包含乳过氧化物酶体系的协同杀真菌组合物的制作方法
【专利说明】包含乳过氧化物酶体系的协同杀真菌组合物 发明领域
[0001] 本发明公开了控制植物疾病和预防作物的微生物腐败（spoilage)的新的抗微生 物组合物。
[0002] 发明背景
[0003] 据估计世界作物产量的约25%由于微生物疾病而损失，其中真菌导致的疾病是迄 今为止最严重的原因。从经济学观点以及人道主义观点来看，预防食品腐败都非常重要。毕 竟世界上许多地方的人在遭受饥饿。
[0004] 在抵抗植物疾病以及减轻它们对产量和质量造成的损伤方面的成功大幅取决于 杀真菌剂的及时应用。由于抗性现象的发展，许多杀真菌剂（例如苯并咪唑）的长期和频 繁使用促成了它们有效性的降低。对于一些作物和疾病目前已观察到了对许多杀真菌剂的 抗性（参见Brent等人，2007)。
[0005] 几十年来，多烯大环内酯抗霉菌那他霉素已被用于预防食品产品（例如乳酪和香 肠）上的真菌生长。通过使用Streptomyces natalensis发酵生产的这种天然防腐剂在全 世界被广泛用作食品防腐剂，并且在食品工业中具有安全使用的悠久历史。其针对所有已 知的食品腐败真菌都非常有效。尽管那他霉素已在例如乳酪工业中被应用多年，但是迄今 为止从未观察到抗性真菌物种的发展。
[0006] 因此可以得出结论：存在对用于处理植物和作物中的真菌生长和植物和作物上的 真菌生长的更有效抗微生物组合物（例如抗真菌组合物）的严重需求。
【发明内容】
[0007] 本发明通过提供包含多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系的新的协同抗微生 物（例如抗真菌）组合物，解决了上述问题。当在本文中使用时，术语"协同的"表示：组合 使用时，抗真菌组分的组合效果大于它们各自使用时的效果之和。
[0008] 通常，可以如下计算协同作用：可以通过计算与用对照组合物处理的产品上的霉 菌生长相比，用活性成分处理的产品上观察到的霉菌生长的减少，来测定个体活性成分的 抗真菌活性（以％计）。可以根据Colby方程（Colby，1967)计算包含两种活性成分的组合 抗真菌组合物的预期抗真菌活性出，以％计）：Ε = Χ+Υ- [(Χ·Υ)/100]，其中X和Y分别是 个体活性成分X和Y的观察到的抗真菌活性（以％计）。如果组合的观察到的抗真菌活性 (〇，以％计）超出组合的预期抗真菌活性出，以％计）并且因而协同因子0/Ε>1.0,那么活 性成分的组合应用导致协同的抗真菌效应。乳过氧化物酶体系可以为粉末形式或者可以为 液体形式。在一个实施方式中，乳过氧化物酶体系包含几种组分。根据本发明的合适乳过 氧化物酶体系可在WO 99/022597、W0 91/11105和WO 97/26908中找到，其通过引用被并入 本文。
[0009] 第一，所述体系包含乳过氧化物酶（LP ;EC 1. 11. 1. 7)。在一个实施方式中，乳过 氧化物酶以0. l-l〇〇〇〇mg/l，优选地10-100mg/l范围内的量存在。乳过氧化物酶是天然存 在于乳中的酶。所述体系中的乳过氧化物酶可以是乳衍生乳过氧化物酶。乳过氧化物酶可 例如为牛、水牛、山羊、绵羊或骆驼来源。从乳中分离乳过氧化物酶的方法是已知的。或者， 可通过重组生物技术方法（例如通过在宿主细胞例如酵母或细菌中产生酶）来制造乳过氧 化物酶。
[0010] 第二，所述体系可包含卤化物，所述卤化物选自由碘化物（Γ)或溴化物（BiO或其 盐（例如碘化钾、碘化钠、溴化钾、溴化钠）或它们的组合组成的组。在一个实施方式中，卤 化物以〇· l-l〇〇〇〇mg/l，优选地25-200mg/l范围内的量存在。
[0011] 此外，所述体系可包含硫氰酸根化合物（SCN0。在一个实施方式中，硫氰酸根化合 物以0. l-10000mg/l，优选地5-50mg/l范围内的量存在。硫氰酸根化合物可以以盐例如硫 氰酸钠、硫氰酸钾、硫氰酸铵、硫氰酸铜、硫氰酸铁或者它们的组合的形式存在。在优选的实 施方式中，所述体系包含如上所述的卤化物和如上所述的硫氰酸根化合物两者。
[0012] 第三，所述体系包含过氧化氢。在一个实施方式中，过氧化氢以0. l-10000mg/l，优 选地l-500mg/l范围内的量存在。过氧化氢可以以其本身（例如，稳定的过氧化氢）存在。 或者，可以存在过氧化氢供体体系。合适的过氧化氢供体体系包括但不限于，碱金属过碳酸 盐（例如，2Na2C03*3H202);碱土金属过氧化物（例如，过氧化镁）和其他固体过氧化物（例 如，过氧化脲）；其中通过抗坏血酸的氧化产生过氧化物的体系；其中通过利用葡萄糖氧化 酶（E. C. I. 1. 3. 4)氧化葡萄糖产生过氧化氢的体系；其中通过利用黄嘌呤氧化酶氧化次黄 嘌呤产生过氧化氢的体系；其中通过利用过氧化酶作用氧化还原的吡啶核苷酸产生过氧化 氢的体系；或上述过氧化氢供体体系的任意组合。
