罗汉果甜苷的甜味增强组合物、甜味增强肽、甜味增强辅助肽和用途的制作方法

本发明属于代糖甜味增强领域，具体涉及一种罗汉果甜苷的甜味增强组合物、甜味增强肽、甜味增强辅助肽和用途。

背景技术：

1、甜是一种味觉体验，主要是由糖刺激分布在舌头上的神经细胞，并由大脑作出的一种味觉判断。蔗糖具有甜味纯正，使用后无异味，成为甜味选择的标准。但过量摄入蔗糖会诱发如肥胖症、糖尿病、心脑血管疾病和龋齿等问题，减少食品中的蔗糖含量已成为一种行之有效的手段。甜味剂是能赋予软饮料甜味的食品添加剂，但无论是天然甜味剂还是人工合成甜味剂，添加量过大无法增加甜度，反而会带来令人不悦的味道回味和口感。

2、罗汉果甜苷又称罗汉果甜甙，植物含量较高且水溶性好，萃取于广西特产经济植物罗汉果，其甜度为蔗糖的300倍，具有清热润肺镇咳、润肠通便之功效，对肥胖、便秘、糖尿病等具有防治作用。但罗汉果甜苷提取工艺复杂，提取的率较低，具有较高的生产成本，且罗汉果甜苷起甜慢，入口后有持续的余味和轻微的苦味，无法达到蔗糖能够产生的高品质味觉体验。

3、因此，如何降低罗汉果甜苷的使用量，同时保持甜度，修饰其味道，使其能够接近蔗糖的甜味特性，是本领域需要解决的技术问题。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本技术目的之一是提供一种罗汉果甜苷的甜味增强组合物，包括短肽tivwngppg和短肽gipawgy。

2、所述罗汉果甜苷的甜味增强组合物中，短肽tivwngppg具有明显的罗汉果甜苷的增添效果，而配合短肽gipawgy后，协同增效了增甜效果。同时协同的短肽gipawgy具有明显的ace酶抑制效果，而ace酶是一种通过肾素-血管紧张素系统调节血压的物质，因此，所述罗汉果甜苷的甜味增强组合物具有明显的ace酶抑制活性，能够有效改善高血压等心脑血管疾病的风险。

3、换言之，本技术提供的罗汉果甜苷的甜味增强组合物与罗汉果甜苷配合后能够获得较高的甜度，降低罗汉果甜苷的使用量，同时保持了相应的甜度，降低蔗糖的摄入，减小糖尿病、肥胖和龋齿等出现的概率，同时具有明显的ace酶抑制率，具有降低心血管疾病发病概率的作用。

4、优选地，所述甜味增强组合物中，短肽tivwngppg和短肽gipawgy的质量比≥0.5，例如0.6、0.9、1.3、1.5、1.8、2.0、2.4、2.8、3.0、3.5、4.0、4.6、5.0、5.4等。

5、进一步优选地，所述甜味增强组合物中，短肽tivwngppg和短肽gipawgy的质量比2:1～3:2。

6、当短肽tivwngppg和短肽gipawgy的质量比为2:1～3:2时，所述甜味增强组合物具有优于短肽tivwngppg的甜味增强效果和ace酶抑制效果。

7、本技术目的之二是提供一种如目的之一所述的甜味增强组合物的用途，所述甜味增强组合物用于增强罗汉果甜苷的甜味。

8、本技术提供的甜味增强组合物能够明显提高罗汉果甜苷的甜味感知，弥补罗汉果甜苷起甜慢的缺陷，同时在达到相同甜度的前体下，降低罗汉果甜苷的使用量；同时其ace酶抑制活性为其在心血管疾病的预防和改善方面提供有益的效果。

9、优选地，所述甜味增强组合物的使用量为每克罗汉果甜苷添加2.08～5.56g甜味增强组合物。

10、本技术目的之三是提供一种罗汉果甜苷的甜味增强肽，所述甜味增强肽的序列为tivwngppg。

11、本技术目的之四是提供一种如目的之三所述的罗汉果甜苷的甜味增强肽的用途，所述甜味增强肽用于增强罗汉果甜苷的甜味。

12、优选地，所述甜味增强肽的使用浓度为每克罗汉果甜苷添加1.39g～5.56g甜味增强肽。

13、所述甜味增强肽tivwngppg具有明显的罗汉果甜苷的增甜效果，能够在不降低甜味感知的前提下，有效的降低罗汉果甜苷的使用量，弥补罗汉果甜苷起甜慢，成本高的缺陷。

