通过在畜栏地板下侧安装尿液分流全角塑料防护罩来防止尿液污染。每天对犊牛进行两次检查，以评估以下变量并为其分配数值得分：临床症状、一般健康观察(起身意愿、姿势、直肠温度、食欲和食物摄入量、态度、水合状态)、是否存在腹泻，以及粪便稠度。imboden et al.,2012。在试验结束时对犊牛重新称重，以计算平均体重增加。

69、如果临床指示，在感染后第10天或那之前对犊牛实施安乐死。因为在出生时未检测到的先天缺陷，两只对照犊牛在试验开始时被安乐死。低npc组和god组的一头犊牛分别在感染后第5天和第6天因严重腹泻引起的肿胀和可能的肠道扭转而被安乐死。

70、通过t检验确定统计显著性。在处理组的犊牛中没有观察到主要毒性作用。

71、结果呈现在图3-图7中。图3表明处理组平均每日脱落的卵囊数量显著低于对照组。与对照组相比，1000mg npc处理组在感染后第6天和第10天脱落的卵囊显著减少(p<0.05)。与对照组相比，500mg npc处理组在感染后第4-6天和第9-10天脱落的卵囊显著减少(p<0.05)。与对照组相比，god处理组在感染后第5-8天和第10天脱落的卵囊显著减少(p<0.05)。图4表明，与对照组相比，500mg npc处理组在试验期间(感染后第3-10天)脱落的卵囊平均总数显著减少了约24％(p<0.05)。

72、图5显示，在试验过程中，god处理组中的犊牛经历了2.7％的体重增加，l-npc处理组中的犊牛经历了2.5％的体重减轻，h-npc处理组中的犊牛经历了3.6％的体重减轻，并且对照组中的犊牛经历了9.1％的体重减轻。与对照组相比，god处理组的犊牛表现出具有统计学意义的体重增加(p<0.05)。在试验过程中，对照组和两个npc处理组的犊牛体重均有所减轻，但npc处理组的犊牛相较于对照组的犊牛体重减轻往往更少。在受到攻击的处理组中，即使在测试传统药物治疗剂时，体重增加也是罕见且出乎意料的。

73、平均每日粪便体积在很大程度上是腹泻的衡量标准，其中粪便体积越大表明腹泻越严重。所有组的犊牛都出现腹泻。只有god处理组在感染后第6天的粪便体积在统计上显著小于对照组(p<0.05)。图6。在试验期间，对照组和处理组的犊牛之间的总粪便体积没有显著差异(数据未显示)。

74、粪便稠度是临床评分标准的一个组分，其从1级(正常、坚硬)到4级(水样)对粪便进行分级。在试验的大部分时间里，对照组和处理组都持续出现腹泻或软便。如图7所示，对照组的犊牛从感染后第3天到感染后第9天表现出严重腹泻。到感染后第10天，小隐孢子虫感染已基本清除，粪便稠度评分与基线(感染后第2天)相似。总体而言，与对照组相比，处理组的粪便稠度评分没有改善。仅在感染后第7天，与对照组相比，god处理组的粪便稠度评分才出现统计学上显著的改善。

75、除了粪便稠度之外，临床评估分数还以1(正常)至4(异常)的等级评估每项姿势、起身意愿、食欲、态度和水合。分数越高表明临床评估越低或动物健康状况越差。无论是每日分析还是在试验过程中累积分析(数据未显示)，对照组和处理组之间的临床评估分数均未观察到统计学上的显著差异。

76、患有严重腹泻的动物的尿量通常会减少。对照组和处理组之间的每日尿量或总尿量没有观察到显著差异(数据未显示)。

77、根据所有试验中所有犊牛的平均体重，受感染(对照和处理)犊牛的代乳品摄入量与未感染犊牛的预期摄入量没有显著差异，除了感染后第4天摄入量减少，这通常与腹泻和食欲不振的发作相吻合(数据未显示)。

78、实施例4–脱落的隐孢子虫卵囊的感染性

79、在研究期间的几天内，从实施例3的对照组和处理组的犊牛的粪便中收集卵囊。将卵囊取出并进行分析，以确保四个处理组之间的卵囊脱落率相等。如实施例1中所述，感染、收获和处理hct-8细胞。

80、结果如图8所示，第一次迭代显示在每个一对条的左侧条中(黑色)，第二次迭代显示在每个右侧条中(白色)。在第一次测定迭代中，与未处理的对照细胞相比，所有三个处理组均表现出感染显著减少(p<0.05)，尽管这在god组的第二次迭代中有所减少与未经处理的(对照)犊牛脱落的卵囊相比，。用低剂量或高剂量过碳酸钠或用葡萄糖氧化酶+右旋糖处理的犊牛脱落的卵囊感染hct-8细胞的能力降低。用产生过氧化氢的组合物诸如过碳酸钠或葡萄糖氧化酶处理犊牛可以减少饲养犊牛的畜栏区域的污染，可以减少隐孢子虫病的环境传播，和/或可以改善犊牛的总体结果。

81、如本文所用，术语“约”修饰例如组合物中组分的量、浓度及其范围，用于描述本公开的实施例，是指通过以下情况可能发生的数值变化，例如，制备化合物、组合物、浓缩物或使用制剂的典型测量和处理程序中；这些程序中的非故意误差；用于实施该方法的起始材料或成分的制造、来源或纯度的差异，以及类似的近似考虑因素。术语“约”还涵盖由于具有特定初始浓度或混合物的制剂的老化而不同的量，以及由于混合或加工具有特定初始浓度或混合物的制剂而不同的量。当用术语“约”修饰时，所附权利要求包括这些量的等价值。在一些情况下，术语“约”包括高达并包括比所列举的值小10％和大10％的值。

82、类似地，应当理解，在示例实施例的前述描述中，为了简化本公开并帮助理解各个方面中的一个或多个方面，有时将各种特征组合在一起在单个实施方案中。然而，公开的这些方法不应被解释为反映了权利要求需要比每项权利要求中明确记载的特征更多的特征的意图。相反，如所附权利要求所反映的，发明的方面在于少于单个前述公开的实施方案的所有特征，并且本文描述的每个实施方案可以包含多于一个发明特征。

83、尽管本公开提供了对优选实施方案的参考，但是本领域技术人员将认识到，可以在形式和细节上进行改变而不脱离本发明的精神和范围。