包含鱼油和果汁的组合物用于治疗炎症的用图
【技术领域】
[0001] 本发明提供了作为水包油型乳剂的包含果汁和具有低totox值的鱼油的组合物 用于治疗/消退炎症和/或其中炎症是病因的疾病的用途。本发明还包括包含乙酰水杨酸 和/或其衍生物和/或类似物的所述组合物。此外，本发明涉及本发明的组合物和治疗剂 用于治疗炎性疾病或其中炎症是病因的疾病的组合用途。
【背景技术】
[0002] ω-3(η_3)脂肪酸具有多种抗炎和免疫调节作用，其可能与其中炎症是基本病 因的疾病和病症相关。炎症是身体试图自我保护，目的是除去有害刺激并且开始愈合过 程。炎症可被分成急性炎症和慢性炎症，其中急性炎症开始迅速并且很快变得严重。急性 炎症的实例可以是例如急性支气管炎或急性阑尾炎。慢性炎症可以是例如不能消除引发 剂、对自身抗原的自身免疫应答或持续存在的低强度慢性刺激物（irritant)。然而，慢性 炎症可发展成严重疾病，如慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary disease， C0PD)、癌症、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病（Alzheimer' s disease，AD)、肌萎缩侧索硬化 (amyotrophic lateral sclerosis，ALS)等。
[0003] ω-3脂肪酸对任何阶段的生命（甚至是在出生之前）都是必不可少的。它们是身 体中每个细胞膜的基本结构单元（building block)，并且其存在是维持足够细胞膜所必需 的。其确实也有助于大部分生物学功能的调节。
[0004] 长链ω-3多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid，PUFA)最丰富的饮食 来源来自鱼油。脂肪酸是膳食脂肪的结构单元并且基本上以甘油三酯的形式储存。然而， 人体不能产生这些脂肪酸，必须从食物来源或补充剂中获得它们。三种脂肪酸构成ω-3家 方矣：α -亚麻酉爱（alpha-linolenic acid，ALA)、二十碳五稀酉爱（eicosapentaenoic acid， EPA)和二十二碳六稀酸（docosahexanoic acid，DHA)。ALA见于例如核桃、一些类型的豆 类和橄榄油中。EPA和DHA见于鱼（包括鱼油）和补充剂中。
[0005] 消散素（resolvin)和保护素（protectin)是源自EPA和DHA的氧化代谢物，并且 是当需要结束炎性应答时有助于除去炎性细胞并恢复组织的分子机制的一部分。已经表明 阿司匹林治疗提高了 EPA和DHA转化成携带强大抗炎性信号的消散素。其发挥作用的机制 仍然是受争议的问题，但是似乎可能的是所述氧化代谢物发挥了重要作用，因为即使是在 纳摩尔至皮摩尔浓度范围内，所述氧化代谢物也具有强大的抗炎和免疫调节作用。当组织 恢复正常时，消散素和保护素以及另外的氧化代谢物（如脂氧素和maresin) -起通过除去 白细胞和细胞碎片促进炎症的消退。
[0006] 波士顿的Brigham and Women's Hospital近期研究揭示了 ω-3实际上转化成效 力是原始脂肪酸本身的10, 〇〇〇倍的化合物。这些化合物包括消散素，其有助于使身体中的 炎性应答结束。
[0007] WO 2007/064222公开了作为水包油型乳剂的包含低氧化鱼油和果汁的组合物。然 而，没有公开治疗和/或消退炎症。
[0008] 从得到本发明的研究中，出人意料地发现可以将作为水包油型乳剂的包含低氧化 鱼油和果汁的组合物用于治疗炎症和/或其中炎症是病因的疾病。下文中将详述的研究表 明在用本发明的包含鱼油和果汁的组合物治疗之后，延缓了炎性过程并且改善了炎症应答 之后的恢复。
[0009] 发明概述
[0010] 本发明涵盖作为水包油型乳剂的包含鱼油和果汁之组合的组合物，其用于治疗炎 症和/或其中炎症是病因的疾病，其中所述鱼油选自totox值低于20且基于所述鱼油的总 重量ω-3含量按重量计高于10%的鱼油，并且其中使用合适的乳化剂来稳定所述乳剂。
[0011] 本发明还涉及作为水包油型乳剂包含鱼油和果汁之组合以及20mg/剂量至 200mg/剂量的乙酰水杨酸和/或其衍生物的组合物，其用于治疗炎症和/或其中炎症是病 因的疾病，其中所述鱼油选自totox值低于20并且基于鱼油的总重量ω-3含量按重量计 高于10%的鱼油，并且其中使用合适的乳化剂来稳定所述乳剂。
[0012] 本发明还涉及本发明的组合物和治疗剂用于治疗炎性疾病或其中炎症是病因的 疾病的组合用途。
[0013] 一些优选的实施方案在本发明的从属权利要求和发明详述中描述。