14、本技术目的之五是提供一种蔗糖替代物，所述蔗糖替代物包括1重量份的罗汉果甜苷和1.39～5.56重量份的如目的之三所述的甜味增强肽tivwngppg。

15、本技术所述的蔗糖替代物能够有效替代蔗糖，获得较好的甜味体验。

16、本技术目的之六是提供一种罗汉果甜苷的甜味增强辅助肽，所述甜味增强辅助肽的序列为gipawgy。

17、所述甜味增强辅助肽gipawgy单独使用，其对罗汉果甜苷的甜味增强效果非常有限，但在目的之五所述的蔗糖替代物中，所述甜味增强辅助肽gipawgy对甜味增强肽tivwngppg具有协同增甜的效果。此外所述甜味增强辅助肽gipawgy具有明显的ace酶抑制活性，其ace酶抑制活性能达到80％以上的效果。

18、换言之，甜味增强辅助肽gipawgy是一种能够协同甜味增强肽tivwngppg的辅助成分，其添加能够提高甜味增强肽tivwngppg对罗汉果甜苷的增甜效果，且赋予蔗糖替代物ace酶抑制活性的效果。

19、本技术目的之七是提供一种如目的之六所述的甜味增强辅助肽的用途，所述甜味增强辅助肽用作保健品添加剂、健康食品添加剂中的任意一种或至少两种的组合；

20、所述保健品包括抑制高血压的健康食品和/或软化血管的健康食品。

21、在本技术提供的短肽中，t为苏氨酸(thr)，i为异亮氨酸(ile)，v为缬氨酸(val)，n为天冬酰胺(asn)，g为甘氨酸(gly)，p为脯氨酸(pro)，a为丙氨酸(ala)，g为甘氨酸(gly)，w为色氨酸(trp)，y为酪氨酸(tyr)。

22、需要说明的是，本技术提供的短肽tivwngppg和短肽gipawgy，可以通过标准方法来合成，或使用肽合成领域技术人员熟知的几种合成途径来制备本发明的短链肽。

23、示例性地，可以利用下面描述的方法以及肽合成领域技术人员已知的常规技术或者本领域技术人员理解的其变化形式来合成短肽tivwngppg和短肽gipawgy。

24、如采用固相法合成甜味增强肽，从c端到n端方向合成多肽，依次接上氨基酸，根据目标肽的序列加fmoc保护的脯氨酸和缩合剂，进行氨基的脱保护和缩合反应，重复脱保护-缩合的过程直至所有氨基酸连接完毕，然后进行纯化。

25、示例性的如短肽tivwngppg(thr-ile-val-trp-asn-gly-pro-pro-gly)，可以通过如下固相法方法合成：

26、如采用固相法合成甜味增强肽，fmoc-thr(pbf)-王树脂浸泡溶胀后洗涤，用脱帽液(n,n-二甲基甲酰胺+哌啶+乙酸酐)反应15min后洗涤，以脱除fmoc，然后加入fmoc-ile-oh氨基酸，以hbtu(苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐)和hobt(1-羟基苯并三氮唑)为缩合剂，以n,n-二异丙基乙胺和溶剂n,n-二甲基-4-吡啶胺为碱试剂室温下进行40min的缩合反应，然后洗涤；再加入脱帽液(n,n-二甲基甲酰胺+哌啶+乙酸酐)反应脱去fmoc并洗涤；如此重复步骤顺次接枝val、trp、asn、gly、pro、pro至gly，目标序列连接完毕后，用三氟乙酸将肽链从树枝上洗脱得到粗品；然后采用rp-hplc c18柱子对粗品进行纯化，将三氟乙酸盐转化为醋酸盐，冻干后并得到高纯度产品。

27、与现有技术相比，本技术具有如下有益效果：

28、(1)本技术提供了一种罗汉果甜苷的甜味增强组合物，其与罗汉果甜苷配合后能够获得较高的甜度，降低罗汉果甜苷的使用量，弥补罗汉果甜苷起甜慢的缺陷，同时保持了相应的甜度，降低蔗糖的摄入，降低糖尿病、肥胖和龋齿等出现的概率，同时具有明显的ace酶抑制率，具有降低心血管疾病发病概率的作用。

29、(2)本技术还提供了一种罗汉果甜苷的甜味增强肽，具有明显的罗汉果甜苷的增甜效果。

30、(3)本技术还提供了一种罗汉果甜苷的甜味增强辅助肽，对甜味增强肽tivwngppg具有协同增甜的效果，且具有明显的ace酶抑制活性。