一种富含胡萝卜素的饲料添加剂的制作方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于饲料领域，尤其涉及饲料添加剂。
【背景技术】：
[0002] 现代畜禽养殖过程中，为了预防和治疗动物疾病，常使用过量抗生素产品来确保 动物健康，但过量抗生素的使用常导致动物肉制品及其产物的品质下降和抗生素耐性增 强，通过食物链的传递导致人类健康也受到抗生素问题的严重影响。
[0003] 源自自然界的一些天然物质不仅具有良好的营养特性，同时还具有抗病毒、消炎、 抗氧化、调节机体免疫功能等作用，具有广阔的应用前景。
[0004] 蜂胶的主要成分是黄酮类化合物、酚类、内酯、香豆精类、醛酮，少量的铁、钙、硅、 锰、铅、镍、铝、铜、锌等微量元素及维生素B族、维生素A，以及多种氨基酸、酶、多糖类及丰 富的阿散酸等。蜂胶还是国内外专家公认的"天然抗生物质"，因为它不仅具有防御外来的 入侵者及感染病原菌扩散的作用，还具有抗病毒、消炎、抗氧化、调节机体免疫功能等作用。
[0005] 杜仲是我国特有的经济林树种，杜仲的皮、叶、果、花含有许多对动物健康有益的 药用和营养成分，是重要的中药材料。现代研料成果表明：以杜仲作为动物饲料的添加剂， 对增强动物免疫力，改善营养物在动物体内的生物转化功能有着积极的意义。
[0006] 据中国农业科学院畜牧研究所研究测定，杜仲叶粉粗蛋白质含量平均为11. 60% (根据杜仲叶产地和采摘时间的不同其含量水平呈差异性），高于玉米、高粱、稻谷籽实（一 般为7~9% );其粗脂肪平均含量达7. 96%，比所有普通谷物籽实的含量（一般为2~ 4%)都高；杜仲叶还含有丰富的钙（平均含量为1.73%)、维生素、氨基酸等营养物质。此 外，杜仲还具有增加肝肾功能，解除体内毒素，从而增强肌体的免疫功能，降低血液中的胆 固醇，减少中性脂肪（皮下脂肪），并促进胶原蛋白的合成与代谢的功效。因此，以杜仲叶作 饲料是极为适宜的。
[0007] 抗菌肽是一类具有抗菌活性的生物小肽，是动物天然免疫防御系统的重要组成 部分。抗菌肽的理化性质稳定，相对分子质量小，抗菌谱广，抗菌机制独特。与传统抗生 素相比，具有抗菌活性强、无耐药性、无残留和毒性小的优点。近年来，抗菌肽作为抗生素 的理想替代品一直是研究的热点。据报道，抗菌肽作为添加剂饲喂动物，具有提高免疫性 能、减少疾病的发生和提高成活率的作用。同时，抗菌肽对动物有良好的促生长作用，可提 高动物的生长性能，降低料肉比。因此，抗菌肽具有成为绿色安全饲料添加剂的潜力。
[0008] 灵芝[Ganoderema lucidum (Leyss ex Fr. ) karst]，又称灵芝草，属担子菌亚门、 多孔菌目、灵芝科、灵芝属。历代的医典把灵芝归位于"上上药"，其排位在人参之前。《神农 本草经》、《本草纲目》记载，灵芝可明目、补肝气、安神、益精、益心气、益脾气、益肺气、益肾 气、通九窍、耳聪、目明、利关节、利尿、养颜美容，是上好的滋补佳品。灵芝多糖能促进蛋白 质、核酸的合成，对血清、肝脏及骨髓细胞蛋白质或核酸的更新、合成有促进作用，它是灵 芝扶正固本的主要有效成分之一。灵芝多糖主要存在于灵芝真菌子实体、菌核、菌丝体或发 酵液中；存在于灵芝中的灵芝酸有止痛、镇静、抑制组织胺释放、解毒、保肝、毒杀肿瘤细胞 的功用，是灵芝的主要有效成分之一。
[0009] 此外，在动物饲料领域中，多以硫酸铜等无机铜作为铜元素的来源，但是无机铜存 在吸收率低，与其他营养物质存在拮抗作用等问题，而螯合铜则可以很好的解决上述问题， 它能够减轻与其他营养物质的拮抗，促进铜和其他矿物质元素的利用，促进动物的生长发 育，提尚伺料利用率，改善脳体品质，提尚繁殖性能，同时还具有抗生物氧化和免疫以及良 好的稳定性等一系列功能，能够带来较佳的经济效益。
