一种具有减肥降脂功效的植物乳杆菌J26后生元冻干粉及其制备方法和应用

本发明属于微生物，具体涉及一种具有减肥降脂功效的植物乳杆菌j26后生元冻干粉及其制备方法和应用。

背景技术：

1、肥胖已被who认定为疾病，会引发多种慢性疾病，近年来有关肥胖危害的研究居高不下。肥胖不仅会增加2型糖尿病、心血管疾病、慢性肾病、肌肉骨骼疾病、感染等一系列代谢疾病发生，还会对大脑小胶质细胞具有损伤作用，加快大脑老化，最新研究发现肥胖可显著增加抑郁和焦虑的风险。

2、有研究表明活的益生菌对降低体重、抑制脂质积累，有改善作用。然而活的益生菌由于具有复制能力，存在在人体内维持微生物活性带来的风险，从对一些特殊人群，如新生儿、敏感人群不适应。后生元是对宿主健康有益的无生命微生物和/或其成分的制剂。近年来已经有不少研究探究了后生元可能存在的健康益处，目前后生元已经被应用于普通食品、营养保健品、特殊医学食品、婴幼儿食品等领域，随着后生元研究的不断深入，后生元也逐渐开始应用于预防或治疗疾病方面，而行业对微生物特定培养基的制备属于供不应求阶段。

3、中国专利申请号202310013365.7公开了一种植物乳杆菌j26组合物、制法和在减肥产品中的应用，组合物包括按照质量比例1:1复配的植物乳杆菌j26与副干酪乳杆菌jy56胞外多糖。副干酪乳杆菌jy56保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期为2022年11月21日，保藏编号为gdmcc no：62988。本发明减低由高脂饮食诱导的肥胖小鼠的体重，显著降低肥胖小鼠血清和肝脏中tc、tg、ldl-c和glu的含量，降低肥胖小鼠血清中的alt、ast、tnf-α、il-6、il-1β和ifn-γ含量。减轻肥胖小鼠肝脏脂肪变性情况，缓解炎症细胞浸润和纤维组织增生现象。该专利提供的植物乳杆菌j26组合物具有较好的减肥效果，但由于其使用的是活的益生菌组合物，对一些特殊人群，如新生儿、敏感人群不适应，导致了其应用受限。

4、基于上述背景，本领域有必要开发天然的非药物类食用级别的具有减肥降脂的后生元功能产品。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具有减肥降脂功效的植物乳杆菌j26后生元冻干粉及其制备方法和应用，该冻干粉具有显著减肥降脂的作用。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种具有减肥降脂功效的植物乳杆菌j26后生元冻干粉的制备方法，包括以下步骤：

4、s1、菌株活化：将植物乳杆菌j26以5%的接种量接种于mrs液体培养基，37℃需氧条件下培养13h，取菌液在mrs琼脂培养基进行三区划线，进行有氧培养，挑取单菌落至mrs液体培养基继续培养13h，得到活化菌株；

5、s2、基础培养基发酵：将步骤s1中的活化菌株以5%的接种量接种于脱脂乳粉培养基中， 37℃扩大培养13h，得到发酵液，随后向发酵液中加入复合载体，于5-10℃下放置4-6h，得到混合液；

6、s3、植物乳杆菌j26后生元冻干粉的制备：将步骤s2中的混合液采用巴氏杀菌-超声联合灭活，灭活后加入秋葵提取液、单甘酯、蔗糖酯，搅拌均匀后进行冷冻干燥，得到所述植物乳杆菌j26后生元冻干粉。

7、优选的，步骤s1中所述mrs液体培养基的组成为：蛋白胨5-8g/l、胰蛋白胨10-15g/l、乙酸钠5-9g/l、磷酸氢二钾2-4g/l、葡萄糖20-30g/l、牛肉膏5-10g/l、酵母粉5-8g/l、硫酸锰0.25-0.5g/l、硫酸镁0.58-0.8g/l、柠檬酸氢二铵2-4g/l、吐温-80 0.1-0.2g/l；所述有氧培养的温度为37℃，时间为48h。

8、优选的，步骤s2中所述复合载体的加入量为发酵液质量的0.4-0.8%；所述脱脂乳粉培养基中脱脂乳粉的含量为100-140g/l，碳源含量为40-80g/l，氮源含量为40-80g/l。

9、优选的，所述碳源为蔗糖、麦芽糖、甘露醇、纤维二糖中的一种或几种，所述氮源为l-半胱氨酸、鸟嘌呤、四氧嘧啶中的一种或几种。

10、优选的，步骤s2中所述复合载体制备方法如下：将凹凸棒土加入质量浓度为5%的盐酸溶液中浸渍2-3h，浸渍完成后过滤、洗涤、干燥，得到预处理凹凸棒土；将预处理凹凸棒土加入去离子水中，接着加入柠檬酸改性壳寡糖，用盐酸调节ph至3-4，进行搅拌反应，反应完成后继续加入羟丙基-β-环糊精，进行加热反应，反应完成后过滤，干燥，即得所述复合载体。

