针对abo血型人群的益生菌复合物及其方法与应用_2

文档序号:9384867阅读:来源:国知局
复合,以降低AB型血的人群患冠心病的风险。
[0027] 针对AB型血人群个性化地补充富含Butyricicoccuspullicaecorum的一种或多 种益生菌复合物,可以降低AB型血的人群患IBD的风险。这是根据发明的实施例3,发现 AB型血人群其Butyricicoccuspullicaecorum菌种的含量低,且人们发现非0型血已有研 究证实具有患⑶的高风险。因此,本发明利用Butyricicoccuspullicaecorum产生的丁 酸能发挥的促进肠道组织发育、改善机体免疫功能、调节肠道微生物及电解质平衡等作用, 通过补充富含Butyricicoccuspullicaecorum的一种或多种益生菌复合物实现预防和治 疗AB型人群患IBD的的作用。
[0028] 本发明的一个实施方案涉及对AB型血人群,个性化地设计补充Roseburia inulinivorans-种或多种益生菌复合物,以改善AB型血人群宿主肠道菌群构成,促进肠 道健康。这是根据实施3发现,AB型血的Roseburiainulinivorans含量最低,与B型血、 0型血人群之间都存在显著性差异。而Roseburiainulinivorans产生的丁酸具有与抗生 素相类似的抗菌及抗肿瘤等功能外,还具有调节机体物质代谢、促进肠道组织发育、改善机 体免疫功能、调节肠道微生物及电解质平衡等作用。因此,针对AB型血人群个性化地补充 富含Roseburiainulinivorans的一种或多种益生菌复合物,能实现促进AB型血人群肠道 健康的作用。
[0029] (3)针对B型血人群,个性化地补充富含Butyricicoccuspullicaecorum的一种 或多种益生菌复合物,能起到预防和治疗B型血人群患IBD的作用。
[0030] 这是根据发明的实施例3,发现B型血人群Butyricicoccuspullicaecorum菌 种的含量低,且人们发现非〇型血已有研究证实具有患CD的高风险。因此,本发明利用 Butyricicoccuspullicaecorum产生的丁酸所发挥的促进肠道组织发育、改善机体免疫功 能、调节肠道微生物及电解质平衡等作用,通过补充富含Butyricicoccuspullicaecorum 的一种或多种益生菌复合物实现降低B型人群患IBD风险或治疗IBD的作用。
[0031] (4)针对0型血人群,个性化地补充富含Lactobacillumucosa的一种或多种益生 菌复合物,能起到预防和治〇型血人群患消化性溃疡等肠道疾病。
[0032] 这是因为作为益生菌的Lactobacillumucosa具有通过降低肠屏障通透性对减轻 肠屏障功能障碍的作用,能防止因肠上皮层细胞之间的紧密连接被损坏而造成的各种肠道 疾病。而本研究根据实施例3证实0型血人群Lactobacillumucosa含量很低,与B型血 存在显著性差异,且0型血的人群对消化性溃疡具有易感性。因此,通过个性化地补充富含 Lactobacillumucosa的一种或多种益生菌复合物,能预防或治疗0型血人群患相关肠道 疾病。
【附图说明】
[0033] 图1是实施例3中AB0血型间肠道菌的厚壁菌门与拟杆菌门的比值差异。
[0034] 图2是实施例3中AB0血型间肠道菌群益生菌在属上的差异性。
【具体实施方式】
[0035] 下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限 于此。
[0036] 在以下的实施例中用到的菌株,其购买信息如下:
[0037]Bifidobacteriumcatenulatum,购自德国微生物菌种保藏中心(DSMZ),DSMN0.: 16992(https://www.dsmz.de/catalogues/details/culture/DSM~16992.html);
[0038] Slackiaisoflavoniconvertens,DSMNO. :22006(https://www.dsmz.de/ catalogues/details/culture/DSM-22006.html);
[0039]Butyricicoccuspullicaecorum,购自德国微生物菌种保藏中心(DSMZ),DSM NO. :23266 (https://www.dsmz.de/catal〇Rues/details/culture/DSM-23266.html?tx dsmzresourcespi5% 255BreturnPid% 255D= 304);
