r/min、4°C条件下离心15min，弃去上清液， 收集菌泥，按海藻糖（保护剂）与菌泥的体积比为1.5:1的比例加入，于-40°C条件下预冻 5h，使其均匀冻结在容器内壁上，然后进行真空冷冻干燥，干燥18-20h后，分别复水测定其 活菌数，DMDL9010菌粉中活菌数为9. 30X109CFU/g。
[0039] (2) 8周龄SPF级SD(SpragueDawley)大鼠50只，体重160~200g，根据大鼠的体 重、血脂随机分为5组。所有SD大鼠由专业人员饲养，5只/笼。在温度22~24°C、湿度 50%~60%的条件下，每天光照12h，黑暗12h。实验期间，大鼠自由饮水和进食，正常组喂 食普通饲料，其他组均喂食高脂饲料（在普通饲料基础上添加猪油10%，胆固醇1%，胆盐 0. 2% )。每天上午对各实验组大鼠进行灌胃，正常组和高脂模型组均灌胃无菌水，阳性组灌 胃lmg/mL阿托伐他汀钙片（也叫立普妥）水溶液，9010高剂量组灌胃用的剂量为IO9CFU/ ml的DMDL9010菌悬液，9010低剂量组灌胃用的剂量为107CFU/mlDMDL9010菌悬液，灌 胃量均为 〇?lmL/10gbw.d。
[0040] 在第8周将全部大鼠禁食一夜，进行断尾采血，离心（3000r/min，IOmin)，分离血 清。在第10周将全部大鼠禁食一夜，腹腔采血，离心（3000r/min，IOmin)获得血清。用全 自动生化分析仪测定血清中总胆固醇（TC)，甘油三酯（TG)，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C) 和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C)含量，结果如表1、表2。
[0041] 如表1所示，第8周时，比较发现各组之间的TC、TG虽无显著性差异，但9010组的 TC、TG水平都较高脂模型组低，说明9010组对高脂血症具有一定的缓解作用。比较LDL-C发 现，虽各组之间无显著性差异，但所有高脂模型组的LDL-C均高于正常组，说明长期饲喂高 脂饲料导致了大鼠体内的低密度脂蛋白胆固醇的增加，增大了大鼠患心血管疾病的风险。 而灌胃DMDL9010菌液的实验组LDL-C较高脂模型组低，这说明DMDL9010菌株可能对心血 管疾病的具有一定的预防作用。
[0042] 表1第8周各组血脂检测结果比较（mmol/L)(M±SD，n= 10)
[0043]
[0044] *相对于正常组有差异（p< 0. 05) ▲相对于高脂模型组有差异（p< 0. 05)。
[0045] 如表2所示，第10周时，比较发现各组之间的TC、LDL-C均无显著性差异，但9010 高剂量组的TG水平比高脂模型组有显著降低，且其TC、LDL-C水平均介于正常组和高脂模 型组之间，说明9010组能缓解大鼠的高脂血症，降低血清胆固醇水平。比较HDL-C发现，所 有高脂模型组的HDL-C均低于正常组，且与正常组之间有显著性差异（p< 0. 05)，这说明长 期饲喂高脂饲料导致了大鼠体内的高密度脂蛋白胆固醇的减少，增大了大鼠患动脉硬化的 风险。其中灌胃DMDL9010菌液的实验组HDL-C的上升较明显，这说明DMDL9010菌株可能 具有一定的调节动脉硬化的功效。
[0046] 表2第10周各组血脂检测结果比较（mmol/L)(M±SD，n= 10)
[0047]
[0048] *相对于正常组有差异（p< 0. 05) ▲相对于高脂模型组有差异（p< 0. 05)。
[0049] (3)在实验第10周将全部大鼠禁食一夜，处死大鼠后，分离肝脏，准确称取一定量 的肝组织，按每〇.5g的组织加入IOmL氯仿：甲醇（2:1，V/V)混合液，振荡混匀，37°C保温 30min，离心（80000r/min，10min，4°C)，小心收集氯仿层液体到新的EP管中，加6mL生理盐 水，离心（80000r/min，10min，4°C)。再重复一次上述步骤后，收集底层氯仿层液体，用氮吹 仪吹干，加入异丙醇：Triton-100 (9:1，V/V)混合液0. 8mL复溶，漩涡震荡2分钟，加I. 2mL 蒸馏水，再漩涡震荡2min，使之充分溶解，所得溶液为肝组织总脂的提取液，留取两份备用。
[0050] 精确吸取胆固醇标准液（192. 000mg/dL)分别稀释成I. 920mg/mL、l. 536mg/mL、 0? 768mg/mL、0. 384mg/mL、0. 192mg/mL、0. 000mg/mL。各取 0?OlmL加入ImL工作液内，混勾后 37°C保温6min，用酶标仪在490nm处测定吸光度，每个孔设置两个复孔，绘制胆固醇含量的 标准曲线。样品测定按照总胆固醇试剂盒进行，取0.OlmL肝组织总脂的提取液加入到ImL 工作液内，混匀后37°C保温6min，用酶标仪在490nm处测定吸光度，每个孔设两个复孔。