11、优选的，所述柠檬酸改性壳寡糖的制备方法如下：将20g壳寡糖加入200ml去离子水中，接着加入5g柠檬酸、0.2g次磷酸钠，于110-120℃下反应2-4h，冷却至室温，加入无水乙醇进行沉淀、洗涤，固液分离，固体产物进行干燥，即得所述柠檬酸改性壳寡糖；所述预处理凹凸棒土、柠檬酸改性壳寡糖、羟丙基-β-环糊精的质量比为100:20-30:10-20；所述搅拌反应的温度为60-80℃，反应时间为3-5h，所述加热反应的温度为80-90℃，反应时间为2-3h。

12、优选的，步骤s3中所述秋葵提取液的制备方法如下：将新鲜秋葵洗净后打成泥状，加入3-5倍的水，在50-70℃条件下搅拌水提2-3h，随后冷却至-10~-5℃，保温3-4h，然后加热至60-70℃，水提1-2h，随后冷却至常温，固液分离，得到第一滤液和滤渣；将滤渣加入5-7倍的蒸馏水中，在55-70℃、200-300w下超声反应20-30min，反应完成后固液分离，得到第二滤液；将第一滤液与第二滤液混合后进行减压浓缩，浓缩至原体积的1/5，即得秋葵提取液。

13、优选的，步骤s3中所述秋葵提取液的添加量为灭活后混合液质量的3-6%，单甘酯的添加量为灭活后混合液质量的0.4-0.6%，蔗糖酯的添加量为灭活后混合液质量的0.4-0.6%；所述灭活工艺为：在65℃、超声功率为400-500w的条件下灭活20-30min；所述冷冻干燥的温度为-60~-80℃，时间为24-48h。

14、本发明还保护一种所述制备方法制备得到的具有减肥降脂功效的植物乳杆菌j26后生元冻干粉。

15、本发明还保护一种所述具有减肥降脂功效的植物乳杆菌j26后生元冻干粉在功能性食品或保健产品中的应用。

16、与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

17、（1）本发明制备的具有减肥降脂功效的植物乳杆菌j26后生元冻干粉，具有减肥降脂的作用，具体体现在：显著缓解高脂饮食诱导肥胖小鼠的体重增加、lee’s指数上升、体脂率升高；显著降低高脂饮食诱导肥胖小鼠血清中tc、tg、ldl-c的水平，提高hdl-c的水平；显著恢复高脂饮食诱导肥胖小鼠葡萄糖耐量的差异性；显著降低高脂饮食诱导肥胖小鼠血清中胰岛素、提高胰高血糖素样肽的水平；显著降低高脂饮食诱导肥胖小鼠血清中瘦素、提高脂联素的含量；因此，其在减肥降脂相关产品中，具有巨大的应用前景。

18、（2）本发明提供的具有减肥降脂功效的植物乳杆菌j26后生元冻干粉的制备方法，将植物乳杆菌j26进行活化，得到活化菌株，随后再将活化菌株在脱脂乳粉培养基中进行发酵培养，采用本发明的发酵方法制得的后生元中有效成分含量高，提高了制剂并在发酵后加入复合载体，复合载体以凹凸棒土为原料，先将凹凸棒土进行酸化处理，提高其表面的活性基团，有利于下一步反应的进行，接着将预处理的凹凸棒土与柠檬酸改性壳寡糖进行反应，使凹凸棒土表面接入壳寡糖，继续再加入羟丙基-β-环糊精进行反应，使凹凸棒土表面接入羟丙基-β-环糊精，凹凸棒土有着优异的综合性能，如较大的比表面积、良好的化学稳定性、良好的生物相容性、较强的吸附性能，将其作为载体原料，一方面可吸附菌株和菌株代谢产物在其表面及内部固定化，使制备的后生元冻干粉性能更加稳定，引入的壳寡糖可进一步提高凹凸棒土的生物相容性，并且其含有的丰富活性基团，可与植物乳杆菌代谢产物中氨基酸、生物酶大分子产生相互作用，提高后生元产品的稳定性，引入的羟丙基-β-环糊精可对后生元中的小分子成分进行包合，使后生元成分具有良好的缓释作用，提高后生元的利用率；接着采用巴氏杀菌-超声联合对混合液进行灭活，该方法可避免杀菌不彻底以及对后生元产品成分损伤的问题，保证后生元冻干粉的功效；随后加入的秋葵提取液可以在后生元冻干粉表面形成秋葵提取液薄膜，可减少后生元的流失，后生元冻干粉进入肠道会缓慢释放后生元，且由于复合载体能吸收食糜中的水分的作用，使得肠道内食糜黏度增加、流动速度减缓，进而延长后生元的作用时间，有利于进一步提高后生元的利用率；同时秋葵含有维生素c和果胶，具有降血糖、降胆固醇、预防心血管疾病等功效，进一步提高了后生元冻干粉的减肥降脂效果。