[0013] 在一个实施方式中，本发明中使用的乳过氧化物酶体系包含葡萄糖、葡萄糖氧化 酶和过碳酸盐（例如，过碳酸钠）作为过氧化氢供体体系。在一个实施方式中，葡萄糖 以0. l-10000g/l，优选地l-10g/l范围内的量存在。在一个实施方式中，葡萄糖氧化酶以 0. 1-10000IU/1，优选地50-1000IU/1范围内的量存在。在一个实施方式中，过碳酸盐以 0· l-10000mg/l，优选地l-500mg/l范围内的量存在。
[0014] 在一个实施方式中，本发明中使用的乳过氧化物酶体系可还含有两种或更多种不 同的乳过氧化物酶、硫氰酸根化合物、卤化物、过氧化氢源或它们的任意组合。商业乳过氧 化物酶体系的实例是名称为Enzicur (Koppert B.V.,荷兰）的产品。所述商业产品可被并 入本发明中。
[0015] 使用之前，可稀释根据本发明的组合物。可利用水性制剂进行稀释。用于稀释的 制剂可额外包含少量油，例如0.01和2% (v/v)之间的油。当制剂包含油时，优选地，存在 用于乳化水性溶液中的油的乳化剂以形成水包油乳剂。油选自由矿物油、植物油、动物油及 其混合物组成的组。植物油例如菜籽油是优选的。
[0016] 用于稀释的水性制剂可还包含少量分散剂，例如0. 01和0. 2% (v/v)之间的分散 剂。分散剂、油和/或乳化剂可存在于一种稀释制剂中，但也可以存在于在根据本发明的组 合物稀释之前或稀释期间被混合在一起的独立的制剂中。
[0017] 在一个实施方式中，多烯抗真菌化合物选自由以下化合物组成的组：那他霉素、制 霉菌素（nystatin)、两性霉素 B、三稀菌素（trienin)、意北霉素（etruscomycin)、菲律宾菌 素（filipin)、钦氏菌素（chainin)、制皮菌素（dermostatin)、lymphosarcin、杀念珠菌素 (candicidin)、金色制霉素（aureofungin) A、金色制霉素 B、哈霉素（hamycin) A、哈霉素 B和 鲁斯霉素（Iucensomycin)。在一个优选的实施方案中，多稀抗真菌化合物是那他霉素。在 一个实施方案中，组合物也可含有两种或更多种不同的多烯抗真菌化合物。应当理解，多烯 抗真菌化合物的衍生物（包括但不限于多烯抗真菌化合物的盐或溶剂合物）或经修饰形式 的多烯抗真菌化合物也可以在本发明的组合物中应用。含有那他霉素的商业产品的一个例 子是商品名为Delvocid?的产品。所述产品由DSM Food Specialties(荷兰）生产，并且 可以是含有例如50% (w/w)那他霉素的固体或是含有例如2-50% (w/v)那他霉素的液体。 所述商业产品可以被并入本发明的组合物中。
[0018] 本发明的组合物通常包含从约0. 005g/l到约100g/l和优选地从约0.0 lg/Ι到约 50g/l的多烯抗真菌化合物。优选地，所述量为0.0 lg/Ι到3g/l。
[0019] 在一个实施方式中，本发明的组合物还包含至少一种选自下组的额外化合物，所 述组由粘着剂（sticking agent)、载剂、着色剂、保护性胶体、粘合剂（adhesive)、除草剂、 肥料、增稠剂、掩蔽剂、触变剂、表面活性剂、其他抗微生物化合物、洗涤剂、防腐剂、铺展剂、 填充剂、喷雾油、流动添加剂、矿物质、溶剂、分散剂、乳化剂、湿润剂、稳定剂、消泡剂、缓冲 剂、UV-吸收剂和抗氧化剂组成。其他抗微生物化合物可以是抗真菌化合物（例如抑霉唑）， 或抵抗昆虫、线虫、螨虫和/或细菌的化合物。当然，根据本发明的组合物也可以包含两种 或更多种任何上述额外的化合物。在抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系被分别应用的情况 下，任何上述额外的化合物也可以与多烯抗真菌化合物和/或乳过氧化物酶体系组合。在 一个实施方式中，额外的化合物是特定用途（例如食品、饲料、药品、化妆品或农业）可接受 的添加剂。适用于食品、饲料、药品、化妆品或农业的额外的化合物是本领域技术人员已知 的。
[0020] 在一个特定的实施方式中，其他抗微生物化合物是属于亚磷酸盐类的