[0010] 类胡萝卜素是一类呈黄色、橙色或红色的多烯类化合物，它是自然界中最普遍存 在也是最稳定的天然色素，广泛存在于许多动植物中。类胡萝卜素作为一种优良的添加剂 和改善营养的营养增补剂，它的优良品质和效果，很久以来就被世界各国所公认，被誉为最 有希望的抗氧化剂。目前，类胡萝卜素被广泛应用于饲料添加剂行业中，由于其良好的应用 前景及卓越的功能，长久以来倍受人们青睐。如何有效开发以天然植物以及真菌获得绿色 饲料添加剂产品对饲料添加剂行业发展具有重要意义。
【发明内容】
：
[0011] 本发明提供一种富含胡萝卜素的饲料添加剂；
[0012] 饲料添加剂重量分数组成如下：
[0013] 抗菌肽5-10份，蜂胶15-20份，杜仲叶提取物10-15份，红酵母培养物20-30份， 灵芝菌固体发酵培养物25-50份，玉米蜂花粉提取物15-25份，谷氨酸钠0. 05-0. 1份，茶多 酚 0? 01-0. 02 份；
[0014] 本发明所使用的红酵母，为一株高产类胡萝卜素的富铜海洋红酵母WYN1， 所述菌株已于2014年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心（地址：中国.武 汉.武汉大学，邮编430072)，保藏编号为：CCTCC No :M 2014592,分类命名：海洋红酵母 WYNl(Rhodotorula sp. WYNl)。
[0015] 所述抗菌肽及蜂胶、谷氨酸钠、茶多酚均为市售产品；
[0016] 所述杜仲叶提取物的制备方法如下：
[0017] 杜仲叶粉碎后加入5-8倍软水，用粗磨研磨，并加入板蓝根，加入量以杜仲重量的 1-2%，混合后经胶体磨研磨，调整胶体磨定子与转子的间隙为50~100微米，胶体磨流量 控制为〇. 1~〇. 5吨/小时，之后浆液加入混合酶进行酶解，pH5. 2-5. 5,温度45-50°C，酶 解时间3-4hr，所述混合酶用量为浆液重量的0. 05-0. 2%，所述混合酶重量份数组成为：果 胶酶4份、(6-葡聚糖酶1份、蛋白酶2份和纤维素酶2份。酶解液灭酶、过滤，冷冻浓缩、 冷冻干燥后粉碎既得杜仲提取物。
[0018] 所述灵芝菌固体发酵培养物制备方法如下：
[0019] 斜面菌种活化培养：将保藏的灵芝斜面菌种转接到斜面培养基上，22-28°C培养 96-120小时左右，至菌丝长满斜面即可；最佳培养温度25°C ;
[0020] 1.液体一级种子培养：将上述灵芝斜面菌种挑取一块接入装有100毫升培养基 的500毫升摇瓶中进行一级种子培养，培养条件：旋转式摇床80-180转/分，22-28°C培养 96-130小时左右；旋转式摇床150转/分为宜，培养温度以25°C为宜；
[0021] 2.液体二级种子培养：将一级摇瓶种子以5-20 %接种量接入装有100毫升培养基 的500毫升摇瓶中进行二级种子培养，培养条件：旋转式摇床80-180转/分，22-28°C培养 96-130小时左右；合适接种量为10%，旋转式摇床150转/分为宜，培养温度以25°C为宜；
[0022] 3.固体发酵培养：将二级摇瓶种子以5-10%接种量接入装有灭菌后固体发酵培 养基的500L固体发酵罐中，培养条件：装料量50%，培养温度20-27 °C，湿度75-90%，通风 量0. 3-1. 0 (V/V)，培养时间15-40天。每隔3-10天开启搅拌10分钟。采用SGF固体发酵 罐；