[0051] 精确吸取甘油三酯标准液（200. 0mg/dL)分别稀释成2. 0mg/mL、I. 6mg/mL、0. 8mg/ mL、0. 4mg/mL、0. 2mg/mL、0. 0mg/mL。各取 0.OlmL加入ImL工作液内，混勾后 37°C保温 l〇min，用酶标仪在490nm处测定吸光度，每个孔设置两个复孔，绘制甘油三酯含量的标准 曲线。样品测定按照甘油三酯试剂盒进行，取〇.OlmL肝组织总脂的提取液加入到ImL工作 液内，混匀后37°C保温10min，用酶标仪在490nm处测定吸光度，每个孔设两个复孔。
[0052] 各实验组大鼠肝脏脂质检测结果如表3所示，各高脂模型组大鼠肝脏中TC和TG 水平均高于正常组，具有显著性差异（P< 〇. 05)，说明饮食来源中过多的胆固醇会在肝脏 中蓄积。9010组的TC较高脂模型组有所降低，其中9010高剂量组的TC和TG较高脂模型 组分别降低33. 2%和40. 8%，有显著性差异（p< 0. 05)，说明DMDL9010菌液在高剂量时能 有效抑制肝脏中胆固醇的蓄积，降低肝脏中的甘油三酯含量。
[0053] 表3各实验组大鼠肝脏脂质检测结果（M±SD，n= 10)
[0054]
[0055] 实施例2
[0056] (1)分别将具有降胆固醇作用的乳杆菌DMDL9010、干酪乳杆菌鼠李糖亚种的冻 干粉置于MRS培养基中，于37°C静止培养18h后，制成种子液，使其的活菌数分别达到 5. OXlOsCFlVmL;
[0057] (2)以10%的体积百分比，将乳杆菌DMDL9010、干酪乳杆菌鼠李糖亚种的种子液 分别接种于工作发酵培养基中，于37°C静止培养18h后，制成工作发酵液，使其的活菌数分 别达到2. 5X10sCFU/mL、5. 5X10sCFU/mL;所述工作发酵培养基配方为：新鲜白菜汁85份、 西红柿汁5份，维生素C3.0份，NaCl1.5份，蒸馏水定容至100份，灭菌后冷却后备用，即 为工作发酵培养基。
[0058] (3)挑选新鲜、成熟适度、没有蛀虫、无腐烂、肉厚结实的包菜、黄瓜、莴苣；
[0059] (4)去除老、烂和不可食用的部位，并用清水洗干净表面的泥沙，并沥干表面的水 分，切成适当大小并用热水烫漂；
[0060] (5)根据蔬菜重量30份，按照3:1的比例接入两种乳酸菌工作发酵液共5份，在其 中加入维生素C1. 5份、NaCl3. 0份，用无菌水定容至100份，尽量使蔬菜浸没在液体中；
[0061] (6)在发酵坛的密封盖的四周注入灭菌水，用水封好坛盖，隔绝空气中的氧气进 入，发酵室控温30°C厌氧发酵24h;测定发酵后泡菜中的亚硝酸盐含量，没有检测到亚硝酸 盐，制得的泡菜酸爽适宜，具有泡菜应有的风味和色泽。
[0062] (7)把切好的菜装入聚乙烯塑料袋或铝塑袋里，抽真空后，热合封口。将包装好的 发酵泡菜放置常温下6个月，取样定容，利用MRS培养基取样分析其中乳酸菌的活菌数为 6. 7X106cfu/g。
[0063] 实施例3
[0064] (1)分别将具有降胆固醇作用的乳杆菌DMDL9010、干酪乳杆菌鼠李糖亚种的冻 干粉置于MRS培养基中，于40°C静止培养36h后，制成种子液，使其的活菌数分别达到 4. 5XIO8CFlVmL;
[0065] (2)以1 %的体积百分比，将乳杆菌DMDL9010、干酪乳杆菌鼠李糖亚种的种子液分 别接种于工作发酵培养基中，于37°C静止培养36h后，制成工作发酵液，使其的活菌数分别 达到5.OX10sCFU/mL、4. 2XIOsCFlVmL;所述工作发酵培养基配方为：新鲜芥菜汁70份、西 红柿汁5份，胡萝卜汁5份，维生素C1. 5份，NaCl3. 0份，蒸馏水定容至100份，灭菌后冷 却后备用，即为工作发酵培养基。
[0066] (3)挑选新鲜、成熟适度、没有蛀虫、无腐烂、肉厚结实的雪里蕻、辣椒和芥菜；
[0067] (4)去除老、烂和不可食用的部位，并用清水洗干净表面的泥沙，并沥干表面的水 分，切成适当大小并用热水烫漂；
[0068] (5)根据蔬菜重量40份，按照1:1的比例接入两种乳酸菌工作发酵液共5份，在其 中加入维生素CI. 0份、NaCl3. 5份，用无菌水定容至100份，尽量使蔬菜浸没在液体中；
[0069] (6)在发酵坛的密封盖的四周注入灭菌水，用水封好坛盖，隔绝空气中的氧气进 入，发酵室控温30°C厌氧发酵72h;测定发酵泡菜