【附图说明】
[0014] 图?α示出了使用本发明的组合物（imartlishr#;)对炎性介质的Als基线转录 的影响。左侧角和右侧角中的数字分别说明了上调炎性基因和下调炎性基因的数量。这 些包括炎性细胞因子ILl、IL6等和趋化因子CXCL3、CCL2等。观察到上调超过4倍的所有 mRNA水平用具有三角形的圆圈表示，下调超过4倍的那些用实心圆圈表示。
[0015]图IB示出了使用本发明的组合物（Smartf丨sh? )对炎性介质的ALS基线转 录的影响。左侧角和右侧角中的数字分别说明了上调炎性基因和下调炎性基因的数量。这 些包括炎性细胞因子ILl、IL6等和趋化因子CXCL3、CCL2等。观察到上调超过4倍的所有 mRNA水平用具有三角形的圆圈表示，下调超过4倍的那些用实心圆圈表示。
[0016] 图2示出了应答者中补充本发明组合物和安慰剂的代谢应答。
[0017] 图3示出了补充本发明组合物和补充安慰剂的ALDL胆固醇和ATAG应答的值 (mmol/L)的变化。
[0018] 图4示出了在比较的16周干预期期间，本发明的组合物（Smartfish)对患有 URTI (upper respiratory tract infection，上呼吸道感染）的患者的影响。未补充 Smartfish的URTI患者充当对照组。上图示出了每组中每个患者URTI发作的平均数。下 图示出了每组中每天症状的总数。
[0019] 图5通过ELISA分析示出了本发明的组合物（Smartfish)和良好鱼油（good fish oil)对LPS刺激的巨噬细胞的促炎性细胞因子TNF- α之分泌的影响。
[0020] 图6通过ELISA分析示出了本发明的组合物（Smartf ish)和良好鱼油对LPS刺激 巨噬细胞的促炎性细胞因子IL-6之分泌的影响。
[0021] 图7示出了在对照培养基、添加了本发明组合物（Smartfish)或良好鱼油的培养 基中培养的LPS刺激巨噬细胞的tnf α和nf κ b的基因表达。
[0022] 图8示出了在对照培养基、添加了本发明组合物（Smartfish)或良好鱼油的培养 基中培养的LPS刺激巨噬细胞的IL8的基因表达。
[0023] 图9示出了在对照培养基、添加了本发明组合物（Smartfish)或良好鱼油的培养 基中培养的LPS刺激巨噬细胞的bax和gpx的基因表达。
[0024] 发明详述
[0025] 本发明的一个目的是提供包含鱼油和果汁的组合物在治疗炎症和/或其中炎症 是病因的疾病/病症中的用途。WO 2007/064222(其为本发明人自己的专利）中描述了组 合物和组合物的制备。
[0026] 本发明中所使用的组合物在以下研究中显示为具有高生物利用度的ω-3来源， 其中源自ω-3的脂质介质出人意料地在体内抗炎性过程中被有效递送和利用。
[0027] 在本发明中，研究了组合物在治疗炎症和其中炎症是病因的不同疾病/病症中的 用途。所述炎症或疾病/病症是ALS (肌萎缩侧索硬化）、包括MCI (轻度认知损害（mild cognitive impairment))的AD (阿尔茨海默病）、COPD (慢性阻塞性肺病）、URTI (上呼吸 道感染）以及超重和肥胖。
[0028] 用本发明的组合物治疗的疾病/病症的另一些实例是哮喘、囊性纤维化、类 风湿性关节炎、手术后认知下降、卒中、冠状动脉疾病、糖尿病和代谢脆弱（metabolic frailty)〇
[0029] 同样，炎性肠病、创伤性脑损伤（脑震荡）、卒中恢复、恶病质和少肌症 (sarcopenia)应该被提及为可从所述组合物受益的病症。
[0030] 这些疾病的共同特征是潜在的炎症，特别是慢性炎症。
[0031] 在下文中，呈现了多个研究和一些结果：
[0032] I. ALS (肌萎缩侧索硬化）
[0033] 该研究的目的是研究11位ALS患者中体内的外周血单核细胞中基线炎性基因转 录以及托珠单抗（tozilizumab，ActeiHra·)的影响并且还测量了比较FRS-R得分（功 能评定量表）的治疗之前和之后的残疾。Fiala等，（将要出版）。患者自由服用营养补充 剂。三位患者服用了本发明中所用的组合物，转录结果与ALSFRS-R得分的结果（肌萎缩侧 索硬化功能评定量表）一起呈现在实施例1中。
[0034] ALS是不治之症并且迫切需要新的治疗方法。在ALS患者中，脊髓和外周血中的炎 症被清楚显出。炎症由通过胱天蛋白酶（Caspase)U白介素 I(ILl)、IL6和趋化因子信号 传到聚集的超氧化物歧化酶I (superoxide dismutase 1，S0D1)活化巨噬细胞来驱动。