[0023] 4.发酵培养结束，选择流化床等多种干燥方法，将物料干燥到水分含量在7 %以 下，对固体发酵物料进行粉碎既得灵芝菌固体发酵培养物。
[0024] 本发明固体发酵培养基的碳源主要选择麸皮、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、玉米芯 (粉碎后）等常用原料，氮源可以选择花生饼粉、蛋白胨、脱脂大豆蛋白粉、豆饼粉、酵母粉 等；需要添加的无机盐有磷酸二氢钾，硫酸镁。
[0025] 优选的，在上述固体发酵培养基中添加有质量比为2-6 %粉碎后，过40-50目的当 归、3-8 %的粉碎后，过40-50目的板蓝根，2-5 %粉碎后，过40-50目的麝香草。
[0026] 所述玉米蜂花粉提取物的制备方法包括如下步骤：按质量比30-50:3-5:2-4分 别称取玉米蜂花粉、糯玉米须和脱脂玉米粉，首先将玉米蜂花粉、糯玉米须分别置装有 0. 2-0. 4%碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，室温下于200W、40KHz清洗3-5min，沥干，然后 与脱脂玉米粉混合，加入原玉米蜂花粉质量3-5倍的水，用乳酸调节pH值为4-6,于电场强 度20-40kV/cm，脉冲时间400-500 y s，脉冲频率200-300HZ条件下进行高压脉冲电场处 理，然后室温400W、40KHz条件超声处理10-15min ;升温至30-40°C，加入原玉米蜂花粉质量 3-10%的酶制剂，搅拌均匀，酶解15-20min，酶解液液经100-300目筛网过滤，滤液经超滤、 减压浓缩、冷冻干燥即得玉米蜂花粉提取物；
[0027] 所述酶制剂的质量组成为：蛋白酶：糖化酶：果胶酶：纤维素酶：脂肪酶= 11-13:5-10:4-6:3-5:1-3。
[0028] 所述红酵母培养物制备方法如下：
[0029] 种子培养按酵母常规培养方法进行培养；
[0030] 发酵培养：初始pH为8,将种子培养液按接种量3-8%接种于发酵培养基，摇床转 速为50-80r/min，24-28°C培养10-15小时后调整温度为16-20°C进行低温静止培养，停止 搅拌，pH调整为3-5,保持2-4小时；之后阶梯形升温到24-30°C，pH调整为4. 6-5. 5,按照 2. 5%的添加量添加蛋白胨，按照2%的量添加酵母粉；摇床转速为50-100r/min，继续发酵 10-15h〇
[0031] 发酵结束后，发酵液经孔径IO-1000 ym粗滤，然后与10-20°C循环超滤浓缩去除 水分得固形物含量20-40 %浓缩液，浓缩液经真空冷冻干燥、超微粉碎得红酵母培养物。
[0032]发酵培养基质量体积比组成为：葡萄糖1 %，酶解玉米粉1-3%，蛋白胨2. 5%，硫 酸镁0. 02 %，磷酸二氢钾0. 15 %，铜含量150-200mg/L，氯化钠20 %，其余为水；
[0033] 所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉配料罐中，以V:m为2:1加入纯净水，调 节pH值3-7,加入中温淀粉酶，酶活为30u/g玉米粉，与酶活为30u/g玉米粉的蛋白酶，边 搅拌边升温至45-55°C保温15-30min，然后缓慢升温至60-65°C保温15-30min，冷冻干燥备 用。
[0034] 所述饲料添加剂由以下方法制得：
[0035]粉碎后灵芝菌培养物、抗菌肽、蜂胶、杜仲叶提取物、玉米蜂花粉提取物、谷氨酸 钠、茶多酚和红酵母培养物按照比例混合得到复合饲料添加剂。
[0036] 有益效果：
[0037] 1、本发明利用从海洋环境中分离获得一株高产胡萝卜素的富铜海洋红酵母WY