[0040]Roseburiainulinivorans,购自德国微生物菌种保藏中心(DSMZ),DSMNO.: 16841 (https://www.dsmz.de/catalogues/details/culture/DSM-16841.html?tx dsmzresourcespi5% 255BreturnPid% 255D= 304);
[0041]Lactobacillumucosa,购自德国微生物菌种保藏中心(DSMZ),DSMNO.: 13345(https://www.dsmz.de/catalogues/details/culture/DSM~13345.html)〇
[0042] 实施例1:人类粪便样品与血液样本的采集
[0043] 为排除宿主饮食习惯、病史、年龄等个体差异的影响,我们共招募171名男性志愿 者。所有的志愿者都是20至30岁,居住在中国广东省。此外,他们有正常体重(BMI= 18. 5~24. 9公斤/平方米),参加调查的人在过去的一个月并没有服用抗生素。每名参加 者完成了详细的医疗,生活方式和饮食调查问卷。
[0044] 人类粪便样品收集后,冷冻在-80°C保存以提取粪便DNA,通过超微量分光光度计 nanodrop2000和琼脂糖凝胶电泳分析提取DNA浓度和完整性。同时,医护人员静脉采集志 愿者血液2mL至EDTA. 2K采血管,并通过正反定型以及反定型准确鉴定AB0血型。
[0045] 以粪便为标本提取细菌基因组DNA进行肠道微生态研究的要求提取到高质量的 粪便细菌基因组DNA,采集的171份人类粪便经琼脂糖凝胶电泳鉴定提取条带单一,未出现 明显降解现象。同时,提起的粪便DNA浓度及纯度均符合要求,可用于下一步测序分析。此 外,按照血型鉴定的标准操作确定了 171个志愿者的血型,其中A型血51人、B型血48人、 0型血59人、AB型共13人。
[0046] 实施例2 :16SrRNA基因测序及数据的处理过滤和0TU统计:
[0047]用检测合格的样品构建文库:将鉴定合格的基因组DNA稀释后作为模板,使用引 物 907R(CCGTCAAirCMITTGAGm)和引物 517F(ACTCCTACGGGAGGCAGCAG)对 16SrRNA基因 的V3-V5区进行扩增,磁珠筛选片段;最后,用合格的文库进行emPCR和测序。用下机得到 的数据再进行下一步的生物信息分析。
[0048]测序得到的原始数据,存在一定比例的干扰数据,为了使信息分析的结果更加准 确、可靠,首先对原始数据进行拼接、过滤,得到有效数据。然后,基于有效数据进行OTUs聚 类和物种分类分析,并将0TU和物种注释结合,从而得到每个样品的OTUs和分类谱系的基 本分析结果。
[0049] 通过Roche454平台对粪便细菌16SrRNA基因进行测序,结果得到原始序列条数 为1,717, 845,平均长度为454bp;过滤后序列的总条数为992, 198。原始序列在经过过滤 处理后,获得16srDNA过滤后的序列并在97%相似度下将其聚类为用于物种分类的0TU, 171个样品共产生4, 788个OUT。
[0050] 实施例3:不同血型人群肠道菌群差异分析
[0051] 我们通过计算AB0血型中肠道微生物的Alpha多样性,结果观察到A型血的个体 肠道微生物多样性显著下降。表1显示在A型血样品shannon指数最小,simpson指数最大, 这说明A型血人的肠道菌组成物种多样性最低(Shannon指数为2. 59436,P〈0.05;Simpson 指数为〇. 16220,P〈0.05,t检验),B型血人的肠道菌多样性最高(Shannon指数为2. 78766, P〈0.05 ;Simps〇n指数为0?1307,P〈0.05,t检验)。人体肠道微生物菌群是一个庞大复杂 的生态系统,它占全身微生态菌总数80%左右,其肠道菌群的多样性非常重要,有大量疾病 如结直肠癌(CRC)、慢性乙型肝炎患者、肠易激综合征(IBS)等均被证实与肠道菌群多样性 降低有关。因此,A型血的人可能更容易患此类疾病。
[0052] 同时,为确定AB0血型肠道微生物的组成变化,我们通过统计学分析研究了AB0血 型肠道微生物在门水平上的组成差异。有趣的发现,A型血的人的肠道微生物厚壁菌门比 拟杆菌门的比率较其他血型大(图1)。A型血的个体的肠道存在的微生物F/B的比率最高 (F/B比率为6. 29),而AB型血的个体呈现最低的F/B比率(F/B比率为1. 49)。Zhao,L等 人研究表明肥胖人群和肥胖小鼠的肠道微生物有更大、更显著的F/B比率,这可能说明A型 血的人群更易肥胖(Naturereviews,Microbiology, 2013 ;11:639_647)〇
[0053] 在
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