[0035] 研究11位ALS患者中体内的外周血单核细胞中基线炎性基因转录和托珠单抗 (Actemra⑨）（细胞因子诘抗剂）输液的影响，托珠单抗抑制了全局白介素 -6 (IL6)信 号传导，这是慢性类风湿性疾病中的关键机制。
[0036] 研究中的患者自己报告ALSFRS-R得分。肌萎缩侧索硬化功能评定量表 (ALSFRS-R)是0至48的得分，其利用MND评估患者中的残疾。其由Cedarbaum和同事 开发(Cedarbaum JM. The ALSFRS-R :a revised ALS functional rating scale that incorporates assessments of respiratory function. BDNF ALS Study Group(Phase III). J Neurol Sci 1999;169:13-21)。有十二个问题，一些询问关于日常活动以及患者需 要多少帮助，并且一些关于特定症状。
[0037] 总之，似乎使用本发明的组合物降低了炎性mRNA的表达并且显示出减缓了 ALS的 进展（通过FRS-R得分的下降测量的）。
[0038] 进一步的细节参见实施例1以及图IA和图1B。
[0039] 2.对来自ALS患者的巨噬细胞的研究
[0040] 本研究是本发明研究1的后续研究。目的是研究来自ALS患者和对照的细胞样品 中抗炎性介质的产生。
[0041] 研究了来自ALS患者和对照的巨噬细胞样品。所述研究包括介质（如例如：RvDU RvD2、RvEl、RvE2、7Marl、PGE2、LXA4、18-HEPE、17-HD0H)的研究。
[0042] 3.研究患有COPD的患者
[0043] 本研究的目的是鉴定本发明的组合物在经受严重的（住院治疗的）恶化的患有 COPD的患者中的潜在益处并且确定本发明对气管和全身性炎症生物标志物的影响并且最 后确定本发明组合物对提高经历肺康复患者的运动能力的影响。
[0044] coro是由对吸入气体和微粒的异常炎性应答引起的非常普遍的疾病。其是进行性 病症，表现为影响气管和肺泡腔的肺病理学的发展，这导致可限制生活质量和功能性表现 的症状。吸入的刺激物通常为烟草烟雾，但是职业性灰尘和环境污染会可变化涉及。炎症 的特征在于炎症的特定模式，其中关键炎性细胞是巨噬细胞、CD8 +、T-淋巴细胞和中性粒细 胞。
[0045] 近年来的研究已经确认coro还影响除了肺以外的器官并且具有多种全身性表 现。目前治疗策略的目标在于肺，使用吸入治疗是护理的现行标准。COF1D患者的详细临床 研究已经确认，许多个体表现出营养不良的证据，饮食通常是不良的并且肌肉功能受到损 害。这导致利用现在指示具有低BMI或体重减轻病史的患者的口服补充剂提高营养状态的 策略的开发。
[0046] 富集口服补充剂（其提供潜在的附加治疗益处以简单地提高卡路里或蛋白质摄 入）的开发在治疗这些通常具有提高的能量需求（可能由于提高的呼吸肌肉活动引起）并 且同时咀嚼和吞咽均会受损的患者中尤其重要。然而，先前建议在coro预防和管理中饮食 和营养物可能是重要因素（Schools等），因为体重减轻是重要的负面因素。参与研究的患 者是45岁至80岁确诊的患者。试验周期长达六个月。
[0047] 进一步的细节参见实施例2。
[0048] 4. COPD 2
[0049] 本研究是上述研究编号3的后续研究，并且包括模拟COPD中情况的细胞研究，其 中研究了巨噬细胞和其他细胞的炎性标志物。研究的目的是比较本发明的组合物对细胞中 炎症的影响，其中所述细胞经受本发明的组合物或者包含ω-3的其他组合物。
[0050] 提出炎性标志物（尤其是TNF- α和IL-8)的修饰与COPD的高度相关。参 见(Int J of Chronic Obstructive Pulmonary Disease 2010 :5 217-222 ;Tumor necrosis factor-alpha levels in healthy smokers and nonsmokers)和 Saris H 等， Biochem Pharmacol 2010，Marl ;79(5( :698-701 ;IL_8production by macrophages is synergistically enhanced when cigarette smoke is combined with TNF_alpha〇
[0051] 5.使用组合物对围手术期神经认知结果的影响。
[0052] 本项目的目的是研究大外科手术之后ω-3必需脂肪酸补充（作为提高内生性消 散素产生的方式）对通常影响整形外科患者的术后结果（包括认知功能和疼痛）的影响。
[0053] 现行的假说是，在外科手术之前提前地，每天给予本发明的组合物补充4周，1